甲醇刚果红染色
病理科操作规范及流程
病理标本的验收规范及流程病理科应有专人验收普通活体组织病理学检查(常规活检)申请单和送检的标本。
(二)病理科验收人员必须：1．同时接受同一患者的申请单和标本。
2．认真核对每例申请单与送检标本及其标志（联号条或其他写明患者姓名、送检单位和送检日期等的标记）是否一致；对于送检的微小标本，必须认真核对送检容器内或滤纸上是否确有组织及其数量。
发现疑问时，应立即向送检方提出并在申请单上注明情况。
3．认真检查标本的标志是否牢附于放置标本的容器上。
4．认真查阅申请单的各项目是否填写清楚，包括：①患者基本情况［姓名、性别、年龄，送检单位（医院、科室）、床位、门诊号/住院号、送检日期、取材部位、标本数量等］，②患者临床情况［病史（症状和体征）、化验/影象学检查结果、手术（包括内镜检查）所见、既往病理学检查情况（包括原病理号和诊断）和临床诊断等］。
5．在申请单上详细记录患者或患方有关人员的电话号码，以便必要时进行联络，并有助于随访患者。
(三)验收标本人员不得对申请单中由临床医师填写的各项内容进行改动。
不合格标本的处理规范与程序1．申请单与相关标本未同时送达病理科；2．申请单中填写的内容与送检标本不符合；3．标本上无有关患者姓名、科室等标志；4．申请单内填写的字迹潦草不清；5．申请单中漏填重要项目；6．标本严重自溶、腐败、干涸等；7．标本过小，不能或难以制做切片；8．其他可能影响病理检查可行性和诊断准确性的情况。
病理科不能接收的申请单和标本一律当即退回申请医师，不予存放，并记录。
病理标本检查和取材规范及程序1.取材前阅读申请单中的内容，初步判断病变的性质。
2.核对申请单的编号与标本的编号、标本的份数是否相符。
３.对于核对无误的标本应按下列程序取材：３.１小标本和不完整的标本通常为活检标本，应按如下标准取材。
３.１.1应描述和记录送检标本的数量（少量时精确计算，多量时进行估计）、大小（若干mm或cm；多量时聚拢测量）、形状、色泽和质地等。
刚果红染色PDCA
病理技术组特殊染色PDCA 循环问题描述：2018年4月诊断医师反应科室刚果红染色效果不佳影响疾病诊断，主要表现在淀粉样着色和纤维组织的着色不易区别,质控小组统计了上半年连续四个月特染结果数据(表一及图一 ），1—3月特染切片优良率统计均符合三级甲等医院要求（优秀率≥90%；优良率≥98%），而4月份统计数据显示该月特染质量明显下降且低于规范要求(优秀率84％；优良率90%）,已经严重影响病理诊断的及时性和准确性。
表一图一7580859095100一月二月三月四月优秀率优良率原因分析：对2018年4月所有特染切片染色项目构成和评分结果为乙、丙、丁的染色项目进行统计，数据显示影响特染优良率的主要因素是刚果红染色和MASSON染色(表二,图二），其中又主要是刚果红染色结果对优良率影响最大（表三，图三),因此最快时间内使优良率达到相关规范要求，可通过改进刚果红染色来实现。
表二。
图二四月份染色项目构成MASSONPASPASM刚果红抗酸染色表三图三四月份乙丙级切片占比MASSONPASPASM刚果红抗酸染色质控小组组织阅片医师及病理技师集体讨论和分析刚果红染色不合格的可能原因：1。
试剂原因：科室刚果红染色为手工染色法，所有试剂均为手工配制，由于标本量较小，染液用量不大且周期较长，很可能是刚果红染液近效期或过期导致试剂失效；2.人员原因：该岗位人员是否依据SOP操作；责任心；实践及理论培训是否合格；3.方法学:本科室刚果红染色项目开展时间不长（2年）,目前的方法学选择在当时并未经过严密的论证，且因为标本量很少，在阅片和染色两方面均没有积累太多经验,所以不排除方法学本身的不足导致染色失败。
图四预期改进目标：制定改进计划措施并实施，在本年度5月底使特殊染色优良率≥98%,优秀率≥90。
改进计划（PLAN）：专业组全体人员就解决方案进行分析和讨论，针对不同的原因给出针对性的解决方案并明确责任人和实施时间表：1。
刚果红染色法的原理
刚果红染色法的原理
刚果红染色法是一种常用的生化实验方法，其原理是将刚果红染色剂
加入到样品中，利用其结合纤维蛋白原及淀粉酶等分泌物的特性，使得样
品中特定结构的蛋白质及其他分子发生结合及聚合作用，最终表现为颜色
的变化。
刚果红染色方法主要针对的是淀粉样品。
淀粉分子在加入刚果红后，
可与其形成无定形结合复合物，这些复合物可能由β-折叠蛋白构建而成，因此染色后的样品通常会呈现出青蓝色至紫色的特殊颜色。
另外，刚果红
还能够与一些蛋白质如淀粉酶等结合，从而形成聚合物。
此种结合可以被
一些特异性抗体所检测，并得出进一步的研究结论。
总而言之，刚果红染色法是利用分子结合的原理和分子特异性的相互
作用，观察分子在染色剂作用下的变化，从而确定样品中蛋白质或淀粉等
特定分子的存在，具有比较敏感和特异的检测效果。
刚果红染色实验服务安全操作及保养规程
刚果红染色实验服务安全操作及保养规程背景刚果红染色实验是生物学实验中常用的一项技术。
它能够帮助研究人员在细胞、组织等生物样本中识别特定结构和组分。
然而，刚果红染色实验操作不当会带来一定的风险，因此需要注意安全操作和保养。
安全操作规程实验室准备在进行刚果红染色实验前，需要证实实验室的安全设备和环境已经符合操作标准。
以下是实验室准备事项：•实验室内设置完备，包括通风良好、桌面整洁干净。
•实验室内存在完备的急救设备和药箱。
•实验室内存在完备的紧急出口，应急灯照明设备。
•实验室内应保持稳定的气温和湿度，避免仪器和试剂受潮。
•实验室内应配备化妆品消毒器材，定时消毒清洗。
个人防护个人防护是刚果红染色实验安全操作的重要一环。
实验人员要戴上以下防护用品：•过滤口罩或实验室的专业防护面具•手套、实验衣、实验帽和实验鞋套•护目镜或眼罩应定期清洗或更换防护用品。
试剂准备在进行刚果红染色实验时，需要提前准备试剂。
在进行试剂准备前，需要查看试剂的保质期及质量，并按照以下步骤进行：•排除试剂过期或存在异常的情况。
•用盛装容器保存好未使用完的试剂，以防接触空气造成污染。
•试剂洗涤后进行专门的堆放分类，以免混淆使用。
实验操作在进行刚果红染色实验时，需要注意以下操作事项：•实验室里要集中活动、防止意外碰撞。
•实验时需仔细读取实验操作手册，确保按正确步骤进行。
•实验师应定时进行手部和试剂消毒，带手端实验前，需要很好地清洗双手。
•实验后，高温残药需严格处理清理，低温残药需放置于有害物质存放处。
•实验结束，所有化学试剂和器材应做好归位整理、分类。
废液处理废液处理需独立维护，操作时需带上手套。
处理时应注意以下事项：•废液需用密闭容器进行储存，防止污染。
•废液丢弃前应提前验明化学物质成分。
•禁止将废液倒入洗涤槽或下水道。
保养规程为确保刚果红染色实验的顺利进行，需要保养实验室设备和仪器。
以下是保养规程：仪器保养定期维护仪器设备，检查电器及电机部分，确保所有线路、接头和控制柜处于正常状态。
免疫荧光和几种特殊染色在肾活检病理诊断中的应用
免疫荧光和几种特殊染色在肾活检病理诊断中的应用罗教秀;储兵;曹晓珊;陈应智;吴师珍【摘要】Objective:To analyze the effect of immunofluorescence and other special staining methods in the pathological diagnosis of renalbiopsy.Methods: 58 patients with chronic kidney disease admitted in our hospital from September 2014 to September 2016 were included in the object of study.All patients underwent renal biopsy puncture to obtain tissue using paraffin, respectively by immunofluorescence, six staining of methanol method, Congo red staining and mucin (PAS) and three Masson dye staining, staining results in different ways.Results: The positive rates of IgA, IgM, IgG, C3 and Clq in the patients with different types of nephropathy were significantly higher than those of IgA nephropathy and membranous nephropathy in patients by immunofluorescence staining.In the comparison of different staining methods, it was found that the positive rate of IgA, IgM, IgG, C3 and Clq detected by immunofluorescence staining was significantly lower than that of other staining methods,P<0.05.There was no difference in the diagnostic rate of other staining methods, P>0.05.Conclusion:Comparing with other methods, the rate of pathological diagnosis of renal biopsy is lower than that of other methods.It is recommended to use other special staining methods to diagnose renal tissue.%目的:分析免疫荧光染色及其他几种特殊染色法在肾活检病理诊断中的应用效果.方法:临床纳入58例我院2014年9月至2016年9月期间收治的慢性肾脏疾病患者作为研究对象,所有患者均进行肾穿刺活检,穿刺取得组织采用石蜡制片,分别采用免疫荧光法、六胺银染色法、甲醇刚果红染色法、黏蛋白染色法(PAS)以及Masson三色染色,对比不同方法染色的结果.结果:不同类型肾病患者中,免疫荧光染色中狼疮性肾病中IgA、IgM、IgG、C3以及Clq诊断阳性率明显高于IgA肾病和膜性肾病患者,P<0.05.在不同染色方法的对比中发现,免疫荧光染色法在肾病检测IgA、IgM、IgG、C3以及Clq诊断阳性率明显低于其他染色方法的诊断率,P<0.05.其他染色方法诊断率均无差异,P>0.05.结论:免疫荧光染色相对于其他染色方式对肾活检病理诊断率稍低,临床上推荐采用其他特殊染色方法对肾组织进行病理诊断.【期刊名称】《河北医学》【年(卷),期】2017(023)006【总页数】4页(P898-901)【关键词】免疫荧光;六胺银;甲醇刚果红;黏蛋白染色;Masson三色染色诊断【作者】罗教秀;储兵;曹晓珊;陈应智;吴师珍【作者单位】中山大学附属中山医院病理科, 广东中山 528403;中山大学附属中山医院病理科, 广东中山 528403;中山大学附属中山医院病理科, 广东中山 528403;中山大学附属中山医院病理科, 广东中山 528403;中山大学附属中山医院病理科, 广东中山 528403【正文语种】中文肾活检组织病理检查包括免疫病理、光学显微镜、电子显微镜等，其中免疫病理检查常采用石蜡切片进行免疫组化染色[1]。
几种常用特殊染色操作过程中的要点
一、网状纤维染色 ——氢氧化银氨法（Gomori法）
5
（一）网状纤维的形态结构
较细的纤维组织、短、分支多，交织成网状
（与胶原纤维共同为细胞丰富的器官起到支撑作用）
HE呈淡红色，银氨液浸染、甲醛还原后呈黑色
（嗜银性/嗜银纤维：黑色）
主要由Ⅲ型胶原蛋白构成，表面被覆糖蛋白
（PAS染色：淡紫红色）
6
＋蒸馏水，洗涤沉淀（50-100ml蒸馏水） <反复/3次，沉淀不浑浊>
留下沉淀及少许上清液（4ml）
<保留沉淀物质>
逐滴＋氢氧化铵（一次1-2滴加入）
<边加摇晃>
至沉淀逐渐完全溶解
<无色溶液>
逐滴＋10%硝酸银，至刚出现浑浊 加氢氧化铵一至数滴，使沉淀消失
＋蒸馏水至40ml，2-8°C冰箱
<浑浊状态>
2
四、淀粉样物 刚果红法（甲醇刚果红、碱性刚果红）、甲基紫法 五、色素 含铁血黄素（Perls）、黑色素（Masson-Fontana）铜（罗 丹明、红氨酸） 六、糖类物质 糖原（PAS）、黏液物质（AB-PAS、AB） 七、脂内物质 中性脂肪（苏丹Ⅲ、Ⅳ、油红O）
3
八、神经组织 尼氏体（硫瑾、甲苯胺蓝）、神经髓鞘（变色酸2R、砂罗 铬花青） 九、肝脏穿刺 Masson、网状纤维、含铁血黄素、PAS、铜等。 十、肾脏穿刺组织 Masson、六胺银、PAS、刚果红等
1.氧化（KMnO4）：使网状纤维内羟基转变为醛基。<选择性> 2.漂白（H2C2O4）：棕色变为无色。 3.媒染（铁明矾）：增加网状纤维对银氨液的选择性。 4.浸银（氢氧化银氨）：银氨液中Ag（NH3）2+被组织吸附后与醛基结合。 5.还原（甲醛）：与网状纤维结合的银氨配位化合物还原成黑色的金属 银。
肾脏病理染色你知多少？
肾脏病理染色你知多少？
来源：中洪博元熊技术
淀粉样变是特殊蛋白质在细胞外形成具β样折叠结构、不可溶的纤维丝沉积在特定脏器而引起器官功能损害的疾病，常累及多个器官，临床表现多样，起病隐袭，误诊率较高，预后较差。
肾脏是淀粉样变这种全身性疾病最常受累的器官之一，肾活检组织的病理学检查是诊断淀粉样变性最可靠的手段之一，阳性率可达85%以上，刚果红染色更成为诊断该病的金标准。
1.酸化甲醇刚果红染色法
（1）石蜡切片脱蜡入水；
（2）5%高猛酸钾与0.3%硫酸等比例混合滴片3 min，水洗；
（3）1%草酸漂白数秒，水洗；
（4）1%甲醇刚果红染色15 min；
（5）氢氧化钾酒精分化数秒，流水洗2 min×3次；
（6）苏木素浅染；
（7）脱水、透明、封固。
2.酸化 Bennhold's 刚果红染色法
（1~3）方法同酸化甲醇刚果红染色法；
（4）1%刚果红室温30 min，水洗；
（5）饱和碳酸锂15 s；
（6）80%乙醇分化，水洗15 min；
（7）苏木素复染；
（8）脱水、透明、封固。
3.酸化 Alkaland's 刚果红染色法
（1~3）方法同酸化甲醇刚果红染色法；
（4）苏木素 5min，分化，水洗；
（5）0.01%氢氧化钠 20 min；
（6）0.5%碱性刚果红（0.5 g 刚果红 0.2 g氯化钠 80%酒精100 ml使用前加1 ml 1%氢氧化钠）20 min；
（7）无水乙醇3缸每缸洗5次；
（8）脱水、透明、封固。
刚果红染色法[整理版]
![刚果红染色法[整理版]](https://img.taocdn.com/s3/m/3e79b13f657d27284b73f242336c1eb91b37335b.png)
3、刚果红染色法分离纤维素分解菌
这一步所需要的仪器有：无菌培养皿、涂布器、1mL移液管，装有9mL无菌水的20mL大试管，温箱等。
培养基的制备参照课本旁栏中的比例配制。
在500mL三角瓶中装入200mL培养基，在121℃下高压蒸汽灭菌20min。
倒平板操作：将灭菌后的固体培养基熔化，按无菌操作的要求，在无菌的培养皿中倒入15～20mL培养基，凝固后待用。
制备菌悬液：按照本专题课题1的稀释操作方法，将选择培养后的培养基进行等比稀释，稀释最大倍数至106。
涂布平板：将稀释度为104～106的菌悬液各取0.1mL，滴加在平板培养基上，用涂布器将菌液涂布均匀，在30℃倒置培养，至菌落长出。
每个稀释度下需涂布3个平板，并注意设置对照。
刚果红染色法：
常用的刚果红染色法有两种，一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，另一种是在倒平板时就加入刚果红。
方法一在长出茵落的培养基上，覆盖质量浓度为1 mg／mI。
的CR溶液，10～15 min后，倒去CR溶液，加入物质的量浓度为l mol／I。
的NaCI溶液，15 min后倒掉NaCl 溶液，此时，产生纤维素酶的茵落周围将会出现透明圈。
方法二配制质量浓度为10 mg／mI。
的CR溶液，灭菌后，按照每200 mI。
培养基加入1 mI。
的比例加入CR溶液，混匀后倒平板。
等培养基上长出茵落后，产生纤维素酶的菌落周围将会出现明显的透明圈。
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甲醇刚果红染色
主要用途：
主要用于淀粉样物质染色
检验原理：
淀粉样物质对刚果红有选择性的亲和力，因此容易着色。
刚果红是一种分子为长线状况的偶氮染料，它以胺基和淀粉样物质的羟基结合，平行的附着在淀粉样物质的纤维上而显红色。
主要成份：
甲醇刚果红染液
碱性酒精分化液
Mayer苏木素
样本要求：
组织片充分固定和脱蜡。
检验方法：
1.石蜡切片常规脱蜡至水
2.用甲醇刚果红染液染10-20分钟，
3.直接用碱性酒精化液分化数秒
4.水洗5分钟
5.mayer苏木素染细胞核2分钟，水洗5分钟。
6.常规脱水透明，中性树胶封固。
检验结果：
淀粉样物质、红细胞、弹力纤染染红色，细胞核呈蓝色，背景淡黄粉色。
注意事项：
1.淀粉与弹力纤维都着染刚果红颜色，二者在形态上有所不同，应注意区别。
2.用碱性酒精分化时要掌握恰当，若分化不足，胶原纤维也可着色，分化过度时淀粉样
蛋白也可脱色。
3.淀粉样物质未染色的蜡片，再存放一年后，将逐渐减弱与归于刚果红结合的能力。