生理指标测定
各生理指标实验步骤
1丙二醛〔MDA〕含量的测定丙二醛在酸性和高温的条件下，可以和硫代巴比妥酸〔TBA〕反响生成红棕色的三甲川，在532nm处有最大光吸收。
植物组织中可溶性糖与TBA的显色反响产物在450nm和532nm处也有吸收。
测定时要排除可溶性糖的干扰，因此分别测定532nm和450nm处的吸光值，直接求得植物样品提取液中MDA的浓度；MDA含量采用硫代巴比妥酸法测定。
计算公式如下:C(µmol.L-1)=6.45OD532-0.56OD450进一步算出每克样品鲜重中丙二醛的含量〔µmolg-1FW〕。
试剂：10%三氯乙酸〔TCA〕：10g三氯乙酸定容于100ml0.6%硫代巴比妥酸：0.6g用10%三氯乙酸TCA定容于100ml试验步骤:〔1〕取植物材料用液氮迅速研磨成粉，取0.2g左右材料，放入5ml离心管内。
〔2〕参加5ml 10%的三氯乙酸，提取30min后，10000r/min离心15min。
〔3〕取上清液2ml，参加2ml 0.6%TBA，混匀，在100℃水浴中煮15min，冷却，冷却后再测量。
〔4〕分别测定532nm和450nm处的吸光值。
以2ml〔加TBA,水〕水代替提取液作为对照管。
2蛋白质含量测定----考马斯亮蓝G-250法实验原理：考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，当它与蛋白质结合后变为青色，前者最大光吸收在465nm，后者在595nm。
在一定蛋白质浓度范围内，蛋白质一色素结合物在595nm波长下的光吸收与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质的定量测定。
仪器和试剂：牛血清白蛋白500微克/毫升：10ｍｇ蒸馏水定溶至100ｍｌ考马斯亮蓝G-250：10ｍｇ溶于5ml 90％乙醇中，参加10ml85％的磷酸，用蒸馏水定溶于100ｍｌ操作步骤：1.标准曲线的制作：取4支试管，按下表配制不同浓度的牛血清白蛋白溶液各1毫升,参加5毫升考马斯亮蓝G-250试剂，摇匀，放置2分钟后用10毫米光径的比色杯在595nm 下比色。
植物生理指标测定
植物生理指标测定1.叶绿素含量测定叶绿素是植物进行光合作用的关键分子，它的含量可以反映植物的光合能力和叶片的健康状况。
叶绿素含量的测定可以通过光谱分析或色度法进行。
其中，光谱分析通过测量叶片吸收和反射的可见光波段来计算叶绿素含量；色度法则是通过提取叶片中的叶绿素，然后用乙醇或乙酸乙酯进行溶解，最后通过比色法来测定其含量。
2.蒸腾速率测定蒸腾是植物通过叶片气孔释放水分的过程，蒸腾速率可以反映植物水分的利用和调节能力。
蒸腾速率的测定方法有多种，常用的有质量法和热法。
质量法是通过称量植物在不同时间段内的重量变化来计算蒸腾速率；热法则是利用蒸腾过程中产生的热量来测定蒸腾速率。
3.气孔导度测定气孔是植物调节气体交换的关键结构，气孔导度可以反映植物对环境中各种因素的响应和适应能力。
气孔导度的测定可以通过气体交换技术进行，常用的方法有蒸腾流速法和扩散阻力法。
蒸腾流速法通过测定气孔腔中水蒸气和二氧化碳的浓度来计算气孔导度；扩散阻力法则是通过测定气孔腔中水蒸气的扩散阻力来计算气孔导度。
4.抗氧化酶活性测定氧化应激是植物面临的常见环境胁迫，而抗氧化酶是植物对抗氧化应激的主要防御系统。
抗氧化酶活性的测定可以通过比色法、荧光法和电化学法等进行。
比色法是基于酶催化反应产生的物质的颜色变化来测定酶活性；荧光法是通过检测酶催化反应产生的荧光信号来测定酶活性；电化学法则是通过测量酶催化反应中释放或吸收的电荷来测定酶活性。
这些测定方法可以用于研究植物对不同环境因子的响应和适应能力，也可以用于评估植物的生长和发育状态。
通过测定植物生理指标，研究人员可以更好地了解植物的生理机制和适应策略，为植物的种植和管理提供科学依据。
植物生理指标测定方法
植物生理指标测定方法植物生理指标是指用来衡量植物生理状况的具体参数或指标，在植物生理研究中起到了非常重要的作用。
植物生理指标测定方法主要包括以下几个方面：光合作用指标、呼吸作用指标、蒸腾作用指标、叶绿素指标、产量指标和抗逆性指标等。
1.光合作用指标的测定方法：(1)净光合速率的测定方法：通过光合速率仪测定植物叶片在光照条件下的净光合速率；(2)光饱和点和CO2抗饱和点的测定方法：通过对光合速率与光照强度或CO2浓度的关系进行测定，确定光饱和点和CO2抗饱和点；(3)光合色素含量的测定方法：通过分光光度计或高效液相色谱法测定叶片中的叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素等光合色素的含量；(4)光合机构有效光能利用率的测定方法：通过光合色素荧光分析仪测定叶片的光能利用效率。
2.呼吸作用指标的测定方法：(1)总呼吸速率的测定方法：通过呼吸速率仪或气体分析仪测定植物组织在不同温度条件下的总呼吸速率；(2)细胞内呼吸速率的测定方法：通过氧和二氧化碳分压差法或氧电极法测定细胞内的呼吸速率。
3.蒸腾作用指标的测定方法：(1)蒸腾速率的测定方法：通过蒸腾速率仪测定植物叶片在不同光照和湿度条件下的蒸腾速率；(2)水分利用效率的测定方法：通过测量蒸腾速率和光合速率的比值来反映植物对水分的利用效率。
4.叶绿素指标的测定方法：(1)叶绿素含量的测定方法：通过叶绿素荧光分析仪或高效液相色谱法测定叶片中叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素的含量；(2)叶绿素荧光动力学特性的测定方法：通过荧光指数、叶绿素荧光参数和叶绿素荧光成像等技术来评估叶绿素在光抑制和光保护状态下的变化。
5.产量指标的测定方法：(1)单株产量的测定方法：通过对植株生物量、籽粒数或实际产量的测定来计算出单株产量；(2)单穗产量的测定方法：通过对穗长、穗粒数和粒重的测定来计算出单穗产量；(3)单粒产量的测定方法：通过对单穗粒数和粒重的测定来计算出单粒产量。
6.抗逆性指标的测定方法：(1)抗氧化酶活性的测定方法：通过测定植物组织中抗氧化酶活性，如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和抗坏血酸过氧化物酶等的活性来反映植物的抗氧化能力；(2)渗透调节物质含量的测定方法：通过测定植物组织中渗透调节物质（如脯氨酸、脯氨酸激酶等）的含量来评估植物的胁迫适应能力；(3)膜脂过氧化程度的测定方法：通过测定植物组织中膜脂过氧化程度的指标，如丙二醛和过氧化氢含量来评估植物膜的稳定性。
生理指标的测定-SOD-MDA-CAT-POD-叶绿素
生理指标的测定测定不同时期野生大豆和栽培大豆的游离脯氨酸、丙二醛、过氧化物酶、叶绿素的含量。
测定方法如下：采样：分别在盐处理后，第2天、第7天和第12天，采叶片测量生理指标。
采摘的叶片标准为：成龄、无病虫害、无缺失、鲜绿的叶片。
丙二醛含量的测定（采用双波长硫代巴比妥酸法）材料提取：称取0.25g左右大豆叶片，加入0.5% TCA 3mL，研磨后所得匀浆3000rpm离心10min。
取上清液2mL，加0.5%TBA（称取TBA0.5g溶于0.5% TCA 溶液，并用其定容至100mL）2mL，混合后在100℃水浴上煮沸30min，冷却后再离心一次。
样品测定：分别测定上清液在450nm、532nm、600nm处的吸光值，并按公式算出MDA的浓度，再算出单位鲜重组织中MDA含量（μmol·g-1）。
结果计算：M=C×V/W×1000M为MDA含量（μmol·g-1）；C为MDA浓度（μmol·L-1）；V为提取液体积（mL）；W为样品重量（g）。
游离脯氨酸含量的测定（采用酸性茚三酮法）样品提取：称取鲜样0.5g左右，放入研钵中，加入80%的乙醇3mL研成匀浆，移入具塞试管中，并用80%的乙醇冲洗研钵，匀浆与洗液合并总量为10mL，加盖后沸水浴煮沸10min，再加活性炭粉末0.25g，振荡过滤（用80%乙醇冲洗滤纸与残渣3次），滤液于80～85℃水浴上蒸去乙醇，残渣用蒸馏水洗济并定容至100mL供测定之用。
样品测定：取具塞刻度试管2只，各加入上述过滤样液2mL、冰醋酸2mL、茚三酮试剂2mL，摇匀后加盖，于沸水浴中煮沸10～15min，冷却后于515nm下比色，记录消光值。
结果计算：A=C×V/WA为样品脯氨酸含量（μg·g-1）；C为从标准曲线上查得脯氨酸浓度（μg·ml-1）；V为样品稀释体积（ml）；W为样品重量（g）。
生理指标测定实验方案汇总
生理指标测定实验方案汇总预测指标：1.抗氧化酶系统.MDA2. 可溶蛋白.超氧阴离子自由基3.叶绿素.类胡萝卜素4.可溶性糖5.游离氨基酸6.过氧化氢7. 谷胱甘肽.ASA1.抗氧化酶系统.MDA A 酶活测定试剂： PBS缓冲液0.05M （pH7.8）：取0.663g NaH2PO4·2H2O和16.384gNa2HPO4·12H2O，加PVP10g，并加EDTA或者EDTA盐，使其浓度为2mM，加蒸馏水定容至1L。
用前冰箱或冰上预冷。
样品制备鲜样0.1-0.5g加入1 ml磷酸缓冲液（0.05M，pH7.8），稍许石英砂，研磨成匀浆；移入10 ml离心管中，再用4ml磷酸缓冲液分两次洗涤研钵并全部转入离心管中；10000×g4℃下离心20 min；上清夜贮于4℃冰箱中保存备测。
同时称取鲜样一份(0.1g左右)烘干称重。
S OD （λ=560nm）试剂配制：1LPBS 缓冲液中加入 Met1.93973g NBT[氮蓝四唑] 0.061323g EDTA-Na2 0.0037224g 核黄素0.00075272g 实验步骤：2.725mL反应液＋250uL蒸馏水＋25uL酶液【样品管】2.75mL反应液＋250uL蒸馏水（光照作为100%CK）【照光对照管】2.75mL反应液＋250uL蒸馏水（黑暗作为调零）【空白调零管】4000lx日光灯下反应20分钟，560nm比色。
反应温度25~35℃。
已知SOD活性单位以抑制NBT光化还原的50％为一个酶活性单位表示按下式计算SOD活性：SOD总活性＝（Ack－AE）*V/（0.5*Ack*w*Vt）（式中SOD总活性以鲜重酶单位每克表示，Ack为照光对照管的吸光度，AE为样品管的吸光度，V为样品液的总体积ml，Vt为测定时样品用量ml，w为样品鲜重g）※※※【空白调零管】可在光反应快结束前配制并用黑色纸或铝箔包裹以避光。
生理指标测定
•脯氨酸：酸式茚三酮显色法测定
•丙二醛：硫代巴比妥酸法测定
•可溶性糖：硫酸-蒽酮法
•可溶性蛋白：G-250考马斯亮蓝法测定
•α-淀粉酶活力：采用3.5－二硝基水杨酸测定法
•过氧化物酶：愈创木酚测定法
•过氧化氢酶：过氧化氢还原法
•超氧化物歧化酶：氮蓝四唑（NBT）法测定
脯氨酸是一种小分子的渗透物质，是水溶性最大的氨基酸，许多植物在受到逆境胁迫时都能积累高水平的脯氨酸[10]。
它不仅是生物大分子的保护剂和羟基的清除剂，还是植物从胁迫条件恢复正常过程中迅速、有效的氮源、碳源和还原剂。
生理指标测定.
实验一植物叶绿素含量的测定（分光光度法）(生理生化，1996,p103)一、原理根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度，即可用公式计算出提取液中各色素的含量。
根据朗伯—比尔定律，某有色溶液的吸光度A与其中溶质浓度C和液层厚度L成正比，即A＝αCL式中：α比例常数。
当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。
各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。
如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。
这就是吸光度的加和性。
今欲测定叶绿体色素混合提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度A，并根据叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。
在测定叶绿素a、b时为了排除类胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。
高等植物中叶绿素有两种：叶绿素a 和b，两者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。
叶绿素a和叶绿素b的比值反映植物对光能利用效率的大小，比值高则大，比值小则反之。
二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：新鲜（或烘干）的植物叶片。
（二）仪器设备：1）分光光度计；2）电子顶载天平（感量0.01g）；3）研钵；4）棕色容量瓶； 5）小漏斗；6）定量滤纸；7）吸水纸； 8）擦境纸；9）滴管。
（三）试剂：1）95%乙醇（或80%丙酮）；2）石英砂；3）碳酸钙粉。
三、实验步骤（1）取新鲜植物叶片（或其它绿色组织），擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉），混匀。
（2）称取剪碎的新鲜样品 0.2g ，分别放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及2～3ml 95%乙醇，研成均浆，再加乙醇10ml，继续研磨至组织变白。
静置3～5min。
（3）取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到25ml棕色容量瓶中，用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。
生理指标测定
试验材料为砀山酥梨（Pyrus bretschneideri），采自安徽省砀山县果园40 年生砀山酥梨。
选择树势健壮、管理水平一致的果树10 株，于2009 年梨花蕾期，分别在树冠的中层南部选择花蕾发育期及大小基本一致的短果枝挂牌，每短果枝保留两个果实。
于花后15 d 开始取样，果实发育前期(花后15～67 d)每四天取样一次，果实发育后期(花后67 d) 每7 d 取样一次，每次取大小均匀的果实40个，-70℃保存备用。
测定项目及方法1 石细胞含量测定参照聂敬全[ 18] 的方法进行。
称取离果皮2.0 mm至果核处的混合果肉5.0 g，-20℃冷冻24 h，在20000 r∙min -1下匀浆3 min，匀浆加入水静置，倒出上层悬浮物，重复3 次，所得石细胞烘干后称质量，重复3次。
(石细胞含量=测定的石细胞干质量／5×100%)。
2 木质素含量测定参照蔡永萍[45] 的方法进行。
果实去皮去核后，取离果皮2.0 mm 至果核处的果肉烘干，研磨成均匀粉末，过筛；甲醇抽提后烘干，取0.2 g 干粉样品，15mL 72%H2SO4 30℃抽提1h，加入115 mL 蒸馏水煮沸1h，保持总体积不变；将反应后的混合液过滤，用500 mL 热水冲洗，至冲洗液呈中性，得到的木质素烘干后称质量。
3 POD 的组织化学定位参照薛应龙[46] 的方法进行。
以花后15～63 d 的砀山酥梨为材料，用锋利刀片切取果肉组织，将其固定于FAA 固定液中，再徒手切片，徒手切成20～40 μm厚的薄片，浸在溶有0.1%钼酸铵的0.85%盐水溶液中5 min，之后在联苯胺溶液内2 min 至切片出现蓝色，最后在0.85%盐水溶液中洗1 min 。
利用联苯胺通过H2O2 经酶促作用产生蓝色络合物，对POD 进行组织化学定位，并拍照，其中对照是煮沸10 min 后的徒手切片。
4 POD 同工酶电泳参照刘青华 [47] 的方法进行。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
生理指标测定_16种1、冻害指数——3~5株观察形态【４种常绿水生鸢尾抗寒性的初步研究】张京，2012李刚，姜卫兵，翁忙玲，等．木兰科６种常绿树幼苗抗寒性的初步研究［Ｊ］．园艺学报，２００７，３４（３）：７８３－７８６．描述叶色变化：在最冷月( 2月中旬) , 所有供试树种均有不同程度的冻害表现, 乐东拟单性木兰受冻害最轻,只有部分植株的少量叶片有些许水渍状, 大部分植株完好无损, 冻害指数为041, 基本不受冻害;阔瓣含笑也长势良好, 有少部分叶片出现褐色水渍状, 冻害指数为14, 受轻度冻害; 金叶含笑受到了中度水平的冻害, 部分植株的叶片整个叶面呈现红褐色水渍状, 冻害指数为25; 红花木莲、醉香含笑和观光木受到了重度冻害, 大多数植株的部分叶片呈焦黄、褐色脱落, 有的整个植株呈萎蔫状,长势非常差, 冻害指数分别为3.2、3.9、4.3.2、相对含水量叶片相对含水量采用饱和称重法［21］测定。
选取各处理部位一致、成熟完好的叶片迅速称其鲜重，再用蒸馏水浸泡8~24 h，使组织吸水达到饱和状态，取出后吸去表面水后立即称其饱和重，然后在105 ℃下杀青30min，在80 ℃下烘干至恒重（1h~24h），放在干燥器中冷却，称其烘干重。
根据公式计算:LRWC( %) = [ (鲜重－干重) /(饱和重－干重) ] × 100%3、光合参数（光合仪测定）光合速率、CO2浓度、光合有效辐射、叶绿素或用95%乙醇浸泡法，浸泡4~5d，测定叶绿素。
《植物生理生化实验原理和技术》4、膜质过氧化：相对电导率（略）、MDAMDA（丙二醛）的测定试剂：三氯乙酸10% （TCA 溶液）：称取100g溶于1L 蒸馏水中；0.6％硫代巴比妥酸溶液（6%TBA）：1.8g溶于300ml TCA 溶液中（加热溶解）称取植物叶片0.3克, 先加入2ml TCA和少量石英砂研磨至匀浆，再加入4ml 10%三氯乙酸(TCA)进一步研磨（总体积为6ml），然后以4000g离心10min, 取上清液待测。
吸取离心的上清液2ml(对照加2ml蒸馏水)，加入2ml 0.6% TBA，混匀物于沸水浴上反应15分钟，迅速冷却后再离心(在冰箱中冷却较快)。
取上清液测定在532，600和450nm波长下比色。
公式CMDA(nmol L-1)＝[(A532－A600)-0.0571×(A450-A600)]/0.155计算MDA量（排除多糖干扰），用每克干（鲜）重中MDA的量表示MDA的含量，单位μmol g-1干（鲜）重或nmol g-1干（鲜）重。
1、含量计算双组分光光度计法：已知蔗糖与TBA反应产物在450nm和532nm波长下的比吸系数分别为85.40,7.40；MDA与 TBA显色反应产物在450nm波长下无吸收，其吸收系数为0，532nm下比吸收系数为155，根据双组分光光度计法建立方程组，计算公式如下：C1（mmol/L）=11.71 D450C2=[6.45(D532—D600) — 0.56 D450]X提取液总体积/测定时用的提取液体积*样品鲜重C1:可溶性糖的浓度, C2为MDA的浓度, D450D532D600分别代表450,532,600nm下的消光度值.参：Brege J G.Microsomal lipid peroxiodation. Methods in Ezymmology.1978,52:302-306 J.G. Buege and S.D. Aust, Microsomal lipid peroxidation. Methods Enzymol.52(1978), pp. 302–306.注: 沸水浴时,可使用小试管,然后上部用保鲜膜包扎.(如橡皮筋)附4.1 MDA、可溶糖含量—硫代巴比妥酸加热显色法【原理】植物遭遇逆境胁迫或衰老过程中，由于自由基、活性氧的积累引起膜脂过氧化，产生脂质自由基，进一步诱发膜脂连续过氧化并导致蛋白质交联变性，而引起细胞损伤或死亡。
MDA 是膜脂过氧化的最终产物，通过其含量的测定可了解膜脂氧化伤害的程度，比较不同植物抗逆性的差异。
在酸性和高温条件下，MDA可与硫代巴比妥酸（TBA）反应，生成红棕色的产物三甲川（3，5，5-三甲基恶唑2，4-二酮）。
该产物在532nm处有最大吸收峰，测定反应产物在532nm处的光密度值，可计算出MDA含量。
但植物组织中的可溶性糖亦与TBA产生颜色反应，其产物对532nm 光的吸收干扰测定。
采用双组分光光度法及其计算式，可排除干扰，计算出MDA的含量。
【器材】分光光度计离心机水浴锅研钵剪刀试管【试剂】（1）10%（W/V ）三氯乙酸（TCA ）：称取10gTCA 定溶于100ml 水中（2）0.6%硫代巴比妥酸（TBA ，以10%的TCA 配制）：取0.6035g 溶于100ml 上述TCA 中（适当加热，否则难溶） 【方法】（1）取0.1g （取0.25g 或0.3g ）叶片，加10%TCA10ml （8ml ）研磨，研磨后在4000r/min 下离心10min （15min ），上清液为样品提取液（2）取上清液2ml （对照加2ml 蒸馏水），加0.6%的TBA2ml ，混合后在100℃水浴上煮沸10min （15min ）（以小试管冒小气泡开始计时），迅速冷却后如有沉淀再离心一次。
分别测定上清液在450nm ，532nm ，600nm 处的吸光值。
【计算】MDA 浓度（umol/L ）=6.45（A 532-A 600）-0.56A 450 MDA 含量（umol/gFW ）=MDA 浓度*VT*10-3/FW 可溶糖浓度（umol/L ）=11.71A 450可溶糖含量（umol/gFW ）=可溶糖浓度*VT*10-3/FW VT ——提取液总体积（ml ） FW ——样品鲜重（g ）【注意】低浓度的铁离子能够显著增加TBA 与蔗糖或MDA 显色反应物在532、450nm 处的吸光值，所以在蔗糖、MDA 、TBA 显色反应中需一定量的铁离子，通常每克干重植物组织中铁离子的含量为100-300ug ，根据植物样品量和提取液的体积，加入Fe 3+的终浓度为0.5umol/L附4.2 过氧化氢（MDA 和过氧化氢用同一提取液）参考Matsubara 等（1983），Partterson 等（1984），林植芳（1988）和刘俊等（2000）的方法，利用H 2O 2与和钛离子形成有色的[TiO （H 2O 2）]2+配合离子（特异吸收峰在410 nm ）的原理对H 2O 2含量进行测定。
【药品】10%三氯乙酸：称10g 三氯乙酸定容至100ml20%TiCl 4浓HCl 液：吸取2ml TiCl 4，用10ml 浓HCl 溶解（注意：两者皆为强挥发性强腐蚀性液体，务必轻拿轻放，通风橱中进行，注意避光保存） 1mol/L 硫酸：吸取5.4ml 浓硫酸，稀释至100ml1mmol/L 过氧化氢1000ml ：取0.15ml30%过氧化氢，定容至1000ml 【方法】准确称取0.5 g （最佳）不同人工老化大豆的新鲜胚轴于6 mL 10％三氯乙酸中研磨成匀浆，定容至10 mL （就用8ml 研磨）。
提取液在10000×g 室温下离心10 min 。
取上清液1 mL 加入0.1 mL 20％TiCl 4的浓盐酸液，再加入0.2 mL 浓氨水。
4500×g ，室温下离心10 min 。
沉淀用3mL 1 mol L －1硫酸充分溶解后，置紫外可见分光光度计上测定410 nm 处吸光光度值。
用标准过氧化氢溶液（0-1mmol L －1）用以上方法做标准曲线。
根据样品吸光光度值对应标准曲线求出过氧化氢量，并计算过氧化氢含量，单位μmol min －1 g －1干重( or 鲜重)。
5、游离脯氨酸【原理】当用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性印三酮加热处理，溶液即成红色，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中。
色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低，在520nm波长下比色测定吸光度，从标准曲线上查出脯氨酸的含量。
【器材】【药品】（1）80%乙醇（8ml乙醇加2ml水），人造沸石，活性炭（2）6mol/L磷酸：取纯的磷酸40.92ml，用100ml容量瓶定容。
（3）茚三酮试剂：将1.25g茚三酮（重结晶）于30ml冰醋酸和20ml 6mol/L的磷酸中加热（70℃）溶解。
4℃保存，试剂两天内稳定，但最好现配现用。
茚三酮的用量与脯氨酸的含量有关，一般当脯氨酸含量在10μg/ml以下时，显色液中茚三酮的浓度要达到10mg/ml,才能保证脯氨酸充分显色。
（4）脯氨酸标准液：准确称取10mgPRO溶于少量80%乙醇中（也可直接用蒸馏水溶），定容到100ml，其浓度为100μg/ml。
（再取此液10ml，用蒸馏水稀释至100ml，即成10μg/ml的脯氨酸标液——一般不做此步）【方法】（制样和标准曲线一起做）（1）绘制标准曲线吸取脯氨酸母液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5，4.0ml分别放入8个50ml容量瓶中，分别加入蒸馏水定容，配成1ug/ml，2，3，4，5，6，7，8μg/ml。
分别吸取上述标准溶液2ml,加冰醋酸2ml，茚三酮试剂2ml入试管中，混匀后加玻璃球塞，在沸水浴中加热30min。
冷却后准确加入4Ml甲苯，剧烈震荡30S，静置10min，待红色物质全部转入甲苯溶液时，用注射器轻轻吸取各管上层脯氨酸甲苯溶液至比色杯中，用分光光度计在520nm下进行比色测定，以甲苯溶液为空白对照，以脯氨酸浓度（或含量）为横坐标，以吸光度为纵坐标作标准曲线。
（2）样品液提取取叶片0.1g（0.3g为宜）加5ml3%磺基水杨酸，加盖（有塞试管），在沸水浴中提取10min，提取过程中要经常摇动，冷却后，以3000r/min离心10min，上清液待测。
取2ml待测液于另一干净的带玻塞试管，加入2ml冰乙酸，2ml酸性茚三酮，在沸水浴中加热30min，溶液即成红色。
冷却后加入4ml甲苯，摇荡30S，静置片刻，用吸管轻轻吸取上层红色脯氨酸甲苯溶液于比色杯中，以甲苯为空白对照，比色【计算】脯氨酸含量=浓度*提取液体积*2.5/（样品干重*106）【注意】配制的茚三酮溶液仅在24h内稳定，因此最好现配现用。
茚三酮的用量与脯氨酸的含量相关。
一般当脯氨酸的质量浓度在10ug/ml时，显色液中茚三酮的质量浓度要达到10mg/ml时才能保证充分显色称量可以大些，且称量基本一致6、POD、CAT、SOD、可溶性蛋白POD,CAT, SOD，可溶性蛋白含量用同一提取液。