MSDP实验
MSD (Meso Scale Discovery)与传统ELISA kit优势比较
MSD 将ELISA线性范围提高2-3个数量级，灵敏度提高10-100倍上海优宁维生物科技有限公司Percepta在针对550位北美和欧洲的顶级生物医药研究人员的报告中显示，基于电化学发光技术的MSD ( Meso Scale Discovery ) 是最受欢迎的5大免疫分析品牌之一。
MSD (Meso Scale Discovery) 与传统ELISA kit优势对比如下:1.更高灵敏度与更宽的线性范围：MSD灵敏度可达0.05pg/ml，有效线性范围达6log。
传统ELISA常规线性范围在10pg/ml-1000pg/ml，采用Ultra-sensitivity试剂盒则为0.5-10pg/ml。
对于一个生物学实验，往往要兼顾正常对照组与疾病组的样本，样本中的待测蛋白浓度分布一般从零点几个pg到几千pg不等，所以一个ELISA试剂盒的线性范围不能同时兼顾高低丰度蛋白的检测，需要非常多的预实验进行稀释度摸索，费时费力。
而MSD提供了从亚皮克级到几万皮克浓度的宽线性范围，有效将所有样本落在最佳线性范围内，得到准确测定（见下图比对，红色条状为疾病样本，黄色条状为正常参照组）。
同时MSD的灵敏度可达0.05pg/ml，对于目前有些疾病样本中待测蛋白浓度下调的研究项目来说，更能够有效的发现疾病组与正常对照组的差异，实现新的科学发现。
2.节省样本用量，可实现多重检测。
传统ELISA所需样本量一般为50-100ul，如果同时关注10个细胞因子的表达调控则可能需要多达500-1000ul的样本，对于很多ELISA实验来说样本量就成了关键问题。
MSD通过点阵技术，在96孔石墨电极板里可实现10个指标每孔的检测。
也可在24孔板里定制实现100指标/孔的筛选检测。
满足了不同的实验需求。
在样本用量上，无论单指标或多指标都只需≤25ul的样本，即可完成检测。
为珍稀样本的研究提供了更多的数据。
目前MSD可以在100ul的极其珍贵的脑脊液样本中，复孔定量测定40种Biomarker，这是以往技术都所不能实现的。
双荧光素酶报告基因实验步骤
双荧光素酶报告基因实验步骤实验目的：本实验采用双荧光素酶（Dual-Luciferase）报告系统，探究基因调控机制。
通过构建表达报告基因的质粒，研究不同因素对基因转录的影响。
实验材料：1. 双荧光素酶检测试剂盒（Promega）2. 293T细胞系3. Lipofectamine 2000转染试剂4. 培养基（DMEM + 10% FBS）实验步骤：1. 构建表达报告基因的质粒。
选择含有目标基因启动子区域的DNA片段，与质粒载体pGL3-基因报告载体连接，形成表达质粒pGL3-目标启动子-火萤酶（Luciferase）。
2. 细胞培养。
将293T细胞接种于6孔板中，培养至70-80%的稳定生长。
注意，细胞仅用到2×105个，否则检测结果会受内源性酶的影响。
3. 细胞转染。
将转染试剂与质粒混合，加入到细胞培养皿中。
注意，Lipofectamine 2000转染试剂与质粒的比例应按照转染试剂说明书进行调整。
4. 点亮荧光素酶（Luciferase）。
在细胞转染后48小时，加入荧光素酶检测试剂和积木酶抑制剂，使细胞产生发光，并通过微量板阅读器记录荧光值。
5. 关闭荧光素酶（Luciferase）。
在荧光素酶检测试剂作用后加入积木酶检测剂，称为“阻滞液”，使细胞发出的光信号被阻断。
加入Renilla荧光素酶检测试剂，使细胞重新产生新的发光信号，并通过微量板阅读器记录荧光值。
6. 数据统计。
按照公式计算相邻荧光信号的比值（荧光素酶/Renilla荧光素酶），以此作为表达目标启动子的相对活性。
（注意，双荧光素酶检测试剂盒中已包含此项标准）实验结果：通过双荧光素酶报告系统，研究了不同生物因素对基因转录的影响。
在细胞实验中，通过记录不同重复单元（replicate）的相对活性，为科研人员提供基因调控机制的新思路。
（数据统计请参照附表）结论：本实验采用双荧光素酶报告系统，通过构建表达报告基因的质粒，检测对基因转录的影响。
H3C关于某组播配置示例
组播配置举例组播配置举例关键词：IGMP、IGMP Snooping、组播VLAN、PIM、MSDP、MBGP摘要：本文主要介绍组播功能在具体组网中的应用配置，包括以下两种典型组网应用：域内的二、三层组播应用情况，以及域间的三层组播应用情况。
缩略语：目录1 特性简介2 应用场合3 域内二、三层组播配置举例3.1 组网需求3.2 配置思路3.3 配置步骤3.3.1 Router A的配置3.3.2 Router B的配置3.3.3 Router C的配置3.3.4 Router D的配置3.3.5 Switch A的配置3.3.6 Switch B的配置3.3.7 Switch C的配置3.4 验证结果4 域间三层组播配置举例4.1 组网需求4.2 配置思路4.3 配置步骤4.3.1 Router A的配置4.3.2 Router B的配置4.3.3 Router C的配置4.3.4 Router D的配置4.3.5 Router E的配置4.3.6 Router F的配置4.4 验证结果5 相关资料5.1 相关协议和标准1 特性简介组播是指在IP网络中将数据包以尽力传送的形式发送到某个确定的节点集合，其基本思想是：源主机只发送一份数据，其目的地址为组播组地址；组播组中的所有接收者都可收到同样的数据拷贝，并且只有组播组内的主机可以接收该数据，而其它主机则不能收到。
作为一种与单播和广播并列的通信方式，组播技术能够有效地解决单点发送、多点接收的问题，从而实现了IP网络中点到多点的高效数据传送，能够节约大量网络带宽、降低网络负载。
以下是对各常用组播协议的简单介绍：1. IGMPIGMP是TCP/IP协议族中负责IP组播组成员管理的协议，用来在IP主机和与其直接相邻的组播路由器之间建立、维护组播组成员关系。
IGMP运行于主机和与主机直连的路由器之间，其实现的功能是双向的：一方面，主机通过IGMP通知路由器希望接收某个特定组播组的信息；另一方面，路由器通过IGMP周期性地查询局域网内的组播组成员是否处于活动状态，实现所连网段组成员关系的收集与维护。
生物样品中尼古丁及其代谢产物的GC-MSD法测定
生物样品中尼古丁及其代谢产物的GC-MSD法测定摘要】目的建立对生物材料中尼古丁及其代谢产物的分析方法。
方法建立的尼古丁及其代谢产物的气相色谱质谱联用的检测技术和方法，为烟草暴露评价提供了客观可靠的方法。
结果尼古丁和可替宁的检出限为分别为0.06μg/mL、0.14μg/mL，测定下限分别为0.020μg/mL、0.048μg/mL。
RSD尿液中尼古丁和可替宁分别为2.02%-2.62%、5.27%-7.24%；头发中尼古丁和可替宁分别为1.09%-2.89%、2.71%-6.61%。
尿液中尼古丁及可替宁的加标回收率分别为82.01%-105.90%、82.20%-99.78%；头发中尼古丁的加标回收率分别85.33%-103.91%。
结论由于采用了毛细管气相色谱分离技术和选择离子扫描采集数据，可有效排除其他组分对尼古丁的干扰。
【关键词】生物样品 GC-MSD 尼古丁及其代谢产物吸烟和被动吸烟是肺癌、慢性呼吸系统疾病、冠心病、脑卒中等多种疾病发生和死亡的重要危险因素。
在世界前8位死因中，吸烟是其中六种疾病的危险因素。
近几年，我国人群二手烟暴露状况没有任何改善。
保护非吸烟者免受二手烟的危害已迫在眉睫。
尼古丁是烟草中存在的一种生物碱,可以作为烟草暴露的特异性污染物, 尼古丁半衰期较短，其代谢物可替宁因半衰期长而作为检测吸烟和戒烟的标志物。
尼古丁及其代谢物的实验室样品分析方法使用气相色谱质谱联用技术。
1 材料与方法1.1 试剂和材料1.1.1三氯甲烷：色谱纯；1.1.2尼古丁：色谱纯；1.1.3可替宁：色谱纯；1.1.4喹啉：色谱纯；1.1.5甲醇：分析纯；1.1.6 NaOH溶液：c（NaOH）=1.5mol/L，取60.0g的NaOH溶于1L纯水中，混匀；1.1.7 氦气：99.999%或以上纯度。
1.2 样品采集尿液：收集烟草暴露2-3小时的受试者尿液（约30ml）于已编号的50ml聚丙烯塑料瓶中，加入硫酸氢钠0.5g—1.0g（以防止尿样腐败，同时保证尿样中尼古丁和可替宁在运输和贮存过程中稳定），拧紧瓶盖，于4℃冰箱中冷藏可保存一周，零下20℃可保存一个月。
南迦巴瓦构造结周边地区主要断裂现今运动特征
南迦巴瓦构造结周边地区主要断裂现今运动特征王晓楠;唐方头;邵翠茹【摘要】本文基于南迦巴瓦构造结周边16个宽频带地震台的观测波形数据,对地震事件进行相关分析,使用MSDP软件进行多台定位,编制了研究区内的地震目录,并利用CAP方法获得了研究区内主要断裂带两侧10km范围内M3.0以上地震的震源机制解,用于分析主要断裂带的现今运动特征.研究结果表明:研究区内的地震活动受主要断裂带的控制;墨脱断裂带现今运动主要为左旋逆冲运动;米林断裂带以左旋正断运动为主;嘉黎断裂带以右旋逆冲为主,兼有左旋和正断运动;阿帕龙断裂带以右旋逆冲运动为主;边坝-达木新生断裂带运动以右旋逆冲运动为主,兼有正断和左旋运动;各主要断裂带的现今运动特征与地质和GPS观测结果相同,表明南迦巴瓦构造结周边地区主要断裂带的现今运动主要受阿萨姆构造结俯冲作用的控制.【期刊名称】《震灾防御技术》【年(卷),期】2018(013)002【总页数】9页(P267-275)【关键词】南迦巴瓦构造结;断裂运动特征;CAP方法;震源机制解【作者】王晓楠;唐方头;邵翠茹【作者单位】中国地震局地球物理研究所,北京100081;中国地震局地球物理研究所,北京100081;中国地震局地球物理研究所,北京100081【正文语种】中文南迦巴瓦构造结位于印度大陆与欧亚大陆碰撞的前沿部位，其地下结构复杂，地震多发，是探索地震活动与断裂运动关系的理想场所。
1950年8月15日，在其东侧发生察隅MS 8.6地震，震源机制解表明发震断裂为右旋走滑，与喜马拉雅碰撞带以逆冲为主的发震构造存在差异。
察隅地震发生前，1950年2月23日，在南迦巴瓦构造结顶端发生M6.0地震；2017年11月18日，在南迦巴瓦构造结顶端又发生M 6.9地震，两者相距仅28km左右，震源机制解表明2次地震的发震构造均为北西向断裂。
自察隅发生MS8.6地震以来，南迦巴瓦构造结周边地区没有再发生7级以上地震，未来该地区有发生强震的可能性。
地震分析软件震相走时表文件结构研究
地震分析软件震相走时表文件结构研究李万金【摘要】通过对现有地震分析软件所配置的震相走时表文件的结构类型及优劣进行分析,将震相走时表分为4种组合结构并分析其实用性.在IASPEI91震相走时表文件结构的基础上进行修改、补充和完善,从而提出了一种安全性高、适用面广、灵活性强、能存储各种结构走时表的新型走时表文件结构.应用这种新型结构震相走时表,地震分析软件可以灵活配置不同的走时表,实现精细定位,并为数字化测震台网快速利用测震资料编制和应用高精度的区域震相走时表创造了条件,对于地球深部构造研究具有一定的促进意义.%First of all, we analyzed file structure types of the seismic phase travel time tables of the existing seismic a-nalysis software configuration and its advantages and disadvantages. In addition, we divided the phase travel time table into 4 kinds of composite structure and analyze its practicality. Thirdly, on the basis of modifying, supplementing and perfecting the structure of the IASPEI91 seismological table, we put forward a improved file structure of travel time table which is high safety, wide adaptation and strong flexibility, and can store travel time tables of different structures. Finally, by the application of the improved file structure of phase travel time table, seismic analysis software could be configured with different travel time table and realized the precise locating of the earthquakes. It created condition for the digital seismic network to use seismographic record for complication and apply regional seismological tables of high precision, have a certain meaning of studying the deep structure of earth.【期刊名称】《地震研究》【年(卷),期】2012(035)002【总页数】7页(P288-294)【关键词】震相走时表;文件结构;步长恒定;IASPEI91走时表【作者】李万金【作者单位】云南省地震局个旧地震台,云南个旧661000【正文语种】中文【中图分类】P315-391地震波从震源到达观测点所需的时间称为走时，地震纵波和横波传播速度不同。
日本富士试剂盒被动凝集法检测肺炎支原体讲义课件
实验过程中出现误差或异常结果。处理方法：仔细核对实验数据，找 出问题所在，重新进行实验。
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CATALOGUE
实验总结及展望
实验总结及体会
实验原理掌握
通过实验，我们深入了解了日本富士试剂盒被动凝集法检测肺炎 支原体的原理，掌握了实验操作流程和注意事项。
实验技能提升
实验过程中，我们提高了实验操作技能，学会了如何进行阳性、阴 性和空白对照的设置，如何判断实验结果等。
试剂盒中使用的肺炎支原体抗原为经 过优化和筛选的纯化抗原，可有效避 免交叉反应，提高检测准确性。
试剂盒的操作流程
用加样器分别吸取 一定量的样本血清 或痰液，加入到试 剂盒的相应孔中。
将试剂盒放置在室 温下孵育一段时间 ，观察各孔的反应 情况。
准备好试剂盒，将 所需试剂从冰箱取 出，放置室温，并 摇动均匀。
。
被动凝集法是一种快速、简便的 检测方法，用于检测肺炎支原体
抗体。
日本富士试剂盒是一种常用的被 动凝集法检测试剂盒，具有高灵
敏度和特异性。
目的和意义
目的
了解日本富士试剂盒被动凝集法 检测肺炎支原体的原理、操作方 法和临床意义。
意义
为临床医生提供一种快速、简便 的检测方法，帮助诊断肺炎支原 体感染，指导临床治疗。
数据分析能力培养
通过对实验数据的分析，我们学会了如何使用统计软件进行数据分 析，掌握了数据分析的技巧和方法。
对未来工作的展望和建议
推广应用
开展培训
建议将日本富士试剂盒被动凝集法检测肺 炎支原体技术推广应用到临床实践中，为 肺炎支原体的快速诊断提供有效手段。
建议定期开展针对新进人员的实验操作和 数据分析培训，提高实验操作水平和数据 分析能力。
错点配置
环境说明：所有设备登录密码为 hcie；所有 FR 环境中要使用静态的 MAP 映射；所有 FR 设备不允许做任何修改；题目 1：MST题目需求：site1 中， CLIENT1 属于 VLAN12， CLIENT2 属于 VLAN34；MSTP 中的 VLAN12 属于 instance1，vlan34 属于 instance2；两个 instance 的主备根桥分别在SW1 和 SW2 上，并且要求 CLIENT1访问 R1 时经过的路径是 SW3-SW1-R1 ；同时要求 CLIENT2 访问 R1 时经过的路径是SW3-SW2-R1;错点：a）LSW3 E0/0/21 将 instance 1 的 cost 改大或将 E0/0/22 的 cost 值改小；也可以将 LSW3 E0/0/22instance 2 的 cost 改大或者将 LSW3 E0/0/21 instance 2 的cost 改小；interface Ethernet0/0/21stp instance 1 cost 10interface Ethernet0/0/22stp instance 2 cost 10b）LSW3的STP模式为STP；stp mode stpc）LSW2的MST instance VLAN 对应关系配置颠倒；stp region-configurationregion-name HCIEinstance 1 vlan 34instance 2 vlan 12active region-configurationd）LSW2没有配置instance 2为根桥；undostp instance 2 roote）LSW1的E0/0/21，没有允许VLAN12通过；interface Ethernet0/0/21undo port trunk allow-pass vlan 12f)LSW2的E0/0/22，没有允许VLAN34通过；interface Ethernet0/0/22undo port trunk allow-pass vlan 34题目 2：eth-trunk题目需求：Site1 中，LSW1-LSW2 之间的所有链路要求做 eth-trunk 的捆绑，并且此 eth-trunk 要求做 src-dst-ip 负载；错点：a）eth-trunk捆绑数目只有两个LSW1:interface Ethernet0/0/18undo eth-trunkLSW2:interface Ethernet0/0/19undo eth-trunkb）eth-trunk的负载均衡方式错误为src-macLSW1:interface Eth-Trunk12load-balancesrc-macLSW2:interface Eth-Trunk12load-balancesrc-macc）LSW1的eth-trunk的mode lacp，LSW2的是manual LSW2:interface Eth-Trunk12undotrunkport Ethernet0/0/18undotrunkport Ethernet0/0/19undotrunkport Ethernet0/0/20mode manual load-banlancetrunkport ethernet0/0/18trunkport ethernet0/0/19port link-type trunkport trunk allow-pass vlan 2 to 4094load-balancesrc-mac题目 3：BGP ADV题目需求：R1 访问 VLAN12 时经过的路径是 R1-LSW1-LSW3; 访问 VLAN34 时经过的路径是R1-LSW2-LSW3；只允许在 AS300 中实现，并且确保你的解决方案不要影响 AS100 AS300 以外的其他 AS;错点：a）LSW1上针对VLAN12的前缀AS-path长度增加一个；LSW1#route-policy AS permit node 1apply as-path 300 additivebgp 300ipv4-family unicastnetwork 10.1.12.0 255.255.255.0 route-policy ASb）LSW2上针对VLAN 34的前缀的MED值修改为100；LSW2#：bgp 300ipv4-family unicastundo network 10.1.12.0 255.255.255.0network 10.1.12.0 255.255.255.0network 10.1.34.0 255.255.255.0 route-policy MEDc)AR1上配置与LSW2的BGP AS错误AR1#:bgp 100ipv4-familyvpn-instance 1undo peer 10.1.200.200peer 10.1.200.200 as-number 400d)AR1 G2/0/1口未关联到vpn-instance 1里；AR1#:interface GigabitEthernet2/0/1undoip binding vpn-instance 1ip add 10.1.100.1 255.255.255.0题目 4：mux-vlan题目需求：Site4 中，AR24、AR25、AR26 在一个网段中，同时都运行了 ISIS 协议，要求 AR26 能和AR24、AR25 都能形成邻居关系，但是 AR24 与 AR25 不能形成邻居关系；通过 LSW8 的二层VLAN 技术以及其他设备排除错误点来实现此要求：注意；配置过程中不能在 LSW8 上删除和增加新的 VLAN；错点：a) Mux-VLAN配置，主VLAN关联从VLAN的时候不应该是group，应该是separate； (考场环境为E口，实验环境为G口)LSW8#interfaceGigabitEthernet 0/0/1undo port mux-vlan enableinterfaceGigabitEthernet 0/0/2undo port mux-vlan enablevlan 100mux-vlanundo subordinate separate 50subordinate group 50b) 接口没有启用mux-VLAN，并且划分VLAN错误；LSW8#interfaceGigabitEthernet 0/0/3port link-type accessundo port mux-vlan enableport default vlan 50c) AR26的路由器类型错误为level-1，应该是level-2 AR26#isis 100is-level level-1d) AR25的E0/0/0接口配置错误了ISIS认证密码；AR25#interfaceGigabitEthernet 0/0/0isis authentication-mode md5 cipher hceee)AR24的G0/0/0接口配置了错误的认证方式AR24#interfaceGigabitEthernet 0/0/0isis authentication-mode simple cipher hcie题目 5：MPLS-VPN题目需求：Site1 与 Site4 为同一个 VPN 客户的两个站点，现在 site1 里的 CLIENTS 无法和 site4 里的CLIENT 通信，请解决此问题；注意：不要删除现有配置，可修改解决；错点：a) AS100与AS200之间的AR2与AR4 AR5互联接口没有配置mpls；interfaceGigabitEthernet 2/0/0undomplsinterface pos5/0/0undomplsb) AR9上配置了一个loopback1口（没有宣告进入IGP），并且此时loopback1口为AR9的lsr id；AR9#interfaceLoopBack 1undoisis enablec) AR23配置了IMPOART Route-policy，只允许了10.1.12.0 网段，应该将其他的网段允许过来（10.1.34.0/BGP互联网段10.1.1.0）AR23#acl number 2000rule 1 permit source 10.1.12.0 0route-policy import permit node 1if-matchacl 2000ipvpn-instance 1import route-policy importd) AR1上配置了错误的RT值100：100，修改为正确配置RT为200：200；ipvpn-instance 1undovpn-target 200:100vpn-target 200:10e) AR23上没有将BGP VPNV4路由引入到IGP ISIS；AR23#isis 100 vpn-instance 1undo import-route bgp题目 6：sham-link题目需求：Site2 与 Site3 为同一个 VPN 客户的两个站点，现在 AR10 与AR20 上面的客户（loopback0模拟）都能互通；请解决此问题；并且要求当 AS100 连接正常的时候，两个客户的数据包通信必须经过 AS100；但是 AS100 出现问题的时候，两个站点可以通过备份链路进行通信；错点：a) AR6上loopback2口没有放入VPN实例2中；AR6#interfaceLoopBack 1undoip binding vpn-instance 2ip address 100.1.136.6 255.255.255.255b) AR13上sham-link配置源目地址写反；AR13#ospf 110 router-id 10.3.128.13 vpn-instance 2area 0.0.0.1undo sham-link 100.1.136.13 100.1.136.6sham-link 100.1.136.6 100.1.136.13c) AR6上面的sham-link配置在了区域0中，应该配置在区域1中；AR6#ospf 110 router-id 10.3.128.6 vpn-instance 2area 0.0.0.1undo sham-link 100.1.136.13 100.1.136.6area 0.0.0.0sham-link 100.1.136.13 100.1.136.6d) AR13上loopback2口没有宣告进入实例的BGP中；AR13#bgp 100ipv4-familyvpn-instance 2undo network 100.1.136.13 255.255.255.255e) AR6上loopback2口错误宣告进入了实例的IGP中；AR6#ospf 110 router-id 10.3.128.6 vpn-instance 2area 0.0.0.1network 100.1.136.13 0.0.0.0f) AR20的S3/0/0口没将cost值改大到100以上；AR20#interface Serial3/0/0undoospf costg) AR7没有将AR13 AR6 VPNV4配置为自己的RR client；AR7#bgp100ipv4-family vpnv4undo peer 100.1.1.6 reflect-clientundo peer 100.1.1.13 reflect-clienth) AR10的S3/0/0接口没有配置OSPF网络类型为broadcast；AR10#interface Serial3/0/0undoospf network-typek) AR11上指向AR10的FR map没有配置broadcast关键字；同时接口没有配置IP地址；AR11#interface Serial3/0/0undofr map ip 10.2.128.10 110ip address 10.2.128.11 255.255.0.0题目 7：vrrp题目需求：Site2 中 AR10 与 AR11 要为 LSW4 的 PC4 提供第一跳网关冗余服务，虚拟网关地址为10.2.129.254 和 10.2.129.253；在配置正确的情况下，VRRP 配置后的状态信息如下；<AR10>display vrrpGigabitEthernet0/0/0 | Virtual Router 1State : MasterVirtual IP : 10.2.129.254Master IP : 10.2.129.10PriorityRun : 200PriorityConfig : 200MasterPriority : 200Preempt : YES Delay Time : 1 sTimerRun : 1 sTimerConfig : 1 sAuthtype : MD5 Auth key : %$%$z<@sHH2C5Kh[\s6#]}C2I`kl%$%$ Virtual MAC : 0000-5e00-0101Check TTL : YESConfigtype : normal-vrrpBackup-forward : disabledTrack BFD : 1 Prioritu reduced:120BFD-session static : UPCreate time : 2014-07-17 20:59:30 UTC-05:13Last change time : 2014-07-17 20:59:41 UTC-05:13 GigabitEthernet0/0/0 | Virtual Router 2State : BackupVirtual IP : 10.2.129.253Master IP : 10.2.129.11PriorityRun : 100PriorityConfig : 100MasterPriority : 200Preempt : YES Delay Time : 1 sTimerRun : 1 sTimerConfig : 1 sAuthtype : MD5 Auth key : %$%$$>13KX6vBGrR0d~&FZ;QI`m`%$%$ Virtual MAC : 0000-5e00-0102Check TTL : YESConfigtype : normal-vrrpBackup-forward : disabledTrack BFD : 2 Prioritu reduced:120BFD-session static : UPCreate time : 2014-07-17 20:59:30 UTC-05:13Last change time : 2014-07-17 21:00:38 UTC-05:13<AR11>display vrrpGigabitEthernet0/0/0 | Virtual Router 1State : BackupVirtual IP : 10.2.129.254Master IP : 10.2.129.10PriorityRun : 100PriorityConfig : 100MasterPriority : 200Preempt : YES Delay Time : 1 sTimerRun : 1 sTimerConfig : 1 sAuthtype : MD5 Auth key : %$%$}/TEU.6A"ML/\e!^KvqEId;F%$%$ Virtual MAC : 0000-5e00-0101Check TTL : YESConfigtype : normal-vrrpBackup-forward : disabledTrack BFD : 2 Prioritu reduced:120BFD-session static : UPCreate time : 2014-07-17 21:19:52 UTC-05:13Last change time : 2014-07-17 21:21:05 UTC-05:13 GigabitEthernet0/0/0 | Virtual Router 2State : MasterVirtual IP : 10.2.129.253Master IP : 10.2.129.10PriorityRun : 200PriorityConfig : 200MasterPriority : 200Preempt : YES Delay Time : 1 sTimerRun : 1 sTimerConfig : 1 sAuthtype : MD5 Auth key : %$%$#tW6O)PNIKiC7uP:)c^7IdYN%$%$ Virtual MAC : 0000-5e00-0102Check TTL : YESConfigtype : normal-vrrpBackup-forward : disabledTrack BFD : 2 Prioritu reduced:120BFD-session static : UPCreate time : 2014-07-17 21:19:52 UTC-05:13Last change time : 2014-07-17 21:20:00 UTC-05:13<AR11>为了加速 VRRP 的收敛，使用 BFD 跟踪上行链路状态以及 VRRP 的邻居关系；错点：a) AR10上配置VRRP 2的virtual-IP错误；interfaceGigabitEthernet 0/0/0undovrrpvrid 2 virtual-ip 10.2.129.253vrrpvrid 2 virtual-ip 10.2.129.251b) AR11上没有配置VRRP 1的认证；interfaceGigabitEthernet 0/0/0undovrrpvrid 1 authentication-modec) AR11上配置VRRP 2的priority为250；interfaceGigabitEthernet 0/0/0vrrpvrid 2 priority 250d) AR11上没有配置VRRP 2的抢占延迟1s；interfaceGigabitEthernet 0/0/0undovrrpvrid 2 preempt-mode timer delaye) AR10 BFD 2地址peer地址指错；undobfd 2bfd 2 bind peer-ip 10.2.129.12 source-ip 10.2.129.10 auto commitf）AR6删除BFD 1（BFD1是和AR11的bfd session）undobfd 1近期错误：R10上VRRP 2的虚地址写错了；R11上VRRP 2没开MD5认证；题目需求：Site2 与 Site3 配置了 IPV6，并且运行 OSPFV3 协议；参与的设备有 AR10、 AR11、 AR18、AR20；AR18 与 AR20 之间通过 tunnel 相通；现在环境中的IPV6 CLIENT 13、IPV6 CLIENT 9 、IPV6 CLIENT10 无法实现互相通信，请解决；错点：a) AR18上OSPFV3做了tunnel0/0/100接口的静默配置；ospfv3 1silent-interface Tunnel 0/0/100b) AR18上tunnel0/0/100配置使接口宣告进入OSPFv3区域1；interface Tunnel 0/0/100undo ospfv3 1 area 0ospfv3 1 area 0.0.0.1c) AR20上tunnel0/0/100中密码错误为122；interface Tunnel 0/0/100gre key 122d) AR20上做了Area0的路由汇总，并且为not-advertise；ospfv3 1area 0.0.0.0abr-summary 2002:10:3:209:: 64 not-advertise题目需求：AS100 与 AS200 要部署域间组播； AR7 是 AS100 中的 RP，AR9 是 AS200 中的 RP； AS100中 AR22 上有一台视频服务器，AS200 中 AR23 上有一个组播接收者要加入组 239.1.1.1，现在客户无法收到组播数据，无法观看相应的视频；请解决该问题；错点：a) AR23连接CLIENT9的接口没有启用PIM SM，没有启用IGMP；interfaceGigabitEthernet 0/0/1undoigmp enableb) AR23没有配置静态RP地址；pimundo static-rp 200.1.1.19c) AR9上配置MSDP的发起连接接口为lo1，正确的为lo0；msdppeer 100.1.1.7 connect-interface LoopBack1peer 100.1.1.7 password cipher hceed) AR9上配置了错误的密码“hcee”；msdppeer 100.1.1.7 password cipher hceee) AR2将OSPF区域路由引入到BGP的时候没有允许100.1.1.7和100.1.255.0/24；acl number 2000undo rule 20undo rule 25f) AR7上PIM配置Lo1为C-RP；应该为lo0；pimundo c-rpLoopBack 0c-rpLoopBack 1题目 10：telnet题目需求：Site3 中，AR16 AR17 AR18 帧中继网络中运行 ospf，使用默认的网络类型；要求 AR18能通过 telnet 远程管理 AR16、AR17；现在 AR18 无法远程管理；解决此问题已满足以下表项；要求 AR16 的 telnet 认证方式为 AA，AR16 上存在两个用户，admin 用户级别为 15 级，guest 用户级别为 1 级要求两个用户都能认证 telnet 登录；要求 AR17 的认证方法为 password；所有 telnet 到 AR17 的用户级别为 5 级；错点：a) AR17的VTY下定义用户级别为1；user-interfacevty 0 4authentication-mode passworduser privilege level 1b) AR16的用户名admin用户服务类型错误为http，用户级别用2；aaalocal-user admin privilege level 2local-user admin service-type httpc) AR16上的VTY线下认证方式错误为pass；user-interfacevty 0 4authentication-mode passwordset authentication password cipher hcced) AR16缺少到AR17 10.3.129.17的map映射；interface Serial 3/0/0undofr map ip 10.3.129.17 608e) AR16 AR17接口的优先级为0配置删除，AR18接口的优先级修改为0；[AR16]interface Serial 3/0/0AR16-Serial3/0/0]undoospfdr-priority[AR17]interface Serial 3/0/0AR17-Serial3/0/0]undoospfdr-priority[AR18]interface Serial 3/0/0[AR18-Serial3/0/0]ospfdr-priority 0f）AR18指定邻居地址错误为10.3.129.19；[AR18]ospf 110[AR18-ospf-110]undo peer 10.3.129.17 [AR18-ospf-110]peer 10.3.129.19。
JUNIPER认证体系
JUNIPER认证考试简介JNCIA-JNCIS-JNCIP-JNCIE，其中JNCIA和JNCIS是低、中级别的认证，但通过JNCIS是参加JNCIP和JNCIE的资格考试，只有通过了JNCIS笔试，才能参加实验考试，类似于CCIE的笔试部分。
而且JNCIA和JNCIS都是独立的认证考试，而且JNCIS考试在全国的很多城市都能考，通过Prometric的考试中心来进行考试，一般在能考CCNA认证或者MCSE认证的地方，也能考JNCIA、JNCIS。
以前没有JNCIP考试，JNCIE实验室考试为2天，后来Juniper为了增强配置和实际操作环节的考核，将2天的JNCIE考试分拆为独立的JNCIP认证和JNCIE认证。
JNCIA考试是笔试，初级的技术认证，主要测试考生对BGP/OSPF/ISIS/等技术的理解，考试费用为125美元，考试时间60分钟，60道不定项选择题目，70%及格；JNCIS考试是笔试，中级的技术认证，主要测试考生对BGP/IGP/MPLS/IPV6/Multicast/IPv6/CoS等技术的理解，考题比JNCIA难度要大，考试费用是125美元，考试时间90分钟，75道不定项选择题目，70%及格；JNCIP考试是实验室操作考试，高级的技术认证，需要配置7台路由器，主要测试考生对IGP/BGP配置还有设备本身操作的能力，考试费用是1250美元，考试时间8小时，80%及格；JNCIE考试是实验室操作考试，顶级的技术认证，需要排除10台路由器的故障并按照求新增配置，主要测试考生的故障排除能力和专家级别的配置能力，考试费用是1250美元，考试时间8小时，80%及格；总之，JNCIE考的就是Juniper路由器M/T系列在骨干网络上的操作、排障和对主流技术的理解。
也因为Juniper以高端路由产品起家，所以认证考试也面向高端，平心而论JNCIE考试的难度与CCIE 相比有过之而无不及。
JNCIA认证课程目的JUNIPER网络公司路由器操作和故障排除(OTJNR)是一门由教师指导的中级课程，主要介绍JUNIPER网络公司M-系列和T-系列平台的操作和故障排除。
MSD实验流程（参考促炎症十因子试剂盒说明书）
MSD实验流程
该流程编写参考说明书：Proinflammatory Panel 1 (human) Kits ，K15049D-1
备注：实际操作以相应产品的试剂盒说明书为准
一、样品和试剂准备：
将所有试剂拿到室温下平衡。
（1）准备标准品：
使用MSD提供的标准品和稀释液2来配制标准品溶液：
复溶冻干的标准品；
反复倒置3次，室温下平衡15-30分钟；
短时涡旋振荡；
将标准品原液进行4倍的倍比稀释，同时准备一个浓度为零的标准品（不加标准品）。
（2）准备样品：
加样之前，用稀释液2将样本和质控品进行2倍的倍比稀释。
（3）准备检测抗体：
用稀释液3将50X的检测抗体稀释成1X工作液
（4）准备读板液：
用去离子水将4X的读板液稀释成2X工作液
二、正式实验：
（
1） 洗板并加入样品
每孔加入≥150µl 洗涤液，反复洗涤3次
每孔加入50µl 样品 （标准品、质控品、或待检样品）
室温下震荡孵育2小时
（2）洗涤并加入检测抗体
每孔加入≥150µl 洗涤液，反复洗涤3次
每孔加入25µl 1X 的检测抗体
室温下震荡孵育2小时
（3）洗涤和读板
每孔加入≥150µl 洗涤液，反复洗涤3次
每孔加入150µl 2X 的读板液
使用MSD 仪器进行读板和分析
*注意: 加样品之前洗涤板子是一个选择性的步骤，对于一些特定的实验，这种方法可能会使检测结果的一致性更好。
分析参数包括定量限、质控的回收率，样品定量值，加样前预洗板这个步骤不会对上述值产生影响。
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首先做一个R13 加组，用R8ping的效果。
第一步：R13 -- R3 建立正常的auto-rp SM 模式，将R13 加组224.1.1.1 在R3上ping224.1.1.1 可以看到R3的回复TS2-R3#ping 224.1.1.1Type escape sequence to abort.Sending 1, 100-byte ICMP Echos to 224.1.1.1, timeout is 2 seconds:Reply to request 0 from 10.1.1.13, 1 msReply to request 0 from 10.1.1.13, 8 msReply to request 0 from 10.1.1.13, 8 msTS2-R3#红色地方不理解。
为什么会出现多个回复的条目，有时候是1个有时候是4个的。
还都是10.1.1.13回复的接下来进行第二步如图：远端AS200 里面有个224.1.1.1的RP。
现在想要本地AS内的加组成员，可以连接到远端的RP。
也就是R8上面ping224.1.1.1 的时候可以看到R13的回复。
沿途路由器不运行任何组播。
MSDP 通过TCP 639建立连接，连接建立在IP包基础之上。
但是需要两个路由器直连。
没有直连就建tunnel步骤如下：R8所在的AS 要有自己的一个224.1.1.1的RP （其实只要包含224.1.1.1 的RP就成）这里假设只有R8一台设备跑了组播。
为了节省时间。
R8：TS2-R8#show run | sec pimip pim sparse-modeip pim autorp listenerip pim send-rp-announce Loopback0 scope 10ip pim send-rp-discovery Loopback0 scope 10TS2-R8#将R8所在AS组播配置好以后，建立MSDP连接。
由于需要逻辑上的直连。
这里在R3和R8之间打一个tunnelTS2-R8#show run int tunnel 123Building configuration...Current configuration : 137 bytes!interface Tunnel123ip address 100.1.1.8 255.255.255.0ip pim sparse-modetunnel source Loopback0tunnel destination 10.1.1.3endTS2-R8#这里要注意。
Tunnel就相当于一根线。
所以一定要将tunnel配置组播。
（刚才没配，纠结半个多小时）R3tunnel 一样，跟R8对着配TS2-R3#show run int tunnel 123Building configuration...Current configuration : 137 bytes!interface Tunnel123ip address 100.1.1.3 255.255.255.0ip pim sparse-modetunnel source Loopback0tunnel destination 10.1.1.8end两端tunnel 配置好以后，进行ping测试。
不通的话查路由表。
看你3层协议是否正确，自己排错。
直到通为止。
TS2-R3#traceroute 100.1.1.8Type escape sequence to abort.Tracing the route to 100.1.1.81 100.1.1.8 12 msec * 8 msecTS2-R3#配置MSDP peer ：两条命令TS2-R3#show run | sec msdpip msdp peer 100.1.1.8 remote-as 200ip msdp cache-sa-stateTS2-R3#配置绿的就行了。
下面那条系统自动生成，这里最好指定远端AS 号码，不指也行TS2-R8#show run | sec msdpip msdp peer 100.1.1.3 remote-as 100ip msdp cache-sa-stateTS2-R8#查看一下MSDP peer 的建立情况TS2-R3#show ip msdp peerMSDP Peer 100.1.1.8 (?), AS 200 (configured AS)Connection status:State: Up, Resets: 2, Connection source: none configuredUptime(Downtime): 00:37:59, Messages sent/received: 49/42 Output messages discarded: 0Connection and counters cleared 01:06:30 agoSA Filtering:Input (S,G) filter: none, route-map: noneInput RP filter: none, route-map: noneOutput (S,G) filter: none, route-map: noneOutput RP filter: none, route-map: noneSA-Requests:Input filter: nonePeer ttl threshold: 0SAs learned from this peer: 0Number of connection transitions to Established state: 3Input queue size: 0, Output queue size: 0MD5 signature protection on MSDP TCP connection: not enabled Message counters:RPF Failure count: 0SA Messages in/out: 7/11SA Requests in: 0SA Responses out: 0Data Packets in/out: 3/9TS2-R3#这里面我没指定source 貌似也没啥问题。
接下来通过tunnel 建立BGP邻居关系TS2-R8#show run | b r bgprouter bgp 200bgp log-neighbor-changesneighbor 10.1.1.6 remote-as 200neighbor 10.1.1.6 password 7 05080F1C2243 neighbor 10.1.1.6 update-source Loopback0 neighbor 100.1.1.3 remote-as 100neighbor 100.1.1.3 update-source Tunnel123 neighbor 197.68.3.2 remote-as 300注意一下update sourceTS2-R3#show run | b r bgprouter bgp 100bgp log-neighbor-changesneighbor 10.1.1.1 remote-as 100neighbor 10.1.1.1 update-source Loopback0neighbor 10.1.1.4 remote-as 100neighbor 10.1.1.4 update-source Loopback0neighbor 10.1.1.5 remote-as 100neighbor 10.1.1.5 update-source Loopback0neighbor 100.1.1.8 remote-as 200neighbor 100.1.1.8 update-source Tunnel123!然后激活MP BGP邻居关系R3：Router bgp 100Address-family ipv4 multicastNei 100.1.1.8 activeR8：同R3配置。
现在要在addrss-family ipv4 multicast 下面宣告TS2-R3#show ip bgp ipv4 multicastBGP table version is 5, local router ID is 10.10.19.1Status codes: s suppressed, d damped, h history, * valid, > best, i - internal, r RIB-failure, S StaleOrigin codes: i - IGP, e - EGP, ? - incompleteNetwork Next Hop Metric LocPrf Weight Path*> 10.1.1.3/32 0.0.0.0 0 32768 i*> 10.1.1.8/32 100.1.1.8 0 0 200 ir> 100.1.1.0/24 100.1.1.8 0 0 200 iTS2-R3#首先宣告自己的回环口地址这里有个问题。
宣告回环口的目的是什么。
我的配置回环口是RP的地址。
貌似应该将两个AS内的RP地址都通告给对方。
不知道这么解释对不对。
一会再去查查资料。
其次宣告是重点！！！要在R8上面将100.1.1.0 网段通告出去。
这个地址是组播的源所在网段，一定要注意，是组播源所在的网段。
因为你R8在ping224.1.1.1的时候。
使用的源地址就是100.1.1.8 。
（如果你R8所在AS 有别的网段的设备是源。
那么就要将源设备所在的网段通告出去。
）这样R3通过show ip bgp ipv4 multicast 可以看到源的路由条目。
加组的设备才能访问到远端的RP。
TS2-R8#ping 224.1.1.1 repeat 5Type escape sequence to abort.Sending 5, 100-byte ICMP Echos to 224.1.1.1, timeout is 2 seconds:Reply to request 0 from 10.1.1.13, 1 ms Reply to request 0 from 10.1.1.13, 1 ms Reply to request 0 from 10.1.1.13, 1 ms Reply to request 0 from 10.1.1.13, 1 ms Reply to request 1 from 10.1.1.13, 1 ms Reply to request 1 from 10.1.1.13, 8 ms Reply to request 1 from 10.1.1.13, 8 ms Reply to request 1 from 10.1.1.13, 1 ms Reply to request 2 from 10.1.1.13, 1 ms Reply to request 2 from 10.1.1.13, 1 ms Reply to request 2 from 10.1.1.13, 1 ms Reply to request 2 from 10.1.1.13, 1 ms Reply to request 3 from 10.1.1.13, 1 ms Reply to request 3 from 10.1.1.13, 8 ms Reply to request 3 from 10.1.1.13, 8 ms Reply to request 3 from 10.1.1.13, 1 ms Reply to request 4 from 10.1.1.13, 1 ms Reply to request 4 from 10.1.1.13, 1 ms Reply to request 4 from 10.1.1.13, 1 ms Reply to request 4 from 10.1.1.13, 1 ms TS2-R8#这里求解释。