0-固相萃取液相色谱串联质谱测定水产品中硝基呋喃类代谢物残留研究

成本低廉， 结果比较 后上机检测。该方法操作简单， ［12 － 14 ］ 。 但是由于 稳定， 很多标准也采用了此种方法 没有进一步的净化， 会导致一些基质比较复杂的生物 样品如水产品， 用流动相溶解后的溶液乳化现象较严 重， 易产生基体效应， 尽管通过二级质谱的高选择性 但仍然会不可避免地污染 可以进一步排除杂质干扰， 仪器系统以及影响结果的准确， 尤其在低浓度时更有 可能导致假阳性的出现。 本研究建立了水产品中硝基呋喃类代谢物的液 相色谱串联质谱检测方法， 对固相萃取条件进行了优 化。该方法检出限低， 重现性好， 结果准确， 能满足水 。喃类代谢物及内标的定性离子对 、 定量离子对、 碰撞气能量、 椎孔电压
Parent ions， daughter ions， collision energy and cone voltage of metabolites of nitrofuran 定性离子对 Qualitative ions 335． 2 ＞ 262． 2 335． 2 ＞ 291． 2 340． 2 ＞ 291． 2 定量离子对 Quantitative ion 335． 2 ＞ 291． 2 锥孔电压 / V Cone voltage 25 25 25 碰撞能量 / eV Collision energy 16 10 10
AHD 标 准 品 （ 德 国 Dr． Ehrenstorfer 公 司， ≥ 99． 0% ） ； SEM 标准品（ 德国 Dr． Ehrenstorfer 公司， ≥ 99． 5% ） ； AOZ 标 准 品 （ 德 国 Witega 公 司，≥ 99． 0% ） ； AMOZ 标 准 品 （ 德 国 Witega 公 司，≥ 99． 0% ） ； AHD － 13 C3 标准品 （ 德国 Dr． Ehrenstorfer 公
－1 流速 / （ mL·min ）
Flow rate 0． 2 0． 2 0． 2 0． 2
1． 5
质谱条件
（ Cone Gas Flow ） ： 50 L / h； 脱溶剂气温度 （ Desolvation Temperature） ： 360 ℃ ； 脱溶剂气流量 （ Desolvation Gas Flow ） ： 500 L / h； 采集方式： 多反应监测 （ MRM ） ； 定性 定量离子对见表 2 。
硝基呋喃类药物作为人工合成的广谱抗菌药 ， 主 要包括呋喃唑酮、 呋喃它酮、 呋喃西林和呋喃妥因等， 因其具有抑菌性和杀菌性而广泛用于畜禽 、 水产等动 物细菌性疾病预防及治疗。研究表明， 此类药物及其 3 － 氨基 － 代谢产物 3 － 氨基 － 2 － 噁唑烷酮 （ AOZ） 、 5 － 吗 啉 代 甲 基 － 2 － 噁 唑 烷 酮 （ AMOZ ） 、 氨基脲 （ SEM） 和 1 － 氨基乙内酰脲 （ AHD ） 均可使实验动物 ［1 ］ 发生癌变和基因突变， 对人的健康造成危害 。 欧 盟已于 1995 年禁止在食用动物中使用硝基呋喃类药 ［2 ］ 物 ， 我国也于 2002 年颁布了禁止使用该类兽药的 ［3 ］ 公告 。由于呋喃类药物能快速代谢而不易在食用 组织中被检测到， 而动物用药后所形成的蛋白结合代 谢产物则可能在相当长的时间内留存在动物可食组 因此， 目前欧盟、 美国和日本等组织和国家要求 织中， ［4 － 5 ］ ， 以达到检测硝基呋喃 以代谢产物为目标分析物 类残留的目的。 液相色谱串联质谱方法由于灵敏度高 、 可同时进 行检测和确证， 已被应用到各种食品中硝基呋喃类代 ［6 － 11 ］ 。但是大部分方法均采用衍生 谢物的残留测定 氮吹后用流动相溶解残余物， 然 化后乙酸乙酯提取，
表1 Tab． 1 时间 / min Time 0 0． 5 3． 0 4． 5
1． 4
色谱条件
色谱柱： Waters Acquity UPLC BEH C18 1． 7 μm， 50 mm × 2． 14 mm； 柱温： 30 ℃ ； 样品室温度： 室温； 流 动相 A： 含 0． 1% 甲酸的 10 mmol / L 的乙酸铵水溶液； 流动相 B ： 甲醇； 进样体积： 10 μL； 流速： 0． 2 mL / min。 流动相梯度见表 1 。
15 13 司， ≥99． 5% ） ； SEM － N C 标准品 （ 德国 Witega 公 司， ≥97% ） ； AOZ － D4 标准品 （ 美国 RDH 公司， ≥ 99． 9% ） ； AMOZ － D5 标准品 （ 德国 Dr． Ehrenstorfer 公
1． 3
仪器设备
Acquity TM 超高效 液 相 色 谱 仪， Micromass Quattro
中国渔业质量与标准 2011 年 9 月 Sep. 2011 Chinese Fishery Quality and Standards Vol. 1 No. 2 第1 卷 第2 期
固相萃取液相色谱串联质谱测定水产品中 硝基呋喃类代谢物残留研究
色谱分离梯度洗脱程序 流动相组成 / % Composition of mobile phase A B 80 70 50 80 20 30 50 20
Gradient elute conditions for the chromatographic separation 梯度变化曲线 Curve 1 6 6 6
司， ≥99． 0% ） ； 二硝基苯甲醛（ 美国 Fluka 公司， 色谱 纯） ； 甲醇、 乙腈 （ 德国 Merck 公司， 色谱纯 ） ； 正己烷 （ 美国 Fluka 公 司， 色 谱 纯） ； 实 验 过 程 中 所 用 水 由 Millipore A10 纯水系统（ 美国 Millipore 公司） 制备； 乙 LC / MS 级 ） ； 二甲亚砜 （ 美国 酸铵（ 美国 Fluka 公司， Fluka 公 司， 色 谱 纯） ， 甲 酸 （ 美 国 Fluka 公 司，＞ 98% ） ； K2 HPO4 、 浓 盐 酸 （ 分 析 纯） ； 固 相 提 取 小 柱 HLB （ 美国 Waters 公司， 3 mL， 60 mg） 。 准确称取 8 种标准品， 用纯甲醇溶解并稀释成 100 μg / mL 的储备液， 室温下可稳定 2 个月。 储备液用 10% 甲醇水溶液（ 1∶ 9，v / v ） 做稀释液配成 1． 0 μg / mL
1， 2 3 1* 2 孙言春 ， 张洁 ， 牟振波 ， 许宪祝
（ 1． 中国水产科学研究院 黑龙江水产研究所 ，黑龙江 哈尔滨 150070 ； 2． 哈尔滨工业大学理学院 ，黑龙江 哈尔滨 150001 ； 3． 唐海县农林畜牧水产局技术推广站 ， 河北 唐山 063200 ） 摘要： 建立了一种快速、 灵敏、 同时定性和定量的超高效液相色谱串联质谱法 （ UPLC － MS / MS ） 来测定水产品中 4 种 AHD、 AOZ 和 SEM） 残留。样品采用乙酸乙酯提取 ， 正己烷脱脂， 采用 HLB 固相萃取柱净 硝基呋喃类代谢物（ AMOZ、 50 mm × 2． 1mm） 色谱柱， 0． 2 mL / min 化。色谱分离柱选用 BEH C18 （ 1． 7 μm， 流动相选用酸化的乙酸铵水溶液 / 甲醇， r2 ≥ 梯度洗脱。在电喷雾 － 多反应监测正离子模式下 ， 进行定量定性分析。 线 性 范 围 在 0． 5 ～ 200 ng / mL 之 间， 0． 998 。以标准加入法计算回收率和相对标准偏差 ， 20 、 100 μg / kg 3 个添加水平， 在 2、 平均回收率在 76． 3% ～ 90． 3 % 2011 ， 1 之间， 相对标准偏差低于 15% ， 最低检测限和定量限分别为 0． 25 μg / kg 和 0． 5 μg / kg。［ 中国渔业质量与标准， （ 1 ） ： 54 － 59］ 关键词： LC － MS / MS； 检测； 硝基呋喃类代谢物； 水产品； 固相萃取 中图分类号： TS201． 6 文献标志码： A 文章编号： 2095 － 1833 （ 2011 ） 02 － 0054 － 06
micro API 三重四极杆质谱（ 配电喷雾离子源 ） ， MassTM Lynx V 4． 1 操作软件 （ Waters 公司） ； XS205 电子天 平 （ Mettler Toledo 公 司 ） ； GX271 自 动 固 相 萃 取 仪 （ Gilson 公司） ； Biofuge Stratos 高速冷冻离心机 （ Thermo Scientific 公司） ； T25 digital Ultra － Turrax 均质机， MS1 Mini － shaker 涡 轮 振 荡 器 （ IKA 公 司 ） ； Milli － Q A － 10 纯水 器 （ Millipore 公 司 ） ； 移 液 器 （ 200 μL、 1 000 μL、 5 000 μL， Eppendorf 公 司 ） ； PHS － 3C pH 计（ 上海精密科学仪器有限公司） 。
2011 年 56 中国渔业质量与标准 续表 2 名称 Name AHD 的衍生物 2 － NP － AHD 2 － NP － AHD － C3 AOZ 的衍生物 2 － NP － AOZ 2 － NP － AOZ － D4 SEM 的衍生物 2 － NP － SEM 2 － NP － SEM － 15 N13 C
13
Tab． 2
continued
定性离子对 Qualitative ions 249． 1 ＞ 104． 1 249． 1 ＞ 134． 1 252． 1 ＞ 134． 1 236． 2 ＞ 104． 1 236． 2 ＞ 134． 1 240． 2 ＞ 134． 1 209． 2 ＞ 166． 1 209． 2 ＞ 192． 1 212． 2 ＞ 168． 1
电离 方 式： ESI （ + ） ； 电 离 电 压 （ Capillary voltage） ： 1． 5 kV； 锥孔电压 （ cone voltage ） ： 25 V； 离子源 温度（ Source Temperature ） ： 110 ℃ ； 锥孔反吹气流量