植物生理生化指标测定(精)
植物生理学实验测试
植物生理学实验测试植物生理学是研究植物生长和发育等生理过程的科学学科，通过实验测试可以揭示植物对外界环境因素的响应和适应机制。
本文将介绍几种常见的植物生理学实验测试方法，包括植物生长实验、叶绿素测定实验和逆境胁迫实验等。
一、植物生长实验植物生长实验是研究植物对不同环境条件下的生长反应的一种常见方法。
可以通过改变光照、温度、水分等环境因素来观察植物生长的变化。
在实验中，选取相同种子并进行处理，如将一组种子暴露在高温环境下，另一组放置在低温环境中，然后记录植物的生长情况，并进行数据统计和分析。
通过这种实验方法可以了解植物对温度的适应性以及不同温度对植物生长的影响。
二、叶绿素测定实验叶绿素是植物中起着关键作用的色素，其含量可以反映植物光合作用的强弱。
叶绿素测定实验可以通过测量植物叶片中叶绿素的含量来评估光合作用的效率。
实验中，首先需要采集新鲜叶片样品，并将其研磨得到绿色叶汁，然后通过光度计等仪器测定叶绿素的吸光度值，并根据标准曲线计算叶绿素的含量。
通过叶绿素测定实验可以评估植物对不同环境因素（如光照强度、养分浓度）的响应和适应能力。
三、逆境胁迫实验逆境胁迫实验是模拟植物在环境恶劣条件下的生理反应，如盐胁迫、干旱胁迫、冷热胁迫等。
通过逆境胁迫实验，可以研究植物在逆境条件下的生理适应和耐受机制。
实验中，可以使用不同浓度的盐水浇灌植物或让植物在干旱条件下生长，然后观察植物的生长情况、生理指标的变化，并与正常生长的植物进行比较分析。
逆境胁迫实验可以揭示植物对逆境的敏感性和胁迫响应机制，为育种和改良耐逆植物品种提供理论依据。
总结：植物生理学实验测试是研究植物生理过程的重要手段，通过不同的实验方法可以揭示植物对环境因素的响应和适应机制。
植物生长实验、叶绿素测定实验和逆境胁迫实验是常见的植物生理学实验方法，分别用于研究植物生长、光合作用和逆境胁迫的情况。
通过这些实验测试的结果，可以进一步了解植物的适应性和耐受能力，为培育适应不同环境的优良植物品种提供理论基础。
最新植物生理指标测定方法
实验一植物叶绿素含量的测定（分光光度法）(张宪政，1992)一、原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常数。
当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。
各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。
这就是吸光度的加和性。
今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。
在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
高等植物中叶绿素有两种：叶绿素a 和b，两者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。
叶绿素a和叶绿素b的比值反映植物对光能利用效率的大小，比值高则大，则反之。
二、材料、仪器设备及试剂试剂：1）95%乙醇（或80%丙酮）三、实验步骤称取剪碎的新鲜样品0.2～0.3g，加乙醇10ml，提取直至无绿色为止。
把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内，以95%乙醇为空白，在波长663nm和645nm下测定吸光度。
四、实验结果按计算丙酮法（Arnon法）【可以用于丙酮乙醇混合法和80%丙酮提取法的计算】叶绿素a的含量（mg/g）=（12.71⨯OD663 – 2.59⨯OD645）V/1000*W叶绿素b的含量（mg/g）=(22.88OD645 – 4.67OD663) V/1000*W 叶绿素a、b的总含量（mg/g）=(8.04⨯OD663 +20.29⨯OD645) V/1000*W 按Inskeep公式叶绿素a的含量（mg/g）=（12.63⨯OD663 – 2.52⨯OD645）V/1000*W叶绿素b的含量（mg/g）=(20.47OD645 – 4.73OD663) V/1000*W叶绿素a、b的总含量（mg/g）=(7.90⨯OD663 + 17.95⨯OD645) V/1000*W注：1、叶绿素a和叶绿素b的比值反映植物对光能利用率【1】比如阳生植物叶绿素a和叶绿素b的比值较大【2】阴生植物叶绿素a和叶绿素b的比值较小2、丙酮-------熔点:-94℃；沸点:56.48℃；是一种无色透明液体，有特殊的辛辣气味易溶于水和甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、吡啶等有机溶剂.下一步实验方法比较【1】95%乙醇直接提取（√）【2】95%乙醇加热提取（冯瑞云，1985）【3】无水酒精和80%丙酮等体积混合提取实验二、不良环境对植物细胞膜的伤害（(张宪政，1992)）一、原理植物组织在受到各种不利的环境条件（如干旱、低温、高温、盐渍和大气污染）危害时，细胞膜的结构和功能首先受到伤害，细胞膜透性增大。
植物生理生化指标测定
植物生理生化指标测定植物生理生化指标测定是研究植物生长发育和适应环境的重要手段之一、通过测定植物的生理生化指标，可以了解植物的代谢活动、光合作用强度、水分状况、营养状况等，从而为植物生长调控、抗逆性研究提供依据。
下面将从光合作用测定、水分状况测定和营养状况测定三个方面对植物生理生化指标测定进行详细介绍。
光合作用是植物生长发育的重要过程之一，也是植物蓄积养分和能量的主要途径。
常用的光合作用测定指标有净光合速率、光饱和点、光补偿点和光抑制。
净光合速率是指单位时间内单位叶面积净光合产物的量，可以通过测定二氧化碳吸收量和氧气释放量来计算。
光饱和点是指植物的净光合速率达到最大值时的光强度，可以通过测定不同光强下的净光合速率来得出。
光补偿点是指净光合速率和呼吸速率相等的光强度，可以通过测定不同光强下的净光合速率和呼吸速率来确定。
光抑制是指过高或过低的光强度对植物光合作用的影响，可以通过测定光强对净光合速率的影响来评价。
水分状况是植物生理生化指标测定的重要方面之一，也是植物生长发育和适应环境的关键因素之一、常用的水分状况测定指标有相对含水量、蒸腾速率和水分利用效率。
相对含水量是指植物组织中的相对含水量与干重的比值，可以通过称量植物组织的湿重和干重来计算。
蒸腾速率是指单位时间内单位叶面积水分蒸腾的量，可以通过测定植物的蒸腾量和叶面积来计算。
水分利用效率是指植物单位干物质产量所需要的水分量，可以通过测定植物的干物质产量和水分消耗量来计算。
营养状况是植物生理生化指标测定的另一个重要方面，也是植物生长发育和代谢活动的基础。
常用的营养状况测定指标有叶绿素含量、叶绿素荧光参数和土壤养分含量。
叶绿素含量是评价植物叶绿素合成和叶绿素降解的指标之一，可以通过植物叶片中叶绿素的提取和测定来得出。
叶绿素荧光参数是评价光能利用效率和光能转化效率的重要指标之一，可以通过叶绿素荧光仪来测定。
土壤养分含量是评价土壤中不同营养元素含量的指标之一，可以通过土壤样品的提取和测定来得出。
植物生理指标测定方法
植物生理指标测定方法植物生理指标是指用来衡量植物生理状况的具体参数或指标，在植物生理研究中起到了非常重要的作用。
植物生理指标测定方法主要包括以下几个方面：光合作用指标、呼吸作用指标、蒸腾作用指标、叶绿素指标、产量指标和抗逆性指标等。
1.光合作用指标的测定方法：(1)净光合速率的测定方法：通过光合速率仪测定植物叶片在光照条件下的净光合速率；(2)光饱和点和CO2抗饱和点的测定方法：通过对光合速率与光照强度或CO2浓度的关系进行测定，确定光饱和点和CO2抗饱和点；(3)光合色素含量的测定方法：通过分光光度计或高效液相色谱法测定叶片中的叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素等光合色素的含量；(4)光合机构有效光能利用率的测定方法：通过光合色素荧光分析仪测定叶片的光能利用效率。
2.呼吸作用指标的测定方法：(1)总呼吸速率的测定方法：通过呼吸速率仪或气体分析仪测定植物组织在不同温度条件下的总呼吸速率；(2)细胞内呼吸速率的测定方法：通过氧和二氧化碳分压差法或氧电极法测定细胞内的呼吸速率。
3.蒸腾作用指标的测定方法：(1)蒸腾速率的测定方法：通过蒸腾速率仪测定植物叶片在不同光照和湿度条件下的蒸腾速率；(2)水分利用效率的测定方法：通过测量蒸腾速率和光合速率的比值来反映植物对水分的利用效率。
4.叶绿素指标的测定方法：(1)叶绿素含量的测定方法：通过叶绿素荧光分析仪或高效液相色谱法测定叶片中叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素的含量；(2)叶绿素荧光动力学特性的测定方法：通过荧光指数、叶绿素荧光参数和叶绿素荧光成像等技术来评估叶绿素在光抑制和光保护状态下的变化。
5.产量指标的测定方法：(1)单株产量的测定方法：通过对植株生物量、籽粒数或实际产量的测定来计算出单株产量；(2)单穗产量的测定方法：通过对穗长、穗粒数和粒重的测定来计算出单穗产量；(3)单粒产量的测定方法：通过对单穗粒数和粒重的测定来计算出单粒产量。
6.抗逆性指标的测定方法：(1)抗氧化酶活性的测定方法：通过测定植物组织中抗氧化酶活性，如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和抗坏血酸过氧化物酶等的活性来反映植物的抗氧化能力；(2)渗透调节物质含量的测定方法：通过测定植物组织中渗透调节物质（如脯氨酸、脯氨酸激酶等）的含量来评估植物的胁迫适应能力；(3)膜脂过氧化程度的测定方法：通过测定植物组织中膜脂过氧化程度的指标，如丙二醛和过氧化氢含量来评估植物膜的稳定性。
《植物生理生化》实验指导
植物生理生化》实验指导（适用专业：农学类相关专业）黑龙江八一农垦大学植物科技学院生理生化教研室生物化学实验部分:实验一、氨基酸的纸层析.................................................... 1实验二、蛋白质含量测定（设计性实验）...................................... 5实验三、酶的基本性质.................................................. 7实验四、维生素C含量的测定 .............................................. 12实验五、还原糖和总糖的测定............................................... 14实验六、淀粉酶活性的测定................................................ 17实验七、脂肪浸提一一索氏脂肪浸提法....................................... 20实验八、一种简单实用的提取植物DNA的方法 ............................... 22实验九、聚丙烯酰胺电泳法测定大麦、小麦种子纯度...................... 24实验十、淀粉酶的诱导、提取和活性测定（综合性实验） (26)植物生理学实验部分：实验一、植物组织水势的测定（小液流法）................................ 28实验二、植物伤流量的测定.............................................. 30实验三、根系活力的测定................................................... 31实验四、蒸腾强度的测定................................................... 35实验五、叶绿体色素的提取、分离、性质和定量测定（综合性实验）.............. 37实验六、光合强度的测定（改良半叶法）....................................... 39实验七、呼吸强度的测定................................................. 41实验八、植物抗逆性的鉴定（电导仪法）.................................. 43实验九、植物缺水程度的测定（脯氨酸法） (45)生物化学实验部分实验一氨基酸的纸层析一、目的：层析分析法已广泛用于氨基酸、核酸、激素、维生素、糖类的分离与分析。
植物的生理生化研究实验
准备实验材料，设置呼吸作用抑制剂处理组和对照组，观察并记录 植物的生长情况。
数据分析
对比处理组和对照组的植物生长数据，分析呼吸作用对植物生长的 影响及机制。
05
植物矿质营养与代谢实验
测定植物体内矿质元素含量
原子吸收光谱法
利用原子吸收光谱仪测定植物样品中矿质元素的含量，该方法具有灵敏度高、选 择性好、精密度高等优点。
应用价值
实验结果可为农业生产、生态环境保护等领域提供科学依据和技术支持。例如，通过了解植物对不同环境条件的 适应机制，可以指导农业生产中合理施肥、灌溉等措施的制定；同时，对于植物抗逆性、抗病性等方面的研究也 可为植物育种和病虫害防治提供新的思路和方法。
提出进一步研究的设想和建议
深入研究特定基因或蛋白质的功能
质壁分离观察
利用显微镜观察质壁分离后的细胞形 态，了解细胞壁的弹性和原生质体的 收缩情况。
分析水分在植物体内的运输途径
长距离运输
通过测定植物不同部位的水势和含水量，分析水分在植物体内的长距离运输途 径和机制。
短距离运输
利用显微技术观察植物细胞间的水分移动，了解水分在细胞间的短距离运输方 式和过程。
信号传导机制探讨
深入研究激素与受体结合后的信号传导过程，揭示激素调控植物生长发 育的分子机制。
03
激素互作分析
研究不同激素间的相互作用关系，探讨它们在植物生长发育中的协同或
拮抗作用。
07
实验结果分析与讨论
对实验数据进行统计分析
数据收集与整理
详细记录实验过程中的各项数据，包括植物的生长情况、生理生 化指标等，并进行分类整理。
分析环境因素对光合作用的影响
实验原理
研究光照强度、温度、CO2浓度等环境因素对光 合作用的影响。
植物生理生化指标的测定方法与意义解读
植物生理生化指标的测定方法与意义解读植物生理生化指标的测定方法与意义解读对于研究植物生长、适应环境以及疾病防治等领域至关重要。
本文将介绍几种常用的植物生理生化指标的测定方法，并解读其意义。
一、叶绿素含量的测定方法与意义解读叶绿素是植物光合作用的关键物质，反映了植物的光合能力和光合效率。
常用的测定叶绿素含量的方法有多种，如色素提取法、光度法和荧光法等。
其中，色素提取法是最常用的方法之一。
该方法通过乙醇提取叶片中的叶绿素，然后用紫外-可见光谱仪分析提取液的吸光度，从而计算出叶绿素含量。
叶绿素含量的测定对植物的研究具有重要意义。
首先，叶绿素含量可以直接反映植物的光合能力和光合效率。
一般来说，叶绿素含量越高，植物的光合作用效率越高，并且可以更好地利用阳光进行光合作用。
其次，叶绿素含量也可以作为植物受到生态环境和生理状态变化的指示器。
例如，在氮素缺乏的条件下，植物体内的叶绿素含量会下降，表明植物养分供应不足。
因此，测定叶绿素含量有助于了解植物在不同环境和条件下的光合适应能力和生长状态。
二、抗氧化酶活性的测定方法与意义解读抗氧化酶是植物体内起重要保护作用的一类酶，包括超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）和抗坏血酸过氧化物酶（APX）等。
这些酶能够清除植物体内产生的有害氧自由基，保护细胞免受氧化损伤。
常用的抗氧化酶活性测定方法有多种，如显色法、发光法和酶活测定法等。
抗氧化酶活性的测定在研究植物的环境适应能力和应对氧化胁迫方面具有重要意义。
首先，抗氧化酶活性可以反映植物受到氧化胁迫的程度。
当植物受到氧化胁迫时，抗氧化酶活性会显著增加，以应对有害氧自由基的累积。
其次，抗氧化酶活性还可以用来评估植物的环境适应能力。
例如，在干旱或高温等胁迫条件下，植物体内的抗氧化酶活性通常会增加，以维持细胞内的氧化-还原平衡。
三、渗透调节物质含量的测定方法与意义解读渗透调节物质是植物在干旱、盐碱等逆境环境下维持细胞渗透平衡和稳态的重要物质。
植物各项生理指标
植物各项生理指标植物的生理指标是指用来反映植物健康状态和生长发育过程的各种参数，可以通过测量和分析这些指标来评估植物的营养状况、生理功能和环境适应能力。
下面详细介绍几个常见的植物生理指标：1.光合作用：光合作用是植物对阳光能量的利用过程，可以通过测量光合速率来评估植物的自养能力。
光合速率受到光照强度、温度、二氧化碳浓度和水分等因素的影响，可以通过光合作用速率仪或测量叶片的气体交换来进行测定。
2.蒸腾作用：蒸腾作用是植物水分和气体交换的过程，通过叶片的气孔释放水分和二氧化碳，并吸收大气中的二氧化碳。
蒸腾速率可以通过测量蒸腾速率仪或水分损失来进行评估，反映植物的水分利用效率和胁迫适应能力。
3.叶绿素含量：叶绿素是植物中主要的光合色素，可以通过测量叶片的叶绿素含量来评估光能的吸收和光合作用的活性。
叶绿素含量可以通过叶绿素仪或酸碱提取法进行测定。
4.叶片氮含量：氮是植物生长所必需的关键元素，叶片的氮含量可以反映植物的养分状况和营养利用效率。
可以通过测量叶片的氮含量来评估植物的营养状态和生长潜力。
5.相对水分含量：相对水分含量是指植物叶片组织中的水分含量与完全脱水状态下的干重之比，可以反映植物体内的水分利用能力和胁迫适应能力。
可以通过测量叶片的相对水分含量来评估植物的水分状况和干旱耐受性。
6.温度响应曲线：温度响应曲线是通过测量植物在不同温度条件下的生理生化指标来研究植物对温度的响应，可以评估植物的热耐性、光合作用活性和生长发育过程。
7.水势：水势是指植物体内和周围环境之间的水分差异，可以通过测量植物的叶片水势来评估植物的水分利用能力和胁迫适应能力。
除了以上提到的指标，还有许多其他的植物生理指标，如叶片气孔导度、叶片蛋白含量、叶片潜热释放率等，这些指标可以更全面地评估植物的生理状态和环境适应能力。
综合应用这些生理指标可以帮助我们更好地了解植物的生长机理和生态功能，并为植物育种、农业生产和生态恢复等提供科学依据。
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小黑豆相关生理指标测定1. 表型变化:鲜重、株高、主根长和叶面积鲜重 :取处理好的植株,擦干根和叶表面水分,测量整株植物的重量,每个测 6个重复。
株高 :取处理好的植株,测量从根和茎分隔处到植株最高点的高度,记录,每个测6个重复。
主根长 :取处理好的植株,测量从根和茎分隔处到主根最远点长度,记录,每个测6个重复。
叶面积 :取处理好的植株,选择第二节段的叶片,测量叶面积,叶面积测量方法是测每个叶片最宽处长度作为叶的长, 测叶片最窄处长度作为叶的宽, 叶片长和宽的乘积即为叶表面积。
每个测 6个重复。
2. 总蛋白、可溶性糖、丙二醛(MDA 和 H2O2含量测定样品处理:取 0.5g 样品(叶片要去除叶脉、根要先用清水清洗干净 ,速在液氮中冻存,在遇冷的研钵中加液氮研磨,然后加入 1.5ml 的 Tris-HCl (pH7.4 抽提, 将抽提液转移到 2ml 的 EP 管中, 于 4℃, 12000rpm 离心 15min , 取上清, 保存在 -20℃下,上清液可用于总蛋白、丙二醛(MDA 、可溶性糖和 H2O2含量测定。
总蛋白测定(Bradford 法 :样品反应体系(800ul H2O+200ul Bradford+5ul样品 , 空白对照为(800ul H2O+200ul Bradford 。
测定后带入标准曲线 Y=32.549X-0.224(Y代表蛋白含量, X 代表 OD595 ,计算得出蛋白含量。
可溶性糖测定:样品反应体系(1ml 蒽酮 +180ul ddH2O+20ul样品提取液 ; 空白对照 (1ml 蒽酮 +180ul ddH2O , 测定 OD625后带入标准曲线 :Y=0.0345X+0.0204(Y代表 OD625, X 代表可溶性糖含量(ug蒽酮配方:称取 100mg 蒽酮溶于 100ml 稀硫酸(76ml 浓硫酸 +30mlH2O . 注意:浓硫酸加入水中时,一点一点递加,小心溅出受伤。
丙二醛 (MDA 测定:在酸性和高温条件下, 丙二醛可与硫代巴比妥 (TBA 反应生成红棕色的 3,5,5-三甲基恶唑 2,4-二酮,在 532nm 处有最大吸收波长,但该反应受可溶性糖的极大干扰,糖与 TBA 的反应产物在 532nm 处也有吸收,但其最大吸收波长在 450nm 处。
采用双组分分光光度法,可计算出 MDA 含量。
MDA 的计算公式为:MDA (umol/L =6.45OD532-0.56OD450.反应体系为:400ul 0.6%TBA+350ul H2O+50ul样品, 80℃水浴 10min 后, 测OD532和 OD450。
对照用 Tris-HCl.0.6%TBA配方:称取硫代巴比妥 0.6g ,溶于少量 1M NaOH中,待其完全溶解后用 10%TCA(称取 10gTCA 三氯乙酸,溶于 100ml 蒸馏水中,待其溶解即可定容至100ml 。
H2O2测定(二甲酚橙法 :样品反应体系(82ul 溶液 A+820ul溶液 B (A:B=1:10+150ul样品提取液 , 30℃水浴 30min ,测 OD560。
标准曲线为 :Y=0.01734X-0.0555(Y代表 OD560, X 代表 H2O2含量溶液 A (200ml :FeSO4.7H2O 0.1835g; (NH42SO4 0.0872g; H2SO4(浓硫酸18M4.58ml ,加水定容。
溶液 B (200ml :二甲酚橙 0.0234g ;山梨醇 6g ,加水定容到 200ml3. 可溶性蛋白、 SOD 、 POD 和 CAT 活性测定样品处理:取 0.5g 样品,速在液氮中冻存,在遇冷的研钵中加液氮研磨, 然后加入1.5ml 的 Tris-HCl (pH7.0 (内含有 20%甘油、 1mmol/L ASA(抗坏血酸、 1mmol/L DTT(二硫苏糖醇、 1mmol/L EDTA、 1mmol/L GSH(还原型谷胱甘肽、 5mmol/L MgCl2抽提,将抽提液转移到 2ml 的 EP 管中,于 4℃, 12000rpm 离心 15min , 取上清, 保存在 -20℃下, 上清液可用于可溶性蛋白、 SOD 、 POD 和 CAT 含量测定。
1mmol/L的 ASA 配制:先配制 10mmol/L的母液—称取 176.13mg 的 ASA , 溶于100ml 的 Tris-HCl (pH7.0中即可,然后稀释 10倍即可。
1mmol/L的 DTT 配制:先配制 10mmol/L的母液—称取 154.25mg 的 DDT 溶于100 ml的 Tris-HCl (pH7.0中即可,然后稀释 10倍即可。
1mmol/L的 EDTA 配制:用 30mmol/L的 EDTA 稀释 30倍即可。
5mmol/L的 MgCl2配制:称取 MgCl2.6H2O 的 101.5mg 溶于 100ml 的 Tris-HCl (pH7.0 ,即可。
样品提取液的配制(200ml :取 10mmol/L的 ASA 母液 20ml , 10mmol/L的母液DTT20ml , 取 30mmol/L的 EDTA 母液 7ml , 称取 203mg 的 MgCl2.6H2O , 最后再量取 20ml 的甘油,将最终体积定容到 200ml ,即可。
可溶性蛋白测定 (Bradford 法 :样品反应体系 (800ul H2O+200ul Bradford+5ul样品 ,空白对照为(800ul H2O+200ul Bradford 。
测定后带入标准曲线Y=32.549X-0.224(Y代表蛋白含量, X 代表 OD595 ,计算得出蛋白含量。
SOD 测定 :SOD 活性的测定是根据照光时,体系中产生氧自由基使硝基四唑蓝还原成蓝色甲 (在 560nm 处有一吸收峰 , 而超氧化物歧化酶作为氧自由基的清除剂可抑制此反应。
• 一个酶活单位定义为将硝基四唑蓝的还原抑制到对照一半 (50% 时所需的酶量。
14.5mmol/L的 dl-甲硫氨酸(分子量 149.21 (现用现配 :称取甲硫氨酸 216.4mg ,加少量 Tris-HCl(pH7.0溶解后,用 Tris-HCl(pH7.0定容到 100ml ,即可。
30mmol/L的 EDTA (292.25 (现用现配 :称取 EDTA 药品 876.75mg ,加少量Tris-HCl(pH7.0溶解后,用 Tris-HCl(pH7.0定容到 100ml ,即可。
2.25mmol/L的 NBT (硝基四唑蓝 (817.6 (现用现配 :称取 NBT 药品 183.96mg ,加少量 Tris-HCl(pH7.0溶解后,用 Tris-HCl(pH7.0定容到 100ml ,即可。
60umol/L的核黄素 (376.36(现用现配 :先称取 225.81mg 的核黄素,加少量50mM Tris-HCl(pH7.4溶解后, 用 50mM Tris-HCl(pH7.4定容到 10ml , 配制成60mmol/L的母液,然后取 100ul 到 100ml 的 Tris-HCl(pH7.4中,即可配制成 60umol/L 的核黄素。
测酶活的反应介质 :测定前在 54ml 的 14.5mmol/L的 dl-甲硫氨酸中分别加入EDTA 、 NBT 和核黄素各 2ml ,此为反应混合液。
酶活测定:在盛有 1.0ml 反应液的试管中,加入适量的酶液(50ul (以抑制达 50%作用酶浓度为最佳。
混匀后放在透明的试管架上,于光照培养箱中准确照光 10min 后,迅速测定 560nm 处的光密度。
以不加酶液照光液的为对照, 计算反应被抑制的百分比。
按下式计算超氧化物歧化酶的活性△ A ×N酶活力=───────────────AO×W ×T ×V ×50%式中:酶活力单位为每 min 每g鲜重酶活单位数;AO为对照试管溶液在 560nm 处的吸光度值 ;△ A 为对照试管溶液在 560nm 处的吸光值与加入酶液的反应液在 560nm 处的吸光值的差 ; N为酶液总体积; W 为提取酶液的样品鲜重 g ; T 为照光时间 (10min; V 为加入酶液的体积 (ml;POD 测定(愈创木酚法 :过氧化物酶广泛分布于植物的各个组织器官中。
在有过氧化氢存在下, 过氧化物酶能使愈创木酚氧化, 生成茶褐色物质, 可用分光光度计测量生成物的含量。
反应混合液配制:在 50ml 的 50mmol/L的 Tris-HCl(pH7.0缓冲液中加入 28ul 的愈创木酚,与磁力搅拌器上加热搅拌直至愈创木酚溶解,再加入 19ul 的 30%的 H2O2,混合均匀, 4℃保存。
酶活测定:取反应混合液 1.0ml , 加入 0.1ml 酶提取液, 2min 前后, 于 470nm 处测OD 值,每隔 1min 读数一次,以每分钟 OD 值的变化表示酶活大小。
(测量时再加入酶液CAT 测定(H2O2法反应缓冲液:20mM 的 H2O2,使用前在 25℃水浴中加热 30min 。
酶活测定:取反应液 1.4ml ,加入 100ul 酶液,每加完一管立即计时,并迅速在波长240nm 下测定 30S 、 1min30S 、 2min30S 时的吸光度,以 Tris-HCl 的作为空白。
以1min 内 A240减少 0.1的酶量为 1个酶活单位。
代入酶活力公式, 以△OD*V/0.1*v*t FW表示 CAT 活性,所有测定均重复三次。
△ OD 代表空白的吸光度 -样品管的吸光度 ; V 代表酶提取液的总体积, v 代表测量是加入的样品体积; t 代表反应时间 min , FW 代表样品鲜重。
0.1mol/LH2O2 配方:称取 1.1333g 的 30%的 H2O2, 加入 100ml 的 50mmol/L的Tris-HCl(pH7.4,即可。
也可以用 0.01%的 H2O2。
4. 叶绿素含量测定样品处理及测定 :取 0.1g 样品,速于液氮中冻存,在遇冷的研钵中加液氮研磨,然后加入 1.5ml 的 95%乙醇抽提, 将抽提液转移到 2ml 的 EP 管中, 于 4℃, 12000rpm 离心 15min , 取上清, 上清用于叶绿素含量测定。
测 OD665和 OD649。
空白对照为 95%乙醇。
Ca=13.95OD665-6.88OD649Cb=24.96OD649-7.32OD665总叶绿素 =Ca+Cb。