中谱红色谱柱
色谱条件的选择
柱温：室温
检测器：紫外（260nm）
色谱峰：1. 胞苷
2.尿苷
3.鸟苷
4.胸苷
5.腺苷
分析条件：
色谱柱：ODS柱 （15cm× 6.0mm） （经甲烷基化处理的ODS柱）
流动相：100mM磷酸缓冲液和 200mM高氯酸钠溶液 梯度洗脱
流速：1.5ml/min
柱温：50℃
检测器：紫外（260nm）
色谱峰：1.未知峰
2.胞嘧啶
3.尿嘧啶
4.鸟嘌呤
5.腺嘌呤
6.胞苷
7.尿苷
8.胸腺激素
9.腺苷
10.鸟苷
11.胸苷
核酸
色谱柱选择方法
糖的分离
★糖的种类很多，可分为单糖（木糖，阿拉伯糖；葡萄糖，果糖，半乳 糖）、二糖（蔗糖，麦芽糖）、低聚糖和多糖。
★单糖和二糖可以使用氨基柱分离（分离异构体效果不很好），还可以 使用阴离子交换柱分离，缺点是分离时间较长。
色谱柱选择方法
肽和蛋白质
凝胶过滤：根据分子量的大小差别进行分离 离子交换：根据分子所带的电荷的差别进行分离 反相和疏水色谱：根据分子的疏水性质的差别进行分离 亲和色谱：根据复合的相互作用的差别进行分离
蛋白质
分析条件：
色谱柱：Shim-pak Diol－300 （50cm× 7.9mm） （二醇基水溶性凝胶柱，
进行洗脱；
分析条件：
核酸
色谱柱：Shim-pak WAX－1
（5cm× 4.0mm）
（叔氨基阴离子交换柱，
用于分析核苷酸）
流动相：20mM磷酸缓冲液（ pH＝7 ）
480mM磷酸缓冲液（ pH＝6.8 ）
梯度洗脱
流速：1.0ml/min
色谱柱(气相)日常维护
偏离或漂移是由于下列原因产生的
温度 流速
确保在两次进样之间有足够的平衡时间 检查体系是否有漏
主要检查进样口部分 柱前
前次色谱过程中的残余的低挥发性流出物
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基线漂移
漂移
正确地使用高纯度的载气 色谱柱老化 色谱柱的最高使用温度不能超过该柱所规定的最高温度极限 进样口温度与检测器温度要高于色谱柱的最高使用温度
载气不纯
使用高纯度的载气及高质量的气体净化器，并定期更换
载气中杂质与固定相发生反应
若使用分离/无分流进样口
进样口底部的密封垫可能会与样品反应
使用金制进口密封垫
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柱故障的诊断与排除
附加峰 (第二页)
即使进纯样，也会出现附加峰 做一次空运行--
如果这些峰还存在，不是由样品产生的，按照前面介绍的方法检查 进样口温度过热，可以导致样品组分的降解 每次将进样口降低20℃， 观察这些峰是否还出现
进样口温度太低
高沸点的化合物不能很快地气化 增加进样口温度
进样口温度太高
许多挥发性的组分在进样口降解 降低进样口温度
进样口被污染
进样口的污染物与样品发生反应 清洗进样口，更换衬管和进样垫
衬管有活性
使用脱活的衬管
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柱故障的诊断与排除
峰型不好
柱过载
将样品稀释10倍重新进样
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柱故障的诊断与排除
附加峰 (第一页)
有两种类型的附加峰 1. 即使不进样也会出现的峰 (鬼峰) ，并且在色谱分析过程中也会出现 在真实的峰之中 2. 由样品产生的附加峰
常用色谱柱简介
常用色谱柱简介气相色谱毛细柱（键合，聚二甲基硅氧烷）HP-1，DB-1，P-1，CP-SIL5CB，Ultra-1,007-1,RTx-1,AT-1类似固定相：SE-30，SP-2100，OV-1，OV-101,使用温度：-60℃-320℃应用范围：烷烃，芳烃，多环芳烃，醇，酚，酮，酯，醛，胺，卤代烃，吡啶，糖衍生物，氨基酸衍生物，维生素衍生物，镇痛药，农药，溶剂，胆固SPB-50型中等极性柱醇，香料，咖啡，食品添加剂等。
(键合, 50%二苯基,50%二甲基聚硅氧烷)对照品牌：HP-50，HP-17，DB-17，RTx-50，AT-50 SPB-5型弱极性柱类似固定相：OV-17, SP-2250,使用温度：30℃-310℃（键合，5%苯基，95%甲基聚硅氧烷）应用范围：烷烃，低沸点芳烃，多环芳烃，醇，甘对照品牌：HP-5，DB-5，BP-5，CP-SIL 8CB，油三酸酯，喹啉，卤素化合物，香料，农药，酯，Ultra-2, ,RTx-5,AT-5镇痛药，除草剂等。
类似固定相：SE-54，SE-52，OV-73 使用温度：-60℃-320℃PTE-5，PTE-5QTM型弱极性柱应用范围：烷基苯，多环芳烃，醇，酚，酮，脂肪(MS专用柱,键合,5%苯基,95%甲基聚硅氧烷)酸酯，苯二甲酸酯，硝基芳烃，芳胺，烷基胺，联对照品牌：HP-5 MS，DB-5 MS, DB-5.625，XTI-5，苯胺，卤代烃，多氯联苯，，糖类衍生物，维生素衍BPX625，半挥发污染物分析柱（US EPA方法525，生物，有机酸，镇痛药，农药，抗组胺药，溶剂，625.5，625）生物碱，防腐剂，香料等。
类似固定相：SE-54,SE-52 使用温度：-60℃-320℃应用范围：多氯联苯，胺，有机磷，有机氯农药，SUPELCOWAX 10型极性柱含氯除草剂，酚，苯胺，香料等。
(键合,聚乙二醇二万)对照品牌：HP-Wax，DB-Wax，BP-20，CP-Wax 52CB，SPB-1701型中等极性柱HP-INNO Wax,AT-Wax(键合, 14%氰丙基,86%二甲基聚硅氧烷)类似固定相：PEG-20M, CARBOWAX-20M,使用温对照品牌：HP-1701，DB-1701，RTx-1701，AT-1701，度：35℃-280℃BP-10，CPSil19CB应用范围：低沸点芳烃，醇，酮，酸，酯，醛，醚，类似固定相：OV-1701,SP-2250 使用温度：室温-280乙二醇，丙二醇，甘油，吡啶，胺，亚硝胺，卤代℃烃，胆汁酸衍生物，冰片，薄荷，精油，香料，酒，应用范围：醇，卤素化合物，有机氯农药，酸性药苯乙烯，茶，溶剂等。
色谱柱
第5章色谱柱5-1引言色谱柱是HPLC分离过程的核心。
一支稳定、高效的色谱柱对建立普适性强、重现性好的方法是必不可少的。
不同供应商的色谱柱，甚至来源相同、认为完全一样的色谱柱之间，可能也会存在很大差异，尤其是不同的色谱柱在塔板数、谱峰的对称性、保留值、峰间距以及使用寿命方面会有所不同，而这些不同对建立理想的HPLC方法会产生很大影响。
本章中，我们将提供一些有关色谱柱担体、固定相及柱填料的信息供读者参考；讨论色谱柱应用中的问题，以及适宜的解决方案，以确保方法普适性强、重现性好，同时也讨论了在常规HPLC分析中，为获得最佳结果，一支“好”色谱柱的重要意义。
选择HPLC柱时，大多数使用者都认为柱间的重现性是方法建立中极为重要的因素。
色谱工作者不愿在校准了一具体系统后，又不得不为一新色谱柱再重新建立HPLC方法。
一些生产厂能在一定程度上保证柱性能指标的重现性，如色谱柱塔板数（N），特定样品与条件下的选择性，反压（压力降），特定测试溶质的保留值（k）。
因此，对许多使用者来说，生产优质产品的厂家的信誉很重要。
价格对一些用户是重要的因素，但上述讨论的其它因素在建立一个普适性强、令人满意的方法时往往更加重要。
色谱柱价格在建立和应用普适性强、可靠的HPLC方法的整个费用中，仅占一小部分（见5-3节）。
灌注色谱填料包含孔径达4000~8000A0（艾）的贯穿孔，而且在这些贯穿孔网络中还有较小的内联孔（如300~1000A0（艾））。
在高流速时，溶质可通过对流和扩散的共同作用，进入（并离开）该孔结构。
其效果减少了峰展宽，所以大的多孔微粒在柱效方面与小微粒相当，但压力降却小得多。
目前这种类型填料的使用还较少，因此，其实用性还有待于进一步探讨。
不过，这种填料似乎非常适于大分子如蛋白质的制备分离，用于小分子的日常分析分离则较少。
颗粒大小（粒度）在HPLC中极为重要。
约5μm的微粒直径很好地兼顾了分析柱的柱效、反压和寿命。
更小的多孔微粒（如3μm）对快速分离很有用。
HPLC法测定益气健脾口服液中枸橼酸的含量
HPLC法测定益气健脾口服液中枸橼酸的含量摘要：目的：建立益气健脾口服液中枸橼酸含量测定的方法。
方法：采用高效液相色谱法，色谱柱为中谱红ODS-H(250×4.6 mm,5 μm)，流动相为0.1%磷酸二氢铵溶液(用磷酸调节pH至2.8)，流速为0.7 ml/min，采用等度洗脱，柱温为28℃，检测波长为210 nm，进样量为10 μl，进行含量测定。
结果：枸橼酸的理论塔板数大于7000，峰面积的RSD为1.9，小于2.0%；枸橼酸浓度在25.31~126.5 μg/mL(R2=0.9992)范围内线性关系良好：重复性，色谱条件耐用性的RSD%均小于2.0；平均加样回收率为100.7%，RSD%为1.6；精密度的RSD%为0.4，表明精密度良好。
结论：该方法高效简便，准确性、重复性好，耐用性强，可为该款益气健脾口服液对枸橼酸质量控制的提供科学依据，更科学评价和有效控制益气健脾口服液中枸橼酸含量。
关键词：益气健脾口服液；含量测定；枸橼酸；高效液相色谱法益气健脾口服为中药成方制剂，其质量标准收载于国家食品药品监督管理总局国家药品标准WS-5257(B-0257)-2014Z及国家药品监督管理局药品补充申请批件2019B02293。
处方是由太子参，山药，桑叶，莲子，绿豆，乌梅，白扁豆，黑豆，南山楂，稻芽，鸡内金以上十一味中药经过煎煮提取加工而成的中成药口服液体制剂，辅料为蔗糖。
药方中的药材均为药食同源，药性温和，安全性高，可长期服用，组方还兼具着健脾，益气，消食三大功效，遵循君臣佐使。
山药可健脾益胃，免疫调节[1]，药力为方中之首，为君药；太子参增强益气健脾、生津润肺[2]之功，故太子参为臣药；佐以绿豆、南山楂合用，既能改善脾虚湿盛导致的口淡不渴，食少乏力，也可清热解毒，调和五脏，避免诸邪反复蕴结于内[3]，协助山药、太子参治疗兼症；使以桑叶疏散风热，清肺润燥，乌梅消食去滞，涩肠止泻，运脾化湿[4]抗氧化，降血脂[5]，莲子，白扁豆，黑豆清心醒脾，健脾利湿，稻芽消食和中，健脾开胃，鸡内金理气利湿，健胃消食[3]，为药方引经调和。
柱选择
推荐使用的色谱柱数量 :
PLgel 20µm MIXED-A 线 性 操 作 范 围: 筛 柱 板 孔 径: 效: 2000 -20,000,000 10µm > 17,000 plates/m 4
推荐使用的色谱柱数量:
凝胶色谱在色谱柱上发生的剪切降解
用示差和PD两角度激光光散射检测器联用，在四氢呋喃1ml/min条件 下分析异氰酸苯酯化纤维素，从不同色谱柱中洗出的聚合物，其重均 分子量 发生了变化。
PlusPore –凝胶色谱柱的新家族 凝胶色谱柱的新家族
基于苯乙烯 / 二乙烯基苯的一种新型凝胶色谱填料 产生于一种新的聚合工艺 Four products in the PlusPore range Not blended materials – 色谱柱内只装填了一种填料 与传统凝胶色谱柱填料相比有更高的孔体积
** THF作流动相 1ml/min流速窄分布聚苯乙烯标样 Mp=9200作测试样测得
PLgel 色谱柱选择方法
混合床硅胶技术的优势
色谱柱方案选择极为简单 Optimized columns 对于各种应用范围都是最优化的色谱柱 简单的备件库存 No artifacts due to column mismatch 简单的增加同类型色谱柱就可以获得更高的分辨率 在使用在线激光光散射检测器或黏度检测器时分布两端外推 更容易
GPC所使用的窄孔柱 所使用的窄孔柱
色谱柱封装规格： PLgel MiniMIX 250x4.6mm columns 典型流速 0.3ml/min 必须减小系统的扩散， 避免谱带展宽发生 (如: 用小体积定量环) 适当减小样品浓度以避免粘滞效应 (在小分子情况下适当浓一些是可以接 受的)
窄孔柱的分辨率
气相色谱柱选择的技巧 色谱柱操作规程
气相色谱柱选择的技巧色谱柱操作规程气相色谱柱在石油、化工、生物化学、医药卫生、食品工业、环保等方面应用很广。
它除用于定量和定性分析外，还能测定样品在固定相上的调配系数、活度系数、分子量和气相色谱柱在石油、化工、生物化学、医药卫生、食品工业、环保等方面应用很广。
它除用于定量和定性分析外，还能测定样品在固定相上的调配系数、活度系数、分子量和比表面积等物理化学常数。
一种对混合气体中各构成分进行分析检测的仪器。
气相色谱柱选择的技巧：一般，初次使用气相色谱仪的伙伴对色谱柱不知怎样合理配置色谱柱，总希望柱子越多越好，盲目购置很多柱子或固定液、担体等，结果有很多闲置造成挥霍。
现在向大家推举一些值得考虑的阅历。
一般准备几个柱子就基本可以解决各类气相色谱分析工作的要求，可优先选择固定液分别为SE—30（或者OV—101）、OV—17、PEG—20M、DEGS、FFAP，的柱子各一个。
对于填充柱，担体可选白色担体、红色担体（包括未酸洗、酸洗、硅烷化）、GDX系列（或者Porapak系列），三种，基本可以解决工作中绝大部分项目。
对柱子长短的选择：由于辨别率与柱长的平方根成正比。
柱子长，则提高辨别率。
一般来说：15m的短柱用于快速分别较简单的样品，也适于快速成分析；30m的色谱柱是常用的柱长，大多数分析在此长度的柱子上成；50m、60m或更长的色谱柱用于分别比较多而杂的样品。
对于口径的选择：柱径直接影响柱子的效率、保留特性和样品容量。
小口径柱比大口径柱有更高柱效，但柱容量更小。
0.25mm：具有较高的柱效，柱容量较低。
分别多而杂样品较好。
0.32mm：柱效稍低于0.25mm的色谱柱，但柱容量约高60%。
0.53mm：具有仿佛于填充柱的柱容量，可用于分流进样，也可用于不分流进样，当柱容量是紧要考虑因素时（如痕量分析），选择大口径毛细管柱较为合适。
中科国环环境讨论中心专家认为，对于一般用户，可选30米或50米长的毛细管，口径选0.32mm较为便利。
色谱柱与色谱分析
鸭绿江文献检索论坛's Archiver鸭绿江论坛› 药物化学› 转贴：分享：关于TLC和柱层析之我的体会转贴：分享：关于TLC和柱层析之我的体会关于TLC和柱层析之我的体会柱层析和TLC是有机化学工作者必须下苦功夫的两项实验技术。
这两项技术掌握与否，对于提高实验的效率至关重要。
常见的例子是：在柱层析时，由于层析柱中的硅胶填料装得不均匀（没有填严实），使得柱子在淋洗过程中就因为出现太多气泡变花，导致分离效果不好。
更常见的例子是：层析柱虽然装得不错，但是由于淋洗剂选择不恰当，结果导致几十毫克产品，用了几百毫升淋洗剂都还没有完全分离。
分离同样的东西，熟手可能只需要半个小时，而一个层析技术不过关的人可能半天都不能得到纯品。
由此可见，这两项技术掌握与否，对于提高工作效率，减轻工作量，减少有机溶剂的使用，从而对身心健康和环境保护都有明显的作用。
柱层析关键在于柱子是否装好和淋洗剂是否选择恰当。
而淋洗剂的选择则是通过TLC确定。
这里要指出的一点是：TLC的作用除了跟踪反应进程，检测试剂和原料纯度外，一个重要的用途就是为柱层析选择适当的淋洗剂。
首先谈柱层析：装柱子（添硅胶）时，有两种方法：即湿法装柱和干法装柱，二者各有优劣。
不论干法还是湿法，硅胶（固定相）的上表面一定要平整，并且硅胶（固定相）的高度一般为15cm左右，太短了可能分离效果不好，太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。
湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后，再填入柱子中，然后再加压用淋洗剂“走柱子”，本法最大的优点是一般柱子装的比较结实，没有气泡。
干法装柱则是直接往柱子里填入硅胶，然后再轻轻敲打柱子两侧，至硅胶界面不再下降为止，然后再填入硅胶至合适高度，最后再用油泵直接抽，这样就会使得柱子装的很结实。
接着是用淋洗剂“走柱子”，一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。
通常上面加压，下面再用油泵抽，这样可以加快速度。
干法装柱较方便，但最大的缺陷在于“走柱子”时，由于溶剂和硅胶之间的吸附放热（可以用手摸柱子明显感觉到），容易产生气泡，这一点在使用低沸点的淋洗剂时如乙醚，二氯甲烷更为明显。
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中谱红色谱柱是指由中谱科技（福州）有限公司开发和生产的液相色谱柱。
这类色谱柱在药品分析、食品检测、工商质检等领域有着广泛的应用。
其中，“中谱红”是中谱科技的一个品牌，他们生产多种类型的色谱柱，例如RD-C18、ODS-H等型号，这些色谱柱适用于不同类型的样品分析。
“中谱红RD-C18”是一种反相色谱柱，常用于磺胺类药物的分离与测定，采用5 μm颗粒大小、4.6×150 mm的尺寸规格，流动相为0.05%磷酸：乙腈梯度洗脱，波长为270 nm。
该色谱柱具有普适性和优异的稳定性。
“中谱红ODS-H”色谱柱采用了聚合型键合高密度C18，并经过特色封尾技术处理，对中药、食品中的复杂化合物及化学药中的杂质分离有较好的效果。
这种色谱柱在提高温度时选择性会更好，适合于大黄等中药材的液相分析。