钒酸盐氧化法测定血清胆红素的方法学评价_王滨2008

钒酸盐氧化法测定血清胆红素的方法学评价王滨(辽宁省普兰店市中心医院,辽宁普兰店116200)摘要目的为了解钒酸盐氧化法测定血清胆红素的可行性,进行方法学评价。

方法钒酸盐氧化法与重氮法测定胆红素的方法进行了比较,并对钒酸盐氧化法的重复性试验、线性试验、干扰试验、回收试验进行了评价。

结果总胆红素测定批内CV%为0.8%,批间C V%为1.3%,平均回收率为101.1%,线性达581.2L m o l/L,与重氮法比较,Y(本法)=0.935X(重氮法)+1.335,t=0.02,P>0.5,r=0.998,血红蛋白浓度和甘油三酯分别高达3.4g/L和7.3mm o l/L不干扰。

结论结果表明钒酸盐氧化法测定血清胆红素具有简单、快速、稳定、灵敏、准确、重复性好。

溶血、乳糜对测定表现为较微的干扰。

可作为常规法使用。

关键词胆红素;钒酸盐氧化法;重氮法[中图分类号]R446.12+9[文献标识码]A学科分类代码:320.1160文章编码:1001-8131(2008)01-0005-02Abstract Objective W e i n tr oduce Ox i d ati o n m ethod ofm easuri n g bilirubin i n serum by V anadic acid.M et h-ods W e use t h e vanadate ox i d ation reagent of b ilirub i n to deter m ina te serum tota l bilirubin si m u ltaneously,take a co m parison w ith the m ethod of i m proved D i a zo m et h ods and also take run-in-run tes,t li n ear tes,t i n terfere tes,t recover y test of vanadate ox i d ation.R esults The CVs o f deter m ina ti o n to ta l bilirubin w ere0.8%for i n tra-r un and 1.3%for m id-run.The average recovery rate w as101.1%for tota l b ilirub i n.L i n ear range of total bilirubin can attach to581.2L m o l/L.The resu lt o f the Vanadate ox i d ation(Y)has a good correlation w it h D iazo m ethod. Their.s regressi o n equation and r,,t p va l u e w ere,TB I L Y(V anadate)=0.935X(D iazo)+1.335,t=0.02,P> 0.5,r=0.998.H e m og lobin and chy lo m icrone m ia have rarely i n terfere.C oncl u sion The m ethod is si n g le,rapid, stable,sensiti v e and accura te.It has the ability to anti-interference o f he m og lob i n and chy lo m icrone m ia.It can be used i n the routi n e deter m i n ation o f b ilir ubin.K ey w ords B ilirubin;V anada te ox ida tion m ethod;D iazo m e t hod血清胆红素测定是临床医学中的一项重要常规检测项目,是黄疸性疾病诊断与鉴别诊断的重要指标,它的升高或降低对了解多种疾病的诊断及病程观察有一定意义。

适量的胆红素在心、脑、肝脏和血管等多种组织与器官内具有保护作用。

因此,准确地测定胆红素,是临床和药品检验工作者追求的目标。

目前测定胆红素的方法主要有两种:一种为传统偶氮法[1],此法操作简便,是现今大多实验室采用的常规方法,但特异性低,干扰因素多,尤其是总胆红素因使用不同加速剂而方法间结果有较大差异。

另一方法为酶法[2],准确、特异性高,但价格昂贵,目前难于普及。

因此,寻找简便准确的测定方法仍是检验界关心的问题。

我们对日本和光纯药工业株式会社推出的钒酸盐氧化法测定血清胆红素试剂盒的性能进行了实验评价,认为该双试剂法适宜于自动生化分析。

1材料与方法1.1反应原理:胆红素在酸性环境下(P H3.0)被钒酸氧化成胆绿素,使胆红素所特有的黄色减少,这样在450n m波长处测得钒酸加入前后的吸光度,由两吸光度的差值即可得出胆红素的含量(直接胆红素试剂缓冲液中含有阻止间接胆红素被钒酸氧化的成份)。

即将标本加入缓冲液中,等吸光度稳定后,读取吸光度A1,加入钒酸溶液,吸光度立即下降,经一段时间(约5分钟)趋于稳定,读取吸光度A2,将A2-A1与标准品的A2-A1比较,即可测出胆红素的含量[3]。

1.2材料1.2.1试剂:¹钒酸盐氧化法测定总胆红素试剂盒,日本和光纯药工业株式会社产品。

º重氮法测定血清总胆红素试[3]H oz um iT,Yosh i da K,Ogata Y,et a.l Non i nvas i ve assess m en t of sig-n ifican t left an teri or descend i ng coronary artery stenosis by coronary flo w vel ocit y reserve w i th transthoracic co l or Dopp ler echocardio-graphy.C i rcu l ation[J],1998,97:1557-1562.[4]陈孝良,陈士良,韩大笑,等.犬冠状动脉狭窄程度与血液动力学的相关分析[J].中国病理生理杂志,1991:622-625.[5]夏红梅,高云华,杨成业.彩色室壁运动技术评价冠心病阶段性室壁运动的临床研究[J].中国超声医学杂志,2000,16:420-422.[6]Ji n-W on J,M yung H J,Kyeong H Y,et a.l E chocard i ograph icEp i card ialFat Th i ckness and C oronary A rtery D i sease[J].C irc J 2007,71:536-539.[7]S c h i nk elA F,Bax J J,G eleij n s e M L,et a1.Non i nvasi ve eval uationof i schae m i c heart d is ease m yocard i al perf us i on i m ag i ng or stress echocard i ography[J].EuroH eart J.2003,24:789-800.收稿日期:2007-11-28剂盒,上海复星长征医学科学有限公司产品。

»总胆红素标准液,宝灵曼中国有限公司产品,总胆红素含量为82.4L mo l/ L。

1.2.2仪器:日立7060型全自动生化分析仪。

1.2.3实验参数:在日立7060型全自动生化分析仪上用钒酸盐氧化法测定血清总胆红素主要参数如下:¹双波长450/ 546n m,温度37e。

º终点法2,吸光度下降法。

»方法第一试剂200L m与标本10L,l孵育5分钟,读取一次吸光度,这时加入第二试剂50L l孵育5分钟,第二次读取吸光度,前后两次吸光度之差与标准吸光度之差比较,可得样品胆红素量。

光径:0.5cm。

重氮法参数按上海复星长征医学科学有限公司总胆红素测定试剂的说明书编制实验参数。

定标统一采用宝灵曼中国有限公司提供的总胆红素标准液。

2实验结果2.1重复性试验:一份质控血清用钒酸盐氧化法测定20次,批内结果(x)?s):T BIL92.75L m o l/L?0.76,C V%为0.8%。

用此血清,每天测定1次,连续测定20天,批间结果(x)?s):T BIL91.02L m ol/L?1.23,CV%为1.3%。

2.2线性试验:取病人胆红素高值标本(581.2L m o l/L),用生理盐水进行倍比稀释,并同原液一起用钒酸盐氧化法测定总胆红素含量,结果见表2-1。

将测得值与计算值的回归方程与r算出:Y(计)=0.808+0.999X(测)r=0.99998。

表2-1线性试验项目原液1:21:41:81:161:32总胆红素581.2290.9142.470.836.119.2注:以上血清胆红素单位为L mo l/L以上表明总胆红素在581.2L m o l/L以下线性良好,完全满足临床的需求。

2.3回收试验:取一份血清标本0.9m,l加入蒸馏水0.1m,l 作为基础样品,用钒酸盐氧化法测定其浓度为13.4L m o l/L。

再取原血清标本0.9m l加入高值胆红素血清(53.4L m ol/L) 0.1m,l混匀,作为分析样品,而后用钒酸盐氧化法测定其总胆红素浓度,所得结果为18.8L m o l/L,回收率为101.1%。

2.4比较试验:用钒酸盐氧化法测定血清总胆红素与重氮法比较,同时测定临床标本50份。

结果(x)?s):重氮法21. 8L m o l/L?25.1,钒酸盐氧化法21.9L m o l/L?26.8,Y(钒酸盐氧化法)=0.935X(重氮法)+1.335,t=0.02,P>0.5,r= 0.998。

2.5干扰试验2.5.1溶血干扰:将血红蛋白液(80g/L)用生理盐水作不同比例稀释,并分别取此血红蛋白稀释液0.1m l与血清标本0. 9m l混匀,使标本中血红蛋白浓度分别为2.7g/L、3.4g/L、4. 6g/L、5.7g/L、6.9g/L、8g/L。

基础管取血清标本0.9m l加入生理盐水0.1m l。

然后用钒酸盐氧化法对上述标本进行测定。

结果,见表2-2。

结果表明H b在3.4g/L以内时对总胆红素测定不产生干扰。

2.5.2乳糜干扰:将甘油三酯定值液(102mm ol/L)用生理盐水作不同比例稀释,并分别取此甘油三酯稀释液0.1m l与血清标本0.9m l混匀,使标本中甘油三酯浓度分别为2.9mmo l/L、4.4mmo l/L、5.8mm ol/L、7.3mm o l/L、8.7mmo l/ L、10.2mm o l/L。