总胆红素(tbil)钒酸盐氧化法
钒酸盐氧化法与干化学法测定总胆红素的方法学比较
/3卷
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血清总胆红素(TBIL)—生化检测项目
血清总胆红素（TBIL）
一、检测原理
在PH2.9左右时，钒酸盐可将胆红素氧化成胆绿素，在去污剂和钒酸盐的共同作用下，游离胆红素和结合胆红素均发生氧化，发生氧化后，胆红素在黄光波段的特异性吸光度会出现明显下降，在451或545nm波长处检测胆红素时，胆红素的吸光度降低程度与样品中的总胆红素浓度成正比，而求出总胆红素的浓度。
二、参考区间
血清：5—22umol/L
三、临床意义
1、血清TBIL增高主要见于：病毒性肝炎、中毒性肝炎、肝内或肝外胆道阻塞、溶血性疾病、新生儿生理性溶血等
2、测定血清TBIL和直接胆红素（DBIL）鉴别黄疸类型有较大意义：
①溶血性黄疸：TBIL增高，DBIL正常或稍升高。
②肝细胞性黄疸：TBIL和DBIL均升高。
③阻塞性黄疸：TBIL和DBIL均升高，但以DBIL升高为主。
总胆红素 (钒酸盐氧化法)试剂盒标准操作程序.
总胆红素(钒酸盐氧化法)试剂盒标准操作程序1.摘要本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人血清样本中总接胆红素的含量。
2.适用范围程序适用于AU5811自动生化分析仪检测血清样本中总接胆红素的含量。
3.职责使用AU5811自动生化分析仪进行测定总接胆红素浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行，室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的总接胆红素（钒酸盐氧化法）试剂盒采用的是钒酸盐氧化法。
5.原理pH3.0左右，在起加速剂作用的表面活性剂的条件下，能够增进未结合胆红素的溶解度，样本中的总胆红素被钒酸盐氧化成胆绿素。
与此同时，胆红素特有的黄色也随之消失。
所以通过测定胆红素氧化前后吸光度的变化，就可以计算出样本中的总胆红素的浓度。
−−→胆红素钒酸盐−胆绿素6.仪器AU5811自动生化分析仪7.试剂7.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2试剂瓶内主要成分：R1：枸橼酸盐缓冲液（pH2.6）、表面活性剂；R2：磷酸盐缓冲液、偏钒酸盐7.3试剂稳定性：试剂于2℃-8℃避光保存，有效期为一年8.标准品和质量控制8.1校准程序：使用科华公司的校准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品：罗氏公司提供的生化复合定值质控血清作为室内质控品。
每日在测定前做一次质控加试剂后做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
8.3质控数据管理：按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。
8.4质控判断规则：按《Westgard多规则质控方法测定标准操作程序》8.5室间质评：分别参加河北省室间质评，对回报的室间质评结果按《室间质量评价程序》进行处理。
钒酸盐氧化法和亚硝酸钠氧化法测定血清总胆红素的方法比较
钒酸盐氧化法和亚硝酸钠氧化法测定血清总胆红素的方法比较【摘要】目的：对钒酸盐氧化法和亚硝酸钠氧化法测定血清总胆红素进行方法比较。
方法：采用两种方法测定血清总胆红素值，进行比较，同时对两种方法的重复性试验、线性试验、干扰试验以及回收试验进行分析总结。
结果：两种方法有很好的相关性，钒酸盐氧化法和亚硝酸钠氧化法测定总胆红素（TB）批内变异系数分别为低值2.8%、2.0%，高值1.8%、1.3%；批间变异系数低值分别为2.8%、2.5%，高值分别为1.8%、1.4%；平均回收率分别为105%、102%；线性分别达到434.3 μmol/L、500.0 μmol/L；较轻微的溶血、脂浊、维生素C对两种方法测定TB无明显干扰。
结论：亚硝酸钠氧化法与钒酸盐氧化法相比具有较好的重复性和回收率，但对溶血、脂浊、维生素C的抗干扰能力不及钒酸盐氧化法。
【关键词】血清总胆红素；钒酸盐氧化法；亚硝酸钠氧化法1 材料与仪器1.1 试剂：钒酸盐氧化法TB（批号0106113）由四川迈克科技有限责任公司提供，亚硝酸钠氧化法TB（批号R113DGC）由上海蓝怡科技有限公司提供，胆红素标准TB浓度为157 μmol/L（批号R201HGC）由上海蓝怡公司提供。
脂肪乳注射液（C14～24）为华瑞制药有限公司生产，批号为051109001。
维生素C为西南药业有限公司生产，批号为060105002。
1.2 仪器：日立公司生产的H7060全自动生化仪，希森美康公司生产的SF-3000血细胞分析仪。
2 方法与结果2.1 两种方法测定参数：严格按照试剂说明书设定，采用两点终点法检测。
2.2 重复性实验：（1）批内重复性实验：取两份不同病人血清标本混合，分别用钒酸盐氧化法和亚硝酸钠氧化法测定TB，连续重复测定20次，计算变异系数（CV）。
（2）批间重复性实验：取两份不同病人血清标本混合，分装保存后分别用两种方法测定TB，1天测1次，连续测定20天，计算CV。
钒酸盐氧化法测定血清胆红素的分析评判
钒酸盐氧化法测定血清胆红素的分析评判【摘要】目的：对测定胆红素的钒酸盐氧化法进行分析评判。
方式：用钒酸盐氧化法测定胆红素，并对其的周密度、稳固性、灵敏度及干扰因素进行分析。
结果：钒酸盐氧化法测定胆红素的批内、批间CV<%，可信检测范围可达:钒酸盐总胆红素(TBil)684 μmol/L,直接胆红素(DBil)342 μmol/L，回收率达到%～%。
用1∶8肝素抗凝，测定直接胆红素明显降低，P<；1∶10肝素抗凝，测定直接胆红素，有轻度的负干扰。
维生素C≤ g/L时，无干扰，而溶血及脂质对钒酸盐氧化法干扰小。
结论：钒酸盐氧化法应用方便，重复性好，灵敏度高，抗干扰性强。
【关键词】胆红素；钒酸盐氧化法；肝素抗凝1993年日本学者Tokuda发表了血清胆红素的钒酸盐氧化测定法。
随着商品化钒酸盐胆红素氧化法试剂的推行，目前国内用户众多［1］。
本文对其周密度、稳固性、灵敏度及干扰因素进行评判和分析。
1 材料和方式试剂和仪器试剂钒酸盐总胆红素（TBil）试剂盒、直接胆红素（DBil）试剂盒由东瓯生物工程提供，临床用20%英脱利匹特脂肪乳由华瑞制药提供，维生素C由湖北中天爱白药业提供，12 500 U/2 ml肝素注射液由天津市生物化学制药厂提供。
血红蛋白液的制备：取1份约3 ml 肝素钠抗凝血，反复加入生理盐水洗涤，最后加入蒸馏水离心取上清液，用KX21N血细胞分析仪测Hb为100 g/L。
仪器日立7060全自动生化分析仪，Sysmex KX21N血细胞分析仪。
统计学处置计量资料数据以±s表示，采纳配对t查验。
P<具有统计学意义，利用SPSS 软件进行统计分析。
测定原理在pH 3周围，表面活性剂和钒酸作用于血清TBil，使之氧化成胆绿素，使胆红素所特有的黄色减少，由此测定钒酸作用前后450 nm吸光度的转变求出血清中TBil的浓度。
在pH 3周围，当试剂中缺少表面活性剂时，钒酸只与血清中结合胆红素作用，使之氧化成胆绿素，现在测定450 nm吸光度下降值求出血清中DBil 的浓度。
钒酸盐法检测总胆红素(TBIL)干扰1例
钒酸盐法检测总胆红素(TBIL)干扰1例胆红素测定应用最广泛的化学测定方法是根据Ehrlich在1883年建立的重氮反应方法，但其影响因素多，尤其溶血、脂血对其影响更大，且需在使用时临时配制试剂，比较麻烦[1]。
氧化酶法受溶血影响较大，而钒酸盐法弥补了这些缺点，它具有抗溶血、抗黄疸、抗脂血等优点，能够测定总胆红素（TBIL）和直接胆红素（DBIL）；同时该试剂具有良好的稳定性，试剂开瓶稳定性极佳，试剂可室温储藏。
自1993年日本学者Tokuda发表了血清胆红素的钒酸氧化测定方法后，国内众多的文献报道均认为该方法与传统方法（改良J-G法）具有良好的相关性，线性、特异性达到较理想的水平。
最近，笔者在工作中发现一起由于球蛋白异常增高而引起的TBIL（试剂为上海复星长征）检测结果异常，现报告分析如下，以供同行参考。
病例简介：患者女，68岁，以多发性骨髓瘤、肾结石并积水收入我院外骨科住院。
于第二天取空腹静脉血做肝功、肾功、血脂、血糖和电解质检测，最近几天无特殊用药。
静脉血经3000r/min离心后血清呈淡黄色，按操作规程要求在BECKMA COULTER UniCeL DXC 800全自动生化分析仪上进行检测，发现TBIL检测结果异常，结果是380.5umol,与血清颜色严重不符。
为排除检测结果可能存在干扰，采用重氮法在同一仪器重新复检，结果为21.5umol、说明TBIL在检测过程中出现了干扰，导致结果增高。
为观测本例标本在用钒酸盐法检测胆红素的过程中是否存在干扰，在36±1℃的水浴箱内模拟BECKMA COULTER UniCeL DXC 800全自动生化分析仪比色杯内反应过程：取洁净玻璃试管两只，分别加入TBIL试剂R1800uL预温一分钟，时间到加入待检血浆28uL混匀，孵育4分30秒，加入R2400uL混匀，反应液在读数时间内出现乳状混浊，且混浊随着时间延长颗粒变粗。
用其他血浆重复上述步骤，在读数时间内反应液未出现混浊，证明在检测过程中出现干扰，导致检测结果假性增高。
总胆红素钒酸盐氧化法试剂盒标准操作程序
总胆红素(钒酸盐氧化法)试剂盒标准操作程序1.摘要本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人血清样本中总接胆红素的含量。
2.适用范围程序适用于AU5811自动生化分析仪检测血清样本中总接胆红素的含量。
3.职责使用AU5811自动生化分析仪进行测定总接胆红素浓度的工作人员要严格按照本SOP程序进行，室负责人监督管理；本SOP的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4.检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的总接胆红素（钒酸盐氧化法）试剂盒采用的是钒酸盐氧化法。
5.原理pH3.0左右，在起加速剂作用的表面活性剂的条件下，能够增进未结合胆红素的溶解度，样本中的总胆红素被钒酸盐氧化成胆绿素。
与此同时，胆红素特有的黄色也随之消失。
所以通过测定胆红素氧化前后吸光度的变化，就可以计算出样本中的总胆红素的浓度。
6.仪器AU5811自动生化分析仪7.试剂1.1试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供1.2试剂瓶内主要成分：R1：枸橼酸盐缓冲液（pH2.6）、表面活性剂；R2：磷酸盐缓冲液、偏钒酸盐1.3试剂稳定性：试剂于2℃-8℃避光保存，有效期为一年2.标准品和质量控制2.1校准程序：使用科华公司的校准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品通过合适的数学模型绘制校准曲线。
2.2质控品：罗氏公司提供的生化复合定值质控血清作为室内质控品。
每日在测定前做一次质控加试剂后做一次质控。
该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。
2.3质控数据管理：按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。
2.4质控判断规则：按《Westgard多规则质控方法测定标准操作程序》2.5室间质评：分别参加河北省室间质评，对回报的室间质评结果按《室间质量评价程序》进行处理。
血清总胆红素重氮盐法和钒酸盐氧化法测定方法的比较
科学研究创新血清总胆红素重氮盐法和钒酸盐氧化法测定方法的比较郭晶晶孟超刘茜（江苏省医疗器械检验所江苏南京210019）摘要：胆红素是血红蛋白的代谢产物，主要涉及肝脏代谢，血清胆红素水平是肝胆疾病的重要诊断指标。
体内的胆红素包括直接胆红素、间接胆红素，二者之和称为总胆红素，临床对胆红素的生化检测有多种方法。
本文使用重氮盐法和钒酸盐法对血清总胆红素进行测定，比较两种方法检测结果的差异。
实验结果发现，两种方法的重复性和准确度均能满足临床要求，钒酸盐法的准确度高于重氮盐法。
关键词：胆红素代谢胆红素测定方法重氮盐法钒酸盐法方法比较中图分类号：R446.1文献标识码：A文章编号：1674-098X(2022)02(a)-0004-03肝脏是人体最大的实质性器官，具有复杂而重要的生理功能，参与代谢是肝脏最主要的功能。
肝脏参与三大营养物质的代谢过程：肝脏可以合成蛋白质，亦可以分解蛋白质。
人体有超过40%的蛋白质是在肝脏合成的，血浆白蛋白则完全由肝脏合成。
肝脏细胞含有蛋白质脱氨酶和转氨酶，从而分解蛋白质，氨进一步转变成尿素排泄。
人体摄入的糖类在肝脏转变为葡萄糖，当血糖浓度升高时，血糖可转变成葡萄糖聚合物以糖原的形式贮存于肝脏；当血糖浓度降低时，肝糖原可以迅速分解成葡萄糖，向人体供能，从而保持血糖的稳定。
当人体摄入的糖类物质较少时，肝脏可以将氨基酸、丙酮酸等非糖类物质转变成肝糖原，以满足机体对葡萄糖的消耗。
肝脏可以合成胆固醇，胆固醇转变成胆汁酸盐，胆汁酸盐使脂肪乳化成微粒，脂肪微粒可被身体吸收。
脂类物质可直接与肝脏中的蛋白质结合成脂蛋白。
肝脏参与维生素的代谢。
一些脂溶性维生素可长期大量储存于肝脏中，如维生素A、维生素D、维生素B12的储存量可满足几个月甚至是一两年的使用。
肝脏中可形成有多种凝血因子，如凝血因子I，同时，肝脏可形成抗凝血因子，如肝素。
由于肝脏的体积大，可以贮存的血量多，因此肝脏也是主要的贮血器官［1］。
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项目总胆红素(TBIL)方法钒酸盐氧化法
目录
1. 检测原理
2. 标本采集与处理
2.1 受检者的准备
2.2 静脉采血
2.3 抗凝剂
2.4 标本处理
3. 试剂
3.1 试剂
3.2 校准血清
3.3 试剂与校准血清的稳定性
4. 仪器
5. 操作
6. 计算
7. 操作性能
7.1 精密度
7.2 准确度
7.3 灵敏度
7.4 可报告范围
7.5 特异性
7.6 干扰
8. 参考值
9. 临床意义
附录A: 参数
1. 检测原理
钒酸盐测定钒酸盐作用前后吸光度差异，可求得样品中的直接胆红素的浓度。
胆红素————胆绿素
pH 3.0
2. 标本采集与处理
2.1 受检者的准备：
病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。
体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2 静脉采血：
除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。
2.3 抗凝剂：
血浆多主张用EDTANa2（1mg/mL）抗凝。
2.4 标本处理：
血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8℃保存。
3．试剂
3.1 试剂：
本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司TBIL试剂盒，为液体双试剂，各组分如下：
组成浓度
R1：
柠檬酸缓冲液100mM
反应促进剂
表面活性剂
R2：
磷酸缓冲液10mM
偏钒酸钠
3.2 校准血清：
使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。
校准频次：
空白定标：每日需做试剂空白定标。
全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。
3.3 试剂与校准血清的稳定性：
原包装试剂储存在2-8℃至标签所示失效日期。
试剂开瓶后，在仪器中至少可保存30天。
试剂储存在18-22℃稳定28天，试剂应避免污染。
试剂R1、R2颜色为无色，当试剂变色，按照试剂失效处理。
多项校准血清在2-8℃储存至标签所示失效日期，复溶后-20℃保存，可稳定一个月，只可冻融一次，避免反复冻融。
参见校准血清说明书。
4．仪器
KONELAB 30型号仪器。
性能：波长450nm，仪器测定吸光度的灵敏度应达到0.001ABS以上。
5．操作
样品为血清或肝素/EDTA抗凝血浆。
本法为终点法。
参数见后附，附录A。
试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。
6．计算
ΔA测定
C = ————×C0
ΔA标准
式中：c——测定总胆红素浓度，μmol/L；
ΔA测定——标本管吸光度；
ΔA标准——标准管吸光度；
C O——校准血清中总胆红素浓度，μmol/L；
7．操作性能
7.1 精密度：
批内CV< 0.67%，批间CV<2.97％。
7.2 准确度：
检测结果的相对不准确度≤±10%。
7.3 灵敏度：
总胆红素浓度为：90μmol/L时，显色吸光度A450nm为0.272～0.332。
7.4 可报告范围：
血清与试剂用量之比为1:25时，测定上限为680μmol /L。
7.5 特异性：
测量值在给定值的90%-110％范围内。
7.6 干扰：
内源性干扰物溶血、脂血、黄疸对测试结果无明显影响。
8．参考值
2.0～20.4μmol /L。
9．临床意义
胆红素是老化的血红细胞中血红蛋白的代谢产物,血液中总胆红素和直接胆红素的含量测定有利于肝病和黄疸病的诊断。
附录A: 参数。