经口急性毒性实验
001_经口急性毒性试验方法_改良寇氏法
急 性 毒 性 试 验 方 法――改良寇氏法Kärber 法由Kärber 于1931提出，后经Finney 改进，顾汉颐作过改进，1963年孙瑞元教授对该法进一步改进，改进后的计算方法称为点斜法或孙氏法，增加了不含0%和100%死亡率的校正式，所得LD 50及全部有关参数与正规概率单位法相近。
改良寇氏法（Käber）试验设计的原则是：各组剂量按等比级数；各组动物数相等：大致有一半组数的动物死亡率在10%～50%之间，另一半在50%～100%之间，最好出现0 %和100 %的剂量组。
一、剂量选择及分组1、剂量选择剂量设计是否合理是急性毒性试验能否成功的关键。
探求外源化学物的急性毒性，测定其LD 50或LC 50时，应首先广泛查阅文献资料，了解该化学物的化学结构和理化性质，如结构式、分子量、溶解度、挥发度、纯度及杂质含量等，其次确定测定LD 50的计算方法，然后设计剂量。
2、预试验：总的原则是先用少量动物，以较大的剂量间距染毒，求出粗略的致死剂量范围，即确定受试动物全部致死的最小剂量（b ）和全部不致死的最大剂量（a ），即求出待测化学物0 %~100 %的大致致死剂量范围，然后在这个剂量范围内按几何级数的间距设计5~7个剂量组，组间剂量呈等比级数（r ），其比值为1.2~1.5。
进行正式实验。
用于急性毒性试验时，动物的体重为：大鼠180~200g ，小鼠18~22g ，豚鼠200~250ｇ，家兔2~2.5kg ，犬10~12 kg 。
用于实验的同一批动物体重变异范围不得超过所用动物平均体重的20%。
仍然遵守雌雄各半或雌雄兼取的原则。
当预试中发现化学物的毒性有明显的性别差异时，则需要选用雌、雄两种性别的动物分别进行试验，求出各自的LD 50。
通过预试，找出受试化学物引起动物死亡的大致剂量范围，以此为依据设计正式试验的剂量和分组。
按下式设计剂量组：1n abr -= 式中：r —相邻两组剂量的比值，一般为1.2～1.5，b —最低全致死剂量量， a —最高不致死剂量， n —设计的组数。
《食品毒理学》经口急性毒性试验
《食品毒理学》经口急性毒性试验一、实验目的和要求掌握给药方法；了解一次或24小时内多次给予受试化学物后，动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的特征以及可能的死亡原因，观察受试动物毒性反应与剂量的关系，求出半数致死量。
二、主要仪器设备实验动物：成年昆明系实验小鼠（SPF级别）。
器材：注射器（0.25，1，2，5ml）、吸管（0.1，0.2，0.5，1，2，10ml）、容量瓶（10，25，50ml）、烧杯（10，25，50ml）、滴管、灌胃针12号、动物体重秤、解剖剪刀、镊子、手术手套，口罩。
试剂：受试化合物（氯化钡溶液，20mg/mL）。
三、实验原理氯化钡是强电解质，可完全电离出钡离子，导致钡离子在小鼠血液内部引发急性低钾血症，故小鼠会出现肌无力和发作性软瘫，心肌应激性减低，各种心律失常和传导阻滞，由于肌无力，严重中毒的小鼠还会出现呼吸困难乃至死亡等症状。
四、实验内容1．健康动物的选择和性别鉴定。
2．实验动物称重、编号和随机分组。
3．受试化学物溶液的配制。
4．小鼠灌胃操作技术。
（1）预实验，取小白鼠、称重、随机分为5组，每组3只，以灌胃的方式给予等体积、不同剂量的氯化钡溶液，摸索小鼠接近100%和0%死亡的剂量范围。
（2）小鼠随机分为5组，每组3只，以灌胃的方式给予等体积、不同剂量的氯化钡溶液。
小鼠灌胃法：将钝头的12号注射针（适用于小鼠），安装在适当容积的注射器上，吸取所需的受试物溶液，左手抓住动物双耳后至背部的皮肤（小鼠仅抓住耳后、颈部的皮肤，用无名指、小手指和大鱼际肌将其尾根部压紧），将动物固定成垂直体位，腹部面向操作者。
注意使动物的上消化道固定成一直线。
右手持注射器，将针头由动物口腔侧插入，避开牙齿，沿咽后壁缓缓滑人食管。
若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一旦感觉阻力消失，即可深入至胃部。
如遇动物挣扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强行插入，以免操作穿破食管，甚至误人气管，导致动物立即死亡。
经口急性毒性试验.
大小鼠标记方法（单色法n>10）
双 色 法
大小鼠标记方法（双色法n<10）
红色表示十位数： 头部染红色为10
左前肢为20
左腰部为30 黄色表示个位数。 大小鼠标记方法（双色法n>10）
其它标记方法
烙印编号法：
体内埋号编号法：
耳孔编号法：
挂牌编号法：
实验动物的随机分组
表1 动物随机分组表 动物号 随机数字 除6余数 分组 动物号 随机数字 除6余数 分组 1 97 1 A 16 27 3 C 2 74 2 B 17 7 1 A 3 24 0 F 18 36 0 F 4 67 1 A 19 7 1 A 5 62 2 B 20 51 3 C 6 42 0 F 21 24 0 F 7 81 3 C 22 51 3 C 8 14 2 B 23 79 1 A 9 57 3 C 24 89 5 E 10 26 2 B 25 73 1 A 11 42 0 F 26 16 4 D 12 53 5 E 27 76 4 D 13 32 2 B 28 62 2 B 14 37 1 A 29 27 3 C 15 32 2 B 30 66 0 F
组 别 A B C D 1 2 7 26 4 5 9 27 14 8 16 鼠 号 17 10 20 19 13 22 23 15 29 25 28
E
F
12
3
24
6 11 18 21 30
具体方法如下：继续抄下随机数字分别除以A、B、C、F组的现有动物数，即： 56/7(7为A组现动物数)整除，余数为0，将A组第7只动物(25号)调配给D组；下一 个：50/6(6为A组现有动物数)余2，将A组第2只动物(4号)调配给D组；接下来 26/6(6为C组现有动物数)余2，将C组第2只动物(9号)给D组。余类推，最后调整
实验二-经口急性毒性试验-Acute-Oral-Toxicity
实习内容
试验动物的选择和性别鉴定。
试验动物的称重、编号以及随机分组方法。 急性毒性试验常用染毒途径和方法。
急性毒性反应的观察和LD50计算。
实验材料
(一) 实验动物：健康成年小鼠或大鼠若干只。
(二) 器材 注射器(O.25，1，2，5ml)、吸管(0.1，0.2，0.5，1，2，
10m1)、容量瓶(10，25，50ml、烧杯(10，25，50ml)、滴管、
灌胃针(大鼠、小鼠适用)、电子天平(感应量1/10000g)、动物 体重秤、外科剪刀、镊子。
(三) 试剂
受试化学物为氟化钠(NaF，分析纯)，苦味酸酒精饱和液 或其它染色剂。
实验动物的选择(提问)
实验动物的性别鉴定
♀
♂
分组成表3所示。雌性动物也按上法分组，然后将雌、雄动物合组进行试验。
表3 调配后30只动物随机分组
组别 A 1 14 鼠号 17 19 23 组别 D 4 9 鼠号 25 26 27
B
C
5
7
8
16
10
20
13
22
15
29
E
F
2
3
6
11
12
18
24
21
28
30
实验动物染毒途径和方法（示教）
常用的染毒途径： 经口染毒 经呼吸道染毒
面向自己,沿着门牙左 边滑入
气管
By LASCO
食道
经皮染毒
注射途径染毒
吸收速率：
静脉注射>吸入染毒>肌肉注射>腹腔注射>皮下注射> 经口染毒>皮内注射>其他染毒途径如经皮等
受试物的配制
实验二 经口急性毒性LD50测定
实验二经口急性毒性LD50测定实验二经口急性毒性LD50测定一、试验目的1. 熟悉急性毒性LD50测定的剂量设计2. 掌握小鼠灌胃技术3. 掌握改进寇氏法计算LD50的方法二、试验原理选择健康的实验动物，依据LD50计算的设计原则，将实验动物随机分成数个染毒组和一个阴性对照组。
一次或24小时内多次给予实验组受试物后，观察动物所产生的急性毒性反应及其严重程度，中毒死亡的特征以及可能的死亡原因。
根据受试物毒性反应与剂量的关系，求出半数致死剂量(LD50)，并根据LD50值将受试物进行急性毒性分级。
三、材料和试剂1. 实验动物:健康成年小鼠60只，雌雄各半2. 器材:灌胃针(小鼠适用)、注射器、吸管、容量瓶、烧杯、滴管、分析天平、台秤、外科手术剪、镊子3. 受试物:(敌百虫或克佰威)4. 染色剂:苦味酸酒精饱和溶液、0.5%品红溶液四、实验内容1. 实验动物称重、编号和随机分组2. 染毒剂量设计及试剂配制3. 小鼠灌胃染毒技术4. 毒性反应的观察及LD50计算五、试验方法(一)预实验1. 探索剂量范围先找出100%与0%的致死量(或阳性反应的剂量)为实验的上、下限剂量(Dmax和Dmin)。
据经验或文献定出一个估计量，取动物若干，每4只一组，按估计量给药，如出现4/4死亡时，下一组剂量降低，当出现3/4死亡时，则上一剂量为Dmax;如降低一档剂量出现的死亡率2/4或1/4时，应考虑到4/4死亡剂量组在正式实验时可能出现死亡率低于70%，为慎重起见可将4/4死亡剂量乘以1.4倍，作为Dmax。
以次类推，找出Dmin。
2. 剂量分组一般染毒组数(G)以5-8组为宜，组间剂量比值为r。
在确定组数后，按下列公式计算r。
1/(G-1)r = (Dmax/Dmin) 3. 受试物溶液的配制配制等比浓度的敌百虫溶液，并使每只动物在给药容量上相等(如0.5ml/20g)。
剂量按等比级数增减，相邻两剂量比值1:0.6,0.9，设5个剂量组。
经口急性毒性试验
经口急性毒性试验经口急性毒性试验是一种广泛使用的实验室动物毒性试验，它通常用于评价新化合物、生物制品等物质的毒性，以及评估安全使用剂量的潜在结果。
这篇文章将介绍经口急性毒性试验的背景、方法、注意事项和限制。
背景方法经口急性毒性试验通常使用小鼠、大鼠、兔子或其他哺乳动物，动物必须年龄相似、体重相当且健康状态良好。
实验中使用不同剂量的测试物质来确定它们在动物体内的毒性。
通常，实验中使用的剂量量较低，但有时也会使用较高的剂量以便观察更加严重的毒性反应。
其实验流程如下：1.选取合适且健康的实验动物，检查其体内和体外健康状况；2.确定实验剂量，并将物质以食物、水、灌胃管等方式交予动物口服；3.观察动物的外观、行为和症状，记录观察结果；4.在一定时间后继续观察动物，在必要时应用适当的护理；5.按照实验协议的规则处理动物，以确保其安全。
注意事项在进行经口急性毒性试验时，需要注意以下几点：1.确定剂量：需要选择适当的实验剂量，以确保所测试的物质不会对动物造成过度毒性反应，且可以解释毒性的分级。
2.采取恰当的动物保护措施：对于实验过程可能造成疼痛或不适的情况，应采取适当的保护措施，例如提供充足的饮水、合适的饲料和温度环境。
3.保证实验数据质量：为了确保实验数据质量，需要在实验过程中跟踪记录、分析数据，并确定实验的有效性以及物质毒性分级的准确性。
限制虽然经口急性毒性试验是一种有效的毒性评估方法，但它有一定的局限性。
经口急性毒性试验只能评估物质对动物的急性毒性反应，而对于慢性毒性、免疫毒性或生殖毒性等长期影响，它并不能提供完整的信息。
此外，每种动物特征不同，对物质的敏感程度也会不同，因此难以将实验结果适用于不同品种的动物和不同的物质评估。
因此，除经口急性毒性试验外，还需要完善其他的毒性评估方法以更准确地评估药物、化学物质和其他物质的毒性。
急性经口毒性实验
小鼠灌胃法：左手拇指和食指捏住小鼠头部两耳后皮肤，无名指或小指将尾部紧压在手上，使小鼠腹部向上，尽量使其体位垂直，注意使动物的上消化道固定成一直线。右手持连着灌胃导针的注射器，将灌胃针由动物口腔侧插入，避牙齿，沿咽后壁缓缓滑人食管。若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，一旦感觉阻力消失，即深人至胃部，一般进针深度小鼠2.5～4cm，随后将受试物溶液注入。如遇动物挣扎，应停止进针或将针拔出，千万不能强行插入，以免穿破食管，甚至误入气管，导致动物立即死亡。小鼠一次灌胃体积为10-20ml/kg
灌胃时操作要避免损伤食道或误入气管
正确捉拿动物，防止被咬伤且避免动物损伤
防止操作者中毒。注意通风，不要把药品撒到手、脸部皮肤及身体其他部位，操作过程中要小心。
五、注意事项：
实验动物的种属。
01
实验动物体重和随机分组情况。
02
受试物的名称、性状等情况。
03
受试物的配制和溶剂。
04
描述实验观察的中毒表现和死亡情况等。
LD50的95%可信限=log-1(X + 1.96 SX )
结果评价：
根据实验动物中毒体征、死亡时间、根据得出的LD50及受试物的种类，按相应的国家标准或技术规范中的急性经口毒性分级标准（课本 215页--农药的急性毒性分级）对受试物进行毒性定级，判断受试物的毒性大小。
灌入量计算和操作要准确，否则影响结果
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202X
急性经口毒性实验 （Acute Oral Toxicity Test）
通过本次实验掌握经口灌胃技术，半数致死剂量的意义。
通过本次实验学习半数致死剂量的计算及毒性判定。
一、实验目的：
二、测定方法：
本实验以灌胃方式测定敌敌畏DDV（80g/100ml）的半数致死量（LD50）。
(整理)经口毒性实验
急性经口毒性试验Acute Oral Toxicity Test1 范围本方法规定了动物急性经口毒性试验的基本原则、技术和要求。
本方法适用于评价化学品的急性毒性作用。
2 规范性引用文件OECD Guideline for Testing of Chemicals (No. 401. Feb. 1987 ) OECD Guideline for Testing of Chemicals (No. 425. Feb. 2001 ) USEPA OPPTIS Health Effects Guideline (Series 870.1100 June 1996)3 试验目的3.1 检测化学品对实验动物的急性毒性作用和强度。
3.2 为亚急(慢)性等毒性试验提供剂量选择的依据。
3.3 试验结果可作为化学品急性毒性分级和标签标识。
４定义4.1 急性经口毒性(Acute Oral Toxicity): 一次或在24h内多次经口给予实验动物受试样品后，动物在短期内出现的健康损害效应。
4.2 经口半数致死剂量（Oral Median Lethal Dose）: 经口一次或24h内多次经口给予受试样品后，引起实验动物总体中半数死亡的毒物的统计学剂量。
以单位体重接受受试样品的质量(mg/kg bw或g/kg bw)来表示。
4.3 剂量-反应关系(Dose-response Relationship)：表示化学毒物的剂量与某一群体中质效应的发生率之间的关系。
5 试验基本原则以经口灌胃法给予各试验组动物不同剂量的受试样品，每组用一个剂量，染毒剂量的选择可通过预试验确定。
染毒后观察动物的毒性反应和死亡情况。
试验期间死亡的动物要进行尸检，试验结束时仍存活的动物要处死并进行大体解剖。
本方法主要适用于啮齿类动物的研究，但也可用于非啮齿类动物的研究。
6 试验方法6.1 受试样品的处理受试样品应溶解或悬浮于适宜的赋形剂中，（不溶性固体或颗粒状物质研磨、过100目筛）建议首选水或食用植物油（如玉米油）作溶剂，也可考虑使用其它赋形剂（如羧甲基纤维素、明胶、淀粉等）等配成混悬液；不能配制成混悬液时，可配制成其它形式(如糊状物等)，但不能采用具有明显毒性的有机化学溶剂。
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实验动物的随机分组 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
雌雄分开分组，每种性别分6组，每组10只
1.动物称重：按体重分在不同笼中待分组 <16g, 16g~, 18g~, 20g~, 22g~, >24g
2.随机分组方法 每种性别随机分为6组：A、B、C、D、E，F,每轮分别从笼中取一只动 物按如下顺序到各组，直到动物取完。(雌雄分别分组）
240mg/Kg
24mg.5mg/Kg
18.8mg/ml
198.4mg/kg
19.8mg/ml
146.5mg/Kg
14.7mg/ml
157.4mg/kg
15.7mg/ml
114.4mg/Kg
11.4mg/ml
125.0mg/kg
12.55mg/ml
90mg/Kg
雌性=A×（1/k）=22.9 ×(1/1.28)=17.9ml
雄性=A×（1/k）=24.2 ×(1/1.26)=19.2ml
从最高剂量组溶液A ml中取出5ml,作为高剂量组。剩余(A-5)ml,加油5ml，混匀后，
再从中取出5ml作为下一个剂量组，依次类推，完成时，最低剂量组体积为A，
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
改进寇氏法：利用剂量对数与死亡率呈S型曲线而设 计的方法。要求如下：
每个染毒剂量组动物数相同， 各剂量组组距呈等比级数， 死亡率呈正态分布， 最低剂量组死亡率<20％， 最高剂量组死亡率>80%。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
三、材料和试剂
1.实验动物：健康成年小鼠，昆明种，普通级，雌 雄各60只
经口染毒
1. 称重并标记:(每组10只） 头，背，尾，右前，右中，右后，左后， 左中，左前，全白 2.灌胃：0.1ml/10g 3.中毒体征和动物死亡情况观察（中毒表现参照教材《毒理
学基础》P123）
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
中毒体征和动物死亡情况观察
1、中毒过程：潜伏期、中毒期、恢复期或死亡时间（只需记录中 毒出现的时间＆死亡时间）
第一轮：A、B、C、D、E、F 第二轮：B、C、D、E、F、A 第三轮：C、D、E、F、A、B 第四轮：D、E、F、A、B、C 第五轮：E、F、A、B、C、D 第六轮：F、A、B、C、D、E
...... 雌雄各5组为剂量组，各剩一组作为溶剂对照（只灌植物油）和备用。 分完组后在笼子上做好标记，动物暂不标记，下午灌胃前再标记。
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急性毒性作用：
指机体一次接触或24小时内多次接触化学物后 在短期（最长到14天）内所发生的毒性效应，包 括一般行为、外观改变、大体形态变化以及死亡 效应。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
LD50：半数致死剂量
指引起一组受试实验动物半数死亡的剂量。常 用以表示急性毒性的大小。
• 改进寇氏法 1、 剂量设置：雌雄，等比数级，灌胃容量：0资.料1仅m供l参/1考0,不g当之处，请联系改正。
雌LD100=240mg/kg,LD0=90mg/kg,k=1.28
雄LD100=250mg/kg,LD0=100mg/kg,k=1.26
㈠雌性5个剂量组
各组浓度
㈡雄性5个剂量组
各组浓度
雄性最高剂量组溶液（母液）：
24mg/ml配置22.9ml
25mg/ml配制24.2ml
雌A＝V * K / (K-1)
雄A= V * K / (K-1)
＝5*1.28/ ( 1.28－1)
=5*1.26/(1.26-1)
＝22.9ml
=24.2ml
4、下一组溶液的配置： 等比稀释法 A*（1/K）
9mg/ml
100mg/kg
10mg/ml
各组浓度＝各组剂量/灌胃容量
例 雌性最高剂量组浓度＝最高剂量/ 灌胃容量 ＝240mg/kg/0.1ml/10g＝24mg/ml
2、每组实际需要量V＝最终体积＋损耗量
＝动物数×平均体重×灌胃容量＋损耗量
＝10×25g×0.1ml/10g+2.5ml
＝5ml
3、 雌性最高剂量组溶液(即母液)：
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
急性毒性试验
• 实验动物的选择（物种和品系，年龄和体 重，性别，分组，预检，禁食）(who?)
• 受试物（what?) • 染毒方法(how?) • 剂量选择（how?) • 毒性作用观察(ending)
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
一 、实验目的
• 1.学习急性毒性试验的实验设计原则 • 2.掌握灌胃技术，随机分组方法 • 3.掌握LD50的计算方法 • 4.观察和描述受试物的中毒特征 • 5.掌握急性毒性分级标准
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
剂量设计
预实验得出LD100、 LD0 ，各设置五个剂量组，n=5 i= ( lg LD100 - lg LD0)/ (n-1)， k=10i
雌性： LD100= 240mg/kg LD0= 90mg/kg
雄性： LD100= 250mg/kg LD0= 100mg/kg
其值越小，表示外源化学物的毒性越强；反之， 毒性越低。
LD50是经过统计学计算得到的毒性参数，是一 个统计量，受实验动物个体易感性差异的影响较 小，因此是最重要的急性毒性参数。
二 、实验原理 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
选择健康的实验动物，根据体重按随机分组的方法， 依予据受L试D物50后计，算了的解设动计物原所则产将生动的物急分性成毒数性个反染应毒及组其。严给 重程度，中毒死亡的特征以及可能的死亡原因，观察 受试物毒性反应与剂量的关系，求出半数致死剂量 （本L次D实50验）采，用并改根进据寇LD氏50法值。将受试物进行急性毒性分级。
2.器材：灌胃针，注射器，吸管，容量瓶，滴管， 动物体重秤等
3.试剂： 受试物为1.3g/ml敌敌畏油溶液（湖北荆 州），植物油，苦味酸（染色标记）。
资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
四、操作步骤
1.实验动物选择：昆明种小鼠，雌雄各60（上午） 2.实验动物的随机分组和标记（上午） 3.剂量设计及受试物配制（上午） 4.经口染毒（下午） 5.中毒体征和动物死亡情况观察记录（下午） 6.LD50的计算（次日下午） 7.结果评价、完成实习报告（次日下午）