重组质粒pGMLV-SC1RNAi的构建及其对猪卵巢颗粒细胞c-Fos的影响

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高效率构建包含内含子的hpRNAi植物载体

高效率构建包含内含子的hpRNAi植物载体高效率构建包含内含子的hpRNAi植物载体摘要在植物基因功能分析中广泛使用的双链RNA干扰（RNAi），是一种高效率的系统，对于制作发夹RNA（hpRNA）结构有一个很大的需求量。

在这里，我们描述了一种新的限制性连接方法，提供了包含内含子的hpRNA（ihpRNA）载体的一种简单而高效的建设。

该系统以优势型IIS的限制性内切酶BsaI和我们新的植物RNAi载体pRNAi-GG（GG）以GG克隆为基础。

这种方法需要有感兴趣的基因的BsaI 识别序列侧翼只有一个单一的PCR产物，然后可以克隆到pRNAi-GG 上在正方向和反方向同时形成ihpRNA的构造。

在这个过程中，在一个管与一个限制性连接步骤完成后，产生的重组ihpRNA具有高效率和零背景。

我们证明与pRNAi-GG载体向量生成的ihpRNA结构的效用有效沉默各种单独的内源和外源标志物基因以及同时沉默这两个基因。

此方法提供了植物功能基因组学的大规模分析的新颖的和高效率的平台。

介绍在双链RNA被发现作为一体的能触发RNA干扰（RNAi）之后[1]，RNA干扰也成为一个基因功能[2-4]分析的最强大的工具。

发夹RNA（hpRNA）结构通常用于通过RNA干扰[5]的机制来诱导靶基因的degra-dation。

在植物中，含有发夹RNA的内含子（ihpRNA）配有一个内含子作为间隔序列表示出了最高基因沉默效率[6]。

因此，ihpRNA结构已被广泛用于植物中的基因沉默。

与在植物中基因序列的爆炸性释放和基因组序列，高效率和成本制作ihpRNA结构系统需求量很大。

为了便于ihpRNA结构的产生，几种方法已经被报道。

传统的连接酶的载体如pHANNIBAL和pKANNIBAL首次使用生成ihpRNA结构[6]。

该方法需要几轮限制和连接，并且因此，比较乏味和耗时。

有一种可替代地方法，GATEWAY 克隆系统为基础的RNAi载体如pHELLSGATE系列和PIPK系列已被广泛用于产生ihpRNA结构[7-9]。

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5和M基因重组腺病毒的构建及表达

猪繁殖与呼吸综合征（ｏｃｅｒｐｏｕｔｅａｄＰｒｉｅｒｄｃｉｎｎｖｒｓｉｔｒｙｄｏ，Ｒ）由猪繁殖与呼吸综ｅｐｒｏｙｓｎｒｍｅＰＲＳ是ａ
经常存在于腺体，第１次就是从腺体组织中分离且
病毒载体。以腺病毒为载体构建重组疫苗，达主表
蛋白为核蛋白，蛋白为基质蛋白［６。由ＯＦＭ４￣－Ｒ５编码的ＧＰ蛋白可以诱导机体产生中和抗体，最主５是要的保护性抗原；由Ｏ６编码的Ｍ蛋白是ＲＦ
２ｈＰＳ洗涤３次；，Ｂ以荧光标记的羊抗鼠的ＩＧ为二ｇ抗，７℃作用３ｎＰＳ洗涤３，３０ｍｉ，Ｂ次吹干，加入缓冲甘油，荧光显微镜下观察。
ｇｎ购自Ｒｏｈｅｔｃｅ公司；光素ＦＴＣ标记羊抗鼠荧ＩＩＧ、根标记羊抗鼠ＩＧ购自Ｇｅｅｅｇ辣ｇｎＴｘ公司；伊文思蓝购自Ｓｇ公司产品；ｉｍａ甲醇、吐温－０购自北京８北化精细化学品有限责任公司。
１２５Ｗｅｔｎｂｔ分析将接种重组腺病毒．．ｓｒｌｅｏ
ｒｄ－Ｐ一的２３ＡｖＧ５Ｍ９ＡＤ细胞培养２，４ｈ用细胞裂解液裂解后，心取上清进行ＳＳＰＧＥ离Ｄ－Ａ。之后转印到硝
摘要：为构建猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＲＳ重组腺病毒活载体疫苗，ＰＲＶ）本研究将ＰＲＳＧＰＲｖ５和

猪繁殖与呼吸综合征病毒E基因重组质粒的免疫效果研究的开题报告

猪繁殖与呼吸综合征病毒E基因重组质粒的免疫效果研究的开题报告一、选题背景及意义猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是一种病毒性疾病，在猪产业中造成了严重的经济损失。

PRRSV主要引起猪的繁殖障碍和呼吸道疾病，严重影响了猪的健康和生产能力。

研发有效的疫苗对于控制PRRSV病毒的传播和流行具有重要意义。

以往的疫苗研发主要采用灭活或弱毒化等方法，但这些方法存在一定的局限性。

基于分子生物学技术，重组质粒疫苗成为了疫苗研发的热门方向之一。

该方法可以将目标抗原的基因插入质粒中，通过基因工程技术，将质粒转化为细胞，从而在机体中产生特异性的免疫反应，提高免疫力。

本研究旨在构建PRRSV E基因重组质粒，并探究其在猪体内产生的免疫反应以及其对PRRSV病毒的抵抗和防御作用，为PRRSV疫苗的研发提供新思路和方法。

二、研究内容和方法1. 构建PRRSV E基因重组质粒选用适当的载体进行DNA序列克隆，将PRRSV E基因的序列插入质粒中，经过转化、筛选等步骤，构建获得PRRSV E基因重组质粒，确保其质量和稳定性。

2. 合成和纯化目标蛋白将重组质粒转化到宿主细胞中，使其在细胞内表达PRRSV E基因，并进行目标蛋白的合成和纯化。

采用SDS-PAGE和Western blotting等方法分析目标蛋白的亚细胞定位和纯度。

3. 猪体内免疫试验选用健康的猪，将纯化后的目标蛋白注射给猪，用ELISA等方法检测猪体内特异性免疫反应的产生和程度。

并且将注射后的猪进行PRRSV病毒的感染，观察猪体内的PRRSV病毒感染程度、病毒排除情况以及免疫效果。

三、预期成果及意义1. 成功构建PRRSV E基因重组质粒，实现目标蛋白的高效表达和纯化。

2. 观察到猪体内针对PRRSV E基因的特异性免疫反应的产生和程度，证明该疫苗具有一定的免疫效果和防御能力。

3. 提供了一种新的PRRSV疫苗研发方法和思路，为猪产业健康和高效发展提供了参考和帮助。

重组质粒pEGFP-N1-Twist的构建、表达及其对SKOV3细胞克隆形成能力的影响

重组质粒pEGFP-N1-Twist的构建、表达及其对SKOV3细胞克隆形成能力的影响尉春艳;张熙;孙学军;彭慧霞;史玉霞;王桂贤【期刊名称】《西安交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2014(035)004【摘要】目的构建含有Twist基因的重组质粒pEGFP-N1-Twist,为进一步研究上皮性卵巢癌的发生及转移机制奠定基础.方法生物合成Twist cDNA基因序列,定向克隆至pEGFP-N1表达载体内,将pEGFP-N1-Twist转染入SKOV3细胞系,用Real-time PCR和Western blot检测Twist基因的表达情况;通过克隆形成实验检测pEGFP-N1-Twist对SKOV3细胞的作用.结果 Twist基因的cDNA已克隆到真核细胞表达载体pEGFP-N1中,将pEGFP-N1-Twist转染入SKOV3细胞后,Twist 基因/蛋白的表达明显上调,转染组较对照组克隆形成明显增加(P＜0.05).结论成功构建了Twist基因的真核表达载体并能在细胞内稳定表达,Twist基因能增强SKOV3细胞的克隆形成能力.【总页数】4页(P447-450)【作者】尉春艳;张熙;孙学军;彭慧霞;史玉霞;王桂贤【作者单位】西安交通大学医学院第二附属医院妇产科,陕西西安710004;西安交通大学医学院第二附属医院神经外科,陕西西安710004;西安交通大学医学院第一附属医院普外科,陕西西安710061;西安交通大学医学院第二附属医院妇产科,陕西西安710004;西安交通大学医学院第二附属医院妇产科,陕西西安710004;西安交通大学医学院第二附属医院妇产科,陕西西安710004【正文语种】中文【中图分类】R711.75【相关文献】1.重组质粒pEGFP-N1-Twist对SKOV3细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响 [J], 尉春艳;张熙;孙学军;彭慧霞;贺赛;王桂贤2.牛瑟氏泰勒虫热休克蛋白70的克隆与原核表达重组质粒的构建 [J], 王轶男;贾立军;薛书江;胡诗悦;钱年超;张守发3.猪白细胞介素18基因的克隆及真核表达重组质粒的构建 [J], 石昂;时庆贺;李新果;王玉国;杨利;李双双;陈陆;王川庆4.牛瑟氏泰勒虫热休克蛋白70的克隆与原核表达重组质粒的构建 [J], 王轶男5.猪ASC及Ub基因的克隆及真核表达重组质粒的构建 [J], 樊钰莹;华思红;王志鹏;孙永科;杨玉艾因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

用于抗HBV RNAi重组质粒的构建

用于抗HBV RNAi重组质粒的构建蔡大川;李用国;曾彦;任红【期刊名称】《西部医学》【年(卷),期】2005(17)6【摘要】目的构建针对乙型肝炎病毒表面抗原和核心抗原的siRNA表达载体pSuper-HBV,以用于后继的RNAi研究.方法根据RNA作用原理设计,针对HBV S/C区的相应序列,再将其克隆入含聚合酶Ⅲ H1-RNA启动子的表达载体pSuper.结果经酶切鉴定、电泳和测序分析证明,含作用序列的重组质粒pSuper-HBVs/pSuper-HBVc及随机序列对照组pSuper-HBVcontrol构建是成功的.结论用于抗HBV RNAi的重组质粒可于体外成功构建,但仍需进一步实验来确定最佳作用靶点.【总页数】3页(P545-547)【作者】蔡大川;李用国;曾彦;任红【作者单位】重庆医科大学附属第二医院感染科,重庆,400010;重庆医科大学附属第二医院感染科,重庆,400010;重庆医科大学附属第二医院感染科,重庆,400010;重庆医科大学附属第二医院感染科,重庆,400010【正文语种】中文【中图分类】R512.6+2;R318【相关文献】1.重组质粒pGMLV-SC1RNAi的构建及其对猪卵巢颗粒细胞c-Fos的影响 [J], 叶丹凤;郑艳华;丁涛;薛士鹏;马红霞2.靶向 STAT5的RNAi重组质粒的构建与鉴定 [J], 张丽杰;赵振军;鹿刚;单保恩3.HBV核心蛋白突变体L60 V重组质粒的构建及其应用于IFN-α抗病毒机制 [J], 孙蓓蓓;管世鹤;王爱华;杨凯;潘颖;吴园园4.RNAi技术及抗HBV治疗研究进展 [J], 杨慧;赵中夫;刘明社5.重组质粒pSUPER-HBs RNAi的构建及筛选 [J], 罗祥基;程庆保;徐峰;谭蔚锋;姜小清;张柏和;王红阳;吴孟超因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

含CpG基序重组质粒的构建及对猪口蹄疫疫苗的免疫增强作用研究的开题报告

含CpG基序重组质粒的构建及对猪口蹄疫疫苗的免疫增强作用研究的开题报告1. 研究背景和意义：口蹄疫是一种由口蹄疫病毒引起的急性、高度接触性疾病，可影响偶蹄目动物，包括猪、牛、羊、马等，其致病性、易传染性和经济损失极大。

目前，疫苗是预防口蹄疫最有效的手段之一。

但由于口蹄疫病毒表面抗原的易变性和多样性，使得疫苗的生产和应用面临一定的挑战。

因此，开发一种能够增强口蹄疫疫苗免疫效果的新型辅助免疫剂成为研究的热点。

CpG基序是细菌DNA中一种结构特异性的未甲基化的CpG二核苷酸序列，其具有强烈的免疫活性和抗原递呈活性，是一种优秀的免疫佐剂。

已有研究表明，将CpG基序引入口蹄疫疫苗体系中，可增强疫苗的免疫效果。

因此，本研究旨在构建一种含CpG基序的重组质粒，并探究其在口蹄疫疫苗中的免疫增强作用，为口蹄疫疫苗的研究和开发提供新思路和实验基础。

2. 研究内容和方法：(1) 构建含CpG基序的重组质粒：采用PCR扩增方法，构建带有CpG基序的核酸序列，与pVAX1质粒进行双酶切后，进行定向克隆，得到含CpG基序的重组质粒。

(2) 病毒感染实验：采用口蹄疫病毒株，将其与含CpG基序的重组质粒和未含CpG基序的对照质粒进行共转染，得到相应的感染培养物。

采用酶联免疫吸附试验和细胞免疫荧光法检测感染培养物中病毒抗原的表达和免疫细胞的活性。

(3) 免疫增强实验：选取合适的动物模型（例如猪），将口蹄疫疫苗和含CpG基序的重组质粒混合使用，注射到动物体内，观察并比较其免疫效果，如抗体产生、细胞免疫反应等。

3. 研究期望与创新点：(1) 通过构建含CpG基序的重组质粒，探究CpG基序在口蹄疫疫苗中的免疫增强作用，为口蹄疫疫苗的开发提供新的思路和方法。

(2) 基于动物实验，评估含CpG基序的重组质粒对口蹄疫疫苗的免疫效果的影响，为口蹄疫疫苗的优化设计提供实验依据。

(3) 本研究将重点关注含CpG基序的重组质粒对口蹄疫疫苗的免疫增强作用，通过实际动物实验推论其潜在的应用前景和价值，具有一定的应用意义和实用意义。

重组质粒pEGFP-C1-LRIG1的构建及其在SHG44细胞中的稳定表达

重组质粒pEGFP-C1-LRIG1的构建及其在SHG44细胞中的稳定表达方园;屈建强;张熙;周乐;孙梦瑶;娄淼【期刊名称】《西安交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2013(034)004【摘要】目的构建含目的基因多亮氨酸重复区免疫球蛋白样区1(LRIG1)的重组质粒pEGFP-C1-LRIG1,为胶质瘤等多种上皮源性肿瘤的分子治疗奠定基础.方法采用RT-PCR方法,从人全血总RNA中,扩增出3282bp的LRIG1cDNA片段,再用XhoⅠ和ClaⅠ双酶切后,定向克隆到真核细胞表达载体pEGFP-C1中,用限制性内切酶酶切分析和DNA序列分析鉴定重组质粒;免疫细胞化学法检测LRIG1基因的表达情况.结果人LRIG1基因的cDNA已克隆到真核细胞表达载体pEGFP-C1质粒中;经脂质体转染SHG44细胞后,G418进行筛选,可见转染细胞胞膜上有大量LRIG1蛋白表达.结论成功构建了pEGFP-C1-LRIG1的真核表达载体,为研究LRIG1基因在胶质瘤等多种上皮源性肿瘤中的作用和其治疗奠定一定的实验基础.%Objective To generate eukaryotic expression vector of pEGFP-C1- lecocine-rich repeats and immunoglobulin-like domain 1 (LRIG1) and obtain its stable expression in SHG44 cells so as to lay the foundation for molecular therapy of glioma and other tumors of epithelial origin. Methods A 3 282 bp cDNA fragment was amplified from the total RNA of the human whole blood cells by RT-PCR method and cloned into the plasmid pEGFP-C1. The vector was identified by the double digestion with restriction enzymes Xho Ⅰ and Cla Ⅰ , and was sequenced by the Sanger-dideoxy-mediated chain termination. The expression of the LRIG1 gene was detected by immunocytochemistry. Results The results showed that the cDNA fragment included 3 282 bp total coding region. The recombinant eukaryotic cell expression vector of pEGFP-C1-LRIG1 was constructed successfully, and the sequence of insert was identical to the published sequence. The SHG44 cells transfected with the pEGFP-C1-LRIG1 plasmid expressed a high level of the LRIG1 protein in the cytoplasm. Conclusion The recombinant plasmid pEGFP-C1-LRIG1 can provide a very useful tool for research on LRIG1 gene's role in glioma and other tumors of epithelial origin and lay the experimental foundation for the treatment.【总页数】4页(P541-544)【作者】方园;屈建强;张熙;周乐;孙梦瑶;娄淼【作者单位】西安交通大学医学院第二附属医院神经外科,陕西西安,710004;西安市中心医院神经外科,陕西西安,710003;西安交通大学医学院第二附属医院神经外科,陕西西安,710004;西安交通大学医学院第二附属医院神经外科,陕西西安,710004;西安交通大学医学院第二附属医院神经外科,陕西西安,710004;西安交通大学医学院第二附属医院神经外科,陕西西安,710004;西安交通大学医学院第二附属医院神经外科,陕西西安,710004【正文语种】中文【中图分类】R739.41【相关文献】1.日本血吸虫真核表达重组质粒PcDNA3-Sj26的构建及其在树突状细胞中的表达[J], 沈定文;李雍龙;刘文琪;龙小纯;刘娟2.人regucalcin cDNA高表达重组质粒的构建及其在原核细胞中的表达 [J], 徐洪;胡亮;倪培华;吴洁敏;赵涵芳3.pNEgr-mIL-12真核表达重组质粒的构建及在COS-7细胞和黑色素瘤B16细胞中的表达 [J], 杨英;刘树铮;付士波4.含绿色荧光蛋白和PLCZ的逆转录病毒载体的构建及其在SHG44细胞中的表达[J], 李侠;章翔;顾建文;付洛安;孙强;刘先珍;王火亘5.过表达KLF4重组质粒的构建及其在白血病K562细胞中的表达 [J], 李波;胡海艳;谭明贤因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

重组质粒pGEX

【Key words】Schistosoma japonicum, Fatty acid binding protein (FABP), gene cloning, Recombinant antigen, fusion expression
目前，血吸虫病防治的主要手段是采用吡喹酮进行化疗。但由于药物本身价格高，而且在一些反复化疗的再感染病人身上已经出现了抗药性的趋向，因此，近几年来利用基因工程的方法发展血吸虫病重组疫苗已成为血吸虫病综合防治的一项重要措施。
4 重组质粒pGEX-6P-1/Sj-FABPc的构建和表达
4.1 目的片段和重组质粒的酶切及分子克隆：挑选含pGEM-T/Sj-FABPc的菌落进行培养，碱裂解法回收和纯化带有目的片段的质粒；同时取适量的表达载体pGEX-6P-1质粒，将二者分别用EcoR I和Not I 进行双酶切处理，用1%的琼脂糖凝胶电泳分离带有双粘性末端的目的片段和表达质粒，并用玻璃珠吸附法[7]进行纯化，T4连接酶于15°C连接4h，构建成pGEX-6P-1/Sj-FABP（见图.1），并转化入BL21菌，用含Amp选择培养基筛选出阳性菌落。通过1%琼脂糖电泳对阳性菌中提取的质粒进行鉴定。
【关键词】日本血吸虫；脂肪酸结合蛋白；基因克隆；重组抗原；融合表达
CONSTRUCTION OF RECOMBINANT pGEX-6P-1/Sj-FABPc AND EXPRESSION IN E.coli Zhao wei1 Su Chuan2 Wu Haiwei2 Hu Xuemei2 Shen Lei2 Zhang Zhaosong2 et al 1 Department of Biology ,Ningxia Medical College ,Yinchuan 750004 2 Institute of Medical Molecular Biology ,Nanjing Medical University, Nanjing 210029

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一
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔａｌｅｎｔｉｖｉｒａｌｖｅｃｔｏｒｃａｒｒｙｉｎｇｓｗｉｎｅｃ — Ｆｏｓｇｅｎｅａｎｄｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｉｔｓｅｆｅｃｔｓｏｎ
【摘要】目的
构建慢病毒载体及观察其介导的ＲＮＡ干扰猪卵巢颗粒细胞ｅ — Ｆｏｓ基因表达情况。方法
通过在线软件设计猪ｃ— Ｆｏｓ基因ｓｈＲＮＡ序列，合成、退火形成双寡链核酸后克隆到ＰＧＭＬＶ— ＳＣ１载体，测序。用
ｃ —Ｆｏｓｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｐｏｒｃｉｎｅｏｖａｉｒａｎｇｒａｎｕｌｏｓａｃｅｌｌｓ（ＧＣｓ）．ＭｅｔｈｏｄｓＰｏｒｃｉｎｅｃ—Ｆｏｓｇｅｎｅｓｈ０ｒｔｈａｉｒｈｉｎＲＮＡ
构建的慢病毒表达载体和包装质粒共转染２９３Ｔ细胞，包装成４组病毒（ｓｈＲＮＡｃ—Ｆｏｓｌ、ｓｈＲＮＡｃ—Ｆｏｓ２、ｓｈＲＮＡ
ｃ —Ｆｏｓ３、ｓｈＲＮＡｃ —Ｆｏｓ４），并测定滴度。感染猪卵巢颗粒细胞，采用ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测各组细胞ｃ—ＦｏｓｍＲＮＡ和蛋白表达。结果重组克隆中插入片段序列与设计的Ｏｌｉｇｏ序列完全一致。滴度为１×１０ＴＵ／ｍＬ，感染复数３０时，阴性对照组、实验ｓｈＲＮＡｅ—Ｆｏｓ４、ｓｈＲＮＡｃ —Ｆｏｓ３、ｓｈＲＮＡｃ —Ｆｏｓ２、ｓｈＲＮＡｃ— Ｆｏｓ１组Ｃ—ＦｏｓｍＲＮＡ的
倍（Ｐ＜０．０５），ｃ— Ｆｏｓ蛋白的表达下降。结论实验ｓｈＲＮＡｃ —Ｆｏｓ１组ｃ —Ｆｏｓ基因下调最明显，成功构建猪卵巢颗
粒细胞ｃ —Ｆｏｓ基因慢病毒ＲＮＡｉ表达载体并筛选出最佳ｓｉＲＮＡ序列。为ｃ —Ｆｏｓ基因的功能研究提供了研究基础。
ｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０１８２，Ｃｈｉｎａ．Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＭＡＨｏｎｇ —ｘｉａ．Ｅ —ｍａｉｌ：ｄｏｃｔｏｒｍａｘｉａ１９７４＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｎ．ｃｎ
表达分别为对照组的０．８４２７± ０．０６５６、０．７９７６－４０．０７３８、０．６９４１４－０．０４８９、０．６５３７± ０．０４７０、０．３１２３－ｔ－０．０１０６
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３３６・
广东医学
２０１４年２月第３５卷第３期ＧｕａｎｇｄｏｎｇＭｅｄｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌＦｅｂ．２０１４，Ｖｏ１．３５，Ｎｏ．３
基础研
究
重组质粒ｐＧＭＬＶ—ＳＣ１ＲＡｉ的构建及其对
【关键词】ｅ —Ｆｏｓ；ＲＮＡ干扰；慢病毒；猪卵巢颗粒细胞
ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＲＮＡｉｐｌａｓｍｉｄｐＧＭＬＶ— — ＳＣＩａｎｄｉｔｓｅｆｅｃｔｓｏｎｃ— — Ｆｏｓｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｐｏｒｃｉｎｅｏ－
猪卵巢颗粒细胞ｃ—Ｆｏｓ的影响术
叶丹凤，郑艳华，丁涛。，薛士鹏，马红霞
‘ 广州医科大学研究生院（广州５１０１８２）；广州医科大学附属第四医院中医科（广州５１１４４７）；湖北省荆门市第二人民医院妇产科（４４８０００）；南阳医学高等专科学校科研处（河南南阳４７３０６１）；广州医科大学附属第一医院中医科（广州５１０１２０）
ｖａ￣ａｎｇｒａｎｕｌｏｓａｃｅｌｌｓ．ＹＥＤａｎ－ｆｅｎｇ，ＺＨＥＮＧＹａｈ—ｈｕａ，ＤＩＮＧＴａｏ，ＸＵＥＳｈｉ — ｐｅｎｇ，ＭＡＨｏｎｇ— ｘｉａ．Ｇｕａｎｇ —