物体表面、手的细菌检测方法-食品伙伴网
物体表面与工人手细菌总数检测方法
物体表面与工人手细菌总数检测方法ICSQ/SL 西安申兰生物医学工程有限公司企业标准Q/SL 06-0012011 ,物体表面与工人手细菌总数的检测规程2011-08-15发布 2011-09-01实施发布西安申兰生物医学工程有限公司Q/SL 06-001,2011目次前言 ..................................................................... ............. II 1 范围 ..................................................................... ............ 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... .. 1 3 职责 ..................................................................... ............ 1 4 抽样 ..................................................................... ............ 1 5 采样方法 ..................................................................... ........ 1 6 检验方法 ..................................................................... ........ 1 7 结果计算 ..................................................................... ........ 1 8 记录(见表A.1 表A.2) (1)IQ/SL 06-001,2011前言本标准是根据Q/SL 9000-2011《质量手册》中的要求而制定。
手、设备表面微生物取样方法
手、设备表面微生物取样方法一、携带物品：酒精灯、75%酒精棉球若干、不锈钢剪、镊子、棉签、10ml生理盐水、一次性手套。
备注：不锈钢剪、镊子、棉签、10ml生理盐水须经高温蒸汽灭菌；10ml生理盐水根据实际所需准备多支；一次性手套需经辐照灭菌；二、操作方法：1、手取样点燃酒精灯，取样人员戴上一次性手套，用棉签蘸取少许无菌生理盐水涂抹车间人员手正背面，反复两次，在涂抹时要转动棉签，使各部位能均匀。
完成后用不锈钢剪剪去取样人员手持部段，然后将棉签投入10ml生理盐水中，盖上试管盖。
2、设备表面取样点燃酒精灯，取样人员戴上一次性手套，用棉签蘸取少许无菌生理盐水涂抹设备平滑表面（面积自己预先估计一个大概数值，25、50或100cm2等），反复涂抹两次，在涂抹时要转动棉签，使各部位能均匀。
完成后用不锈钢剪剪去取样人员手持部段，然后将棉签投入10ml生理盐水中，盖上试管盖。
三、细菌及大肠菌群的培养（具体操作时以GB4789.2-2010和GB4789.3-2003为准）样液稀释：将放有棉棒的试管充分振摇。
配成1：10样液。
根据污染情况，进行十倍递增稀释，吸取1ml 的1：10样液加9ml无菌生理盐水中，混匀，此液为1：100稀释液，以此类推。
细菌总数：1、以无菌操作，选择1～2个稀释度各取1ml样液分别注入到无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿，及时将冷却至46℃左右的平板计数琼脂培养基倾注平皿，每皿约15-20ml，转动平皿使其充分混合均匀。
2、待琼脂凝固后，将平皿翻转，置36℃±1℃培养48 h后计数。
3、结果报告：报告每25、50或100cm2数食品接触面或每只手的菌落数。
大肠菌群：1、以无菌操作，选择3个稀释度各取1ml样液分别接种到乳糖胆盐发酵管内，每个稀释度接种三管。
2、将乳糖胆盐发酵管置于36℃±1℃培养24±2h。
所有乳糖胆盐发酵管都不，则可报告为大肠菌群阴性，如有产气者，根据标准做证实实验。
台面和手部菌落总数测定方法
3.1 PCA培养基（121℃，灭菌15分钟）
3.2 VRBA培养基
3.3 0.85%灭菌生理盐水
4、检验程序
4.1样品采集：
4.1.1操作台面：将经灭菌的内径为5cm X 5cm的灭菌规格板放在被检物体表面，用灭菌过的镊子夹取浸有生理盐水的脱脂棉在规格板内进行取样，用脱脂棉擦洗两次后立即放入装有10ml灭菌生理盐水的试管中，加盖。
X = A/2×10
X —大肠菌群数
A —平板上的平均菌落数
***食品有限公司
文件编号
FW-QC-QI-008
版号
A1
文件名称：
台面和手部菌落总数、大肠菌群的测定
页次
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生效日期
2009.04.01
1、范围
适用于平和坊食品有限公司操作台面、设备、工具和工人手部表面菌落总数、大肠菌群的测定。
2、设备与材料
2.1生化培养箱37±1℃
2.2恒温水浴锅46±1℃
2.3培养皿
***食品有限公司
文件编号
FW-QC-QI-008
版号
A1文件Βιβλιοθήκη 称：台面和手部菌落总数、大肠菌群的测定
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2009.04.01
4.3大肠菌群测试：将已采集的样品在6h内送实验室，每支采样管充分混匀后取1m L样液，放人灭菌平皿内，倾注VRBA!]J6f;D_H2c#X_^137390培养基15ml。每个样品平行接种两块平皿，待凝固后翻转平皿置37℃士1'C培养18-24h，计数平板上紫红色菌落数。
Y2 = A/S×10
Y3=A×10
K_BF_{_h1`L1F:q_G137390式中_K x_B_iD_i137390:
食品接触面微生物检验规程
食品接触面微生物检验规程食品接触面微生物检验规程1、标准要求●直接接触食品的生产设备设施：菌落总数≤10个/cm2，大肠菌群（MPN /cm2）：阴性；●员工手部、一次性手套、工作服等食品接触面；菌落总数≤10个/cm2；大肠菌群（MPN /cm2）：阴性；●生产车间空气落菌：清洁区：≤10cfu/平皿；次清洁区：≤50cfu/平皿；非清洁区：≤100cfu/平皿；●包装卷膜、饼托等内包材；菌落总数≤10个/cm2，大肠菌群（MPN /cm2）：阴性2、检验方法2.1菌落总数2.1.1：涂抹法适用于直接接触食品的生产设备设施；员工手部、一次性手套、工作服等食品接触面；包装卷膜、饼托等内包材；2.1.2 仪器设备：高压灭菌器、恒温培养箱、天平、锥形瓶。
2.1.3试剂及培养基：营养琼脂培养基；生理盐水。
2.1.4操作2.1.4.1样品采集2.1.4.1.1将生理盐水以50ml分装入锥形瓶中用高压灭菌器灭菌。
2.1.4.1.2将灭菌滤纸浸沾生理盐水在内包装材料（塑料瓶内壁、复合薄膜袋内表面）、生产器具和人员手部的表面檫拭，面积约为25c㎡，然后将带菌棉签放入有50ml生理盐水的锥形瓶中，充分振荡后作原液备用。
2.1.4.2测定：将原液取1ml于平板中，再将灭菌营养琼脂倒入平板内并转动平皿，使混合均匀，待凝固后倒转放入生化培养箱中（36+1）℃培养（48+ 2）h。
2.1.4.3 计数：以菌落计数法计菌落数。
2.1.5 结果计算生产器具和生产人员手部每25c㎡表面的细菌总数=平皿上菌落的平均数2.2 自然沉降法适用于生产车间空气落菌2.2.1 仪器与设备：高压灭菌器、恒温培养箱、器皿、天平。
2.2.3 试剂及培养基：营养琼脂培养基、生理盐水。
2.2.4 操作2.2.4.1将营养琼脂培养基在高压灭菌器中灭菌后制成营养琼脂平板。
2.2.4.2根据现场面积的大小及环境状况，选择有代表性的位置设置采样点（高出地面1.2m～1.5m），室内面积> 30㎡设3个以上采点，室内对角线交叉处的中点及与中点等距离的四角的各点取样（四角距离壁1m处），室内面积≤30㎡设内、中、外对角线三点取样（内外距离墙1m）。
物体表面及手的检测
物品和物体表面消毒效果监测1、采样方法(1）采样时间：消毒处理后医疗操作前。
(2)采样面积：被采表面小于100cm²，时，取全部表面;被采表面大于等于100cm²时，取100cm²。
（3）采样方法：将5cm×5cm 灭菌规格板放在被检物体表面，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液（中和剂＋洗脱液)的棉试子一只，在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次，并随之转动棉试子,剪去手接触部位,将棉试子放入装有10ml 含相应中和剂的无菌洗脱液(中和剂＋洗脱液)的试管内,在试管上标明科室、检品所在房间和物品或物体表面的名称及采样面积，立即送至检验科细菌室。
若采样面积大于等于100cm²，应连续采样四个点（即采样100cm²）。
2、检验方法（1）细菌总数检测〔cfu /cm²〕：将试管内的棉试子用力振打80次，无菌操作吸取1。
0ml 接种于灭菌平皿内，加入溶化冷至45一48℃的营养琼脂15一18ml,边倒入边摇匀,待凝固后放入 37℃培养箱培养 48h ，计数菌落数 cfu / cm²。
计算：cfu/cm²=平板上菌落数×稀释倍数／采样面积（cm²） ,不规则物品或物体表面报告单位为 cfu／件。
（2）致病菌检测①检测原则：致病菌的检测依据污染情况进行相应指标的检测。
②金黄色葡萄球菌检测取采样液1.0ml ,接种于 5ml SCDLP 液体培养基中→36℃±1℃增菌 24h→取1白金耳环上述增菌液，在血平板上作划线分离→36℃±℃培养24h→观察菌落特征→鉴定→报告。
③乙型溶血性链球菌检测取样品1.0ml，接种于1％葡萄糖肉汤→37℃增菌24h→取1白金耳环增菌液在血平板上作划线分离→36℃±1℃培养24h→观察菌落→鉴定→报告。
④沙门氏菌属、志贺氏菌属、非发酵菌群等致病菌的检测参照相关检测方法。
食品接触面表面微生物检测规程
⾷品接触⾯表⾯微⽣物检测规程⾷品微⽣物检测1 ⽬的对洁净区操作⼈员、洁净区的表⾯定期进⾏微⽣物检测，以避免⼈为因素污染产品。
2 范围本规程适⽤于检测洁净区操作⼈员⼿部、⼯作服和洁净区表⾯的菌落总数。
3 职责3.1实验室检验员负责对菌落总数进⾏测试并予以记录。
3.2品管部主管负责对测试结果进⾏审核。
4 内容4.1本检测规程采⽤接触平⽫法。
4.2器具、培养基及测试条件；4.2.1器具、培养基4.2.1.1培养箱、培养⽫、营养琼脂培养基。
4.3洁净区操作⼈员微⽣物检测4.3.1步骤：4.3.1.1取已灭菌并在50±5℃保温的液态营养琼脂培养基，在层流净化台上倒⼊已灭菌的培养⽫中（18-20ml/⽫）。
4.3.1.2打开培养⽫上盖，以培养基表⾯接触测试⾯轻压2-3秒，盖上盖⼦。
4.3.1.3以75%酒精擦拭消毒测试⾯。
4.3.1.4将培养⽫放置于30-35℃培养箱中培养48⼩时。
4.3.2测试⾯之选择：4.3.2.1 ⼿部：以⼿掌内侧⾯为主要测试⾯。
4.3.2.2 ⼯作服：以袖⼝、肘部、腹部为主要测试⾯。
4.3.3 测试频率与标准：（见下表）洁净级别警告限（菌落数/25cm2）监测频率⼿⼯作服100001次/班10000331次/班100000551次/⽉4.3.4异常情况处理：4.3.4.1异常情况：指测试结果超过规定标准，或出现病原菌的情况。
4.3.4.2出现异常情况，⽴即查找污染源，并进⾏彻底的清洁消毒。
4.3.4.3对在此期间⽣产的产品的微⽣物污染情况进⾏调查，必要时采取应急措施。
4.3.4.4对⽣产部门进⾏⼈员个⼈卫⽣及清洁规范的教育和培训。
4.3.4.5⼀个⽉内再进⾏测试，直到合格或找出污染源并消除为⽌。
4.4洁净区表⾯微⽣物检测4.4.1洁净区微⽣物测试点选择表⾯微⽣物监测的采样点数⽬及其布局根据以下⼏个⽅⾯设置：4.4.1.1空调系统验证的结果4.4.1.2房间的⼤⼩和布局4.4.1.3房间的⽤途4.4.1.4与产品的距离4.4.1.5⼈流物流⽅向对于同⼀洁净区，每个相同的取样物体在其不同的地⽅采2个样。
物体表面与工人手细菌总数检测方法
物体表面与工人手细菌总数检测方法ICSQ/SL 西安申兰生物医学工程有限公司企业标准Q/SL 06-0012011 , 物体表面与工人手细菌总数的检测规程2011-08-15 发布2011-09-01 实施发布西安申兰生物医学工程有限公司Q/SL 06-001,2011目次、八前言.......... II 1 范围........ 1 2 规范性引用文件.. 1 3 职责........ 1 4 抽样........ 1 5 采样方法... 1 6 检验方法... 1 7 结果计......... 1 8 记录（见表A.1 表A.2） (1)IQ/SL 06-001,2011、八前言本标准是根据Q/SL 9000-2011 《质量手册》中的要求而制定。
本标准由质量部提出。
本标准批准人: 张冠中。
本标准由质量部归口。
本标准起草部门: 质量部。
本标准主要起草人: 孟阳。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为:本标准代替Q/SL 07-03,2006 。
IIQ/SL 06-001,2011物体表面与工人手细菌总数的检测规程1 范围适用于与产品接触的所有物体表面及工人手的细菌总数的检测。
2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
GB 15980-1995 一次性使用医疗用品卫生标准GB 15981-1995 消毒与灭菌效果的评价方法及标准GB 2828 逐批检查计数抽样程序及抽样表（适用于连续批的检查）Q/SL 9761,2011 监视和测量装置控制程序Q/SL 08-001,2011 实验室管理制度职责3 质量部负责对本检验规程实施。
4 抽样按GB 2828《逐批检查计数抽样程序及抽样表（适用于连续批的检查）》。
空气、物体表面、医务人员手的监测方法
空气、物体表面、医务人员手的监测方法采样及检查原则：采样应具有一定数量和代表性，采样后必须尽快对样品按要求指标进行检测，送检时间不得﹥6小时，若样品保存在冰箱内送检时间不﹥24小时。
一、空气监测：1、采样时间：消毒处理后，操作前2、采样方法：平板沉降法（1）布点方法：室内面积≤30ｍ²，设内、中、外对角线3点，两端距墙1米；室内面积＞30ｍ²，设东、西、南、北4角及中央5点，其中东、西、南、北均距墙1米。
洁净手术室9个点。
（2）采样方法：将直径为9cm普通营养琼脂平板在室内各采样点处，采样高度为距地面0.8--1.5米，采样时将平板盖打开，扣放于平板旁，暴露5、15、30分钟，盖好立即送检。
( 3)注意事项：采样前，关好门、窗，在无人走动的情况下，静止10min 进行采样。
二、医务人员手的监测：1、采样时间：在接触病人和从事医疗活动前进行采样或消毒后立即采样。
2、采样面积及方法：放被检人（五指并拢），用浸有无菌盐水的棉拭子在双手指屈面从指根到指端往返涂擦各 2 次(双手涂擦面积约60平方厘米），并随之转动采样棉拭子，剪去操作者手接触部位，将棉拭子投入 5ml 无菌盐水试管内，立即送检。
三、物体表面监测1、.采样时间：在消毒处理后4小时内进行采样。
2、.采样方法：用5cm×5cm的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有无菌盐水的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次，并随之转棉拭子，连续采样4个，采样面积100cm2剪去手接触部位后，将棉拭子投入5ml含无菌盐水试管内，立即送检。
门把手等不规则物体表面用棉拭子直接涂擦采样4.注意事项：采集样本要有足够的数量且具有代表性，如层流洁净手术室，选择具有代表性采样地点（如手术台、治疗车、无影灯把手等）；采样时，棉拭子处于湿润状态，如处于饱和状态可将多余的采样液在采样管壁上挤压去除。
禁止使用干棉拭子采样。
四、消毒液的监测1、常用消毒液有效成分含量测定2、使用中消毒液细菌监测：1ml使用中消毒液+9ml中和剂3、结果判定：使用中的灭菌用消毒液、无细菌生长。
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物体表面、手的细菌检测方法 - 食品伙伴网物体表面、手的细菌检测方法
1 采样及检测原则
采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测;送检时间不得超过4h，若样品保存于0,4?条件时。
送样时间不得超过12h。
2 物体表面采样及检查方法
2.1采样面积
222 被采样品的表面积,100cm，取全部表面;被采样品的表面积?100cm，取100cm。
2.2采样方法
用浸有灭菌水的棉拭子1支，放在被检物体表面，横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子。
将棉拭子放入装有10ml灭菌水的试管中送检。
2.3 细菌菌落总数检查
2.3.1 用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内，振摇试管，混合均匀，做成1:100的稀释液。
2.3.2另取1ml灭菌吸管，按上条操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用一支1ml灭菌吸管。
2.3.3选择2~3适宜的稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度作两个平皿。
2.3.4稀释液移入平皿后，应及时将凉至46?营养琼脂培养基注入平皿约
15ml，并转动平皿使混合均匀。
同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液的灭菌平皿内作空白对照。
2.3.5待琼脂凝固后，翻转平板，置36?1?恒温培养箱内培养48?2h。
2.3.6 菌落计数方法
做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。
在记下平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
2.3.7结果计算:
2 表面细菌菌落总数(cfu/cm)= 平皿上菌落的平均数×采样液稀释倍数
2 采样面积(cm)
3人员手采样及检查方法
3.1 采样面积及方法
被检人五指并拢，将浸有灭菌水的棉拭子一支在双手指曲面从指根到指端来回涂擦各两
2次(一只手涂擦面积30cm)，并随之转动采样棉拭子，将棉拭子放入装有10ml 灭菌水的试管中。
3.1.1 用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内，振摇试管，混合均匀，做成1:100的稀释液。
3.1.2另取1ml灭菌吸管，按上条操作顺序，做10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用一支1ml灭菌吸管。
3.1.3选择2~3适宜的稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度作两个平皿。
3.1.4稀释液移入平皿后，应及时将凉至46?营养琼脂培养基注入平皿约
15ml，并转动平皿
使混合均匀。
同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液的灭菌平皿内作空白对照。
3.1.5待琼脂凝固后，翻转平板，置36?1?恒温培养箱内培养48?2h。
3.1.6 菌落计数方法
做平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。
在记下平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。
3.1.7结果计算
2手细菌菌落总数(cfu/cm)= 平皿上菌落的平均数×采样液稀释倍数2 30(cm)×2
参考资料:GB 15982、1995。