高效液相色谱同时检测蛋白饮料中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸的前处理方法研究
糕点中五种添加剂的检测方法研究
糕点中五种添加剂的检测方法研究建立高效液相色谱法同时测定糕点中的安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸五种食品添加剂的方法。
样品经超声提取，以pH=8.5的0.02 mol/L乙酸铵溶液和甲醇为流动相，采用Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱进行分离，用液相二极管阵列检测器于230nm波长处检测。
结果表明，五种食品添加剂在0.01 mg/mL-0.12 mg/mL的线性范围内线性良好，相关系数均达0.999以上，加标回收率在92.9%—1017%范围内，相对标准偏差RSD值低于3.2%。
标签：糕点；高效液相色谱；安赛蜜；糖精钠；苯甲酸；山梨酸；脱氢乙酸食品添加剂是为改善食品色、香、味等品质，以及为防腐和加工工艺的需要而加入食品中的人工合成或者天然物质。
在目前所使用的添加剂中，绝大多数为化学合成添加剂，是通过氧化、还原、缩合等一系列化学合成反应所得，有的具有一定的毒性，有的在食品中起变态反应或转变成其它的有毒物质，通过动物实验证明，有些物质有致癌、致畸形等作用。
消费者对食品的安全性日益关注，食品添加剂的使用情况越来越受到人们的重视，特别是有机防腐剂（苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸）和人工合成甜味剂（糖精钠、乙酰磺胺酸钾即安赛蜜），由于它们都有一定的毒性，过量摄入会对人体带来伤害甚至引发癌症。
在GB2760-2014《食品安全国家标准：食品添加剂使用标准》中，对食品中添加的防腐剂及甜味剂都有明确的限量规定或不得添加。
为了防止食品企业超限量或超品种使用添加剂，各级食品监管部门在对食品的监督抽查中都会检测上述5种添加剂。
而目前根据我国现有的检测标准，分三种方法（GB/T23495-2009、GB/T23377-2009、GB/T5009.140-2003）来检测，同一样品需进行不同的前处理方法，不但工作效率低，也增加了工作成本，因此五种食品添加剂的同时快速检测成为必要。
本文在国家检测标准的基础上加以改进，探讨用高效液相色谱法同时检测糕点中的安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸的方法，以便能快捷、准确地测定糕点中上述5种添加剂的含量，在实际工作中具有很强的实用性。
高效液相色谱法同时检测食品中脱氢乙酸、山梨酸、苯甲酸、糖精钠的含量
高效液相色谱法同时检测食品中脱氢乙酸、山梨酸、苯甲酸、糖精钠的含量【摘要】：由于生活水平的提高，人们越来越注重食品的安全性。
本文选用紫外检测器，反向C18柱，以甲醇醋酸铵水溶液（0.02mol/L)（5：95比例）为流动相，同时检测食品中脱氢乙酸、山梨酸、苯甲酸和糖精钠的含量，提高了试验的效率可执行性。
尤其是脱氢乙酸，在230nm波长下检验，降低了检出限，提高了痕量元素检测精确度。
【关键词】：食品添加剂；高效液相色谱法；食品卫生检验食品添加剂即为使食品的质量、色、香、味得到改善，延长存放的时间等需求下使用的合成或自然化学物质。
现阶段许多生产商家在饮品、酱制品、发酵豆制品中加入的甜味素一般是糖精钠、安赛蜜（AK糖）等。
使用的防腐剂通常是苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸。
但过度摄入这些添加剂对人体健康有一定的危害[1~2]。
目前，我国的《食品添加剂使用标准》(GB2760—2014）中对这些添加剂的应用范畴和最大允许使用量都有明确的规定[3~4]。
为了更好地测量和提高效率，在有关参考文献的基础上，本次研究选择高效液相色谱法同时检测了食品中脱氢乙酸、山梨酸、苯甲酸、糖精钠添加剂的含量，现报告如下：1 材料和方法1.1 关键仪器和实验试剂液相色谱仪：Waters 1525，装有紫外检测器；离心机：10 000r/min，TGL-16A离心机，长沙普通仪器有限公司；工业甲醇：色谱纯，tedia公司；乙酸铵：优级纯，广州试剂厂；碳酸氢钠：优级纯，Comio实验试剂；紫外线可见光度计：TU-1810，北京谱仪通用性仪器有限公司1.0mg/mL脱氢乙酸标液：精确称量0.100g脱氢乙酸标准物质，添加5mL碳酸氢钠（20g/L)，微热状态下溶解，转移到100mL容量瓶中，放水滴定剂至100mL，作为储备液，在4摄氏度的环境下保存。
1.0mg/mL山梨酸标液：精确称量0.100g山梨酸标准物质，添加5mL碳酸氢钠（20g/L)，加温溶解，转移到100mL容量瓶中，放水滴定剂至100mL，作为贮备溶液。
高效液相色谱法同时检测碳酸饮料中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠含量
高效液相色谱法同时检测碳酸饮料中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠含量摘要: 采用高效液相色谱法同时检测饮料中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠。
样品经除乙醇（如果含有乙醇），氨水调pH至中性，定容，过水相微孔滤膜，以 C18 （6 × 250mm）色谱柱分离，用配紫外检测器的高效液相色谱仪进行检测。
结果显示安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠浓度在 1.0mg/ L ～ 100. 0mg/ L 范围内呈线性关系，回收率在87% ～ 98% 之间，相对标准偏差在 1%以下，最低检测限0.5mg/kg，适用于同时检测碳酸饮料中的安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠的含量。
关键词:碳酸饮料；安赛蜜；苯甲酸; 山梨酸; 糖精钠; 高效液相色谱仪防腐剂能抑制微生物生长繁殖，在食品中应用普遍，我国到目前为止已批准了32种使用的食物防腐剂，其中最常用的有苯甲酸钠、山梨酸钾等经常用于食品防腐，苯甲酸钠价格低廉，主要用于碳酸饮料和果汁饮料。
糖精钠及安赛蜜作为甜味剂应用于食品中调整食品口味，它们属于高倍甜味剂。
这些产品的甜度都比蔗糖高，现在糖精钠的使用得越来越少，而安赛蜜普遍添加到饮料中。
但过量使用会对人体产生毒副作用，甚至引发癌症。
因而对各类食品进行安全质量控制尤为重要。
现有的国家标准方法中，只有同时测定苯甲酸、山梨酸、糖精钠的方法。
由于碳酸饮料中一般添加安赛蜜比较普遍，很少添加糖精钠，在日常工作中，为节约时间提高分析效率，就要求检测人员研究出适合食品中普遍存在的多种添加剂同时测定的检测方法。
1 材料与方法1. 1 仪器（1）赛默飞世尔高效液相色谱仪U3000带紫外检测器；（2）C18 ( 4.6× 250mm) 色谱柱；(3)万分之一电子天平；（4）无油真空抽滤装置 (5)水浴锅（6）刻度吸管10mL,移液管5mL,容量瓶50mL(7)0.22μm水相微孔滤膜1.2 试剂：（1）盐酸（优级纯）；（2）氨水 ( 优级纯) ; （3）甲醇 ( 色谱纯 ) ;（4）醋酸铵(20mmol/L)：称取1.54g优级纯醋酸铵，加入少量水溶解后，转入1000mL的容量瓶中，加水定容到刻度，经0.22μm水相微孔滤膜用真空抽滤装置抽滤后备用。
超高效液相色谱法检测饮料中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸含量
１ 材 料 与 方 法
１ １ 仪 器 与 试 剂 ．
Ｗａ ｒ Ａ Ｑ ｎＹ Ｕ Ｌ （ ｔ ｓ Ｃ Ｕ ＇ Ｐ Ｃ 配有二极管阵列检测器 、 ｅ 自动进
样 器、 谱 工 作 站 ， ｃ ｕ Ｐ Ｃ＠ Ｂ Ｈ Ｃ。 谱 柱 ： 色 Ａ Ｑ ＩＹ Ｕ Ｌ ｒ Ｅ 色
安全与质量检测教学 。Ｅ—ｍ ｉ ｈｈ ７ ＠１ ３ ｅｍ。 ａｌ ｃｍ ９ ６ ．ｏ ：ｃ
０４ ｍ ．５ 滤茶饮料、 汽水试样 取 ５—１ ０ｇ样品 ， 用水
（ 上接 第 ２ １页 ） ８
［３ 李景红 ， ２］ 孟祥晨． 高效液相色谱法检测牛乳中掺加的胶原水解蛋
中图分类号 ： Ｓ ７ ． Ｔ ２２ ７ 文献标志码 ： Ａ 文章编号 ：０ ２—１０ （０ ２ ０ ０ ８ ０ １０ ３ ２ ２ １ ）５— ２ ２— ２
近年来 ， 由于消费者对食 品的安全性 日益关注 ， 品中各 食
种 添加剂 ， 特别是人工合成添加剂 的使用情况越来 越受到人 们 的重视 。苯 甲酸、 山梨酸 、 安赛蜜 、 糖精 钠等添加剂广 泛应 用 于饮料 、 酱腌菜 、 蜜饯等食品 中， 些添加剂的长期过量食 这 用对人体有 一定 危害 ， 我 国《 品添加 剂使 用卫 生标 准》 在 食
程 春梅 董 刘敏 ， ，师邱 毅 ，宋慧波 ，曹小敏 ，张 境
（． １浙江医药高等专科学校 ， 浙江宁波 ３５ ０ ； ． １ １０ ２ 江苏省淮安市产品质量监督 检验所 ， 江苏淮安 ２ ３０ ） ２ ０ １
摘要 ： 立了利用超高效液相色谱 同时测定饮料中安赛蜜、 建 糖精 钠、 甲酸、 苯 山梨酸含量 的方法 。采 用 Ａ Ｑ ＩＹ Ｃ ＵＴ Ｕ Ｌ ＠ Ｂ Ｈ Ｃ８ 谱 柱 （ ０ ｍ ｘ２ １ｍ １ ７ ｍ） 以 ０ ０ ｏ Ｌ的 乙酸 铵 一甲醇 （ ５： ） 流 动相 ， 速 ＰＣ Ｅ １ 色 １０ ｍ ． ｍ， ． ， ．２ｍ ｌ ／ ９ ５为 流 ０ ３ｍ ／ ｉ ， ． Ｌ ｍ ｎ 柱温 ２ ５℃ ， 二极管阵列检测器在波长 ２０ｎｌ ３ ｌ 进行检测。整个分离过程在 ２４ｍｎ内完成 ， Ｔ ． ｉ 安赛蜜 、 糖精钠、 苯甲酸 、 山梨酸的回收率为 ９ ．％ ～１４ ２ 。该方法快速准确， ４４ ０ ．％ 适用于果汁、 含乳饮料、 茶饮料 、 汽水等常规检测 。 关键 词 ： 超高效液 相色谱法 ； 饮料 ； 安赛蜜 ； 糖精钠 ；苯甲酸 ； 山梨酸
高效液相色谱法测定食品中山梨酸_苯甲酸_糖精钠样品前处理方法(精)
【实验室检测】高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠样品前处理方法张宗辉[摘要 ]目的探讨高效液相色谱法测定食品中山梨酸、苯甲酸、糖精钠的样品前处理方法。
方法不同样品用不同前处理方法 , 用二极管阵列管检测品 (HPLC －DAD 分析测定 , 外标法定量。
结果该前处理方法线性关系良好 , 相对标准偏差分别为山梨酸 3. 18%、苯甲酸 2. 74%、糖精钠 2. 15%, 加标回收率均在 90% 100%之间。
结论该方法稳定性好、准确可靠、简单快速 , 适用于食品添加剂的测定。
[关键词 ]高效液相色谱法 ; 食品 ; 山梨酸 ; 苯甲酸 ; 糖精钠 [中图分类号 ]O657. 7[文献标识码 ]A[文章编号 ]1006－4028(2011 06－0480－03作者单位 :南充市疾病预防控制中心 (四川南充 637000作者简介 :张宗辉 , 男 , 副主任技师 , 医学检验Pretreatment Methods for Simultaneous Determination of Sorbic Acid , Benzoic Acid and Saccharin Sodium in Different Foods by HighPerformance Liquid ChromatographyZHANG Zong －huiNanchong Municipal Center for Disease Control and Prevention ,Nanchong 637000, Sichuan Province , China．Abstract Objective To establish pre －treatment methods for the simultaneous determination of sorbic acid , benzoic acid and saccharin sodium in different foods by high performance liquid chromatography (HPLC with DAD detection．Methods Different samples were pre －treated with different methods and detected by HPLC with the external standard quantification．Results There was a good linear relationship , the relative standard de-viations were 3. 18%for sorbic acid , 2. 74%for benzoic acid and 2. 15%for saccharin sodium．The recoveries ranged from 90%to 100%for the targeted components．Conclusion The method is simple , rapid , reliable and accurate , which is suitable for the determination of food additives．Key wordshigh performance liquid chromatography ; food ; sorbic acid ; benzoic acid ; saccharin sodium高效液相色谱法可以同时测定山梨酸、苯甲酸、糖精钠 , 方便简单快捷。
超高效液相色谱法同时测定糕点中苯甲酸(钠)、山梨酸(钾)和糖
超高效液相色谱法同时测定糕点中苯甲酸（钠）、山梨酸（钾）和糖精钠的含量发表时间：2018-07-09T17:23:54.363Z 来源：《基层建设》2018年第14期作者：钟锐文[导读] 摘要：糕点中的苯甲酸（钠）、山梨酸（钾）和脱氢乙酸（钠）、安赛蜜和糖精钠经水提取，脱脂、沉淀蛋白、离心、过滤后，采用超高效液相色谱法同时测定，样品标准加入平均回收率分别为99.01%~99.36%、99.51%~101.58%、98.90%~99.73%。
广州市澳键丰泽生物科技有限公司广东广州 510760摘要：糕点中的苯甲酸（钠）、山梨酸（钾）和脱氢乙酸（钠）、安赛蜜和糖精钠经水提取，脱脂、沉淀蛋白、离心、过滤后，采用超高效液相色谱法同时测定，样品标准加入平均回收率分别为99.01%~99.36%、99.51%~101.58%、98.90%~99.73%。
关键词：超高效液相；糕点；苯甲酸（钠）；山梨酸（钾）；糖精钠Simultaneous Determination of Benzoic Acid（Sodium），Sorbic Acid（Potassium），and Saccharin Sodium in Cakes by Ultra Performance Liquid ChromatographyRuiwen Zhong（Guangzhou Alchemy Biotechnology Co.，Ltd.，Guangzhou，Guangdong 510760，China） Abstract：The benzoic acid（sodium），sorbic acid（potassium），dehydroacetic acid（sodium），acesulfame potassium，and sodium saccharin in the cake are extracted with water，delipidated，precipitated protein，centrifuged，and filtered，followed by ultra-high performance liquid chromatography.The average recoveries of the standard samples were 99.01%~99.36%，99.51%~101.58%，and 98.90%~99.73%，respectively.Key words：Ultra high performance liquid phase；Pastry；Benzoic acid（sodium）；Sorbic acid（potassium）；Sodium saccharin食品安全是当今关系民生的重大问题，直接关系到广大人民群众的身体健康，而食品的色香味取决于在食品加工过程中使用的适量的食品添加剂。
食品中的山梨酸、苯甲酸、糖精钠、脱氢乙酸的测定
食品中的山梨酸、苯甲酸、糖精钠、脱氢乙酸的测定【摘要】目的：同时对食品中的山梨酸、苯甲酸、糖精钠、脱氢乙酸进行测定，缩短检测时间，提高检测效率。
方法：使用高效色谱仪，紫外检测器，同时检测食品中脱氢乙酸、山梨酸、苯甲酸、糖精钠的含量。
结果：精密度在1%-8%之间，回收率在91%-110%之间。
结论:该方法前处理简单，检测结果稳定性好，准确度高，能同时检测食品中的4种添加剂，提高检测效率。
【关键词】高效液相色谱仪; 安赛蜜; 苯甲酸; 山梨酸; 糖精钠; 脱氢乙酸在食品加工中，为了提高食品的风味，延长保持期等原因，食品中会加入各种的添加剂，而比较常用的包括山梨酸、苯甲酸、糖精钠、脱氢乙酸等。
在国标中，山梨酸、苯甲酸、糖精钠是使用国家标准GB 5009.28-2016进行检测，脱氢乙酸是使用国家标准GB 5009.121-2016进行检测，但在市场的抽检中，有很多的食品均需要检测这4种添加剂，在大量的检测工作中，如果能把这4种添加剂同时进行检测，可以大大缩短检测时间，提高检测效率。
本实验通过对流动相、检测波长的调整探索了一种能同时检测山梨酸、苯甲酸、糖精钠、脱氢乙酸的方法。
1 实验部分1 试剂与仪器岛津液相色谱仪，配紫外检测器，C18色谱柱苯甲酸钠标准品（CAS号:532 32-1)，山梨酸钾标准品（CAS号:590-00-1)，糖精钠标准品（CAS号:128-11-9)氨水、亚铁氰化钾、乙酸锌、无水乙醇、正已烷、甲醇: 色谱纯1.2 试样提取准确称取约2 g试样于50 ml具塞离心管中,加水约25 m，涡旋混匀，于50℃水浴超声20 min，冷却至室温后加亚铁氰化钾溶液（92g/L)2 ml和乙酸锌溶液(183g/L)2 mL，用氢氧化钠溶液(20g/L)调pH至7.5，混匀于8 000r/ min离心5 min,将水相转移至50 ml容量瓶中，于残渣中加水20 mL，涡旋混匀后超声5 min，于8 000 r/min离心5 min将水相转移到同一50 ml容量瓶中并用水定容至刻度，混匀。
高效液相色谱法同时测定四川豆瓣中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠及脱氢乙酸
高效液相色谱法同时测定四川豆瓣中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠及脱氢乙酸陈艳（乐山市产品质量监督检验所，乐山 614000）摘要：目的：建立高效液相色谱法同时快速测定四川豆瓣中5种食品添加剂安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠及脱氢乙酸的检测方法。
方法：样品提取液使用C18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）、采用二极管阵列检测器进行检测；考察了检测波长、不同流动相体系，不同流动相比例、梯度洗脱及流动相流速对实验结果的影响。
结果：安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠及脱氢乙酸在5.0～100.0μg/mL范围内，浓度与峰面积有良好的线性关系，相关系数均大于0.99，样品的加标回收率分别为81.2%～92.2%、84.1%～96.8%、91.1%～99.0%、85.1%～92.3%、89.9%～101.2%，相对标准偏差均小于3.00%。
结论：本方法操作简单、快速、准确，可适用于四川豆瓣中苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸及安赛蜜含量的同时测定。
关键词：四川豆瓣；安赛蜜；苯甲酸；山梨酸；糖精钠；脱氢乙酸；高效液相色谱法中图分类号：TS202.3/O657.7+2 文献标识码：A 文章编号：1006-2513（2020）10-0109-08doi：10.19804/j.issn1006-2513.2020.10.017Simultaneous determination of acesulfame K，benzoic acid，sorbic acid，saccharin sodium and dehydroacetic acid inSichuan traditional broad-bean sauce by HPLC methodCHEN Yan（Leshan Product Quality Supervision and Inspection Institute，Leshan 614000）Abstract：Objective：To establish a HPLC method for the simultaneous and rapid determination of acesulfame K，benzoic acid，sorbic acid，saccharin sodium and dehydroacetic acid in Sichuan traditional broad-bean sauce. Methods：C18 column（250mm×4.6mm，5μm）and diode array detector were used to detect the sample extract. The effects of detection wavelength、different mobile phase system，different mobile phase proportion，gradient elution and mobile phase flow rate on the experimental results were investigated. Results：The concentration of acesulfame K，benzoic acid，sorbic acid，saccharin sodium and dehydroacetic acid was in the range of 5.0～100.0 mg/L. There was a good linear relationship between the concentration and peak area. The correlation coefficients were all greater than 0.99. The average recovery of spiked samples was 81.2%～92.2%、84.1%～96.8%、91.1%～99.0%、85.1%～92.3%、89.9%～101.2% respectively，and the relative standard deviation was less than 3.00%. Conclusion：The method issimple，rapid and accurate. It can be used for the simultaneous determination of acesulfame K，benzoic acid，sorbic收稿日期：2020-05-15作者简介：陈艳（1984-），女，工程师，硕士研究生，研究方向为食品分析与检验。
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高效液相色谱同时检测蛋白饮料中安赛蜜、糖精钠、苯甲酸、山梨酸、
脱氢乙酸的前处理方法研究
【摘要】建立了二极管阵列─反相高效液相色谱同时快速测定蛋白饮料中安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸五种食品添加剂的检测技术。
本文改进的前处理方法操作简便，试验精确度和准确度良好，非常适合应用在大量蛋白饮料样品的快速检测工作中。
【关键词】高效液相色谱；蛋白饮料；安赛蜜；苯甲酸；山梨酸；糖精钠；脱氢乙酸
在检测安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸等指标的前处理过程中，需要对提取液进行过滤，而蛋白饮料中蛋白质含量较高，影响过滤效率，是影响上述添加剂快速检测的主要环节。
在水中，苯甲酸和山梨酸溶解度较低，按照GB/T23495采用亚铁氰化钾和醋酸锌进行蛋白质沉淀[1]后，苯甲酸和山梨酸与杂质一起沉淀，影响测定的准确性[2，3]。
而按照GB/T21703调节pH值后，用亚铁氰化钾和醋酸锌沉淀蛋白质，再用甲醇定容[4]，则液相色谱图中组分峰出现拖尾现象，影响组分峰定量的准确性。
因此有必要针对蛋白饮料的前处理方法进行改进，论证检验方法的实用性，使得数据准确可靠，操作更为简单，便于在基层常规检测工作中推广。
1、材料与方法
1.1仪器与试剂
1.1.1仪器Waters e2695分离模块，Waters 2998 PDA检测器，超声清洗器。
1.1.2试剂色谱纯甲醇，超纯水，0.5mol/L氢氧化钠，0.42mol/L 硫酸锌，0.02mol/L乙酸铵，1.00mg/mL苯甲酸、山梨酸、糖精钠（国家标准物质中心），配制250mg/L的安赛蜜储备液和110mg/L的脱氢乙酸储备液（北京上立方联合化工技术研究院）。
1.1.3色谱条件色谱柱：TopsilTMC18（250mm×4.6mm×5μm）色谱柱，柱温：30℃，检测波长：230nm，流动相：甲醇：0.02mol/L的乙酸铵（8：92），流速：1.0mL/min，进样体积：20μL。
1.2前处理方法
称取1g蛋白饮料（精确至0.001g）于50mL比色管中，加入1mL NaOH溶液，摇匀，加入2mL有机沉淀剂，再分别加入1.5mL ZnSO4溶液、1.5mLNaOH 溶液和5mL超纯水，超声处理后用超纯水定容至刻度，混匀，静置5min。
上清液过滤（双层滤纸），滤液经0.45μm滤膜过滤后上机。
2、结果与分析
2.1样品前处理
蛋白饮料中蛋白质含量较高，在前处理过程中样品极难通过滤纸和滤膜，很大程度上影响了检测效率，因此需要采取有力措施除去蛋白质。
因苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸在水中的溶解度较低，加入蛋白质沉淀剂后与杂质一起被沉淀，影响测定的准确性[2]，因此需要先将苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸转化为易溶于水的盐。
另外，氢氧化钠有沉淀蛋白质的作用[5]，因此本文选择先用氢氧化钠促进苯甲酸、山梨酸和脱氢乙酸在水中的溶解。
由于硫酸锌和氢氧化钠对蛋白质的沉淀能力有限，考虑在不稀释样品的前提下，先加入硫酸锌和氢氧化钠并添加少量有机试剂使样液先进行蛋白质沉淀，再进行稀释和超声处理。
我们选用常用的有机试剂甲醇、乙腈、丙酮、正己烷进行蛋白质沉淀试验，结果表明，经过改进的沉淀剂添加方法，能明显加强蛋白饮料中蛋白质的沉淀，当添加2mL甲醇、乙腈或丙酮时，与不加有机试剂相比，样液分层效果更佳。
几种有机试剂相比，正己烷的分层效果最差。
从色谱图来看，加甲醇沉淀蛋白质，苯甲酸的峰出现拖尾现象，如图1所示。
因为甲醇极性相对较大，使得检测样液极性与流动相极性差别加大，影响目标化合物在色谱柱中的分离，表现为峰拖尾现象。
图1 添加甲醇的样液中的混标色谱图
在同一蛋白饮料中，添加安赛蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精钠、脱氢乙酸的混合标样，样品定容后，这五种标准物质的浓度分别为：安赛蜜0.354mg/L、苯甲酸和糖精钠各0.200mg/L、山梨酸0.242mg/L、脱氢乙酸0.210mg/L。
选取沉淀效果最好的丙酮和乙腈作为有机沉淀剂对样品前处理后，分别超声处理15min和30min，再进行上机测试，测试结果见表1。
由表1，可知经丙酮和乙腈沉淀的样品，超声处理15min后，糖精钠和脱氢乙酸的回收率较低。
考虑到前处理过程中添加剂分散不够均匀的可能，延长超声时间至30min，由测试结果可知，添加丙酮的样品中糖精钠和脱氢乙酸的回收率均有较大提升，而添加乙腈的样品中糖精钠和脱氢乙酸的回收率变化较小。
因此，确定前处理过程中，以丙酮作为有机沉淀剂，超声处理时间为30min。
表1 不同前处理方法的各组分回收率
检测项目回收率（%）
丙酮沉淀，超声15min 丙酮沉淀，超声30min 乙腈沉淀，超声15min 乙腈沉淀，超声30min
安赛蜜 92.56 94.51 92.83 93.56
苯甲酸 109.75 107.26 107.67 99.75
山梨酸 90.61 92.30 91.22 92.82
糖精钠 81.91 98.53 84.10 84.13
脱氢乙酸78.15 92.01 74.15 73.04
2.2标准曲线的建立
通过对混合标准溶液的逐级稀释，分别进样20μL，五种食品添加剂组分均呈良好线性关系，见表1。
表2 相关性分析
检测项目范围（mg/L）回归方程相关系数方法检出限（mg/L）
安赛蜜 0.0-2.0 y=58320x-1020.7 0.9999 0.0175
苯甲酸 0.0-2.0 y=77893x-1367.9 1.0000 0.0176
山梨酸 0.0-2.0 y=110188x-1896.1 0.9999 0.0172。