蛋白质水解度测定方法综述
蛋白质水解度的简易测定方法
蛋白质水解度的简易测定方法蛋白质水解度是指蛋白质在特定条件下被水解的程度。
测定蛋白质水解度的主要方法之一是采用“肽键长度”测定法。
以下是测定蛋白质水解度的简易方法及步骤：一、准备相关试剂和器材1.蛋白质溶液：你需要准备一定浓度的蛋白质溶液，以便进行后续的测定。
2.氢氧化钠溶液：用于中和蛋白质溶液中的酸。
3.茚三酮溶液：用于与肽键发生反应，生成紫色产物。
4.醋酸溶液：用于调节溶液的pH值。
5.滴定管和滴定剂：用于滴定蛋白质溶液中的游离氨基。
二、测定步骤1.调节溶液的pH值：用醋酸溶液调节蛋白质溶液的pH值至4.5～5.0之间。
这个pH范围是蛋白质中肽键与茚三酮反应的最佳条件。
2.加入茚三酮：向蛋白质溶液中加入一定量的茚三酮溶液，充分混合后静置10～15分钟。
3.加热：将混合液加热至100℃左右，保持加热状态数分钟，使反应完全。
4.中和：待混合液冷却后，用氢氧化钠溶液调节pH值至9～10之间，使混合液呈现碱性。
此时，未水解的氨基与茚三酮反应生成的产物会转变为黄色。
5.滴定：使用滴定管，用已知浓度的盐酸滴定混合液中的游离氨基，直至颜色变化为粉红色。
这个过程需要耗费一定的时间。
6.计算肽键长度：通过滴定所消耗的盐酸浓度和体积，可以计算出混合液中游离氨基的浓度。
再根据蛋白质中氨基酸的结构通式，可以计算出肽键长度。
三、注意事项1.在调节pH值时，要注意细致地使用精密的pH试纸或酸度计进行测量，以保证结果的准确性。
2.在加入茚三酮后，要充分混合并静置一段时间，以确保反应完全。
3.在加热过程中，要确保混合液受热均匀，并保持适当的加热时间以确保反应完全。
4.在滴定过程中，要保证滴定管的清洁度，避免因滴定剂污染而影响结果的准确性。
同时，需要多次摇晃混合液，以确保滴定剂与游离氨基充分反应。
5.在计算肽键长度时，需要考虑到蛋白质中不同氨基酸的构象和结构通式。
同时，还要注意温度和离子强度等因素对肽键长度的影响。
综上所述，测定蛋白质水解度的简易方法是可行的。
蛋白质水解度的简易测定方法_袁斌
文章编号:10083464(2002)02011303蛋白质水解度的简易测定方法袁斌1,吕桂善2,刘小玲2(1深圳市成业冷冻有限公司,广东深圳518019;2广西大学生物技术与糖业工程学院,广西南宁530004)摘要:介绍了一种比较简单可行的蛋白质水解度的测定方法,该方法基于国外通用的pH ST A T 法,不需要特别的仪器,化学试剂耗量少,测定结果可靠,便于实验室和工业化生产使用。
关键词:蛋白质;水解度;pH ST A T 法中图分类号:T Q 936.1 文献标识码:AThe simple method of determining for the degree ofhydrolysis of proteinsYU ANG Bin 1,LU Gui shan 2,LIU Xiao ling2(1Shenzhen Cheng ye Freeze Cor por ation Limited,Shenzhen 518019,China;2Biotechnolog y and Sug ar Engineering Colleg e ,Guangx i U niv .,Nanning 530004,China )Abstract :A simple and w orkable method ,w hich w as based o n pH STAT method ,fo r deter-mining the deg ree of hydr olysis o f pro tein ,was intr oduced in the present paper.This metho d can be used in lab and food industry w ith g ood results and little reagents consumptions.Key words :pro tein;deg ree of hydr olysis;pH ST AT Method蛋白质是人体必不可少的营养素,在人体的代谢和生长过程中起着十分重要的作用。
蛋白质水解物水解度的测定
蛋白质水解物水解度的测定
蛋白质水解物水解度是指蛋白质的分解能力，反映其特定化学和物理状态的能力。
它是饮食营养研究，氨基酸、肽链分离研究，腺体功能研究以及蛋白质工程及其他各种研究的重要指标。
因此，测定蛋白质水解物水解度对科学技术和医药卫生研究有着重要的意义。
蛋白质水解物水解度的测定主要是利用蛋白质的有机化学性质，用吡咯烷醇法、酸碱回流法或乙溴脩乙腈法等有效分析方法进行测定，因而在分析中不仅要测定蛋白质溶液中含有量有多少，还要根据技术参数判断抽样物质的水解情况。
吡咯烷醇法测定蛋白质水解物水解度通常是先用乙酸乙酯将抽取物中粗品脂肪
酯化，然后用硫酸银电泳池分别测定溶液中的可混溶蛋白和不混溶蛋白，最后利用其峰图的光谱图所显示的结论，来评定蛋白质水解物的水解度。
酸碱回流法测定蛋白质水解物水解度，主要是用恒定pH值的溶液将抽取物溶解，通过混合溶液中可溶蛋白和不溶蛋白，在紫外分光光度计上测定混合液中可溶性蛋白含量，来评价蛋白质水解物的水解度。
乙溴脩乙腈法测定蛋白质水解物水解度，主要是先使抽取物经过乙溴脩乙腈处理，将不溶性蛋白和其有机混合物分流，再用阴离子交换树脂将其树脂柱状分离，最后通过吸光度光谱测定乙溴脩乙腈处理后，抽样物质的可混溶蛋白含量，以评定其水解度。
以上是蛋白质水解质水解度测定方法，它是检测蛋白质结构及其分解情况的有
效方法，是蛋白质工程与医药生物技术研究的重要参考。
因此，正确准确的测定技术必须被正确使用，以确保研究成果的可靠性。
蛋白质水解度的测定
收稿日期:2000—05—10文章编号:1003—7969(2000)06—0176—02蛋白质水解度的测定郭兴凤(郑州粮食学院食品工程系,450052郑州市嵩山南路140号;作者:女,35岁,工程师) 摘要:介绍了一种新的测定蛋白质水解度的方法,该方法利用待测蛋白样品的完全水解液做为茚三酮比色的标准样品测定蛋白质的水解度,并和常用的几种测定水解度的方法进行了比较。
该种方法消除了由一种氨基酸做为对照样品所带来的测定误差,是一种简单易行的测定水解度的方法。
关键词:蛋白质;水解度;测定中图分类号:T Q64519+9 文献标识码:A 水解度是指蛋白质分子中由于生物的或化学的水解而断裂的肽键占蛋白质分子中总肽键的比例。
测定蛋白质水解度的方法很多,常用的方法有三氯乙酸沉淀法、三硝基苯磺酸法[1]、茚三酮比色法、甲醛滴定法[2]、pH -stat [3]法等。
甲醛滴定法快速简单,但采用此法测定结果低于氨基酸理论含量[2];茚三酮比色法由于采用的是单一氨基酸做标准,而不同的氨基酸对茚三酮的呈色度不同,因此采用茚三酮比色法结果也有偏差[2];三硝基苯磺酸法测定的结果相对较准确,但由于所用的试剂不易获得且分析方法非常繁杂,通常情况下采用此种方法的还不太多;现在有许多研究采用pH -stat 法,这种方法也有误差,在工业生产中可用于监控水解终点,但在研究中则需要用其他的方法进行校正。
本文介绍一种新的测定水解度的方法,本方法采用茚三酮比色法,利用待水解原料的完全水解液作为标准,消除了由于不同氨基酸与茚三酮结合产物的呈色度不同对测定结果造成的误差,本方法是依据Qin -Y un Chen [4]的方法和现行的方法进行改进,使测定结果更接近真实值。
1 原料和试剂111 主要仪器751分光光度计,上海。
112 试剂11211 茚三酮显色液:2g 茚三酮加入100ml 蒸馏水,溶解,放棕色瓶中保存,应每次使用前配制。
11212 pH8缓冲溶液:012m olNa 2HPO 49417ml 与012m olNaH 2PO 4513ml 合并,混匀。
水解度的测定方法
水解度的测定方法1. 直接观察法直接观察法是一种简单直观的测定水解度的方法。
该方法适用于一些易溶于水且水解反应速度较慢的物质。
首先，将待测物质加入一定量的水中，搅拌均匀。
然后，观察物质是否完全溶解，以及是否发生水解反应产生沉淀。
如果物质完全溶解且无沉淀生成，则说明水解度很高；如果物质未完全溶解或有沉淀生成，则说明水解度较低。
2. 重量法重量法是一种常用的测定水解度的方法。
该方法适用于水解反应速度较快的物质。
首先，将待测物质加入一定量的水中，搅拌均匀。
然后，将溶液过滤，将滤液和沉淀分别称重。
根据溶液中物质的质量和总质量，可以计算出溶解的百分比，即水解度。
3. 比色法比色法是一种常用的测定水解度的方法。
该方法适用于水解产物具有显色性质的物质。
首先，将待测物质加入一定量的水中，搅拌均匀。
然后，用分光光度计测定溶液的吸光度。
根据溶液吸光度与物质浓度之间的关系，可以计算出物质的浓度，从而得到水解度。
4. pH法pH法是一种常用的测定水解度的方法。
该方法适用于水解反应与溶液的酸碱性质相关的物质。
首先，将待测物质加入一定量的水中，搅拌均匀。
然后，用pH计测定溶液的酸碱性。
根据溶液的pH值，可以推断出水解反应的进行程度，从而得到水解度。
5. 离子选择性电极法离子选择性电极法是一种准确测定水解度的方法。
该方法适用于水解产物能够与特定离子发生反应的物质。
首先，将待测物质加入一定量的水中，搅拌均匀。
然后，用离子选择性电极测定溶液中特定离子的浓度。
根据离子浓度与物质浓度之间的关系，可以计算出物质的浓度，从而得到水解度。
总结起来，水解度的测定方法包括直接观察法、重量法、比色法、pH法和离子选择性电极法等。
不同的方法适用于不同的物质和实验条件。
在进行测定时，需要根据具体情况选择合适的方法，并注意实验操作的准确性和数据的可靠性。
水解度的测定对于了解物质的溶解性质和反应活性具有重要意义，能够为化学研究和工业生产提供有价值的信息。
蛋白水解度测定方法
蛋白水解度测定方法蛋白水解度（Protein Hydrolysis）是指蛋白质在特定的水解条件下被分解的程度。
测定蛋白水解度的方法有很多种，以下是其中几种常见的方法：1.肽图分析法（Peptide Mapping）肽图分析法是一种通过蛋白质在特定条件下水解得到的肽片段的分离和鉴定，来推断蛋白质序列和结构信息的方法。
该方法的原理是，不同的肽片段与固定相的结合能力不同，从而可以在色谱柱上分离出不同的肽片段。
通过对这些肽片段的分析，可以得到蛋白质的一级结构信息，进而计算出蛋白质的水解度。
2.游离氨基含量法（Free Amino Acid Content）游离氨基含量法是通过测定蛋白质水解液中游离氨基的含量，来计算蛋白质的水解度。
该方法的基本原理是，蛋白质水解后生成的游离氨基酸与某些特定的试剂反应，生成有色产物，通过测定有色产物的吸光度，可以得出游离氨基酸的含量。
根据游离氨基酸的含量，可以计算出蛋白质的水解度。
3.肽谱法（Peptide Mass Spectrometry）肽谱法是通过分析蛋白质水解液中肽片段的质量，来推断蛋白质的序列和结构信息。
该方法的基本原理是，不同的肽片段在质谱仪中碎裂后产生不同的离子峰，通过对这些离子峰的分析，可以得出肽片段的质量。
根据肽片段的质量，可以推断出蛋白质的序列和结构信息，进而计算出蛋白质的水解度。
4.生物化学法（Biochemical Methods）生物化学法是通过研究蛋白质在生物体内的代谢过程，来推断蛋白质的水解度。
该方法的基本原理是，蛋白质在生物体内的代谢过程受到许多因素的影响，如酶的活性、底物的浓度、代谢途径等。
通过对这些影响因素的研究，可以推断出蛋白质的水解程度。
5.免疫学法（Immunological Methods）免疫学法是通过检测蛋白质在生物体内的免疫原性，来推断蛋白质的水解度。
该方法的基本原理是，蛋白质在生物体内的免疫原性与其分子量、构象等因素有关。
蛋白水解产物 肽分子量测定
蛋白水解产物肽分子量测定一、引言蛋白质是生物体内的一种重要大分子，具有多种生物学功能。
蛋白质的水解产物包括肽和氨基酸，其中肽具有多种生物活性。
因此，肽分子量的测定对于理解蛋白质的功能和作用机制具有重要意义。
随着生物技术的不断发展，肽分子量的测定方法也在不断改进和完善。
本文将就肽分子量测定的方法及应用进行综述。
二、肽分子量测定的方法1.化学法化学法是最早用于测定肽分子量的方法，包括氨基酸分析仪法和凝胶电泳法。
氨基酸分析仪法是通过将肽链水解为单个氨基酸，然后根据其组成和浓度计算肽分子量。
该方法具有较高的准确度，但操作繁琐，需要较长时间。
凝胶电泳法是将肽混合物在凝胶电泳中分离，根据迁移率和标准分子量进行比较，从而计算出肽分子量。
该方法操作简便，但准确度较低。
2.物理法物理法包括质谱法和核磁共振波谱法。
质谱法是通过将肽分子置于质谱仪中，测量其离子质量和丰度，从而计算出肽分子量。
该方法具有高精度和快速的特点，是当前常用的测定方法之一。
核磁共振波谱法是通过测量肽分子中氢原子核的自旋磁矩，从而推算出分子量。
该方法需要特殊的仪器和复杂的样品处理过程，应用较少。
3.酶法酶法是通过特定的酶将肽链水解为单个氨基酸，然后利用氨基酸分析仪法或质谱法测定肽分子量。
该方法具有高精度和操作简便的特点，但需要特定的酶和仪器设备。
三、肽分子量测定的应用1.蛋白质组学研究蛋白质组学是研究蛋白质表达、功能和调控的学科。
在蛋白质组学研究中，肽分子量的测定对于蛋白质的鉴定和注释具有重要意义。
通过将肽分子量与数据库中的蛋白质序列进行比对，可以确定蛋白质的组成和结构，为进一步研究蛋白质的功能和作用机制提供基础。
2.药物研发药物研发中，肽分子常被用作药物候选物或药物载体。
通过肽分子量的测定，可以了解药物的结构和性质，为药物的设计和优化提供依据。
此外，肽分子量的测定还可以用于药物质量控制和生产过程中的监控，保证药物的安全性和有效性。
3.生物标记物检测生物标记物是指在生物体内表达异常的物质，常用于疾病的诊断和治疗监测。
蛋白质水解度测定方法综述
使用荧光光度计在吸收波长为 ３４０ ｎｍ 条件下测
法，采用本方法测定蛋白质水解度时，不需要经典的 定衍生物的荧光度。水解度的计算公式：
ｐＨ－ ｓｔａｔｅ 法那样，对反应体系的 ｐＨ 值进行在线控制，
ＤＨ＝１００ｎ／Ｎ
而只需在水解结束后将反应体系的 ｐＨ 调至 ７．０，并记
式中：ｎ 代表牛乳蛋白水解后肽键的平均数，Ｎ 代
原料大豆中游离氨基酸进行测定，计算如下：
４ 小结
ＤＨ＝ 水解蛋白质的７－．８（ＮＨｍ２ｍ含ｏｌ量／ｇ）－ ０．３３（ｍｍｏｌ／ｇ）×１００ ％
其中：０．３３ 是原料大豆样品中游离氨基含量，可根 据自己样品测定值代入。
但是由于不同氨基酸和水合茚三酮显色不同，对 测量结果有部分偏差，例如脯氨酸和羟脯氨酸与茚三 酮反应产生黄色物质，因其 α－ 氨基被取代，所以产生 不同的衍生物。郭兴凤［１３］利用待水解原料的完全水解 液作为标准， 消除了由于不同氨基酸与茚三酮结合产
蛋白质由不同的氨基酸通过肽键相连所组成，在 这些氨基酸中一部分可以由人体自己合成，称为非必 需氨基酸；而另外约有八种氨基酸必需由食物供给， 称为必需氨基酸。食物中如含有全部的必需氨基酸， 而且数量又多，这种食物蛋白质营养价值就高。但是， 存在一个问题，就是如何使蛋白质或氨基酸更有利于 人体的吸收，因此国内外通过对此进行大量的研究表 明：蛋白质通过水解，水解为二肽或三肽的产物在人 体内要比自由氨基酸易于吸收，比没有水解的蛋白质 更易于吸收［１］。因此在用不同的蛋白质酶对蛋白质进 行水解时，必须要对水解度进行测定。
在水解过程中，当肽键断裂后，就会有一个新的 － ＣＯＯＨ 和 － ＮＨ２ 形成，因此，水解肽键的数，就可以根 据水解后测定新形成的末端 － ＣＯＯＨ 或 － ＮＨ２ 基团的 量确定。
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蛋白质水解度测定方法综述
徐英操;刘春红
【期刊名称】《食品研究与开发》
【年(卷),期】2007(028)007
【摘要】对目前国内外常用的蛋白质水解度测定方法进行了综述,其中pH-state 方法是通过滴定水解过程中释放的质子测定DH;OPA、TNBSCLOt内常用的水合茚三酮和甲醛等测定方法是利用游离氨基的反应测定DH.
【总页数】4页(P173-176)
【作者】徐英操;刘春红
【作者单位】东北农业大学理学院应用化学系,黑龙江,哈尔滨,150030;东北农业大学理学院应用化学系,黑龙江,哈尔滨,150030
【正文语种】中文
【中图分类】TS2
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5.氨基酸配方及蛋白质水解配方特殊医学用途婴儿配方食品中氯测定方法的比较研究 [J], 田洪芸; 李恒; 任雪梅; 张海红; 王文特; 傅俊青; 吴鸿敏
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