几种食用菌多糖的提取与抗氧化性研究
食用菌多糖抗氧化性的研究
学士学位论文论文题目：食用菌多糖抗氧化性的研究姓名院系化学与材料科学院专业化学（师范类）年级2003级学号0324220326指导教师独创声明本人郑重声明：所呈交的毕业论文（设计），是本人在指导老师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，成果不存在知识产权争议。
尽我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文（设计）不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。
对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式表明。
本声明的法律后果由本人承担。
作者签名：二00 年月日毕业论文（设计）使用授权说明本人完全了解鲁东大学关于收集、保存、使用毕业论文（设计）的规定。
本人愿意按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版，同意学校保存学位论文的印刷本和电子版，或采用影印、数字化或其他复制手段保存论文（设计）；同意学校在不以营利为目的的前提下，建立目录检索与阅览服务系统，公布论文（设计）的部分或全部内容，允许他人依法合理使用。
（保密论文在解密后遵守此规定）论文作者（签名）：二00 年月日A.2B 指导教师用表毕业论文（设计）任务下达书学院化学专业化学（师范类）学号0324220326姓名现将毕业论文（设计）任务下达书发给你。
毕业论文（设计）任务下达书内容如下：一、毕业论文（设计）题目食用菌多糖抗氧化性能研究二、主要内容从食用菌子实体中提取粗多糖；食用菌多糖清除羟自由基能力的研究；食用菌多糖清除超氧阴离子自由基能力的研究。
三、具体要求掌握分光光度计的原理和操作方法；能够熟练而准确地进行常用分析操作；能够阅读英文文献。
四、主要参考文献1、徐向荣,王文华,李华斌.羟自由基的测定方法[J].中国卫生检验杂志,1997,7（5）:311～3132、张宏,谭竹钧. 四种邻苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶活性方法的比较.内蒙古大学学报（自然科学版）,2002,33（6）:677～681六、本毕业设计（论文）任务下达书于2006年12 月4日发出。
2种常用食用菌中多糖化合物复配的体外抗氧化活性研究
2种常用食用菌中多糖化合物复配的体外抗氧化活性研究[目的]研究金针菇、平菇多糖体外复配的抗氧化活性，以羟基自由基（OH·）和超氧阴离子（O-2·）为评价指标，探究多糖复配的可行性和有效性。
[方法]以金针菇、平菇为原材料，优化多糖提取条件，然后进行体外抗氧化活性研究，测定其对OH·和O-2·清除率，研究复合多糖对自由基的清除能力，并与单一多糖进行比较。
[结果]多糖的最优提取条件为超声时间30 min，热水浸提温度为90 ℃。
在此条件下，金针菇得率为1.25%，多糖纯度为84.3%；平菇得率为1.46%，多糖纯度76.4%。
复合多糖清除OH·的能力随着浓度的升高而升高，在金针菇多糖∶平菇多糖=5∶1的复配比例下会体现良好的协同性，优于单一多糖。
复合多糖清除O-2·的能力也随着浓度的升高而升高，尤其在低浓度下，金针菇多糖∶平菇多糖=3∶1复配时具有比单一多糖更好的协同性。
[结论]食用菌多糖的复配能有效提高其抗氧化活性。
金针菇，《中国植物图鉴》上称朴蕈，在真菌分类学上属担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、口蘑科、小火焰菌属[1]。
金针菇多糖是其生物活性成分，具有抗氧化等多种生物活性[2]。
李守勉等通过结晶紫法测得，质量浓度1%金针菇多糖溶液对羟基自由基（OH·）的清除能力为5.10%[3]。
Yang研究发现，0.5 mol/mL 金针菇多糖对自由基的清除率为6317%[4]。
Wu 等发现，金针菇多糖对活性氧的清除能力较其他还原剂如VC、茶多酚等显著，对自由基的清除率随浓度的增加而逐渐增大[5]。
平菇，又名侧耳、糙皮侧耳、蚝菇、黑牡丹菇，隶属于担子菌门、伞菌亚门、伞菌纲、伞菌亚纲、伞菌目、侧耳科、侧耳属，是一种相当常见的灰色食用菌[1]。
大量药理学研究表明，平菇多糖具有良好的抗氧化等生物活性[6-7]。
Xia等研究发现，8 mg/mL平菇多糖粗品（POP）对超氧阴离子（O-2·）的清除率为40.5%，且纯化后的多糖对O-2·的清除能力显著提高[8]。
食用菌中活性多糖的提取与应用研究
食用菌中活性多糖的提取与应用研究食用菌是一类营养丰富、具有多种医疗保健功效的食品。
其中，活性多糖是食用菌中的一种重要成分，具有抗肿瘤、免疫调节、抗氧化等多种生物活性。
因此，提取和应用食用菌中的活性多糖已经成为当前研究的热点之一。
一、食用菌中活性多糖的提取方法1、水提法水提法是常用的一种提取方法。
其操作简单，成本低廉，适用于大规模生产。
具体操作步骤为：将食用菌粉末加入适量的水中，进行浸泡，再进行煮沸、搅拌、离心等处理步骤，最终得到含有活性多糖的水提液。
2、酸碱提法酸碱提法是通过酸碱处理来提取多糖。
其优点是提取效率高，但操作过程较为复杂。
具体操作步骤为：将食用菌粉末加入适量的酸或碱中，进行浸泡，再进行煮沸、搅拌、离心等处理步骤，最终得到含有活性多糖的酸碱提液。
3、微波辅助提取法微波辅助提取法是近年来发展起来的一种新型提取方法。
其优点是操作简单、提取效率高、成本低廉。
具体操作步骤为：将食用菌粉末加入适量的水中，进行浸泡，然后利用微波辐射进行加热处理，最终得到含有活性多糖的微波辅助提取液。
二、食用菌中活性多糖的应用研究1、抗肿瘤作用食用菌中的活性多糖具有很强的抗肿瘤作用。
实验研究表明，食用菌中的多糖可以抑制肿瘤细胞的生长和增殖，促进肿瘤细胞凋亡，从而达到治疗肿瘤的目的。
2、免疫调节作用食用菌中的活性多糖还具有免疫调节作用。
实验研究表明，食用菌中的多糖可以增强机体免疫功能，促进白细胞的增殖和活性，从而增强机体对各种病原微生物的抵抗能力。
3、抗氧化作用食用菌中的活性多糖还具有很强的抗氧化作用。
实验研究表明，食用菌中的多糖可以清除自由基，减少氧化损伤，并且能够保护细胞膜和DNA等生物分子免受氧化损伤。
三、结论总之，食用菌中的活性多糖是一种非常重要的生物活性成分，具有很强的医学和保健价值。
目前，提取和应用食用菌中的活性多糖已经引起了广泛关注，并且在医药、保健品等领域得到了广泛应用。
未来，我们还需要进一步深入地研究食用菌中活性多糖的生物学特性和药理学作用机制，以期更好地发挥其医学和保健功效。
几种食用菌多糖抗氧化活性比较
100
1 059 26 7 0 575 60 1 0 558 1 172 18 8 1 159 19 4 0 616 1 224 15 2 1 025 29 0 0 282
61 4 57 3 80 5
1 055 26 9 0 879 39 1 0 290 0 911 36 9 0 739 48 9 0 188
作者简介: 党蕾 ( 1988- ) , 女, 在读本科生。* 通讯作者 收稿日期: 2010- 01- 28
16卷 05 期
党蕾等 几种食用菌多糖抗氧化活性比较
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由 Fe2+ VC产生 OH, 取 2 5mL 悬浮液各加不同质量浓 度的 金 钱 菇、花 菇、冬 菇 多 糖, 1mm ol/LFeSO4 50 L 和 1mm ol/LVC 50 L, 在 520nm 处测定隔 20m in 反应时间的
水、三氯乙酸、硫代巴比妥酸 ( TBA )、抗坏血酸 ( Vc) 、Tris 碱、HC 、l 蔗糖、邻苯三酚均为国产分析纯。 1 1 3 仪器 电子分析天平、上海精密科学仪器有限公
司、UV 754N 紫外分光光度计、上海精密科学仪器有限公
司、HH - 4数显恒温水浴锅、国华电器有限公司、GZX 9070 MBE 电热恒温鼓风干燥箱、上海博迅实业有限公司
量浓度的多糖溶液 1 0m L, 加入 pH 8 2的 T ris H C l溶液 (取 0 2m ol/L tris 溶液 25mL, 另 取 0 1m ol/LHC l溶 液 22 5m L, 两者混合后稀释至 100m L即得 ) 5 0mL 及 50 L
醛生成量比 Fe2+ + H 2 O2 组明显减少, 说明金钱菇、花菇、 冬菇多糖能强烈的抑制 OH 诱导的脂质过氧化作用。
6种食用菌菌丝体多糖含量的比较
基 金 项 目： 建 省 教 育 厅 科 技 项 目（Ａ ９ ９ ） 福 Ｊ ０ ０ ７
作者简介 ： 熊芳（ ９ ３ ）女（ ）助理实验 师， １８一 ， 汉 ， 硕士 ， 食用 菌活性物质开发与利用。 通信作者
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芝和香菇 不仅 多糖含 量较 高 ， 而且对羟 自由基 的清除 能力也较好 。 比较 而言 ， 针菇 多糖具有 更广 阔的 开发 利 相 金
用前景 ． ．
关键 词 ： 用 菌 ； 丝 体 ； 食 菌 多糖 ； 氧 化 ； 自由基 抗 羟
Ｔｈ ｍ ｐ ｒｓ ｎ ｏ ｈ ｌ ｓ ｃ ｈａ ｉ ｅ ｂ ａ ｎ ｄ ｆ ｏ ｉ ｆｅ ｅ ｔＥｄ ｂ ｅ Ｆｕ ｕｓＭ ｙ ｅｉ ｅ Ｃｏ ａ ｉｏ ｆｔ ｅ Ｐ０ ｙ ａ ｃ ｒｄ ｓＯ ｔ ｉ ｅ ｒ ｍ Ｓ ｘ Ｄｉ ｒ ｎ ｉ ｌ ｎｇ ｃ ｌａ
酿 酒 科 技 ，０ ６１） ３ ４ ２ ０ （０： — ５ ４
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五种真菌的复合多糖体外抗氧化作用研究
第！卷第9期黑龙江科学V3 9 2018 年 5 月HEILONGJIANGSCIENCE May 2018五种真菌的复合多糖体外抗氧化作用研究于冲，潘钰，曲晓军，夏海华(黑龙江省科学院微生物研究所，哈尔滨150010#黑龙江省科学院高技术研究院，哈尔滨150020)摘要：以香菇、黑木耳、灰树花、姬松茸和蛹虫草等5种食用菌多糖的复合多糖为研究对象，用邻苯三酚法测定真菌多糖对起氧阴离子自由基的清除率，用水杨酸法测定真菌多糖对羟自由基的清除率。
比较复合多糖与5种单一真菌多糖对体外抗氧化功能的影响。
结果表明，用邻苯三酚法测定复合真菌多糖在低、中、高三个浓度时对起氧阴离子自由基的清除率分别为20. 6%、48.5%、53.2% ,分别比清除率最高的单一多糖高出19. 1%、20.3%、16. 2% $用水杨酸法测定复合真菌多糖在低、中、高三个浓度时对羟自由基的清除率分别为23. 9%、55. 0%、61. 4% ,分别比清除率最高的单一多糖高出12. 7%、14. 3%、17. 6%。
关键词：复合多糖;抗氧化;起氧阴离子自由基;羟自由基;清除率中图分类号：TQ281 文献标志码：A文章编号：1674 -8646(2018)09 -0001 -03Study on antioxidant effects of complex polysaccharidesfrom five kinds of fungi in vitroYUChong，PAN Y u，QUXiao-jun，XIAHai-hua(Institute of Microbiology，Heilongjiang Academy of Sciences，Harbin 150010，China;Institute of Advanced Technology，Heilongjiang Academy of Sciences，Harbin 150020，China) Abstract %The compound polysaccharides of5 kinds of edible mushroom polysaccharides such as sh black fungus，Grifola frondosa，Agaricus blazei，and Cordyceps militaris were used as the research object.The scavenging rate of superoxide a nion radicals by fungal polysaccharides was determined by pyrogallol metliod.Salicylic acid metliod was u sed to determine the scavenging rate of hydroxyl radicals by fungal polysaccharides.In vitro effects between complex polysaccharides and five single fungal polysaccharides on the antioxidant capacity we results shows the s cavenging rates of superoxide anion free radicals determined by pyrogallol method was20. 6%for the low，48. 5%for the medium and 53. 2%for high concentrations of complex fungal polysaccharides respectively. 19. 1%，20. 3%and16. 2%higher compared with scavenging rates of the highest single po radical scavenging rates of the compound fungal polysaccharides determined by salicylic acid met!iod was 23. 9%for low，55.0% for medium，and 61.4%for high concentrations respectively.12.7%，14. 3%and17.6%higher compared with scavenging rates of highest single polysaccharides respectively.Key words ：Complex polysaccharide;Antioxidant;Superoxide anion radical;Hydroxyl radical;Clearance rate真菌多糖是存在于自然界的活性多糖中多糖含量 最高、生物活性最强的一种多糖，它们通常能够引发免 疫系统对肿瘤细胞、病毒和细菌感染的非特异性反应，并促进宿主产生更多激素和免疫细胞的合成。
食用菌草灰菇中多糖的提取分离及其生物活性研究
食用菌草灰菇中多糖的提取分离及其生物活性研究随着人们对健康的关注越来越高，食用菌的营养和药用价值日益受到重视。
草灰菇是一种常见的食用菌，具有丰富的营养价值和药用价值。
其中的多糖是其重要的活性成分之一，具有抗肿瘤、降血糖、调节免疫等多种生物活性。
因此，研究菇类多糖的提取分离及其生物活性，对于拓展食用菇的开发利用具有重要意义。
一、草灰菇提取多糖的方法1. 水提醇沉法水提醇沉法是一种简单易行的提取方法，其主要原理是通过对菌类多糖在水中的稀释溶液中加入足量醇类沉淀剂，沉淀出多糖物质。
此法提取得到的多糖含量较高，但因为水溶液无法稳定，其纯度较低。
2. 离子交换法离子交换法是一种基于离子交换树脂进行的多糖提取方法。
选择性接收多糖成分，同时去除其他有机物的混杂物。
此法提取的多糖物质比较纯净，可直接进行生物活性研究。
二、草灰菇多糖的生物活性1. 抗肿瘤活性草灰菇多糖作为其主要的抗肿瘤活性成分之一，在物理和化学性质方面具有增强机体免疫力、促进淋巴细胞增值、活化巨噬细胞、产生巨噬细胞因子等多个作用机制。
研究表明，草灰菇多糖能明显抑制人类肝癌细胞、胃癌细胞、结肠癌细胞、肺癌细胞等肿瘤细胞的增殖，具有很大的潜力作为抗肿瘤药物的开发利用。
2. 降血糖活性草灰菇多糖具有一定的降血糖活性，常用于糖尿病等代谢性疾病的治疗。
草灰菇多糖通过调节胰岛素受体、增加胰岛素分泌量、提高肝酶的活性等方式实现降血糖的作用。
3. 调节免疫活性草灰菇多糖不仅可提高人体的免疫力、调节免疫系统失调等问题，而且还具有促进生长、增重、抗休克、增加求偶和性多能的细胞繁殖等作用。
其中，FAP-1可促进巨噬细胞的吞噬能力，Β-Glucan则可激活免疫细胞，产生免疫效应，且更能迅速识别病原体并释放相应的免疫物质。
三、总结食用菌具有丰富的营养和药用价值，尤其是其中的多糖具有丰富的生物活性。
草灰菇多糖已经成为研究的热门之一，其提取分离及其生物活性的研究，将进一步拓展菌类资源的开发利用，为人类的健康做出积极的贡献。
两种食用菌多糖提取物的抗氧化活性比较研究
4种常用食用菌子实体多糖抗氧化活性的比较
4种常用食用菌子实体多糖抗氧化活性的比较解春艳;秦静;韩爽;段秀霞【摘要】[目的]比较4种子实体多糖对羟自由基、超氧阴离子自由基的清除作用及其总还原力等体外抗氧化活性.[方法]采用热水浸提法分别从香菇子实体、杏鲍菇子实体、蟹味菇子实体和茶树菇子实体中提取多糖,经纯化、干燥后,获得4种食用菌子实体多糖粉.对子实体多糖进行体外抗氧化活性研究,主要测定其总还原力、清除羟自由基及超氧阴离子自由基的能力.[结果]试验表明,4种常用食用菌子实体多糖的体外抗氧化活性均随着多糖浓度的增大而增强;其中,总还原力大小依次为香菇＞杏鲍菇＞茶树菇＞蟹味菇;对羟自由基清除能力的大小依次为:茶树菇＞香菇＞杏鲍菇＞蟹味菇;对超氧阴离子自由基清除能力的大小依次为:茶树菇＞杏鲍菇＞香菇＞蟹味菇.[结论]研究可为对食用菌资源的开发利用提供理论依据.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2014(000)035【总页数】3页(P12643-12645)【关键词】香菇;杏鲍菇;蟹味菇;茶树菇;抗氧化【作者】解春艳;秦静;韩爽;段秀霞【作者单位】廊坊师范学院生命科学院,河北廊坊065000;河北省高校食药用真菌资源与应用技术研发中心,河北廊坊065000;廊坊师范学院生命科学院,河北廊坊065000;廊坊师范学院生命科学院,河北廊坊065000;廊坊师范学院生命科学院,河北廊坊065000【正文语种】中文【中图分类】S464.1+2生物体在新陈代谢过程中不断地产生自由基。
通常情况下，自由基在机体内的生成和去除处于平衡状态，不会对身体造成严重损伤，但是当机体内的自由基过剩时，会引起如脂质、蛋白质和核酸等生物大分子的氧化损伤［1］，进而导致诸如衰老、癌症、心脑血管疾病及冠心病等多种疾病的发生，抗氧化剂对机体的保护作用，主要通过其抑制自由基的产生或直接清除自由基等来实现［2］。
食用菌是一种公认的安全微生物资源，其天然无毒、营养丰富，其中部分品种还可药食兼用。
食用菇多糖提取物体外抗氧化性能研究_林桂兰
华东理工大学学报(自然科学版)Journal of East Ch ina U niversity of Science and T echno logy (N atural Science Editi on )V o l .32N o.32006203收稿日期:2005203231作者简介:林桂兰(19812),女,硕士,研究方向:食品科学。
通讯联系人:许学书,E 2m ail :xueshu @ecust .edu .cn 文章编号:100623080(2006)0320278204食用菇多糖提取物体外抗氧化性能研究林桂兰1, 许学书1, 连文思2(1.华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,上海200237;2.雀巢公司上海研发中心,上海201812) 摘要:香菇和鸡腿菇分别经热水浸提,反复醇提、洗涤、真空干燥后得到两种多糖提取物。
通过多糖抗食用油脂的氧化作用、利用Fen ton 反应检测对羟基自由基(・OH )的清除作用、对邻苯三酚自氧化系统产生的超氧阴离子自由基(O 2-・)的清除作用以及在模拟胃液条件下清除NO 2-的作用,对这两种不同来源的食用真菌多糖的体外抗氧化活性进行了研究。
结果表明:两种多糖提取物都具有体外抗氧化性能,香菇多糖提取物的抗活性氧自由基能力和清除NO 2-的能力优于鸡腿菇多糖提取物。
关键词:食用菇;多糖提取物;抗氧化作用;自由基;NO 2-清除作用中图分类号:Q 593文献标识码:AAn tiox idan t Activ ity of Ed ible M ushroom Polysacchar ideExtracts in vitroL IN Gu i 2lan 1, X U X ue 2shu 1, L IA N W en 2si2(1.S ta te K ey L abora tory of B ioreactor E ng ineering ,E ast Ch ina U n iversity of S cience and T echnology ,S hang ha i 200237,Ch ina ;2.N estle R &D Cen tre ,S hang ha i 201812,Ch ina )Abstract :C rude po lysaccharide ex tracts w ere ob tained from sh iitake m u sh room (L en tinus ed od es )and shaggy m ane (Cop rinus co m a tus )th rough ho t w ater ex tracti on ,rep eat ethano l p reci p itating ,w ash ing and vacuum drying .T heir an ti ox idan t activities w ere investigated in fou r differen t assays in v itro ,nam ely ,inh ib iti on effect on edib le o ils ox idati on system ,scavenging activities of hydroxyl free radicals (・OH )gen 2erated by Fen ton reacti on and superox ide an i on (O 2-・)generated by pyrogallo l au tox idati on system ,andeli m inating of NO 2-in m i m ic gastric ju ice .R esu lts show that they bo th po ssess an ti ox idan t capacity inv itro.T he scavenging of reactive oxygen species and eli m inating activities of NO 2-by po lysaccharideex tracts from sh iitake m u sh room are stronger than that by po lysaccharide ex tracts from shaggy m ane .Key words :m u sh room s ;po lysaccharide ex tracts ;an ti ox idan t activity ;free radical ;eli m inating of NO 2- 生物体内的有氧代谢过程不断地产生自由基,当它的存在超出机体防护系统所具有的清除能力,就会直接或间接地引起蛋白质变性、酶失活、多糖降解、DNA 链断裂、生物膜结构损伤、细胞解体乃至机体病变和死亡[1]。
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第40卷第2期2017年6月南京师大学报（自然科学版）JOURNAL OF NANJING NORMAL UNIVERSITY(Natural Science Edition)Vol.40 No.2June,2017doi：10.3969/j.issn.l001-4616.2017.02.012几种食用菌多糖的提取与抗氧化性研究魏华，张娣，陆玲，陈福程(南京师范大学生命科学学院，江苏省微生物与功能基因组学重点实验室，江苏省微生物资源产业化工程技术研究中心，江苏南京210023)[摘要]采用热水浸提法分别提取香燕edoffo:)、木耳(/luricuiaria potyfric/ta)、银耳（rremeMa)、猴头燕 (/fericium eriraaceits)、茶树燕(4grocy6e 种食药用菌子实体中的水溶性多糖，子实体粉末在一定的料水比下热水浸提，胰蛋白酶法脱杂蛋白，乙醇沉淀得到精多糖.并采用苯酚-硫酸法测其糖含量，DPPH( 1，1-二 苯基-2-三硝基苯肼)法检测其抗氧化性.结果显示，茶树菇的精多糖得率最高，为4.81%,香菇其次，木耳最低；含糖量猴头菇最高，为53.9%，木耳最低;5种食药用菌子实体多糖均具抗氧化性、DPPH清除作用，茶树菇最强，浓度为1.13 mg/mL时清除率为50%,香菇次之，银耳最弱.[关键词]多糖，食用菌，分离纯化，总糖含量，抗氧化性[中图分类号]Q539 [文献标志码]A [文章编号]1001-4616(2017)02-0072-04Extraction, Purification and Antioxidant Activities of SeveralPolysaccharides from Edible and Medicinal FungiWei Hua,Zhang Di,Lu Ling,Chen Fucheng(School of Life Sciences,Jiangsu Key Laboratory for Microbes and Functional Genomics,Jiangsu Engineeringand Technology Research Center for Microbiology, Nanjing Normal University, Nanjing 210023 ,China)A bstract：Water soluble polysaccharide were extracted by hot water from five kinds of edible and medicinal fungus—Lentinus edodes ,Auricularia polytricha ,Tremella ,Hericium erinaceus ,Agrocybe chaxinggu.First, sporophore powder were extracted by hot water in certain ratio of material to water. And, hybridprotein were removed by trypsase. Then, refined polysaccharide were obtained by ethanol precipitation. The sugar content was tested by phenol sulfuric acid method.The antioxidant activity was detected by the DPPH( 1, l-two-2-three dinitrophenylhydrazine) method.Key words：polysaccharide,edible mushroom,isolation and purification,total sugar content,antioxidation科学研究表明，衰老、癌症、动脉粥硬化、糖尿病和关节炎诸多疾病都与过量自由基的产生相关，并且 环境污染、生活压力大等外界因素更会导致体内自由基浓度大大增加.而抗氧化活性物质以其能够直接 或间接清除自由基的能力而越来越受到各界重视.目前常用的抗氧化剂以化学合成抗氧化剂为多，如二 丁基羟基甲苯（B H T)、丁基羟基茴香醚（B H A)、没食子酸内酯（P G)等，副作用大.因此开发天然高效安全 的抗氧化物质具有重要的意义和前景.食用菌富含多种天然活性物质，其药效和安全性历经多年验证，是 开发新型高效活性化合物的理想来源.食药用菌多糖是由食药用菌中分离得出的由1〇个以上的单糖以糖苷键连接而成的高分子聚合物，是从 食药用菌子实体、菌丝体、发酵液中分离出的，在细胞的新陈代谢中起作用的一类活性物质.大量的实验表 明，食药用菌多糖具有抗氧化[1]、抗肿瘤[2]、降血糖[3]、降血脂[4]、免疫调节[5]等作用.有些已经在临床上广 泛应用[6_7].随着科研对食药用菌多糖功效的深人探究，食药用菌多糖势必会被应用于更多领域，尤其是制药 行业.深人研究食药用菌多糖的活性成分及其理化性质对于食药用菌多糖的应用有着非常积极的意义.本文对香菇、木耳、银耳、猴头菇、茶树菇子实体多糖进行了初步分离纯化，糖含量的测定和初步的抗收稿日期:2015-09-29.基金项目：江苏省“六大人才高峰”第八批高层次人才项目和国家基础科学人才培养基金（J1103507)、江苏省高校自然科学基金(16KJB180016).通讯联系人:陆玲，博士，教授，研究方向：真菌遗传学•E-mail :linglu@ —12—魏华，等:几种食用菌多糖的提取与抗氧化性研究氧化性的检测，旨在为进一步研究这几种食药用菌的提取纯化和药用价值提供理论依据，实验结果表明，几种食用菌多糖均具有较强的抗氧化性，其中茶树菇多糖最强，香菇多糖次之.1材料与方法1.1材料1.1.1 子实体子实体干品（大山合集团有限公司），粉碎后备用.1.1.2 试剂胰蛋白酶、无水乙醇、5%苯酚、浓硫酸、D P P H，实验过程中所用标准葡萄糖均为国产分析纯.1.1.3 主要仪器电子天平;722光栅分光光度计(上海精密科学仪器有限公司）；R E-52A A旋转蒸发仪(上海亚荣生化 仪器厂）；H H-S4数显恒温水浴锅（金坛市晶波实验仪器厂）；2-16P离心机（S a rto riu s).1.2方法1.2.1 子实体多糖的提取、分离和纯化1.2.1.1子实体粗多糖的提取分别将子实体置于烘箱中烘干，使用粉碎仪粉碎，过40目筛，将菇粉按比例加人双蒸水，猴头菇、香 菇、茶树菇料水比为1:20,银耳、木耳料水比为1:60. 90 °C恒温浸提3 h，抽滤除渣得到浸提液，浸提液浓 缩至原来体积的1/4至1/5,加人4倍体积的无水乙醇，充分混合，置4 °C冰箱中醇析过夜，5 000 r/m i n离 心10 m in，收集沉淀，冷冻干燥至恒重，即得粗多糖.1.2.1.2子实体粗多糖的纯化将子实体粗多糖配制成浓度为10 g/L的溶液，与0.01 g/m L的胰蛋白酶溶液混合，用N a H C03调节p H至8.1.混合液在37 °C水浴保温3 h，然后溶液中加人4倍体积的无水乙醇，充分混合，置4 °C醇析过 夜，5 000 r/m i n离心10 m in，收集沉淀，冷冻干燥至恒重即得精多糖.1.2.2 总糖含量的测定[8]总糖含量采用苯酚-硫酸法测定：以葡萄糖作为标准品，制作标准曲线并分别计算样品中的含糖 量.配制100 p g/m L的糖溶液，分别稀释成（0、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100)^§/〇^梯度浓度的糖 液.取1m L不同浓度的葡萄糖溶液，分别加人0.5 m L的5%苯酚溶液和2.5 m L 99.9%的浓硫酸，静置 20 m in后，在490 n m处测定吸光值.以糖质量（p g)为横坐标，490 n m处吸光值A为纵坐标，所得回归方 程为;r= 91.198*_2.436 9,相关系数《2= 0.991 9.将样品配置成合适的浓度，按上述步骤操作，根据吸光值计算样品中多糖的含量.1.2.3 多糖D P P H清除率的测定[9]D P P H是一种稳定的可长时间存在的自由基，其结构中含有3个苯环，其中1个N原子中有1个孤对 电子，其乙醇溶液且在517 m n附近有强烈的吸光反应，呈现为紫色.当D P P H溶液中加人自由基消除剂时，N原子中的孤对电子会被配对，形成稳定的分子，溶液的染色将由紫色向淡黄色变化，导致其在 517 m n处的吸光值减小，减小的程度与自由基被清除的程度表现出一定的定量关系.称取9.858 m g D P P H，加95%乙醇溶解，然后定容至250 m L，制备浓度为0.1 m r n d/L D P P H溶液.反 应体系中加人2 m L D P P H，再加人2 m L不同浓度（0.1，0.2,0.4,0.8，1.6,3.2,6.4)〇18/〇^的多糖样品溶液，在暗处混合、室温下反应30 m in，测定在517 m n处的吸光值.每个浓度梯度做3个平行样，取平均值.按下 式计算D P P H•清除率：D P P H •清除率=[1-(4-4。
）/〇1〇〇%-式中，4为加人样品溶液后的吸光度;4。
为样品溶液本底的吸光度;疋为空白对照液的吸光度.2结果与分析2.1子实体粗多糖提取通过热水浸提法得到几种食用菌子实体粗多糖，进而除蛋白得到精多糖，并分别计算其质量得率—73 —南京师大学报（自然科学版)第4〇卷第2期（2〇r7年)(表1)，测定其总糖含量(表2).表1不同子实体中多糖得率Table 1 Polysaccharide yield from fruiting body of several edible and medicinal fungis得率猴头菇香菇银耳木耳S树齋粗麵7.0138.625 4.711 3.61014.250.靜繼萍.1 3.940 4.250 3.185 3.100 4.810表2不同子实体提取多糖的总糖含量Table 2 Contents of polysaccharide from fruiting body of several edible and medicinal fungis总糖含量猴头菇香菇银耳木耳茶树翁粗多糖（pg/m L)31.81432.22442.63025.96018.280精多糖（pg/m L)53.91044.65236.53512.62939.390.因为真菌本身的成分和性质的不同样采用热水浸提，其多糖的得率相叢较大.由表i可知，粗多 糖的得率大小为:荼树菇潘菇> 猴头菇 > 银耳 >木氧精多糖得率排序相同.茶树菇为低糖高蜜白的真菌, 故热水浸提后，所得粗多糖的糖俞量最少（18.28%).木耳和银耳多糖浸提过程中料液粘度较蠢，使得木茸 和银耳多糖的得率较低,推测是H为其中含有果胶等粘度较蠢的物质，从而影响了多糖得率.针对此类粘 度较貪的多糖_裏考.虑改进浸辑艺以提育得率.苯酚硫酸法测将猴头菇中的精多糖的糖含鸶比较高，香截次之，茶树菇和银耳相近，木尊晕低.由表2可知，猴头菇、香藉和茶树薪中，粗多糖的糖含達明显低于精多糖的糖含遽，表明胰蛋白梅去除 的效果比较好，纯化的比较成劝;而银專和木耳厕梟精多糖的糖含量低于粗多糖，可能是面为在用胰蛋& 酶去除杂蛋白的过程中，随着蛋&的洗脱，其中的多糖也有所流失,导致了糖成分的减少、糖含量曲降低.同样的在去除杂蛋t e S，茶树藤精多糖的糖含量低于猴头菇和香菇，但是輝警银耳和木尾2.2多糖对DPPH的清除率利用物质对自由基的清除率来表征其抗氧化作用是苜前普遍采用的方法.由■ 1可知，木耳子实体多糖对DPPH的清除率随着搪质量浓度的升高而升高，但是在糖质量浓度为 6.4 mg/mL时，fljj显可观察到反应体系有沉淀出现，故吸光值明显偏大，不再准确地描述DPPH的清除作 用；木耳子实体精多糖在浓度为3.2 mg/mL时，对DPPH的清除率接近SO%,可见作用比较明显■木耳子 实体粗多糖在浓度为2.34 时，对DPPH的清除率为50%.由图2可知，银耳粗多糖的清除作用总体随着糠质綦浓度的升高而升离,精多糖的清除作用总体随着 糖质量浓度的升高而降低，但是在0.2 rag/m l〜0.8 rag/mL的浓度葙围内，随着糖虜釐浓度的升高，粗多糖 的清餘作用逐渐减小，精多糖的清除作用逐渐増大.银耳多糖的两条清除曲线呈轴对称.银耳子实体粗多 糖在浓度为6.4 mg/贝L时，对DPPH的清除率接近42队由B 3可知，茶树菇多糖的清除作用％糖质量浓度璧相关，在0.4 mg/mL~ 1.6 mg/mL的高浓度范 围内表现的最为明;1,茶树菇子实体精多糖在浓度为I.6 mg/mL时，对DPPH的清除率为64.6%.当精多糖质量浓度为1.13 mg/mL时，茶树菇子实体精多糖对DPPH的清除率为50%.由图4可知，香截多糖的请除作勝_糖质繼度達JE相关，且在糖质.釐浓度为0.8 m g/m L之艮两条清除曲线基本乎行.由_中也可以看出，香菇子实体的粗多糖的清除作用萌显强于精多糖,可能是因为粗 —74 —魏华，等:几种食用菌多糖的提取与抗氧化性研究糖质量浓度/(mg/mL)图4香菇子实体中多糖对DPPH 的清除率Fig. 4 DPPH scavenging percentage of Lentinus edodes 0 1 2 3 4 5 6 7糖质量浓度/(mg/mL)图S 猴头菇子实体中精多糖对DPPH 的清除率Fig. 5 DPPH scavenging percentage of Hericium erinaceus糖质量浓度/(mg/mL)图3荼树菇子实体中多糖对DPPH 的清除率 Fig. 3 DPPH scavenging percentage of Agrocybe chaxinggu由图5可知，猴头菇的精多糖对DPPH 的清除乘在 0.8 mg /inX ■的浓度截.围内，■糖质量浓_度最IH 相关.，猴头菇子实体精多糖在浓度为6.4 mg /m L 时， 对DPPH 的清除率为86.7%,清除作用明显，暖精多糖 质着浓度为4.1 mg /m L 时.，猴头猶警实体精_：多糖对 DPPH 的清除率为50%.依据子实体精多糖对D P P H 的清除率为50%时的多糖质量浓度得到精多糖的清除作用的大小比较:茶树菇> 香菇 > 木耳 > 猴头菇 > 银耳3结论真菌多糖不仅具有很好的营养价值，还有重要的医药价值和经济价值，作为一类来源广、无副作用而 效率謂的保健食品功能西子•白益受到人们的青踩，其研究越来越受到科研的重视.本实验采用水提醇沉 的方法从猴头菇、香菇、银耳、木耳&茶树菇5种食药用菌的乎实体中提取、纯化分别得到粗多糖和精多 糖.真菌本身的性质和含奮的墓异,使锝各自的分离纯化方法不一，且多糖得率相差较大.茶树菇乎实体 的精多糖得率最高，为4.81%;香藉其次;木耳最低，只有3.S 前提取食药用菌子实体多糖的方法很多，不同的提取方法各有利弊，应根据提取蠢;的进行适_ 择;•齊根据材料的性眞、提取成本设备等选择舍遒的提取方法•本文釆用的传统的热水稿提祛:薦提 取多糖的最常用方法，操作简氧但耗时长、效率低，而利用复合酶解法、微波辅助法、超声波辅助法等可以 贏著提高提取率、缩短提取时间.苯潘硫酸法测多糖的总糖含量,除了木耳精多糖的糖含量为12.629%之外，其他4种材料的精多糖的 糖含量壤在40%~54%，其中以猴头菇多糖的糖含量较为53.9%.采用DPPH 法定性地检测所得的几 种多糖是_有抗氧化性.实验数据及分析初步表明，猴头菇、香菇、银耳、木耳、茶树菇5种食药用菌的 子实体多糖均嘉有抗氧化性，其中，以茶树菇精多糖的清除作用最强，爾精多糖的糖质鸶浓度为1.13 ra ^mL 时，茶树菇子实体精多搪对DPPH 的清除率为50%4香藉次之;银耳精多糖的清除作用最弱•由于食药用菌多糖的特殊的、天然的、高效的活性作用[1°\建立高效的、经济的多糖提取方法具有重 要的现实意义;同样的，提高子实体多糖的纯度，以得到均一性多糖弁清楚其理化性质才更加有利予食药 甩菌多糖的深度开发利用.[参考文献][Q 路薪讓*鮮谦.DPPH :检测碱提香鸯子蘭本多糖的擁化性簡研究[辽雜农业科學，2010,38f :18).:9 519-9 520. [2] ■小私瘳姻摄蠡多糖化學&分及讀理作M 的研;J ]. 食用肅,_2007 (: 1) t3 -6.(下转第88页）—75 —多糖中的I 些杂质也具有抗氧化性，也可能是在胰蛋白酶去除杂蛋S 的过程中,一些有效成分损失，使得 清除率下降-3精多糖质量浓度为1.6 mg /mL 时,香菇子实体精多糖对DPPH 的清除率为50%.8642L 0.0.0.0.1&Q南京师大学报（自然科学版)第40卷第2期（2017年)HIKINO H,ISHIYAMA M, SUZUKI Y, et al. Methaniems of hypoglycemic activity of ganoderma B：aglycan of ganoderma lucidum fruit bodies[J]. Planta Medica, 1989(55) ：423.周国华，于国萍.黑木耳多糖降血脂作用的研究[J ].现代食品科技，2005,21(1) :46-48.LEI L S,LIN Z B. Effect of ganoderma polysaccharides on T cell subpopulations and production of interieukin 2 in mixed lymphonyte[ J ]. Acta Pharm Sin, 1992,27(5) ：331-334.王斌，连宾.食药用真菌多糖的研究与应[J ].食品与机械，2005:96-99.周国英，兰国红，何小燕.食用菌多糖研究开发进展[J ].实用预防医学，2001,11(1) :203-204.DUBOIS M,GILLES K A,HAMILTON J K,et al. Colorimetric method for determination of sugars and related substances[ J ]. Anal Chem, 1956(28) ：35〇-356.YAMAGUCHI T,TAKAMURA H. Hplc method for evaluation of the free radical-scavenging activity of foods by using 1,1-diphenyl- 2-piciylhydrazyl[ J ]. 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