正交设计优选超声萃取甘草酸的提取工艺
正交设计和均匀设计用于炙甘草中甘草酸的提取优化研究
［ 键 词 】 炙甘 草 ； 关 甘草 酸 ； 取 法 ； 提 正交 设 计 ； 均匀 设 计 ； 高效 液 相 色 谱 一二 极 管 陈列 检 测 法 ［ 国图 书 资 料 分 类 号 ］ Ｒ ２ ． 中 ９７ ２ ［ 文献 标 志 码 ］ Ａ 【 章 编 号 ］ １０ － ７ （０ ０ ０ － １ － 文 ０ ９０ ８ ２ １ ）４ ３ ９０ ８ ０ ３
ｒ ｉａ ａ ｐａ ａａ ｃ ｈ ｚ ｅ ｐｒ ｅ ｒ ｔ ｕｍ ｌｅ ｗａ ｔ ｉ ｄ ｂｙ ｒｈｏ ｏ ａｌ ｓｇ ｎｄ ｈｏ ｇ ｎｅ ｕ ｄ ｓｇ ｍｅ ｌ ｓ ｓｕｄ ｅ ｏ ｔ ｇ ｎ ｄｅ ｉ ｎ ａ ｍｏ ｅ ｏ ｓ ｅ ｉｎ． Ｍ ｅ ｈｏ Ｔｈｅ ｈ ｏ ａｏ ｒ ｐｈ ｔ ｄｓ ｃ ｒ ｍ ｔｇ ａ ｙ
李 翔， 王逢春 ， 王 敏
［ 要 ］ 目的 建立 高效 液 相 色 谱 一二 极管 阵列 检 测 法 测 定 甘 草 酸 含 量 的 方 法 ， 采 用 正 交设 计 和 均 匀 设 计 试 验 摘 并 优 化 炙 甘 草 中 甘草 酸 的提 取 工 艺 。 方 法 色 谱 条 件 ： ｇ ｅｔ ｏｂｘＳ ． Ａ ｉｎ ｒａ ＢＣ ｌ Ｚ 分析 柱 （ ． ｍ × ５ ． ４６ｍ ２０ ０ｍｍ， ｍ） 流 动 相 为 ５ ， 乙腈 一 ％ 醋 酸 溶 液 （ 积 比 ３ ：６ ） 检 测 波 长 ２ ４ｎ 流速 １０ｍ／ ｉ， 温 ３ ￣ 进 样 量 １ ｌ 以甘 草 酸 的 含 量 为 ２ 体 ７ ３， ５ ｍ， ． ｌｍｎ 柱 ０Ｃ， Ｏ 。 指 标 ， 固液 比例 、 泡 时 间 和超 声 时 间 等 因 素 进行 优 化 。使 用 统 计 学 方 法 分 析 试 验 结 果 ， 进 行 验 证 试 验 。 结 果 通 对 浸 并
甘草中甘草酸的提取工艺研究2
Study on the Extraction Technology of Glycyrrhizic Acid from Glycyrrhiza uralemis Fisch. DU Wen2bin et al (College of Pharmacy , Wuhan University , Wuhan , Hubei 430072) Abstract [Objective ] The research aimed to study the extraction technology of glycyrrhizic acid from Glycyrrhiza uralemis Fisch. [Method] Taking the
8
0. 218 0. 218 0. 217 0. 218 0. 217 0. 218 0. 05 0. 23
12
0. 346 0. 346 0. 348 0. 350 0. 350 0. 348 0. 20 0. 57
16
0. 356 0. 358 0. 359 0. 359 0. 362 0. 359 0. 22 0. 61
试验以芦丁为标准品 ,利用硝酸铝显色法对悬浮培养飞
图 2 飞廉悬浮细胞中总黄酮含量的变化曲线
Fig. 2 The change curve of total flavonoids content in the suspended
cells of Carduus crispus L.
廉细胞总黄酮含量进行测定 ,稳定性及重现性良好 ,加样回
超声波法从甘草中提取甘草酸工艺研究
现， 甘草酸及甘草次酸类药物具有防止病毒性肝炎 、
高血脂 症 和癌症 等疾病 的作 用 。甘草 酸可 显著 抑制
收稿 日期 ：０ ８—０ ２０ ４—２ １ 基金项 目： 国家 自然科 学基金 （ 编号 ：０ ７０ ４） 陕西省 自然科学 基 １３ ４６ ， 金（ 编号 ：０ ６ ０ ） 陕西省教育厅基金（ ２０Ａ ３ ， 编号 ：６ Ｋ ２ ） ０Ｊ３２ 。
方式， 以实现最佳 冷冻效果 ， 到理想 的加工 目的 。 达 原料不 同 ， 性 不 同 ， 选 择 不 同 的脱 水 温 度 。 特 应
真 空脱 水时 ， 既要 彻 底脱 除物 料 中的水 分 ， 又要 保 持
学 ，０ ３ ２ （ ） ３ ４ ． ２ ０ ，４ ９ ： ８— １
物料原有的色泽和营养 。有的原料对温度比较敏感 ， 如ｉ 苹果 、 洋葱 、 蒜 、 卜 ， 大 萝 等 当温 度超 过 ９ ０℃ 时 便 发生焦糊现象 ， 并产生不愉快异味； 对于甘薯、 马铃 薯、 芋头等 ， 当温度超过 １ 时， ０ｏ ０ Ｃ 可产生香味； 大多 数水产品和食用昆虫类在 １０ １０ｏ 高温下效果最 ～ ２ １ Ｃ
冷冻方式不 同 ， 冻效 果 也不 同 ， 根 据 不 同 的 冷 应 加工需要选 择不 同的冷 冻方 式 和冷 冻条 件 。进行 真
空脱水加工时应选择缓冻 ， 果蔬的冷冻保鲜￣ －应选 ｎ＿ ｒ 择速冻。而冷冻参数的选择与原料干率 、 细胞壁结 构、 可溶性 固形 物 含量 及 组织 液 冰点 有 关 。因此 ， 应 根 据不 同的加工需 要和原料 的特点 ， 择恰 当 的冷 冻 选
佳 。因此 ， 同的原料应 根据各 自的特性 选择适 宜 的 不 脱 水温度 ， 现最佳 的风味效果 。 以体
甘草提取物的工艺流程
甘草提取物的工艺流程一、原料准备与筛选甘草提取物的生产始于优质的甘草原料。
甘草植物通常在晚秋至春季之间收获，此时的甘草根含有最高的甘草酸含量。
原料准备好后，需要进行严格的筛选，去除病害、虫蛀、杂质等不合格的部分，确保提取物的质量和纯度。
二、清洗与干燥筛选后的甘草原料需要进行彻底的清洗，以去除表面的泥沙、尘埃和其他杂质。
清洗后的甘草需要在通风良好、温度适中的地方进行干燥，以防止发霉和变质。
干燥后的甘草应保持一定的湿度，以便于后续的粉碎和提取操作。
三、粉碎与混合干燥后的甘草需经过粉碎机进行粉碎，使其成为适合提取的颗粒大小。
粉碎后的甘草颗粒需要进行混合，以确保提取时甘草酸的均匀分布，从而得到稳定的提取物。
四、提取溶剂选择甘草提取物的提取过程需要选择合适的溶剂。
常用的溶剂有乙醇、甲醇、水等。
选择溶剂时，需要考虑到甘草酸的溶解性、溶剂的安全性、以及提取效率等因素。
五、浸泡与提取在选定的溶剂中，甘草颗粒需要进行一段时间的浸泡，以便于甘草酸充分溶解在溶剂中。
浸泡后，通过加热和搅拌的方式，使甘草酸更好地溶解并转移到溶剂中。
提取的时间和温度需要根据甘草的品种和溶剂的性质进行调整。
六、过滤与浓缩提取完成后，溶液需要进行过滤，以去除其中的固体残渣。
过滤后的溶液通过浓缩设备进行浓缩，使其达到所需的浓度。
浓缩过程中需要控制温度和真空度，以防止甘草酸的热降解和氧化。
七、干燥与粉碎浓缩后的甘草提取物需要进行干燥，以去除其中的溶剂。
干燥过程中需要控制温度和湿度，以防止甘草酸的热降解和吸湿。
干燥后的甘草提取物可以根据需要进行粉碎，得到不同粒度的产品。
八、质量控制与包装完成上述步骤后，需要对甘草提取物进行质量检测，以确保其符合相关标准和客户要求。
质量检测项目包括甘草酸的含量、溶剂残留、重金属含量等。
合格的产品可以进行包装，以便于储存和运输。
包装材料应具有良好的密封性和避光性，以防止甘草提取物受潮、氧化和变质。
通过以上工艺流程，我们可以生产出高质量的甘草提取物，满足医药、食品、化妆品等行业的需求。
甘草中甘草酸的提取工艺研究
表 3 L9 ( 34 )正交试验结果
试验
编号
A
B
C
1
1
1
1
2
1
2
2
3
1
3
3
4
2
1
2
5
2
2
3
6
2
3
1
7
3
1
3
8
3
2
1
9
3
3
2
K1
9. 09 10. 45 9. 32
K2
9. 11 9. 37 9. 38
K3
10. 34 8. 72 9. 85
R
1. 25 1. 73 0. 53
甘草酸 甘草酸提 D 得率 / % 取率 / %
表 4 方差分析
方差来源 SS
df
A
9. 919
2
B
12. 429
2
C
1. 921
2
D 误差
4. 030
2
0. 412
18
MS 4. 960 6. 215 0. 960 2. 015 0. 023
F 216. 783 271. 643
41. 980 88. 077
sig 0. 000 0. 000 0. 000 0. 000
甘草酸工业化生产的关键是提取工艺参数的优化 ,提取 工艺参数包括溶剂浓度 、溶剂体积 、提取温度和提取时间等 , 其中 溶 剂 浓 度 对 甘 草 酸 提 取 率 影 响 最 大 [8 ] 。有 研 究 表 明 [10 ] ,用微波萃取时 ,含 0. 5%氨水的 10%乙醇溶液可使甘 草酸提取率达到最高 ,但多数文献报道是以氨水浓度为定
关于两种方法提取甘草酸效率之比较
关于两种方法提取甘草酸效率之比较【摘要】目的比较水酸法和氨水法提取甘草酸含量的变化。
方法利用正交试验4因素3水平选择最佳提取条件(包括加水量、提取次数、煮沸时间、粉碎时间、溶剂量、振荡时间、氨水浓度)，用紫外分光光度法在252 nm波长处测定甘草酸含量。
结果每100 g甘草粗粉用水酸法提取的最佳条件为：每次加水量2 000 mL，提取2次，煮沸5 min，粉碎20 s；氨水法最佳条件为：每次加0.4%氨水2 000 mL，振荡2 h，提取2次。
最终氨水法提取率为32%，水酸法提取率为26%。
结论在最佳条件下，氨水法提取的甘草酸纯度和提取率明显高于水酸法。
【关键词】甘草；甘草酸；水酸法；氨水法；正交试验Key words：Radix glycyrrhiza；Glycyrrhizic acid；decoct method；Ammonia-water method；orthogonal design甘草为豆科植物甘草(Glycyrrhiza uralensis Fisch)、胀果甘草(Glycyrrhizainflata Bat.)或光果甘草(Glycyrrhizaglabra L.)的干燥根和茎。
甘草中主要含有甘草酸、甘草次酸、黄酮、生物碱、氨基酸等化学成分，具有广泛的生理活性。
甘草酸是甘草中最为重要的化学成分(其含量最高，可达14%)，具有解毒、消炎、抗过敏、治疗溃疡、镇咳、抗肿瘤和防治病毒性肝炎、高血脂症和癌症等疾病的作用[1]。
本试验采用正交设计，比较甘草酸的2种不同提取方法，为大规模、高效生产甘草酸提供理论依据。
1 材料甘草：药材市场自购。
浓硫酸(98%)、氨水(35%)、盐酸(1 mol/L)均为分析纯。
2 方法2.1 甘草酸的提取方法[2-3]及正交因素[4]的选择2.1.1 水酸法甘草粉碎，取100 g甘草粗粉加入适量水，煮沸适当时间，60 ℃水浴恒温振荡2 h。
过滤，将滤渣重复数次上述操作，合并滤液，蒸发浓缩至原来的1/3，边搅拌边滴加浓硫酸至不再析出沉淀为止；陈化2 h，离心分离，将沉淀至于60 ℃以下烘干，即为甘草酸粗品。
正交试验法优化甘草酸的提取工艺
１ １２ 试 药 甘 草 药 材 （ 售 ） 甘 草 酸 单 铵盐 对 照 ．． 市 ，
济、 高效 的甘草 酸提 取 工 艺具 有 极 其 重要 的意 义 。本 研 究采用 含氨 １ 的 ６ ％ 乙 醇溶 液 作为 提取 溶 剂 ， ％ ０ 比较索 氏提取 、 超声 提取 、 微波 提取对 甘草 酸提取 率 的 影响， 并对 粉末 粒度 、 提取 时 问 、 固液 比、 沉 ｐ 酸 Ｈ值 四
甘 草 （ ｌｃｒ ｉ ） 豆 科甘 草 属 植 物 ， Ｇｙｙｒ ｚ 是 ｈａ 自古 至今 ，
因素进 行考 察 ， 以确定 甘草 酸的最 佳提 取工艺 。
１ 材料 及方 法
广为药用 ， 有“ 之 国老 、 药 之 王” 兼 药 众 的尊 号 ， 临床 是
最常用 的 中草 药 品 种 。甘 草 酸 （ ｌ ｙｒｉ ｃａ ｉ， Ａ） ｇｙ ｒ ｚ ｃ Ｇ ｃ ｈｉ ｄ 异 名甘 草甜素 ， 是其 最 重 要 的有 效 成 分 之 一 。研究 证 实， 甘草 酸具有 抗炎 … 、 抑制 肝 炎病 毒 、 滋病 病 毒 艾
３ 讨 论
２ ０ ７ ９ ：３ ５ ． ０ ８， （ ） ５ －４
３ １ 本 方法供 试品溶 液制 备方法 简便 易行 ， 该 色谱 ． 在
【 ］ 赵 子剑 ， 启 鹏 ， 敏 ． ４ 赵 刘 复方 石淋 通 片的 质 量 标 准 研 究 【 ］ 现 代 中 Ｊ．
医药 ，０ ５，５ ５ ：９７ ． ２ ０ ２ （ ） ６ －０
学 工 业 出 版 社 ，０ ５ ２ ９ ２ ０ ：２ ．
［］ 赵子剑． Ｌ ２ ＨＰ Ｃ测 定 藤 黄健 骨胶 囊 中 淫 羊 藿 苷 的含 量 ［ ］ 光 明 中 Ｊ．
甘草酸的提取分离及鉴定实验反思
甘草酸的提取分离及鉴定实验反思甘草酸是一种重要的药用成分，具有抗炎、抗氧化、抗溃疡等多种药理活性。
因此，对甘草酸的提取分离及鉴定具有重要的研究意义。
本实验旨在探讨甘草酸的提取分离方法，并利用色谱技术对提取物进行定性与定量分析。
首先，我们采用了超声波辅助提取法来提取甘草酸。
该方法具有操作简便、提取效率高的优点。
在实验中，我们选择了甘草根作为原料，将其粉碎并混合乙醇溶剂，然后进行超声波提取。
超声波的作用能够破坏细胞壁，促进甘草酸的释放。
实验结果表明，超声波提取法能够有效地提取甘草酸，并且提取率较高。
接下来，我们进行了甘草酸的分离纯化实验。
由于甘草酸在溶剂中的溶解度较高，在大部分有机溶剂中均可溶解。
因此，我们选择了正己烷和乙醇为溶剂，并采用反应结晶法进行分离纯化。
实验中，我们将提取得到的甘草酸溶液慢慢加入冷却的正己烷中，通过结晶使甘草酸分离出来。
此方法能够有效地去除杂质，并得到较为纯净的甘草酸。
最后，我们利用色谱技术对提取物进行了鉴定。
我们选择了高效液相色谱（HPLC）进行分析。
通过比对标准品和提取物的保留时间及峰面积，我们能够定量分析甘草酸的含量。
实验结果显示，提取物中含有一定量的甘草酸，并且与标准品具有相似的色谱图谱。
整个实验中，我们遇到了一些问题。
首先，提取物中可能存在其他有机酸或杂质，导致甘草酸的纯度不高。
其次，色谱分析过程中，可能存在色谱峰重叠的问题，使得甘草酸的定量分析不够准确。
针对这些问题，我们可以进一步改进提取和分离的方法，以提高甘草酸的纯度和分析的准确性。
总之，通过本次实验，我们成功地提取分离了甘草酸，并利用色谱技术对其进行了鉴定。
通过实验反思，我们认识到了实验过程中存在的问题，并提出了改进的方向。
这些实验结果对于进一步研究甘草酸的药理活性及应用具有重要的指导意义。
甘草中甘草酸和甘草苷的提取工艺研究
甘草中甘草酸和甘草苷的提取工艺研究魏宁;郎伟君【摘要】为优选甘草的最佳提取工艺条件，以甘草酸和甘草苷的提取率为指标，采用正交设计法对影响提取的因素进行优化．结果表明，最佳提取溶剂为乙醇，影响浸出的主要因素为乙醇体积分数、溶媒用量、提取时间和提取次数，最佳提取工艺为6倍量55％乙醇，加热回流提取3次，每次1．5 h．该工艺合理，稳定可行，适合生产．%The orthogonal design method was used to optimize the best extraction technology conditions of glycyrrhiza uralensis with extraction rate of glycyrrhizic acid and liquorice glyco-sides as index.Results indicated that the best extraction solvent was ethanol, and the main factors influencing the leaching were ethanol concentration, solvent dosage, extraction time and extraction times.In addition, the best extraction process was 6 times of the volume of 55%ethanol, heating reflux extraction for 3 times and each time for 1.5 h.This process was reasonable, stable, feasible and suitable for production.【期刊名称】《哈尔滨商业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2015(000)002【总页数】3页(P143-145)【关键词】甘草酸;甘草苷;正交试验;提取工艺【作者】魏宁;郎伟君【作者单位】哈尔滨商业大学药学院，哈尔滨150076;哈尔滨商业大学药学院，哈尔滨150076; 哈尔滨乐泰药业有限公司，哈尔滨150025【正文语种】中文【中图分类】R284甘草为豆科植物甘草、胀果甘草、光果甘草的根及根茎，具有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药的功能[1].甘草的主要化学成分为三萜皂苷类和黄酮类，其中甘草酸、甘草苷分别是其重要的单体活性成分，具有很强的药理活性[2].本文以甘草酸和甘草苷的提取率为指标，对提取溶剂的选择和最佳方法进行考察，旨在为甘草用于化妆品并实现工业化生产提供参考.高效液相色谱仪(日本岛津公司)：SPD-M20A型二极管阵列检测器、LC-10ATvP型泵、DGU-20A3型脱气器、CBM-20A型系统控制器、SIL-20A型自动进样器、LC solution色谱工作站、Diamonsil-C18色谱柱(5 μm,150 mm×4.6 mm)(迪马公司).甘草药材(哈药集团世一堂制药厂，经哈尔滨商业大学药学院张德连副教授鉴定为真品)；甘草酸单铵盐对照品(批号：111089-201301)、甘草苷对照品(批号：111610-201301)均购自中国药品生物制品鉴定所；甲醇、乙腈、冰乙酸为色谱纯，水为双蒸水，无水乙醇为分析纯.2.1 甘草酸和甘草苷的质量浓度测定2.1.1 色谱条件1)甘草酸色谱柱：Diamonsil-C18柱(5 μm,150 mm×4.6 mm)；流动相：甲醇-0.2 mol/L 醋酸铵溶液-冰醋酸(67∶33∶1)；检测波长：250 nm；流速：1 mL/min，进样量：10 μL.2)甘草苷色谱柱：Diamonsil-C18柱(5 μm,150 mm×4.6 mm)；流动相：乙腈-0.5%冰醋酸(1∶4)；检测波长：276 nm；流速：1.0 mL/min；进样量：20 μL.2.1.2 对照品溶液的制备1)甘草酸精密称取甘草酸单铵盐对照品5 mg，置于5mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀即得.2)甘草苷精密称取甘草苷对照品1.25 mg，置于5 mL量瓶中，加甲醇制成每1 mL含250 μg的溶液.2.1.3 供试品溶液的制备1)甘草酸精密量取各提取液1 mL，置50 mL量瓶中，加流动相约20 mL，超声处理30 min，加流动相稀释至刻度，精密量取续滤液10 mL，置25 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，取续滤液，测定并计算；2)甘草苷精密量取各提取液1 mL，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇溶液10 mL，超声处理30 min，补足减失的重量，精密量取续滤液1 mL，置50 mL量瓶中，用20%乙腈稀释至刻度，取续滤液，测定并计算.2.1.4 线性关系考察1)甘草酸精密吸取对照品溶液0.25、0.50、0.75、1.00、1.50 mL，分别置于5 mL容量瓶中，流动相稀释，摇匀.分别精密吸取10 μL注入液相色谱仪进行分析.以甘草酸单铵盐对照品的进样质量浓度(C)对其峰面积积分值(A)进行线性回归，得回归方程：A=3811.1C+683.15(r=0.999 8)，结果表明，甘草酸单铵盐对照品的进样质量浓度在50～300 μg/mL的范围内与其峰面积积分值呈良好线性关系.2)甘草苷精密吸取对照品溶液0.25、0.50、0.75、1.00、1.50 mL，分别置于5 mL容量瓶中，甲醇稀释，摇匀.分别精密吸取20 μL注入液相色谱仪进行分析.以甘草苷对照品的进样质量浓度(C)对其峰面积积分值(A)进行线性回归，得回归方程：A=19 003C+10 174(r=0.999 7)，结果表明，甘草苷对照品的进样质量浓度在6.25～37.5 μg/mL的范围内与其峰面积积分值呈良好线性关系.2.2 提取工艺研究2.2.1 不同提取溶剂的选择根据文献报道[3]和2010年版《中国药典》(一部)，结合实际生产的需要，对不同提取溶剂进行筛选.选取水和65%的乙醇作为提取溶剂，以甘草酸和甘草苷的提取率为评价指标进行比较，提取方法： 1)水煎煮法：甘草粗粉50 g，用20倍量水煎煮3次，每次1.5 h，合并煎液，离心，倾取上清液，浓缩至50 mL，测定； 2)乙醇回流提取法：甘草粗粉50 g，用6倍量65%的乙醇回流提取3次，每次1.5 h，合并提取液，回收乙醇至无醇味，浓缩至50 mL，测定.不同提取溶剂下甘草酸和甘草苷的提取率见表1.注由表1可知，水煎煮法的总提取物得率比65%乙醇回流提取法的总提取物得率高一些，但65%乙醇回流提取法的甘草苷和甘草酸的提取率都比水煎煮法的高很多，综合结果优选65%的乙醇作为提取溶剂.2.2.2 优化乙醇回流提取工艺选用正交试验，优化乙醇回流提取条件.根据预实验选取乙醇体积分数(A)、溶媒用量(B)、提取时间(C)、提取次数(D)4个因素，每个因素选3个水平，采用L9(34)正交设计，以甘草酸和甘草苷的提取率综合值为指标进行考察，综合值=(甘草酸提取率+甘草苷提取率)/2.因素水平见表2；正交实验结果见表3；方差分析结果见表4.由表3直观分析可知，各因素对提取效果的影响依次为D>C>B>A，优化水平是A2B3C3D3；由表4方差分析可知，提取次数(D)对甘草酸、甘草苷提取效果的影响有显著意义(P<0.05).以总提取物得率为考察指标时，直观分析表明各因素对提取效果的影响依次为D>C>B>A，优化水平是A2B3C3D3；方差分析表明，B、C、D三种因素对总提取物得率的影响均有显著意义(P<0.05)；乙醇体积分数(A)对甘草酸、甘草苷的提取率，总提取物得率的影响均无显著意义.为降低大批量生产成本，决定选用55%乙醇(A1)，则最佳工艺为A1B3C3D3，即6倍量55%乙醇，回流提取3次，每次1.5 h.该结果与正交试验中综合值最高者的搭配A1B3C3D3一致.2.2.3 验证试验称取甘草50 g，按最佳工艺A1B3C3D3进行验证试验，测得甘草酸、甘草苷提取率分别为73.41%、74.18%，接近正交试验方案中的最高值，优化条件可行.有文献报道[4]，甘草酸用氨水提取效果好.甘草苷易溶于有机溶剂，多用乙醇提取.通过查阅文献和预实验，并从甘草用于化妆品工业化生产和安全角度考虑，本试验综合优选乙醇作为提取溶剂，确定乙醇体积分数、溶媒用量、提取时间和提取次数为考察因素，通过验证放大实验表明，正交实验优选确定的最佳工艺水平是科学、可行的，有利于实际生产降低能源、节约时间，故确定甘草乙醇回流提取的最佳工艺为A1B3C3D3，即6倍量55%乙醇，回流提取3次，每次1.5 h.【相关文献】[1] 国家药典委员会.中国药典(一部)[M].北京: 中国医药科技出版社, 2010. 80-81.[2] 张明发, 沈雅琴, 张艳霞.甘草及其有效成分的皮肤药理和临床应用[J].药物评价研究, 2013, 36(2): 146-156.[3] 刘育辰,王文全,郭洪祝.甘草有效成分的提取纯化方法研究进展[J].中成药, 2010, 32(11): 1953-1957.[4] 杜文彬,张洪.甘草中甘草酸的提取工艺研究[J].安徽农业科技, 2008, 36(25): 10935-10946.。
甘草中提取甘草酸的新工艺研究
关 键词 ： 甘 草酸 ； 提取 工 艺 ； 交试 验 ； 率 正 得
中图分 类号 ： Ｒ ２ ４ ２ ８ ． 文献 标志 码 ： Ａ 文章编 号 ：０ ４０ ６ （０ ０ ０ —０ ３０ １ ０ —３ ６ ２ １ ） ２０ ５ —５
Ｓ ｕ ｙ ｏ ｈ ｗ ｃ ｎｉ ｅ ｏ ｔ ｄ ｎ ｔ ｅ Ｎｅ Ｔｅ ｈ ｑｕ ｓ ｆ ｒ Ｅｘｔ ａ ｔｎｇ Ｇｌ ｃ ｒ ｈ ｚ ｃ ｒ ｃ ｉ ｙ ｙ ｒ ｉｉ
ｍｅ ｈ ｄ ｒ ｅ ｅ ｍｉ ｅ ． ｏ ｈ ｅ ｔｃ ｎ ｉｉ ｎ ｆｕ ｔ ａ ｏ ｉ ｎ ａ ｃ ｍｅ ｔｅ ｔ ａ ｔｏ ｔ ｅ ｔ ｍｐ ｒ ｔ ｒ ｓ ｔ ｏ ｓ ｗｅ ｅ ｄ ｔ ｒ ｎ ｄ Ｆ ｒｔ ｅ ｂ ｓ ｏ ｄ ｔ ｓ ｏ ｌｒ ｓ ｎ ｃ ｅ ｈ ｎ ｅ ｎ ｘ ｒ ｃ ｉ ｎ， ｈ ｅ ｅ ａ ｕ ｅ ｉ ｏ
ｓ ｔｄｅ ｔａｔ ｎ ｔ ｅｍｉｅ ｘｒｃａ ｔａ ｄ ｄ ｉ １ ％ ｅｈ ｎ ｌ ０ ５ ａ ｉ ｅ ｘｒｃｉ ，ｈ ｘ ｄ ｅ ｔａｔｎ ｄ ｅ ｓ ０ ｓ ｏ ｔａ ｏ ＋ ． ｍｍｏ ｉ， ｅ ｔ ｇ ｐ ｗｅ ５ Ｗ ｎ ｎａ ｈ ａｉ ｏ ｒ５ ０ ｉ ｎ
条件 是 ： 入 混 合提 取 剂 （／ 加 １ ２体 积 １ 乙 醇 和 ＋ １ ２体 积 ０ ５ 氨 水 ） 微 波 功 率 ５ ＯＷ 加 热 ３ ０ ／ ． ， ５
次 ， 热 时间 为 ２ ， 化 后 平均 得 率 为 １ ． ７ ． 加 ０Ｓ 优 Ｏ ７ 经过 优 选得 到 的 ２种 甘 草酸 制备 工 艺 ， 取 率较 提
（ 州 理 工 大 学 生 命 科 学 与工 程 学 院 ， 肃 兰 州 ７ ０ ５ ） 兰 甘 ３０ ０
摘 要 ： 采 用超 声 强化 提 取 和微 波辅 助提 取 ２种 新 方 法对 甘 草 中的甘 草 酸提 取 工 艺进 行 研 究 ， 以甘草 酸得 率 为考 察指 标 ， 过 正 交 试 验 设 计 ， 定 超 声 强 化 提 取 和 微 波 辅 助提 取 各 自的 最 佳 提 通 确 取 条件． 果表 明 ， 声 强化提 取 的最佳 工 艺条件 ： 结 超 温度 为 ３ ０℃ ， 声 电功 率 密度 为 ８ ｅ 。 超 超 ０ｗ／ ｒ ， ａ 声作 用时 间为 ９ ｎ 酸化 Ｐ 值 为 １ ０ 优 化后 平均 得 率 为 １ ． Ｏ ； 波辅 助提 取 的最 佳 工 艺 Ｏｍｉ ， Ｈ ．， ２ ２ 微
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4105 mg /m l的溶液作为对照品储备液 。
表 1 HPLC法测定甘草酸含量的加样回收实验
编号
样品量 (mg) 对照品量 (mg) 测得量 (mg)
回收率 ( % ) 平均回收率 ( % )
RSD ( % )
1
31346 0
11440 5
41936 2
10311
2
41146 2
21881 0
61850 0
参 考 文 献
[ 1 ] 中华医学会精神科分会. 中国精神障碍分类及诊断标准. 山东 科学技术出版社 , 2001: 75278.
[ 2 ] 张传芝 ,卢氏臣 ,李绍敏 ,等. 齐拉西酮治疗首发精神分裂症对 照研究. 临床精神医学杂志 , 2007, 17 (5) : 317.
[ 3 ] 中华医学会 ,舒良. 精神分裂症防治指南. 北京大学医学出版 社 , 2007: 52253.
外 ,其余均为分析纯 ,水为重蒸水 。
面积有良好的线性关系 。
美国 W aters 1525 B reeze 高效液相色谱仪 (W aters 2487 21115 精密度试验 精密吸取对照品溶液 5 μl注入液相色
双波长紫外检测器 ) , JBT/C2YCL 400 / PGT ( c)超声波药品处 谱仪 ,在 21113色谱条件下连续进样 5次检测 ,结果峰面积分
211 含量测定方法的建立
量的同一样品 (含量为 72174% )适量 ,分别加入甘草酸单铵
21111 对照品溶液的制备 精密称取甘草酸单铵盐对照品 盐对照品溶液 015、110、110、210、510 m l,按 21113 色谱条件
适量于 50 m l容量瓶中 ,用稀乙醇溶解并定容 ,制成浓度为 测定 ,结果见表 1。
147101
149175
G = ∑xi = 453174
【关键词 】 甘草 ;甘草酸 ;超声波辅助萃取 ;高效液相色谱
甘草系多年生草本植物 ,是豆科 Legum inosae植物甘草 、 欧甘草 、胀果甘草的根和根状茎 ,药用历史悠久 ,是最常见的 中草药和经济植物 。甘草具有补脾益气 、解毒保肝 、润肺止 咳 、调和诸药的功效 ,主要成分为甘草酸 [2 ] 。甘草酸又是高 甜度的甜味剂和解毒剂 ,且具有很强的增香效能 ,已成为一种 十分重要的食品和化妆品添加剂 [3 ] 。因而甘草酸的提取工
早在 50年代 ,人们就把超声波用于提取花生油 、鱼组织 中的鱼油 、啤酒花中的苦味素 、动物组织浆中毒质等 ,都表明 利用超声波在较短时间内能得到比用常规法要多的提取物 。 把超声技术用于中药有效成分的提取 ,近年来才被重视 。一
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48118 ±11126 49141 ±12130 54125 ±11136 53145 ±9163 52178 ±13155
> 0105 < 0101 < 0101 < 0101 < 0101
213 临床疗效比较 治疗组痊愈 9 例 、显进 17 例 、有效 6 例 、无效 2例 ,显效率 : 76147% ,总有效率 94112% ;对照组痊
3
18倍量
3次
标 ,采用 L9 (34 )正交实验方案 。试验因素水平和结果分别见 表 3 正交实验方案和结果
浸泡时间 (C) 2h 4h 12 h
编号
A
B
C
D
得率 ( g)
含量 ( % )
综合提取率 ( % )
1
1
1
1
1
10165
30143
43138
2
1
2
22111403311150153
3
1
3
3
作者单位 : 519000 珠海中山大学附属第五医院 (贾艳艳 郭永 谊 ) ;上海市泛植制药有限公司 (陈华 )
艺也日益成为人们关注的热点 。目前对甘草酸的提取分离主 要有浸泡法 、水煎法 、渗漉法等 。这些方法在工业中均有应 用 ,但它们都不同程度的存在费时 、收率低 ,产量 、质量无法提 高的缺点 。因此 ,寻找一种提取率高 、能耗少 、快速而又适合 工业化大生产的甘草酸提取工艺已十分必要 。
(由 SIGMA 公司提供 ,纯度为 7614% ) ,对羟基苯甲酸正丁酯 度绘制工作线 ,得回归方程 : Y = 3 289 712X211 981, r = 01999
(由 SIGMA公司提供 , HPLC用 ) 。化学试剂除乙腈为色谱纯 9。表明甘草酸单铵盐浓度在 01125 8～11235 mg/m l时与峰
·158·
中国实用医药 2009年 8月第 4卷第 23期 China Prac Med, Aug 2009, Vol. 4, No. 23
些研究表明 ,利用超声波产生的强烈振动 、高的加速度 、强烈 21112 内标溶液的制备 精密称取对羟基苯甲酸正丁酯适
的空化效应 、搅拌作用等 ,都可加速药物有效成分进入溶剂 , 量于 250 m l容量 瓶 中 , 用 稀乙 醇 溶 解 并 定 容 , 制 成 浓 度 为
52HT2A、52HT2C、a2肾上腺素能受体具有较高的亲和力 ,对组 织胺 H1受体具有中等亲和力 ,是 52HT2A 和多巴胺 D2 的强 拮抗剂 。治疗精神分裂症的作用机制可能与其通过对 52HT2 和多巴胺 D2受体的拮抗作用产生作用 。并根据神经系统不 同状态发挥作用 ,维护神经系统正常生理功能 。两组治疗后 PANSS阴性症状量表评分具有显著性差异 ( P < 0105) ,这表 明齐拉西酮对于改善精神分裂症阴性症状疗效优于氯氮平 。 由于齐拉西酮既能改善精神分裂症阳性症状 ,又对阴性症状 有较好的临床效果 ,故其临床显效率较高 ,对精神分裂症精神 症状改善效果好 。
理机 (济宁金百特电子有限责任公司 ) , TDL 240B 离心机 , DZF 别为 1 092 975、1 069 935、1 066 123、1 068 598、1 077 011、平
型真空干燥箱 。
均值为 10 074 928、RSD 为 0168%。
2 方法与结果
21116 加样回收试验 采用加样回收法 。精密称取已知含
1 材料和仪器
110、210、310、410、610、810、1010 m l于 25 m l容量瓶中 ,加入
新疆产乌拉尔甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch1 (兵团医药 210 m l的内标液 ,用稀乙醇定容至刻度 ,摇匀 。按 21113所述
公司提供并鉴定 ,适当粉碎后备用 ) ,甘草酸单铵盐对照品 色谱条件测定峰面积 ,以甘草酸的峰面积对甘草酸单铵盐浓
[ 4 ] 杨顺才 ,高申荣 ,杜见芳 ,等. 齐拉西酮与利培酮治疗首发精神 分裂症的对照研究. 中国民康医学杂志 , 2008, 20 (5) : 4092410.
治疗组药物副反应一般较轻 ,主要有头晕 、恶心 、静坐不
正交设计优选超声萃取甘草酸的提取工艺
贾艳艳 陈华 郭永谊
【摘要 】 目的 研究超声波辅助萃取甘草中甘草酸的最佳提取工艺 。方法 采用 3因素 4水平 L9 (34 )正交试验法 ,以甘草酸的含量和得率为考察指标 ,对超声波辅助萃取甘草中甘草酸的工艺优化 。在 优选出的超声波辅助萃取最佳工艺条件下 ,将该法与加热回流法 、渗漉法进行比较 。结果 优选的超声 波辅助萃取工艺条件为 :药材浸泡 4 h,用相当于药材重量 18倍量的水 ,超声提取 3次 。超声波萃取 90 m in甘草酸综合提取率劣低于渗漉提取 10 h,远高于加热回流 6 h。结论 超声波辅助萃取具有快速 、高 效 、节能的特点 ,可用于甘草中甘草酸的提取 ,值得推广 。
47122 ±12135 45116 ±9121 49196 ±11135 47115 ±8127 49131 ±8156
48121 ±10102 57123 ±10154 63158 ±10144 59154 ±12162 60184 ±9127
47116 ±11150 46135 ±9186 50106 ±11152 49175 ±8127 49133 ±8156
3
11190
35176
56193
4
2
1
2
3
10165
30158
43160
5
2
2
3
1
11134
34170
52168
6
2
3
1
2
11145
33108
50170
7
3
1
3
2
11100
33145
49126
8
3
2
1
3
11130
34199
52193
9
3
3
2
1
11130
35149
53169
K1
150188
136124
从而提高了提出率 ,缩短了提取时间 ,并且免去了高温对提取 01465 3 mg /m l的溶液 ,作为内标液 。
成分的影响 [4 ] 。因此把超声波作为提取的一种手段 ,在中草 21113 色谱条件 色谱柱 : D iamonsil ( 250 mm ×416 mm , 5
药有效成分提取这一领域中具有良好的应用前景 。本实验采 μl)北京迪马科技公司 ; 流动相 : 乙腈 20101 mol/L 磷酸 ( 38:
能 、震颤 、嗜睡等 ,与对照组相比不良反应的发生率明显较低 , 提高了患者服药的依从性 。本研究提示齐拉西酮对体质量血
愈 8例 、显进 16例 、有效 7例 、无效 3例 ,显效率 70159% ;总 有效率 91118%。两组有效率经 χ2 检验无显著性差异 ( P >