各种显微技术——制片——染色
生物制片显微绘图染色体和核型分析技术
（2）观察 描绘前，需要仔细观察标本片，熟悉切片中各种组织的 构造层次，重要鉴别特征的位置、各种组织所占的比例等。
（3）勾画轮廓图 ①用幻灯机或投影仪，将标本片投像于绘图纸上， 调整合适的放大倍数，用3H（2H）铅笔轻轻勾画出各个部位 的轮廓，不清晰的部位在显微镜下，用显微测量加以校正。② 小型材料，可以直接用描绘器进行勾画。③徒手勾画法。
4．药材粉末图绘制法
粉末图是描绘粉末药材中具有鉴别意义的组织碎片、 细胞或细胞内含物形态的特征图。绘制方法如下：
11、脱水透明（上行）：用梯度乙醇将溶液逐步过度到无水状 态。 （30%、40%、50%（可过夜）、60%、70% （可过夜）、80%、90%、100%、 50%ETOH+50%PX、100%PX）
12、封片：树脂封片
二、冰冻制片法
冰冻切片
是借助低温冷冻将活体组织或新鲜组织快速 冻结达到一定的硬度进行制片的一种方法。 可省去包埋过程中的一切繁杂手续和时间能 够得到迅速的切片和显微鉴定结果。如手术 中等待冰冻快速病理报告，以病变性质而决 定手术方式和范围。
• 脱水
二甲苯+石蜡
二甲苯
• 切片 • 包埋 • 浸蜡
• 透明
蛋白胶
梯度乙醇
梯度乙醇
• 黏片
• 脱蜡 • 染色 • 封藏
树脂
• 透明
二甲苯
实验关键
1、取材：取材要有代表性，注意取材的时间、部位 和方向。
2、固定：F.A.A.固定液（F=福尔马林：40%甲醛 5ml；A=乙醇50%或70%90ml；A=冰醋酸 5ml），固定时间：10~24h以上。
疟原虫镜检技术-制片与染色PPT课件
疟原虫等。
病例分析
通过实际病例分析，提高疟原虫 形态鉴别能力。
诊断结果的判定与报告
结果判定
根据镜下观察到的疟原虫形态特征，准确判定是 否感染疟疾。
报告撰写
按照规范撰写诊断报告，包括患者基本信息、临 床表现、镜检结果和诊断意见等。
沟通与反馈
及时与临床医生沟通，提供诊断意见，并根据医 生反馈调整镜检技术。
05
注意事项与质量控制
制片过程中的注意事项
样本采集
采集的血液样本应新鲜，避免长时间放置，以免影响制片效果。
血膜制备
血膜应均匀涂片，避免出现厚薄不均或气泡，影响镜检结果。
干燥与固定
制片应在室温下自然干燥，避免过热或过冷，以免影响染色效果。
染色过程中的注意事项
染色液选择
01
根据制片要求选择合适的染色液，确保染色效果良好。
血膜的固定与干燥
固定方法
将固定液滴加在血膜上，使血膜完全浸没在固定液中，静置 10分钟，然后晾干或用吹风机吹干。
干燥注意事项
确保血膜干燥彻底，以免在染色过程中出现脱落或染色不均 的情况。同时，干燥后的血膜应妥善保存，避免污染和损坏 。
03
染色技术
染料的种类与选择
染料种类
注意事项
生物染料、荧光染料、酸性染料等。
02
制片技术
血液样本采集与处理
血液样本采集
采集患者耳垂或指尖血，确保血 液新鲜、无污染。
血液处理
将采集的血液与等量抗凝剂混合 ，摇匀后静置10分钟，然后离心 分离出血浆和血膜。
血膜的制作
血膜板制作
选择适当的血膜板，用吸管吸取少量 血浆，均匀滴加在血膜板上，形成圆 形血膜。
微生物制片显微观察及检测技术
微生物制片显微观察及检测技术微生物是一类不能看见的生物体，它们很小、很微弱。
为了观察和检测微生物，科学家们开发出了多种显微观察和检测技术。
本文将介绍一些常用的微生物制片技术及显微观察和检测技术。
微生物制片技术主要是将微生物样本制备成薄片以便进行显微观察。
常用的制片技术包括固定、包埋和切片。
固定是将微生物样本中的细胞或细菌固定在载玻片上，常用的方法有热固定、酒精固定和甲醛固定等。
包埋是将固定的微生物样本包裹在固体介质中，通常用于切片前的处理，常用的方法有冰冻包埋和石蜡包埋。
切片是将包埋的微生物样本切成薄片，常用的方法有冷冻切片和石蜡切片。
显微观察技术是利用显微镜观察微生物样本的细节和特征。
常用的显微观察技术包括光学显微镜和电子显微镜。
光学显微镜是利用光线通过样本并经过透镜放大观察，主要适用于观察细菌、真菌、原生动物等较大的微生物。
电子显微镜是利用电子束通过样本并经过电磁透镜放大观察，主要适用于观察细菌、病毒等较小的微生物。
电子显微镜分为扫描电子显微镜和透射电子显微镜两种，扫描电子显微镜适用于表面观察，透射电子显微镜适用于内部观察。
检测技术是用于检测微生物样本中的特定组分或特定物质。
常用的检测技术有免疫荧光检测法、酶联免疫吸附检测法和聚合酶链反应检测法等。
免疫荧光检测法是利用荧光染料标记的抗体与特定抗原结合形成复合物，通过显微镜观察荧光信号来检测微生物样本。
酶联免疫吸附检测法是利用酶标记的抗体与特定抗原结合形成复合物，通过显色反应来检测微生物样本。
聚合酶链反应检测法是利用特定的引物和酶来扩增微生物样本中的特定基因片段，通过电泳分析来检测扩增产物。
除了上述的微生物制片技术、显微观察和检测技术，还有一些其他的辅助技术可以提高微生物观察和检测的效果。
例如，染色技术可以通过染色一些特定物质来突出显示微生物样本中的细节和结构。
常用的染色技术有普鲁士蓝染色、格拉姆染色和伊汀染色等。
荧光标记技术可以通过标记荧光染料来突出显示微生物样本中的特定组分。
微生物基本操作规范制片染色和显微观察
➢§ 1 清洗、消毒和灭菌操作 ➢§ 2 培养基的制备 ➢§ 3 采样和取、制样 ➢§ 4 接种、分离纯化
➢§ 5 制片、染色及显微观察
➢§ 6 实验室安全基础知识
5.1
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
显微操作
显微镜是微生物检验中最常用的精密 光学仪器。
显微镜的种类很多，在实验室中常用 的有：普通光学显微镜、暗视野显微镜、 相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。
2.草酸铵结晶紫染液、碘液、95％乙醇、蕃红染 液、石炭酸复红染液
3.菌株：大肠杆菌，金黄色葡萄球菌
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
实验内容与步骤
(一)细菌的简单染色步骤 涂片→干燥→固定→染色→水洗→干燥→镜检
1．涂片 取干净的载玻片于实验台上，在载玻片的中央滴一
滴无菌蒸馏水，将接种环在火焰上烧红，待冷却后从 斜面挑取少量培养物与玻片上的水滴混匀后，在载玻 片上涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过大。 2．干燥
细菌带负电荷多，容易与带正电荷的碱性染料结合，故用碱 性染料染色的较多。
微生物中细菌、致病菌是很小的生物体，必须通过染色的方 法，在显微镜下才能看得清楚，并且还可以通过染色的方法鉴别 革兰氏染色特性，以及是否长有鞭毛、周毛、荚膜和芽孢等。
细菌的大小与形态 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
细菌的测量单位： 微米(μm)
2.左眼注视 （注意右眼应该同时睁着），并转动粗调焦 螺旋，使镜筒徐徐上升，直到看清物象为止；
3. 再用微调焦螺旋调至清晰。
注意：粗调调焦螺旋只用于上调载物台，如观察 显微镜时，用粗调节器调节，有压碎载玻片、损坏物 镜的危险。因此，用细调焦螺旋调节视野使其更清晰
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
微生物检验技术项目七微生物染色及显微形态观察技术
二、染色技术
【报告内容】 1.简述普通光学显微镜的构造及工作原理； 2.简述普通光学显微镜的使用过程及保养方法； 3.分别绘出你在低倍镜、高倍镜和油镜下观察到的 金黄色葡萄球菌及大肠埃希氏菌的状态，包括在三 种情况下视野中的变化，同时注明物镜放大倍数和 总放大率。
二、染色技术
任务7-2细菌的染色及形态结构观察
Thank you
二、染色技术
任务7-3 酵母菌、霉菌的染色及形态结构观察
7-3-1酵母菌的形态观察 【任务验收标准】 1.了解自然存在的酵母菌及其形态结构、出芽生殖方式 2.学习掌握区分酵母菌死、活细胞的染色方法。
二、染色技术
【任务完成条件】 1.酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、热带假丝 酵母(Candida tropicalis)斜面菌种； 2.PDA培养基 3. 0.05％美蓝染色液(以pH 6.0的0.02mol/L磷酸缓冲 液配制)、碘液、0.04％的中性红染色液； 4.显微镜、载玻片、擦镜纸、盖玻片、接种环等。
二、染色技术
【工作任务】 1.观察酵母菌个体形态 以小组为单位制取菌悬液，每位学生独立完成酵母菌 的活体染色观察及死亡率的测定。 2.观察自然状态的酵母菌 以小组为单位培养酵母菌，每位学生独立完成观察任 务。
二、染色技术
【工作任务】 1.观察酵母菌个体形态 以小组为单位制取菌悬液，每位学生独立完成酵母菌的活 体染色观察及死亡率的测定。 2.观察自然状态的酵母菌 以小组为单位培养酵母菌，每位学生独立完成观察任务。
二、染色技术
【工作任务】 1.细菌荚膜染色制片的制作及观察； 2.细菌芽孢染色制片的制作及观察。
二、染色技术
【任务指导】 （一）细菌的荚膜染色 1.负染色法 2.湿墨水法 3.干墨水法
微生物基本操作规范之制片、染色及显微观察
规范操作基础培训
5 制片、染色及显微观察
主要内容：
➢§ 1 清洗、消毒和灭菌操作 ➢§ 2 培养基的制备 ➢§ 3 采样和取、制样 ➢§ 4 接种、分离纯化
➢§ 5 制片、染色及显微观察
➢§ 6 实验室安全基础知识
5.1 显微操作
显微镜是微生物检验中最常用的精密 光学仪器。
显微镜的种类很多，在实验室中常用 的有：普通光学显微镜、暗视野显微镜、 相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。
涂片→干燥→固定→初染→水洗→媒染→水洗→脱色→水洗→复பைடு நூலகம்→水洗 →干燥→观察
1．取培养物分别做涂片、干燥、固定，方法均与简单染 色的相同。
2．用草酸铵结晶紫染色1min后水洗。 3．加碘液媒染1min后水洗。 4．斜置载玻片，滴加95％乙醇脱色，至流出的乙醇不现
紫色 为止，大约需时20~30s，随即水洗。 5．用蕃红染液复染1min，水洗。 6．用吸水纸吸掉水滴，待标本片干后置显微镜下，用低
细菌的大小与形态
细菌的测量单位： 微米(μm)
细菌的形态
球菌
杆菌
螺形菌
染色方法
(一)简单染色法
简单染色法又叫作普通染色法，只用一种 染料使细菌染上颜色，观察细菌的形态。
(二)复染色法 用两种或多种染料染细菌，目的是为了鉴别不同性
质的细菌，所以又叫鉴别染色法。主要的复染色法有革 兰氏染色法和抗酸性染色法。
油晕不再扩大为止）； 4.用微调焦螺旋调至清晰。
注意：油镜的操作需要较强的关线，故需将光线 调至最强。
用10倍和/或40倍物镜为随后的高倍油镜（90倍 或100倍）选择合适的视野（油镜镜筒上通常刻有 H.I.OIL或OEL等标志）
制片、染色及显微观察课件
不同染料具有不同的性质和浓度要求，需根据实际情况进行调整。
注意染色温度和时间
染色温度和时间对染色效果有影响，需根据染料和实验要求进行控制。
03
显微观察技巧
显微镜的种类与选择
光学显微镜
选择依据
利用可见光和光学透镜放大物体，主 要用于生物学和医学领域。按用途可 分为普通光学显微镜、荧光显微镜、 相差显微镜等。
根据观察需求选择合适的显微镜，如 观察细胞结构可选择光学显微镜，观 察超微结构可选择电子显微镜。
电子显微镜
利用电子束代替可见光，通过电磁透 镜放大物体，主要用于观察超微结构。 按原理可分为透射电子显微镜和扫描 电子显微镜。
显微观察的基本步骤与技巧
制片
染色
调焦与对光
观察与记录
技巧
将待观察样品制备成适 合观察的薄片或切片， 如血液涂片、组织切片 等。制片过程中需注意 保持样品新鲜、无污染 ，切片厚度适中。
制片、染色及显微观察课 件
• 制片技术简介 • 染色技术详解 • 显微观察技巧 • 制片染色一体化技术 • 实际操作演示
01
制片技术简介
制片技术的定义与重要性
定义
制片技术是指通过一系列处理， 将生物或无生命样本制成可以在 显微镜下观察的薄片或切片的过 程。
重要性
制片技术是生物学、医学、农业 等领域研究的基础，对于观察细 胞结构、组织形态、微生物特性 等方面具有重要意义。
涂片制作
讲解如何将待观察的标本涂抹在载玻片上，并保证其均匀、平整，以便后续染 色和观察。
染色技术操作演示
常用染色方法
介绍几种常见的染色方法，如HE染色、Masson染色等，以及它们在制片过程中 的作用和效果。
疟原虫的镜检技术-制片染色
血膜的制作（取血时间）
❖ 现症病人和流调普查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要某期 疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。
❖ 疟疾典型的临床表现分前驱期、发冷（寒战）期、发热期、出 汗期和间歇期五期。
疟原虫镜检技术 ——制片与染色
主讲内容
❖厚薄血膜的制作与染色。 ❖疟原虫计数方法。
血膜的制作（所需设备）
❖ 载玻片：新玻片浸入有液态洗涤剂的清水中10-20分钟，
干净棉巾逐个擦拭，再用清水冲洗干净，晾干，最后用干 净柔软的棉巾将玻片擦亮。已用过的玻片浸泡于洗涤剂溶 液中1-2天，或浸泡于煮沸的5%肥皂水中1-2小时，再放 入新配置的洗涤剂溶液中1-2小时，逐个擦去血膜痕迹， 清水漂洗干净，擦亮。
姬氏染液的染色方法
❖ 血片干燥后,先用甲醇或无水酒精固定薄血膜（瑞氏不需固定）, 再用清水对厚血膜溶脱血红蛋白(新制作的也可直接染色)，然后 再进行染色。
注意：吸取母液时，不要晃动瓶子,以免沉淀物泛起影响染色效果。
➢ 成批血片染色：将已用甲醇固定薄血膜的血片插入染色缸，倒入 3%姬氏染液稀释液（3毫升姬氏原液加缓冲液或蒸馏水97毫升， 混匀）浸没血片，同时对厚薄血膜染色30-40min（根据当地实际 情况，酌情增减染色时间），然后用清水轻轻将染液漂洗干净， 将血片标本（血膜面朝下）插于晾干板上晾干，包装，镜检。
制作血膜注意事项
❖清洗玻片片时，手指勿接触玻片表面，以免油 污使薄血膜产生空白区以及厚血膜脱落。作为推片的玻 片边缘一定要平滑，才能使推出的血膜均匀一致。
❖刚涂制的血膜要平放在标本盒内 厚血膜未干前勿
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形态学研究技术一、显微镜介绍（PPT 3~18）二、固定（PPT 19~20）三、组织切片（PPT 21~25）四、组织染色（PPT 26~30）五、免疫组织化学/免疫细胞化学（PPT 31~56）六、荧光染料（PPT 57~65）七、定量分析（PPT 66~77）八、应用（PPT 78~88）九、电子显微镜（PPT 89~102）一、显微镜的介绍★四种光学显微镜：亮视野；相差；微分干涉相差；暗视野（用的非常少，比如原位杂交中同位素标记的点是亮的，用暗视野显微镜在暗背景下看到的亮点会更清楚）★倒置显微镜：可操作空间大，可以做电生理等实验，最常用的观察方法是相差，由于此方法不需要染色，因此是观察活细胞的理想方法，分辨率不如正置组成和普通显微镜一样，只不过物镜与照明系统颠倒，前者在载物台之下，后者在载物台之上，倒置显微镜和放大镜起着同样的作用，就是把近处的微小物体成一放大的像，以供人眼观察。
只是显微镜比放大镜可以具有更高的放大率而已。
目镜的作用与放大镜一样。
所不同的只是眼睛通过目镜所看到的不是物体本身，而是物体被物镜所成的已经放大了一次的像。
★体视显微镜：视野大可作精细解剖和/或胚胎，分辨率不如正置1．双目镜筒中的左右两光束不是平行的，而是具有一定的夹角——体视角（一般为12度---15度），因此成像具有三维立体感；2．像是直立的，便于操作和解剖，这是由于在目镜下方的棱镜把像倒转过来的缘故；3．虽然放大率不如常规显微镜，但其工作距离很长4．焦深大，便于观察被检物体的全层。
5．视场直径大。
★荧光显微镜：光源是汞灯,有滤镜。
固定后的细胞、组织用荧光染料；活体细胞用荧光蛋白。
荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别：1.照明方式通常为落射式，即光源通过物镜投射于样品上；2.光源为汞灯紫外光，波长较短，分辨力高于普通显微镜；3.有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线，以保护人目。
（荧光素的标记只是作为一种指示剂，不像电子显微镜下面看到的是真实物体，要真正敲定某种物质的location只能借助电镜）★共聚焦显微镜：（结构，原理）光源不是汞灯,是激光器，（注：在观察的时候，使用汞灯为光源，拍摄的时候使用激光器）与普通的CCD成像不同, 普通的CCD成像杂光多，不清晰，颜色是真彩,共聚焦显微镜的颜色是伪彩（同一个激光器有几个不同的波长，可据荧光素选择具有需要波长的激光器。
不同于普通荧光显微镜激发光是某一波段内的光，激光器发出的是某一特定波长的光，能量集中，功率大。
）从一个点光源发射的探测光通过透镜聚焦到被观测物体上，如果物体恰在焦点上，那么反射光通过原透镜应当汇聚回到光源，这就是所谓的共聚焦，简称共焦。
共焦显微镜(CLSM或LSCM)]在反射光的光路上加上了一块半反半透镜，将已经通过透镜的反射光折向其它方向，在其焦点上有一个带有针孔(Pinhole)，小孔就位于焦点处，挡板后面是一个光电倍增管(photomultiplier tube，PMT)。
可以想像，探测光焦点前后的反射光通过这一套共焦系统，必不能聚焦到小孔上，会被挡板挡住。
于是光度计测量的就是焦点处的反射光强度。
其意义是：通过移动透镜系统可以对一个半透明的物体进行三维扫描。
★成像系统○1digital camera imaging system(CCD)（真彩）CCD的真实名称为电荷耦合器件，工作原理是CCD将光线转换成模拟电压信号，并且标出每个象素的灰度级，再由一个模数转换器将模拟电压信号转换为数字信号，每种颜色使用8、10或12位来表示，逐点扫描后，通过扫描图像专用格式保存在电脑里。
成像过程中，光源发出的光必须经过镜片的反射和透镜的聚焦，且得到的图像是真彩。
○2共聚焦成像-----激光共聚焦显微镜（伪彩）有小孔，分辨率高，但进入的光量也少，需在两者间达到平衡；不是CCD那种全量，而是只扫描某个部分，得到的pic 每张都在焦点上，可以叠加；得到的灰白pic可以人为赋予各种颜色。
二、固定★固定的目的和作用若想得到理想的染色结果、正确地判断抗原物质在组织细胞内的位置，除需有良好的酶和抗体外，保持组织细胞内抗原物质的不动性（immobility）和免疫活性也是至关重要的。
固定的目的在于迅速终止酶的活性，避免组织细胞结构的解体，阻止细胞内外肽类和蛋白质的扩散移位，增强组织细胞对标本制作过程中各种有害影响的对抗作用，总之，在于达到固定抗原和保存组织细胞形态结构的目的。
尤其是保持抗原分子上有限数目氨基酸顺序和抗原决定簇的完整性，保持抗原分子三维空间构型的稳定性以便于结合特异性抗体。
尤其是大多数神经激素和肽类物质，因为具有水溶性，在进行免疫组织化学研究之前，常常需要固定处理。
但是肽类物质和蛋白质的物理化学性质不同，因而对不同的固定剂或者固定方法的适应程度也不尽相同。
某些固定剂甚至可以同时破坏和/或保护同一抗原物质的不同抗原决定簇。
因此，在进行免疫组织化学研究的时候，先要了解所研究物质（如蛋白质和肽类）的化学性质，再根据需要来选用适宜的固定剂或固定方法，改进固定的条件。
★固定剂选择最佳固定液的标准是：①最好地保持细胞和组织的形态结构；②最大限度地保存抗原的免疫活性。
值得注意的是免疫组织化学技术中禁用含重金属的固定液。
免疫组织化学研究中常用的固定剂：交联固定：多聚甲醛、戊二醛（glutaraldehyde）沉淀固定:乙醇、甲醇、丙酮（acetone）细胞可选择的固定液多，一般固定10min～20min。
★ pH：较多中性固定液（PH 7.4），有时也会用酸性或碱性固定液用不同的磷酸缓冲液配制PFA（多聚甲醛），得到酸、中、碱性固定液。
★固定的时间：长,对组织结构有好处,但对抗原不一定好；组织固定时间最好在l2h内，一般固定时间不应超过24小时。
随着固定时间的延长对组织抗原的检出强度将逐渐降低。
★常用的固定方法有两种：浸入法和灌注法。
浸入法即将组织浸泡在固定液内（必要时在4℃下），固定时间根据抗原的稳定性以及固定液的性质而定，一般在2-12h之间。
灌注法主要适用于动物研究；灌注固定可以使固定液迅速到达全身组织充分固定。
★Procedure（灌注, 浸泡, 后固定）★蔗糖（10%、20%、30%）-----高渗的蔗糖溶液，能够置换出水，所以可作为冰冻切片前的冻融保护。
蔗糖脱水的作用：○1冰冻切片时的冻融保护，○2提高染色时抗原的浓度。
★固定时应注意力求保持组织新鲜，勿使其干燥；组织块不宜过大过厚，组织块厚度必须控制在0.3cm以内；固定液必须有足够的量，在体积上一般大于组织20倍以上，否则组织中固定不良而影响效果；组织固定后，应充分水洗，去除固定液，以减少固定液造成的人为假象。
三、切片★冰冻切片是免疫组织化学中最常用的一种切片方法，能够最大量的保存抗原、操作简便，主要适用于不稳定的抗原（如检测细胞膜的某些抗原成分），但标本来源受限。
新鲜的组织及已固定的组织均可作冰冻切片。
冰冻切片时,组织中水分易形成冰晶,影响抗原定位。
冰晶小而多，对组织结构损害大。
因此可采用以下措施减少冰晶的形成：①速冻，缩短组织从-33～-43℃的时间。
（用干冰或液氮，但液氮易使组织冻裂）②将组织置于20%-30%蔗糖溶液中1-3天，利用高渗吸收组织中水分，减少组织含水量。
冰冻切片一般用恒冷切片机。
切片后如不染色，必须将切片吹干，贮存于低温冰箱内，进行短暂预固定干燥后贮存于低温。
冰冻切片优缺点：○1不用任何包埋,迅速,薄,4～5μm,可以保存很长的时间○2缩短了制片时间○3抗原性不受损失○4对稳定性差的抗原，如淋巴细胞表面抗原尤其适合。
★石蜡切片：在冰冻切片染色不好的情况下可选用石蜡切片，可作抗原修复。
抗原修复：组织在制作过程中,由于化学试剂的作用封闭了抗原，又由于热的作用致使部分抗原的肽链发生扭曲,致使在免疫组化的染色过程中不能将其显示出来，为了解决上述的问题,利用化学试剂和热的作用将这些抗原重新暴露出来或修正过来的过程称为抗原修复。
在制作切片或超薄切片时，由于组织是柔软的，或局部的软硬不均，这样制作厚薄均匀的切片是困难的。
所以有必要用一定物质浸透组织内部，整个组织一样硬化，以利于切成薄片，这种物质叫做包埋剂。
包埋：就是将已经固定，脱水，透明，浸蜡的组织快从最后的蜡浴取出置入充满熔融石蜡的包埋框内，包埋成块，使组织和包埋剂相容一体并迅速冷却，这个程序称为包埋。
包埋剂凝固后，进一步加强了组织的硬度和韧度而便于进行切片。
石蜡切片的优缺点：○1石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法○2最大优点是组织形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；○3石蜡块还能长期存档，供回顾研究。
○4石蜡切片制作过程对组织内抗原显现有一定的影响，但可通过某些措施予以改善，因而它是大多数免疫组化中首选的组织标本制作方法。
HE染色石蜡切片制作的基本过程（了解）1、取材与固定：从人或动物新鲜尸体上取下组织块(一般厚度不超过0．5厘米)投入预先配好的固定液中(10％福尔马林，Bouin氏固定液等)使组织、细胞的蛋白质变性凝固，以防止细胞死后的自溶或细菌的分解，从而保持细胞本来的形态结构。
2、脱水透明：一般用由低浓度到高浓度酒精作脱水剂，逐渐脱去组织块中的水份。
再将组织块置于既溶于酒精，又溶于石蜡的透明剂二甲苯中透明，以二甲苯替换出组织块的中酒精，才能浸蜡包埋。
3、浸蜡包埋：将已透明的组织块置于已溶化的石蜡中，放入溶蜡箱保温。
待石蜡完全浸入组织块后进行包埋：先制备好容器(如折叠一小纸盒)，倒入已溶化的石蜡，迅速夹取已浸透石蜡的组织块放入其中。
冷却凝固成块即成。
包埋好的组织块变硬，才能在切片机上切成很薄的切片。
（生物秀实验频道 ）4、切片与贴片：将包埋好的蜡块固定于切片机上，切成薄片，一般为5—8微米厚。
切下的薄片往往皱折，要放到加热的水中烫平，再贴到载玻片上，放45℃恒温箱中烘干。
5、脱蜡染色：常用HE染色，以增加组织细胞结构各部分的色彩差异，利于观察。
苏木精(Hematoxylin，H)是一种碱性染料，可将细胞核和细胞内核糖体染成蓝紫色，被碱性染料染色的结构具有嗜碱性。
伊红(Eosin，E)是一种酸性染料，能将细胞质染成红色或淡红色，被酸性染料染色的结构具有嗜酸性。
染色前，须用二甲苯脱去切片中的石蜡，再经由高浓度到低浓度酒精，最后入蒸馏水，就可染色。
HE染色过程是：①将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。
②酸水及氨水中分色，各数秒钟。
③流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻。
④入70％和90％酒精中脱水各10分钟。
⑤入酒精伊红染色液染色2—3分钟。
6、脱水透明：染色后的切片经纯酒精脱水，再经二甲苯使切片透明。
7、封固：将已透明的切片滴上加拿大树胶，盖上盖玻片封固。