实验六植物细胞骨架的光学显微镜观察
实验六细胞骨架的光镜观察
作业
绘洋葱鳞茎表皮细胞骨架图, 并作简要分析。
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实验方法
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1. 撕取洋葱鳞茎内的表皮细胞(约1cm大小若干片)置于 装有pH6.8磷酸缓冲液15~20ml的50ml小烧杯中,使其 下沉。 2. 吸去pH6.8磷酸缓冲液,用1% TritonX-100 10ml处理 20-30分钟。 3. 吸去TritonX-100,用10 ml M-缓冲液洗三次,每次10分 钟。 4. 10ml 3%戊二醛固定0.5小时。 5. 吸去3%戊二醛,用10mL PH6.8磷酸缓冲液洗三次.每 次10分钟。 6. 0.2%考马斯亮蓝G250 3ml染色20分钟。 7. 用蒸馏水冲洗1-2次,细胞片置于载玻片上,加盖玻片,于 普通光学显微镜下观察。
实验六(一)细胞骨架的光镜观察
实验目的 实验原理 实验方法 作业
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实验目的
掌握显示细胞骨架的染色方法。 光镜观察细胞骨架纤维。
架体系，由微 管,微丝,中间纤维和微梁构成。细胞骨架决定着细胞形 状的保持和改变,同时也是胞质中许多物质和颗粒运输 以及细胞各种运动的结构基础,甚至还被认为在能量转 化和信息传递方面也有作用。 本实验将着重于细胞质骨架三种组分的观察。 微管、微丝经常成束平行排列在一起,多沿细胞长 轴,细胞突起分布。微管、微丝也可疏散成网状.微管、 微丝所含蛋白,可以被考马斯亮蓝G250非特异性染色,在 光学显微镜下呈着色清楚的细直纤维,如果用非离子去 垢剂TritonX-100处理细胞,可将质膜结构与细胞内许多 蛋白质溶解,但微管、微丝的蛋白却不被溶解破坏。因 此,细胞先经TritonX-100处理后,再用考马斯亮蓝G250 染色,其胞质背景着色弱,而微管、微丝着色清晰,从而提 高分辨率。
光学显微镜下观察到的细胞骨架的形态特征
光学显微镜下观察到的细胞骨架的形态特征细胞骨架的奇妙舞会细胞骨架，这个听起来像是科幻电影里的超能力道具，其实在生物学的世界里，它们才是真正的幕后英雄。
想象一下，细胞就像是一台精密的舞台剧，而细胞骨架就是那些支撑舞台的大梁和幕布。
今天，我们就来聊聊这些神秘的“幕后工作者”，看看它们是如何让细胞保持平衡、稳定，以及如何上演一场场生命的华丽表演。
细胞骨架可不是那种随便搭个架子就能用的。
它得有专门的设计图纸，还得经过严格的施工过程。
简单来说，细胞骨架就像是一张巨大的网，由许多根细细的丝线组成，这些丝线就像钢丝一样，相互交织在一起，形成了一个稳定的网络结构。
这个网络结构不仅支撑着细胞膜，还帮助细胞内的各种器官正常工作。
那么，这些丝线是怎么来的呢？它们可不是随意乱拉的，而是通过一种特殊的机制——微管的形成过程，一点一点地组装起来的。
想象一下，细胞就像一个工厂，微管就像是流水线上的零件，每个零件都是精心设计过的，这样才能保证整个机器的运转效率。
除了微管，细胞骨架中还有另一种重要的结构——微丝。
这些细长的纤维就像是细胞内的高速公路，负责传递信息和能量。
微丝的一端连接着细胞核，另一端则延伸到细胞质的各个角落，就像是一个无处不在的信号发射器。
那么，这些复杂的网络结构是怎么维护的呢？这就要说到细胞骨架的一个神奇功能——动态调整。
细胞骨架可以根据细胞的需要，像魔术师一样快速地改变形状和长度，以适应不同的环境。
这种灵活性对于细胞的生存至关重要，因为一旦细胞骨架出现问题，就像一根绳子断了，整个细胞都会摇摇晃晃，甚至可能会“走形”。
现在，让我们来点幽默感。
想象一下，如果细胞骨架是一群调皮的小朋友，那么微管就像是他们的老师，负责教他们如何正确地玩耍。
而微丝就像是他们的伙伴，一起在细胞内部穿梭，传递着快乐和活力。
让我们来总结一下。
细胞骨架就像是细胞的“建筑师”，它们默默地支撑着细胞的每一个部分，确保细胞能够正常运作。
而我们每个人的身体，都是由无数这样的“建筑师”精心打造的杰作。
细胞实验课件植物细胞骨架的显示与观察
根据细胞骨架成份的蛋白质性质及其抗去垢 剂抽提的特点，用戊二醛在室温下固定细胞后， 经非离子型去垢剂TritonX-100处理除去膜结构 和可溶性蛋白质，留下抗抽提的细胞骨架成份， 用考马斯亮兰R250染色显示。
植物细胞骨架的显示与观察
实验目的 １．加深了解细胞骨架成份的化学性质、形态
分布与功能。 ２．掌握用考马斯亮兰显示细胞骨架系统的原
理与方法。
植物细胞骨架的显示与观察
１．仪器、用具 显微镜、载玻片、盖玻片、剪刀、镊子
２．材料 新鲜的洋葱鳞茎பைடு நூலகம்表皮
３．试剂 （１）3%戊二醛固定液 （２）1%TritonX-100抽提剂 （３）0.2%考马斯亮兰R250染色液
植物细胞骨架的显示与观察
植物细胞骨架的显示与观察
１．洋葱鳞茎内表皮要选取新鲜的。 ２．材料在载玻片上要确保展平，并且
是单层细胞。 ３．要保证材料充分和药品接触。
植物细胞骨架的显示与观察
作业：实验报告，观察到的图像要画图。
植物细胞骨架的显示与观察
观察时，先用低倍镜观察，可以看见细胞的核 区及细胞质中的细胞骨架成份被染成兰色，成束 的细胞骨架成份从核周围呈现放射状地向细胞质 中延伸，找到典型的图像后，转用油镜细心观察 ，注意调节显微镜的工作状态，尽可能达到最佳 分辨效果和清晰度，并仔细地调节细调旋钮，在 立体细胞的不同水平面进行观察。这时候，可以 看到细胞骨架结构的立体情况，并在细胞膜下见 到由很细的纤维构成的网格结构，此外，还可以 明显观察到横穿细胞壁的胞间连丝存在的部位。
1 取材：新鲜内表皮。 2 固定：3%戊二醛固定液，15min。水洗干净，
吸干水分。 3 抽提：1%TritonX-100抽提剂，20min。水洗
细胞骨架的光学显微镜观察
4．0.2％考马斯亮蓝R250，其溶剂为：甲醇46.5mL、冰醋酸7mL、蒸馏 水46.5mL。
5．3％戊二醛，用6 mmol／L（pH6.8）磷酸缓冲液配制。
【方法与步骤】
一、植物细胞骨架的光学显微镜观察 1．撕取洋葱鳞茎内表皮（约1mm2大小若干片）置于装有 pH6.8磷酸缓冲液的青
霉素小瓶中，使其下沉。 2．吸去磷酸缓冲液，用1%Triton X-100 处理20～30min吸去。 3．吸去Triton X-100，用M-缓冲液洗2次，每次5min。 4．3％戊二醛固定15min。 5．pH6.8磷酸缓冲液洗2次，每次5min。 6．0.2％考马斯亮蓝 R250染色 5 min。 7．用蒸馏水洗1～2次，细胞置于载玻片上，加盖玻片，于普通光学显微镜下观
Microbubules
Microfilamemts
Intermediate filaments
【实验原理】
当用适当浓度的Triton X-100处理细胞时，可将细胞质膜中和细胞质中的 蛋白质和全部脂质被溶解抽提，但细胞骨架系统的蛋白质不受破坏而 被保存，经戊二醛固定，考马斯亮蓝R250染色后，可在光学显微镜下 观察到微丝。
Actin-binding proteins(微丝结合蛋白)
◆ monomer-sequestering protein(单体隔离蛋白) ：维持高 浓度的单体肌动蛋白
◆ cross-linking protein(交联蛋白) ：改变细胞内肌动蛋白 丝的三维结构
◆ End-blocking (capping) proteins（封端（加帽）蛋白）： 调节肌动蛋白丝的长度
◆ filament-severing protein(纤维切割蛋白)：同肌动蛋白 丝结合并进行切割
植物细胞骨架的显微镜观察
植物细胞骨架的光学显微镜观察一、【实验目的】1、掌握植物细胞骨架处理及染色方法。
2、对洋葱鳞茎内表皮细胞进行染色，观察其细胞骨架。
二、【实验原理】用适当浓度的TritonX-100处理时，可将细胞内蛋白质破坏，但细胞骨架系统的蛋白质却被保存，后者用考马斯亮蓝R250染色，可在光学显微镜下观察到细胞骨架的网状结构。
三、【实验试剂】1、M-缓冲液；2、pH6.8磷酸缓冲液；3、1% TritonX-100，用M-缓冲液配制；4、0.2%考马斯亮兰R250；5、3%戊二醛，用pH6.8磷酸缓冲液配制；四、【实验步骤】（Ⅰ）1、撕取洋葱鳞茎内表皮细胞约1cm2大小若干片，置于装有pH6.8磷酸缓冲液的培养皿中，使其下沉(约1-2min)；2、吸去pH6.8磷酸缓冲液，用1% TritonX-100处理30min；3、吸去1% TritonX-100，用M-缓冲液洗3次，每次3-5min；4、3%戊二醛固定30min5、pH6.8磷酸缓冲液洗3次，每次3-5min；6、0.2%考马斯亮蓝R250染色10min；7、用蒸馏水洗1-2次，将内表皮细胞平铺于载玻片上，加盖玻片，于显微镜下观察。
注意事项：1、用去垢剂 TritonX-100 的缓冲液处理材料时，应控制在30min 左右；2、每一次加液或染色后，应用 PBS 洗2 次，并用滤纸吸干。
3、加 3%戊二醛溶液对细胞骨架和细胞形态的维持十分重要，固定时间应不低于20min。
4、在用考马斯亮蓝染色的时候应该注意把洋葱鳞茎表皮摊开,使其染色均匀.利于以后观察.5、在染色之前用滤纸吸去缓冲液再进行染色或许观察到的效果更好.6、在观察时,很清楚的看到细胞核的分布,但细胞骨架有点模糊,不过也可以观察到它的基本轮廓及其分布的网状结构.四、【实验步骤】（II）1、取洋葱内皮1cm 左右2、置于含PBS 液的载玻片上3、湿润后，吸去PBS4、加2 滴1%Triton X-100/M-缓冲液，5min5、吸去缓冲液，加3%戊二醛-PBS溶液，固定30min6、加PBS 洗2 次，共3min7、加0.2%考马斯亮蓝R250 染色30min8、用PBS 洗2 次，共2min，吸干，加盖玻片，于显微镜下观察四、【实验步骤】（III）1、取内表皮约0.5cm2，放在盛有PBS缓冲液的小烧杯中，浸泡处理10min。
实验十、植物细胞骨架光学显微观察
2．6mmol／L PH6．8磷酸缓冲液。 3．1％Triton X-100，用M-缓冲液配。 4．0.2％考马斯亮蓝R250，其溶液 是甲醇ml，冰乙酸7ml，蒸馏水 46.5ml。 5．3％戊二醛，用6mmol／L磷酸缓 冲液(PH6．8)配制。 6．5％、7％、95％乙醇。 7．叔丁醇、正丁醇、二甲苯、树胶。 (三)材料：洋葱鳞茎。
十、植物细胞骨架光学显微 观察
内蒙古大学生技基地
一、实验目的
观察光学显微镜下细胞骨架的结构， 了解显示植物细胞骨架的方法及其 原理。
二、实验原理
细胞骨架是指在细胞中支持和连接 细胞各组分，以及与细胞运动有关 的结构，它包括微管、中间纤维、 微丝。当用适当浓度的Triton X100处理时，可将细胞内大部分蛋 白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋 白质却仍被保存，经过固定和考马 斯亮蓝R250染色，从而在光镜下 观察到细胞骨架的网状结构。
细胞骨架观察结果：
光学显微镜下洋葱内表皮细胞的轮廓清 晰可见（如图1），细胞壁及其分界明显。 10×10倍镜下可粗略观察到细胞内粗细 不等的蓝色纤维、团块形成的网状结构。 同一细胞内各处骨架的密集度不均匀， 细胞核区域的纤维相对密集，蓝色浓重， 甚至分辨不出网络结构，另外可见细胞 壁区域有零星蓝色纤维分布；相邻细胞 的密集程度基本一致，
三、实验用品
(一)器材：显微镜、50ml烧杯、滴管、容量瓶、载玻 片、盖玻片、镊子。 (二)试剂： 1．M一缓冲液 作用：M缓冲液使细胞骨架中的微丝保持稳定。在M缓 冲液中，其中咪唑是缓冲剂EGTA 和EDTA螯合 Ca 离子，溶液并提供Mg离子，在低钙条件下，骨架纤 维保持聚合状态并且较为舒张，便于观察。 配方：50mmol／L咪唑，50mmol／L kCl：，0.5 mmol／LMgCl2， lmmol／L EGTA(乙二醇双(a-氨基乙酸)醚四乙酸)， 0．1mmoL／L EDTA，lmmol／L巯基乙醇或 DTT(二硫苏糖醇)。
细胞骨架的观察
6．0.2％考马斯亮蓝R250染色10 min。 7．蒸馏水洗2次，然后将样品置于载玻片上，加 盖玻片，于普通光学显微镜下观察。 8．如果染色效果好，则可依次用50％乙醇、70 ％乙醇、95％乙醇、正丁醇、二甲苯处理样品， 各5 min。然后将样品平展于载玻片上，加1滴 中生树胶，盖上盖玻片封片，制成永久切片。
2．器具： 显微镜，烧杯，玻璃滴管，载玻片， 盖玻片，镊子。
【实验步骤 实验步骤】 实验步骤
1．用镊子撕取洋葱鳞叶内侧的表皮若干片(约l cm2大小若干片)，置于50 mL烧杯中，加入pH 6.8磷酸缓冲液，使其下沉。 2．吸去磷酸缓冲液，用1％Triton X-100处理20 min。 3．吸去Triton X-100，用M缓冲液洗3次，每次5 min。 4．用3％戊二醛固定30 min。 5．磷酸缓冲液(pH 6.8)洗3次，每次5 min。
实验6 实验 细胞骨架的观察
【目的 目的】 目的 掌握用光学显微镜观察植物细胞骨架的原理及 方法，观察光学显微镜下细胞骨架的网状结构。 【原理 原理】 原理 植物细胞用适当浓度的TritonX-100处理后， 可破坏细胞内蛋白质，但细胞骨架系统的蛋白 质却保护完好。
考马斯亮蓝 R250(Coomassiebrilliant blue R250, 考马斯亮蓝R250)，可以 见到一种网状结构，即是细胞骨架结构。
【实验报告 实验报告】 实验报告 描绘所观察到的洋葱鳞叶细胞骨架图。
【材料 材料】 材料 洋葱鳞叶。 【实验用品 实验用品】 实验用品 1．试剂： (1) 2％考马斯亮蓝R250染色液：称考马斯亮 蓝R250 lg，溶于250 mL无水乙醇中，加冰醋 酸35 mL，再加蒸馏水至500 mL。 (2) 磷酸缓冲液(pH 6.8)：6.8 mmol／L磷酸缓 冲液，调至pH 6.8。
6、实验六 细胞骨架的光镜观察
实验目的 实验原理 实验方法 作业
一、实验目的
1. 掌握显示细胞骨架的染色方法。 掌握显示细胞骨架的染色方法。 2. 光镜观察细胞骨架纤维。 光镜观察细胞骨架纤维维网架 体系，由微管，微丝，中间纤维和微梁构成。 体系，由微管，微丝，中间纤维和微梁构成。 微管、微丝所含蛋白可以被考马斯亮蓝G250非 微管、微丝所含蛋白可以被考马斯亮蓝G250非 特异性染色， 特异性染色，在光学显微镜下呈着色清楚的细 直纤维， 如果用非离子去垢剂TritonX 100处 TritonX直纤维 ， 如果用非离子去垢剂 TritonX-100 处 理细胞， 理细胞，可将质膜结构与细胞内许多蛋白质溶 但微管、微丝的蛋白却不被溶解破坏。 解，但微管、微丝的蛋白却不被溶解破坏。因 细胞先经TritonX 100处理后 TritonX处理后， 此 ， 细胞先经 TritonX-100 处理后 ， 再用考马 斯亮蓝G250染色 其胞质背景着色弱，而微管、 染色， 斯亮蓝G250染色，其胞质背景着色弱，而微管、 微丝着色清晰。 微丝着色清晰。
四、作业
绘洋葱鳞茎表皮细胞骨架图， 绘洋葱鳞茎表皮细胞骨架图， 并作简要分析。 并作简要分析。
三、实验步骤
撕取洋葱鳞茎内的表皮细胞( 大小) 若干片， 1. 撕取洋葱鳞茎内的表皮细胞(约1cm2大小) 若干片， 置于装有15--20ml pH6.8磷酸缓冲液的小烧杯中 15-磷酸缓冲液的小烧杯中, 置于装有15--20ml pH6.8磷酸缓冲液的小烧杯中,使 其下沉。 其下沉。 吸去磷酸缓冲液， TritonX10ml处理20分 处理20 2. 吸去磷酸缓冲液，取1% TritonX-100 10ml处理20分 钟。 吸去TritonX 100， TritonX缓冲液洗三次,每次10 3. 吸去TritonX-100，用10ml M 缓冲液洗三次,每次10 分钟。 分钟。 3%戊二醛固定15分钟 戊二醛固定15分钟。 4. 10ml 3%戊二醛固定15分钟。 吸去戊二醛， PH6.8磷酸缓冲液洗三次 磷酸缓冲液洗三次. 5. 吸去戊二醛，用10mL PH6.8磷酸缓冲液洗三次.每次 分钟。 5分钟。 6. 0.2%考马斯亮蓝G250染色10分钟。用蒸馏水冲洗1-2 0.2%考马斯亮蓝G250染色1 分钟。用蒸馏水冲洗1 考马斯亮蓝G250染色 镜检。 次,镜检。
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四 实验方法
5 PH6.8 磷酸缓冲液洗 3次/10分钟 6 0.2%考马斯亮蓝R250染色 20~30分钟 7 蒸馏水洗 1-2次→装片→观察 8 制作永久切片
四 实验方法(Ⅱ)
取洋葱内皮1cm 左右
置于含PBS 液的载玻片上
湿润后，吸去PBS
加2 滴1%Triton X-100/M-缓冲液，5min
植物细胞骨架的形态特征
细胞骨架观察结果 10×40倍镜下可清楚观察到蓝色的网状结构确实由
线性纤维交织成，纤维间的结合点稍膨大。细胞边缘 骨架较稀疏，但可见由与胞壁相同走向的纤维形成的 细胞质膜的轮廓，与细胞内部的纤维通过纵向的纤维 相连。相邻细胞有纤维穿过胞间的细胞壁。调节显微 镜焦距可观察到细胞不同横切面的网络结构的变化， 表明细胞骨架以三维立体结构的形式分布在整个细胞 内。
实验六 植物细胞骨架的光学 显微镜观察
一 实验目的 1 通过对洋葱内皮细胞的处理，掌握植物
细胞骨架的制备方法与显微形态观察。 2 掌握考马斯亮蓝R250 对植物细胞骨架
染色的方法。
二 实验原理
细胞骨架是由蛋白质丝组成的复杂网状 结构，成分有微丝、微管和中间纤维。
Triton X-100可溶解抽提细胞中的蛋白质 和脂质，但不破坏细胞骨架系统。
吸去缓冲液，加3%戊二醛-PB 溶液，固定30min
加PBS 洗2 次，共3min
加0.2%考马斯亮蓝R250 染色30min
用PBS 洗2 次，共2min，吸干
镜检并绘图 细胞骨架标本制作过程
五 作业
1 绘出植物细胞骨架微丝结构图。 2 分析和论述在光学显微镜下观察到的细
胞骨架的形态特征。 3 为什么用TritonX-100 的缓冲液处理材
料？
植物细胞骨架微丝结构图
植物细胞骨架微丝结构图
植物细胞骨架微丝结构图
植物细胞骨架微植物细胞骨架的形态特征
细胞骨架观察结果
光学显微镜下洋葱内表皮细胞的轮廓清晰可见（如 图），细胞壁及其分界明显。10×10倍镜下可粗略 观察到细胞内粗细不等的蓝色纤维、团块形成的网状 结构。同一细胞内各处骨架的密集度不均匀，细胞核 区域的纤维相对密集，蓝色浓重，甚至分辨不出网络 结构，另外可见细胞壁区域有零星蓝色纤维分布；相 邻细胞的密集程度基本一致，但有少数细胞有较大不 同。
戊二醛固定、考马斯亮蓝R250染色，光 学显微镜观察网状结构的由微丝组成的 细胞骨架。
三 实验仪器、材料和试剂
1 仪器、用具：普通光学显微镜等 2 材料：洋葱鳞茎 3 试剂：
⑴ M-缓冲液 ⑵ 6mmol/L磷酸缓冲液 ⑶ 1% Triton X-100 ⑷ 0.2%考马斯亮蓝R250
三 实验仪器、材料和试剂
3 试剂： ⑸ 3%戊二醛 ⑹ 50%、70%、95%乙醇 ⑺ 叔丁醇、正丁醇、二甲苯、中性树胶
四 实验方法(Ⅰ)
1 洋葱鳞茎内表皮（1cm大小）→ 50ml烧杯（磷酸缓冲液）→下沉
2 吸去缓冲液→ 加1% Triton X-100 20~30 分钟
3 吸去Triton X-100→ M-缓冲液洗 3次/10分钟