植生耐盐生理指标测定(免费)(精)

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植物生理生化指标测定

植物生理生化指标测定

植物生理生化指标测定植物生理生化指标测定是研究植物生长发育和适应环境的重要手段之一、通过测定植物的生理生化指标,可以了解植物的代谢活动、光合作用强度、水分状况、营养状况等,从而为植物生长调控、抗逆性研究提供依据。

下面将从光合作用测定、水分状况测定和营养状况测定三个方面对植物生理生化指标测定进行详细介绍。

光合作用是植物生长发育的重要过程之一,也是植物蓄积养分和能量的主要途径。

常用的光合作用测定指标有净光合速率、光饱和点、光补偿点和光抑制。

净光合速率是指单位时间内单位叶面积净光合产物的量,可以通过测定二氧化碳吸收量和氧气释放量来计算。

光饱和点是指植物的净光合速率达到最大值时的光强度,可以通过测定不同光强下的净光合速率来得出。

光补偿点是指净光合速率和呼吸速率相等的光强度,可以通过测定不同光强下的净光合速率和呼吸速率来确定。

光抑制是指过高或过低的光强度对植物光合作用的影响,可以通过测定光强对净光合速率的影响来评价。

水分状况是植物生理生化指标测定的重要方面之一,也是植物生长发育和适应环境的关键因素之一、常用的水分状况测定指标有相对含水量、蒸腾速率和水分利用效率。

相对含水量是指植物组织中的相对含水量与干重的比值,可以通过称量植物组织的湿重和干重来计算。

蒸腾速率是指单位时间内单位叶面积水分蒸腾的量,可以通过测定植物的蒸腾量和叶面积来计算。

水分利用效率是指植物单位干物质产量所需要的水分量,可以通过测定植物的干物质产量和水分消耗量来计算。

营养状况是植物生理生化指标测定的另一个重要方面,也是植物生长发育和代谢活动的基础。

常用的营养状况测定指标有叶绿素含量、叶绿素荧光参数和土壤养分含量。

叶绿素含量是评价植物叶绿素合成和叶绿素降解的指标之一,可以通过植物叶片中叶绿素的提取和测定来得出。

叶绿素荧光参数是评价光能利用效率和光能转化效率的重要指标之一,可以通过叶绿素荧光仪来测定。

土壤养分含量是评价土壤中不同营养元素含量的指标之一,可以通过土壤样品的提取和测定来得出。

植物生理指标测定方法

植物生理指标测定方法

植物生理指标测定方法植物生理指标是指用来衡量植物生理状况的具体参数或指标,在植物生理研究中起到了非常重要的作用。

植物生理指标测定方法主要包括以下几个方面:光合作用指标、呼吸作用指标、蒸腾作用指标、叶绿素指标、产量指标和抗逆性指标等。

1.光合作用指标的测定方法:(1)净光合速率的测定方法:通过光合速率仪测定植物叶片在光照条件下的净光合速率;(2)光饱和点和CO2抗饱和点的测定方法:通过对光合速率与光照强度或CO2浓度的关系进行测定,确定光饱和点和CO2抗饱和点;(3)光合色素含量的测定方法:通过分光光度计或高效液相色谱法测定叶片中的叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素等光合色素的含量;(4)光合机构有效光能利用率的测定方法:通过光合色素荧光分析仪测定叶片的光能利用效率。

2.呼吸作用指标的测定方法:(1)总呼吸速率的测定方法:通过呼吸速率仪或气体分析仪测定植物组织在不同温度条件下的总呼吸速率;(2)细胞内呼吸速率的测定方法:通过氧和二氧化碳分压差法或氧电极法测定细胞内的呼吸速率。

3.蒸腾作用指标的测定方法:(1)蒸腾速率的测定方法:通过蒸腾速率仪测定植物叶片在不同光照和湿度条件下的蒸腾速率;(2)水分利用效率的测定方法:通过测量蒸腾速率和光合速率的比值来反映植物对水分的利用效率。

4.叶绿素指标的测定方法:(1)叶绿素含量的测定方法:通过叶绿素荧光分析仪或高效液相色谱法测定叶片中叶绿素a、叶绿素b和类胡萝卜素的含量;(2)叶绿素荧光动力学特性的测定方法:通过荧光指数、叶绿素荧光参数和叶绿素荧光成像等技术来评估叶绿素在光抑制和光保护状态下的变化。

5.产量指标的测定方法:(1)单株产量的测定方法:通过对植株生物量、籽粒数或实际产量的测定来计算出单株产量;(2)单穗产量的测定方法:通过对穗长、穗粒数和粒重的测定来计算出单穗产量;(3)单粒产量的测定方法:通过对单穗粒数和粒重的测定来计算出单粒产量。

6.抗逆性指标的测定方法:(1)抗氧化酶活性的测定方法:通过测定植物组织中抗氧化酶活性,如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和抗坏血酸过氧化物酶等的活性来反映植物的抗氧化能力;(2)渗透调节物质含量的测定方法:通过测定植物组织中渗透调节物质(如脯氨酸、脯氨酸激酶等)的含量来评估植物的胁迫适应能力;(3)膜脂过氧化程度的测定方法:通过测定植物组织中膜脂过氧化程度的指标,如丙二醛和过氧化氢含量来评估植物膜的稳定性。

植物耐盐生理生化指标及耐盐植物筛选综述

植物耐盐生理生化指标及耐盐植物筛选综述

文献标 志 码 : A
文章编 号 :0 17 6 (0 0 0 —0 90 1 0 —4 1 2 1 )30 5 —7
Ph so o ia n o h mia nd c so l l r n e a a ni g y i l g c la d Bi c e c lI ie fSa tTo e a c nd Sc n n
是 叶 肉细 胞 的 光 合 活 性 降低 所 引 起 。也 有 报 道 指
出, 总 叶面积 的下 降是 杨树 生长下 降 的 主 要 原 因 , 影 响 核桃 和 绒 毛 而
白蜡 生长 的主要 原 因是 单 株 总 叶 面 积 的下 降 , 叶 单
s s e i he a s s m e f s l— o e a t p a s wa ic s d y t m n t s e s nto a tt l r n l nt s d s us e . Ke r s: a tt l r nc ph i l g c la oc m ia nd x; c nn ng y wo d s l o e a e; yso o ia nd bi he c 1i e s a i
西 北 林 学 院 学 报 2 1 ,2 ( ) 9 6 0 0 5 3 :5 ~ 5
J u n 1 fNo t wetF r sr nv riy o r a rh s o e tyU iest o
植 物 耐盐 生 理 生化 指标 及 耐盐 植 物 筛选 综 述
杨 升 , 华 新 , 张 张 丽
进 行 耐盐植 物 筛选 的 3种方 法 : 直接 法 、 生理 生化 指标 法和 混合 法 , 并在 此 基 础 上 阐述 了建 立 耐 盐
性 评 价 体 系统 一 标 准 的 意 义 。 关 键 词 : 盐 性 ; 理 生化 指 标 ; 选 耐 生 筛

盐胁迫影响耐盐柳新品系生理指标试验

盐胁迫影响耐盐柳新品系生理指标试验

盐胁迫影响耐盐柳新品系生理指标试验土壤盐渍化是一个世界性的重大资源问题和生态问题。

我国盐渍化土壤面积达2千万hm2,约占总耕地面积的10%[1],其中滨海盐碱地总面积为500万hm2。

滨海盐碱地立地条件差,植被景观单调,生物多样性低,树种资源匮乏[2],植物的耐盐机理和耐盐能力研究,可筛选和培育耐盐植物,为滨海盐碱地区造林绿化、沿海防护林工程、生态修复及开发奠定材料和技术基础。

柳树,杨柳科柳属,乔木,生长优势明显,具有适应性强、易繁殖、造林成活率高、生长迅速、抗风,耐盐能力好等特点,是我国沿海滩涂主要的造林树种之一。

无论在营造工业用材林,还是在防风固沙,水土保持,盐碱地改造等方面都有广阔的应用前景。

本研究项目所用的3种柳树是项目组2009年在如东东凌滩涂0.4%及0.4%以上土壤上通过实生选育出的耐盐柳树新品系。

参照赵可夫[3]的划分方法,结合植物的生长发育状况,将植物的耐盐程度分为4级:能够在土壤含盐量超过0.6%范围内正常生长的植物为特耐盐植物;在含盐量为0.6%~0.4%范围内正常生长的植物为强耐盐植物;在含盐量为0.4%~0.2%范围内正常生长的植物为中度耐盐植物;在含盐量为0.2%~0.1%范围内正常生长的植物为轻度耐盐植物。

可见这3种柳树为强耐盐植物。

本试验通过对3种耐盐柳树不同浓度盐胁迫下生理指标的测定,并逐一进行比较和评价,为建立柳树耐盐鉴定体系建立提供了实验依据和指导。

1 材料与方法1.1 试验设计与处理供试的树种为项目组选育的L0903,L0906,L0911耐盐柳树新品系,均为一年生扦插苗,本试验在江苏沿江地区农科所避雨大棚内进行。

2011年5月将各品系进行盆栽,盆口径25cm,所用的基质按园土:基质:草炭按照1:2:1(体积比)混合,用多菌灵进行消毒处理。

2011年8月,选择长势相对一致的种苗进行试验。

试验采用完全随机组设计,共设3个盐分梯度(NaCl):0,0.2%,0.4%。

植株生理生长指标的测定

植株生理生长指标的测定

根系活力的测定(TTC法)植株根系是活跃的吸收器官和合成器官,根的生长情况和活力水平直接影响地上部分的生长、营养状况及产量水平。

一、原理氯化三苯基四氮唑(TTC)是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素,溶于水中成为无色溶液,但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲腙,生成的三苯甲腙比较稳定,不会被空气中的氧自动氧化,所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体,植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原,可因加入琥珀酸,延胡索酸,苹果酸得到增强,而被丙二酸、碘乙酸所抑制。

所以TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。

二、材料、设备仪器及试剂(一)材料水培或砂培小麦、玉米等植物根系。

(二)仪器设备1. 分光光度计;2. 分析天平(感量0.1mg);3. 电子顶载天平(感量0.1g);4. 温箱;5. 研钵;6. 三角瓶50ml;7. 漏斗;8. 量筒100ml;9. 吸量管10ml;10. 刻度试管10ml;11. 试管架;12. 容量瓶10ml;13. 药勺;14. 石英砂适量;15. 烧杯10ml、1000ml。

(三)试剂1、乙酸乙酯(分析纯)。

2、次硫酸钠(Na2S2O4),分析纯,粉末。

3TTC 1.0g,溶于少量水中。

定容到100ml。

4TTC 0.4g,溶于少量水中。

定容到100ml。

56 1.84的浓硫酸55ml,边搅拌边加入盛有500ml蒸馏水的烧杯中,冷却后稀释至1000ml。

7 4.72g,溶于水中,定容至100ml即成。

三、实验步骤1、定性测定(1)配制反应液:把1%TTC溶液、0.4mol/L的琥珀酸和磷酸缓冲液按1:5:4比例混合。

(2)把根仔细洗净,把地上部分从茎基切除。

将根放入三角瓶中,倒入反应液,以浸没根为度,置37℃左右暗处放1~3h,以观察着色情况,新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色,表明该处有脱氢酶存在。

2、定量测定(1)TTC标准曲线的制作取0.4%TTC溶液0.2ml放入10ml量瓶中,加少许Na2S2O4粉摇匀后立即产生红色的甲腙。

水稻耐盐指标的测定方法

水稻耐盐指标的测定方法

一、相对电导率的测定1.4转基因植株相对电导率测定(南京农业大学王景艳)将新鲜的对照及转化植株烟草叶片用300mmol/LNaCI胁迫处理4h,分别称取.02g各两份,各加5ml超纯水,用DDs一12数字电导仪测定电导率(所用的电极参数为.095)(RC),之后再放入沸水中煮沸15min以杀死植物组织,取出放在自来水中冷却10min,测定其煮沸电导率扭(Rc’),相对电导率为Rc/R c’xloo%(汤章成,1999).2.8相对电导率的测定方法(湖南农业大学张亚州)取相同部位的转基因植株叶片和非转基因植株叶片,用去离子水冲洗,再用洁净滤纸吸干表面水分"用剪刀剪成大小基本一致的叶片,各40片,分装在两个大试管中,每管20片,然后在装有叶片的试管中各加入20mL的去离子水,放入真空干燥箱中用真空泵抽气lh以抽出细胞间隙的空气或放在摇床上摇动3h使叶片沉入水底,然后将上述试管置室温放lh,期间不断摇动。

lh后用电导仪测其初电导值(S1).测毕将各试管放入沸水浴中,以杀死植物组织.取出试管后用自来水冷却至室温,摇匀,测其终电导值(52).计算公式:相对电导率L=S,/52.二、脯氨酸含量的测定1、(华中农业大学万丙良)游离脯氨酸含量的测定采用磺基水杨酸提取法。

分别取0.5g新鲜叶片,加少量(2-3ml)3%磺基水杨酸研磨,磺基水杨酸最终体积为5ml.转入离心管中,沸水浴中提取10min。

冷却后以3000rpm离心10min,取上清液待测。

取2ml上清液,加2ml冰乙酸,2ml茚三酮,混匀后沸水显色60min,取出冷却后用4ml甲苯萃取,静置片刻,取甲苯相(粉红色)于离心管。

3000rpm离心5min,然后在520nm波长处测定OD值.以甲苯为空白对照,在1-6µg/ml范围内作标准曲线。

2、华中农业大学彭英胁迫处理后第4d取苗5株,-80℃保存以备测定叶片脯氨酸含量。

脯氨酸含量测定按照Bates(1973)的方法稍作改动。

植物生理学中各项生理指标的测定方法

植物生理学中各项生理指标的测定方法

植物⽣理学中各项⽣理指标的测定⽅法⼀.实验内容实验1 MDA(丙⼆醛)含量测定所需试剂:10%三氯⼄酸(TCA)(纯) 0.25%硫代巴妥酸 (纯)实验2:可溶性蛋⽩含量测定所需试剂:考马斯亮蓝G-250 95%⼄醇 85%磷酸实验3:SOD(超氧化物歧化酶)酶活性测定所需试剂:dl-甲硫氨酸(Met) NBT EDTA-Na2 核黄素实验4:CAT(过氧化氢酶)活性(过氧化氢酶)测定所需试剂:PBS(PH=7.0) 30% H2O2实验五:Apx(抗坏⾎酸过氧化物酶)活性(即ASA—POD活性)测定所需试剂:ASA(分⼦量167.12) (⼄=胺四⼄酸=钠)EDTA—Na2 PBS (pH7.0) 30%H2O实验6: ASA(维⽣素C)含量测定偏磷酸 95%⼄醇磷酸 4% 2,2-⼆联吡啶 FeCl3(或FeCl3·6H2O)实验7:GSH(⾕胱⽢肽, 媚⼒肽GSH GSH是由⾕氨酸、半胱氨酸和⽢氨酸结合⽽成的三肽化合物)含量测定所需试剂:NaH2PO4·2H2O DTNB(⼆硫代硝基苯甲酸) PBS (PH6.8)实验8:脯氨酸测定所需试剂:磺基⽔杨酸甲苯茚三酮冰⼄酸 85%磷酸试验9:叶绿素含量测定。

80%丙酮试验9:GR活性测定试验10:过氧化氢含量测定。

三氯⼄酸试验11:超氧阴离⼦含量测定⼆.酶液和母液提取1. 酶液提取所需试剂:50mmol/L磷酸缓冲液(PH=7.8)(内含1% (m/v) 聚⼄烯吡哆烷酮PVP),0.1mmol/L EDTANa2或EDTA),也可为(内含2% (m/v)PVP),0.2mmol/L EDTA Na2或EDTA)(先配制后⽤缓冲液定容)2. ASA . GSH母液提取所需试剂:5%偏磷酸1.抗氧化酶酶液提取(SOD.POD.CAT):1g(根据样品的量,少的可以适当减少)叶⽚加⼊预冷5ml. 50mmol/L磷酸缓冲液(PH=7.8)↓4℃冷冻15000g离⼼20分钟↓上清液即为酶液(5℃下保存⼀两天内备⽤,中短期⽤-20℃保存)2.ASA . GSH母液提取:0.1g叶⽚加⼊3ml预冷5%偏磷酸溶液↓4℃冷冻14000g离⼼10分钟↓上清液即为母液(5℃下保存备⽤)(偏磷酸可显著沉淀蛋⽩质和保护ASA)酶液提取所需试剂:PVP(聚⼄烯吡哆烷酮):1%(1g溶于100ml⽔),1000ml需称取10g,此处⽤PBSEDTA-Na 2 : 0.1mmol/L (37.2mg EDTA-Na2溶于1000ml蒸馏⽔),此处⽤PBSPBS(缓冲液)配制⽅法:① Na2HPO4·12H2O ② NaH2PO4·2H2O取① 71.64g,蒸馏⽔定容⾄1L,取② 31.21g定容⾄1L,放置4℃冰箱备⽤PH=7.8 取① 91.5ml+② 8.5ml=100ml (浓度0.2mol/L)需要0.05mol/L→将上述溶液烯释⾄400ml (0.2mol/L*0.1=0.05mol/L*V)母液提取所需试剂:5%偏磷酸:称5g纯偏磷酸,定容⾄100 ml蒸馏⽔(需加热溶解,温度在50-60℃)偏磷酸有剧毒(偏磷酸难溶解,先得⽤研钵提前研碎,后⽤磁⼒搅拌器溶解⼀到两天后再定容)(现所⽤为38%HPO3,所以需称65.7895g,定容⾄500ml)三.实验步骤实验1:MDA含量测定1.1所需试剂:10%三氯⼄酸(TCA)(纯)称10g定容⾄100ml0.25%硫代巴妥酸 (纯) 称0.25g⽤10%TCA定容⾄100ml(配制时,可⼀次完成,先配TCA,不要定容,再加⼊硫代巴⽐妥酸,然后定容,若难溶解,可以在磁⼒搅拌器上微热)1.2步骤:取0.3g叶⽚,加4ml磷酸缓冲液研磨,加⼊ 4ml 0.25%的硫代巴⽐妥酸(溶于10%的三氯⼄酸)溶液↓摇匀95℃加热15分钟↓快速冷却3000g离⼼15分钟↓取上清测定 OD532,OD600,OD450值↓按公式求 MDA浓度=6.45×(OD532-OD600)-0.56OD450 (µmol/L)可溶性糖浓度=11.71×OD450 (mmol/L)最后计算 MDA含量(µmol/g FW)= [4×(MDA浓度x)×10-3/0.1]同时,可测得可溶性糖含量(m mol/g FW)= 4×(可溶性糖浓度χ)×10-3/0.1(⽤多波长测定,在测定之前⼀定要矫正基线,公式中的参数可以直接在分光光度计上输⼊)注意:以0.25%的硫代巴妥酸溶液作空⽩调零MDA含量测定的改进1.可以⽤做酶活性时提取的酶液来直接测定MDA含量,⽤量可以定为1.0、1.5或2.0(较好)ml。

植物耐盐生理生化指标研究进展

植物耐盐生理生化指标研究进展

第7期第53卷第7期2014年4月湖北农业科学Hubei Agricultural SciencesVol.53No.7Apr.,2014收稿日期:2013-10-10基金项目:“十二五”国家科技支撑计划项目(2013BAC2B04)作者简介:王智明(1988-),男,山东潍坊人,在读硕士研究生,研究方向为逆境植物生理生态,(电话)183********(电子信箱)wzmzixialang2008@;通讯作者,许兴,教授,博士,博士生导师,主要从事逆境植物生理生态与盐碱地改良研究,(电子信箱)xuxingscience@。

盐渍土是对各种盐渍化土壤的俗称,包括不同程度的盐土、碱土以及次生盐渍化土壤[1]。

盐土是指土壤溶液中可溶性盐(NaCl、Na 2SO 4等)的含量(一般在0.30%以上)超过了作物正常生长发育的耐受极限的土壤;而碱土则是指土壤溶液中含有大量的可交换性Na +,显著改变了土壤和植物理化性状的土类,通常其碱化度在15%以上,pH 大于9,又称钠质土。

土壤盐渍化严重影响我国的农业生产和生态环境,是制约现代农业增产、增效和实现农业良性发展的两大土壤因素之一[2]。

土壤中的盐碱是影响植物生长发育的重要限制因子,主要胁迫因子包括pH、Na +及Cl -[3]。

研究表明,在盐碱混合胁迫下,作物生长发育迟缓,代谢功能紊乱甚至丧失,严重时植株发生永久性萎蔫,尤其是西部干旱荒漠地带[4]。

植物的耐盐性是一个受多基因控制的综合数量性状,涉及诸多抗盐基因选择性差异表达和多种耐盐生理生化的协调作用[5]。

每种盐生植物甚至非盐生植物均有一套独特的耐盐方式和耐盐机制,使得它们的基因和生理生化指标变化差异明显,所以综合考虑其多项指标,才能科学评价植物的耐盐性。

本文就植物耐盐性对诸多学者近年来关于耐盐生理生化指标的研究进行了综述,以期为进一步揭示不同植物的耐盐机制,完善植物耐盐性的综合衡量指标体系以及选育适盐性植物新品种提供参考依据。

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植物在盐胁迫下,活性氧含量会明显增加,对植物体产 生毒害,而过氧化物酶(POD)会清除植物体内多余的活 性氧 。过氧化物酶广泛存在于植物的各个组织器官中。在 有过氧化氢存在的条件下,过氧化物酶可以使愈创木酚氧 化,产生茶褐色物质,在470nm处有最大吸收峰,可根据 单位时间内A470的变化值,计算POD活性。
(五)丙二醛含量测定 1、丙二醛提取 小麦叶片0.2g,加入10﹪三氯乙酸(TCA)5mL(分两次加)和少 量石英砂充分研磨,匀浆液以4000r/min离心20min,上清液 即为样品提取液。 2、反应体系 取2mL提取液,分别加入2mL 0.6﹪TBA液,混匀,在试管上 加盖塞,置于沸水浴中沸煮15min,迅速冷却,离心。取上清 液测定532nm和450nm下的A值。以2mL水代替提取液调零。 3、MDA含量计算: 根据C=6.45×A532-0.56×A450,计算出样品提取液中丙二醛 的浓度C,然后再计算出每克样品中丙二醛的含量(μmol/g (FW))。
植物在盐胁迫下,往往发生膜脂过氧化作用,丙二醛 (MDA)是其产物之一,通常将其作为脂质过氧化指标, 用于表示细胞膜脂过氧化程度和植物对逆境条件反应的强 弱。丙二醛是常用的膜脂过氧化指标,在酸性和高温度条 件下,可以与硫代巴比妥酸(TBA)反应生成红棕色的三 甲川(3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮),其最大吸收波长在 532nm。
实验九 植物耐盐生理指标测定(综合性)
一、实验目的: 1、了解盐胁迫的机理以及植物的耐盐机制 2、了解植物盐处理的方法 3、掌握植物体内脯氨酸含量测定的原理和方法 4、掌握过氧化物酶活性的测定原理和方法 5、掌握丙二醛含量的测定方法 6、掌握基本的数据统计方法
二、定量的脯氨酸 (Pro)降低水势, 维持植物体内的水分平衡, 保证植物 的正常生长。用磺基水杨酸提取植物样品时,脯氨酸便游 离于磺基水杨酸的溶液中,然后用酸性茚三酮加热处理后, 溶液即成红色,色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在 520nm波长下比色,从标准曲线上查出脯氨酸的含量。
4. 脯氨酸的含量的计算 从标准曲线查得脯氨酸浓度,计算出样品中脯氨酸的含量, 以每克材料鲜重含脯氨酸的微克数表示(μg/g)。
(四)过氧化物酶活性的测定 1、过氧化物酶的提取 称取小麦叶片0.2g,加5ml pH 6.0的磷酸缓冲液,再加入少许 PVP及石英砂研磨。4℃,4000rpm离心15分钟,上清液为酶 粗提取液 2、反应体系 50μl酶粗提取液加入4ml反应液,在可见分光光度计下 470nm处测A值,放入后立即记时,每隔20s记一次数值,连 续记录三次,取平均值。 3、酶活力定义 过氧化物酶活性以每克鲜重每分钟在470nm下A值的变化值, 设每变化0.01为一个酶活力单位。POD活性=U/min· g
(三)脯氨酸含量测定 1、标准曲线的制作 用100μg/ml脯氨酸配制成0.4、0.8、1.2、1.6、2.0μg/ml的 标准溶液。取标准溶液各2ml,加2ml3% 磺基水杨酸,2ml 冰醋酸和4ml2.5% 茚三酮试剂于具塞试管中,置沸水浴中 显色1h,冷却后与波长520nm测定A值,以A值为纵坐标, 脯氨酸浓度(μg/ml)为横坐标绘制标准曲线。
五、思考问题 1.为什么设置重复处理? 2.分光光度法要求A值在多大范围内,数据才可靠,如何调 整? 六、实验报告 主要内容包括:1.实验目的及要求 2.实验主要仪器和试剂 3. 实验原理 4.实验步骤 5.实验结果 6.结果分析 7.回答问题
2 、脯氨酸的提取 称取小麦叶片0.2g,加3%磺基水杨酸5ml研磨提取,匀浆 移至试管中,在沸水浴中提取10min,冷却后,5000rpm离 心20min,上清液即为脯氨酸粗提液。 3、反应体系 取上清液2ml,并加入1ml冰醋酸,2ml酸性茚三酮,混匀 置于沸水浴中显色0.5h。以2ml磺基水杨酸,1ml冰醋酸, 2ml酸性茚三酮为对照。在可见分光光度计下520nm处测得 A值。
三、实验主要仪器和试剂
仪器: 离心机;分光光度计;恒温水浴锅 试剂:酸性茚三酮溶液;冰醋酸;标准脯氨酸溶液;3% 磺基水杨酸;过氧化物酶测定反应液;pH6.0磷酸缓冲液 10%TCA;0.6%TBA
四、实验步骤 (一)实验材料的培养 小麦种子吸胀8h后消毒,采用水培法种植,至三叶期, 作为供试材料。 (二)盐胁迫处理 用200 mmol/L NaCl对小麦进行盐胁迫,以未进行盐胁迫 为对照,以进行盐胁迫为处理,盐胁迫3d后分别测定脯 氨酸含量、过氧化物酶活性和丙二醛含量,对照和处理 分别重复3次。
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