药物相关基因多态性检测试剂的设计与评估思路

.6中国医疗器械信息 | China Medical Device Information专题·技术审评Thematic Forum · T echnical Review随着药物基因组学和药物遗传学的研究进展，传统的基于工作总结的“经验医学”模式、基于循证医学的“标准化医学”模式和“分层医学”模式逐渐向基于个体基因多态性的“个体化医学”模式转移[1]。

药物基因组学从基因组水平出发，研究基因序列多态性与药物效应多样性之间相互关系。

通过研究影响药物吸收、分布、代谢、排泄等个体差异的基因特性以及基因多态性导致的药物效应多样性来减少不良反应的发生、提高疗效，达到个体化给药的目的[2]。

2010年，由于氯吡格雷个体化差异带来的严重心血管不良反应，FDA 要求对氯吡格雷说明书加注“黑框警告”。

其中，告知临床医师目前已存在CYP2C19基因型检测，建议无法将氯吡格雷转化为活性形式的慢代谢型患者改用其他抗血小板药物[3]。

目前采用分子诊断技术有针对性的检测预期用药人群的相关基因多态性，可辅助医生制定用药方案，减少药物不良反应。

1.注册申报情况自2009年我国首次批准药物相关遗传多态性基因检测试剂以来，有多家国内专注于分子诊断产品的公司申报并陆续上市了多个相关产品。

然而就获批产品数量而言，仍远少于其他基因检测试剂，检测靶点目前主要包括药物作用靶点（如血管紧张素转化酶基因）和药物代谢酶相关基因（如编码细胞色素酶P450基因）的检测。

方法学主要有基因芯片技术、PCR 毛细电泳片段分析法、PCR 荧光探针法等。

近年来随着人类基因组序列图谱的绘制完成，蛋白纯化、分子克隆技术和多态性检测技术的成熟，研究者对药物遗传多态性基因的研究飞速发展，其中验证较为充分的部分项目已转化为产品并进行了注册申报。

收稿日期：2017-06-01药物相关基因多态性检测试剂的设计与评估思路韩昭昭 国家食品药品监督管理总局医疗器械技术审评中心 （北京 100044）文章编号：1006-6586(2017)15-0006-02 中图分类号：R197.39 文献标识码：A内容提要： 文章旨在阐述基于药物相关基因多态性检测试剂的试剂盒设计、分析性能评估和临床评价的思路。

通过介绍该类试剂的申报情况，分析该类试剂的注册申报资料中常见问题，对检测试剂的预期用途、企业内部参考品与质控品的设置、分析性能评估及临床评价等部分注册申报资料要求进行解析。

关 键 词： 药物相关基因多态性 性能评估 个体化医疗 技术审评 临床评价Ideas about Design and Evaluation for Pharmacogenetic Tests of Human Genotypic MarkersHAN Zhao-zhao Center for Medical Device Evaluation, CFDA (Beijing 100044)Abstract :This paper aims to illustrate the idea of pharmacogenetic tests of human genotypic markers kit design, analytical performance evaluation and clinical evaluation. On the basis of introducing declarations of the reagents, analysis registration dossier common problems. And analysis the requirement of performance evaluation, reference material and control setting , clinical evaluation study. This paper aims to analysis of the general problem in the registration dossier and make recommendations on in vitro diagnostic device of tumor markers.Key words:drug related human genotypic markers, performace evaluation, individualized medicine, technical review, clinical evaluation技术审评·专题T echnical Review · Thematic Forum2.预期用途该类检测试剂用于定性检测用药相关基因多态性，主要包括药物作用靶点、药物转运蛋白、药物代谢酶相关基因，临床上用于辅助指导临床治疗药物的选择及药物剂量的设定。

生产企业在进行联合检测的项目设置应注意具有临床意义，即所有设定位点应对特定适应症有协同辅助诊断意义。

特定适应症可指某一特定疾病，如高血压用药相关多基因联合检测可作为统一注册单元；或某一类药物，如华法林相关基因联合检测。

不建议按照基因进行联合检测。

如CYP2C19基因的不同型别与抗惊厥药、抗凝血药物、抗高血压药物等相关，不建议将该基因所有不同型别作为联合检测项目进行申报。

应谨慎对待“筛查”和“预测”用途的声称。

“筛查”用途需采用无症状人群进行充分的临床实验，充分考虑低发病率与假阳性带来的影响，同时应有临床相关诊疗指南支持。

“预测”用途则需要在临床实验中对充分样本数的跟踪随访样本进行研究，验证待测靶标与用药疗效之间的关系。

3.企业内部参考品与质控品的设置本类检测试剂项目目前暂无国家参考品及国际参考品提供，企业应根据试剂盒检测靶标设置企业内部参考品。

企业内部参考品建议包含：基因型参考品、最低检出量参考品、精密度参考品及特异性参考品。

参考品设置应包含所有声称可以检测的基因型别，建议尽量选择临床真实样本制备企业内部参考品，对于罕见的基因型别可采用人工构建的方法制备内部参考品。

建议在试剂盒中配置合理的质控品，外部质控品应包含阳性质控品与阴性质控品，阳性质控品应包含低浓度水平；内对照设置也应合理，选择管家基因或其他源于人类基因组DNA无已知单核苷酸多态性位点的片段。

基于不同检验原理的试剂盒质控品的设置可能有所不同，然而都应确保有效控制检测过程中各个关键步骤，确保检测的完成并且无污染及交叉反应发生。

企业内部参考品及试剂盒内质控品的设置应注意包含不同浓度水平。

参考品应包含多个浓度水平（至少包含高和低浓度水平）；试剂盒内质控品应至少包含最低检出量浓度水平，以有效监测检验的可靠性。

申请人应于申报资料中详细描述参考品及质控品的制备（构建）方法、序列的确定方法、量值确定方法并明确基质成分。

4.分析性能评估分析性能评估资料是注册产品说明书声称性能指标的重要支持资料，此部分资料应涵盖产品研制阶段对试剂盒进行的所有性能验证的研究资料。

对于本类产品建议应包括以下内容：①对提取试剂的验证，至少包含提取效率、提取重复性、提取抗干扰能力及提取后样本的稳定性的研究；②基因型参考品符合率；③最低检出限研究，应包含所有声称可检测基因型，研究资料包含确认与验证两部分资料，具体研究方法可参考国家食品药品监督管理总局已发布核酸检测试剂相关审查指导原则；④最高检出浓度研究资料；⑤精密度研究，采用不同浓度水平，包含所有声称检测型别（野生型与突变型）进行，建议研究者考虑不同操作者、不同检测地点及不同运行等所有可能影响检测结果的因素；⑥样本相容性研究，验证所有适用样本类型（包含不同抗凝剂类型）都可以测得准确的结果；⑦干扰试验，建议包括内源性物质的定量干扰试验、常用药物及预期人群治疗药物干扰试验、同源性物质的干扰、样本间携带干扰试验；⑧交叉反应研究，研究与非人类基因组DNA、与待测靶基因核酸序列相近或具有同源性的其他序列（如其他突变型别）间是否存在交叉反应。

5.临床评价临床实验入组应选择预期人群，不建议大量入组健康人群进行临床实验。

如华法林用药相关基因检测试剂的临床实验，应选择预期使用华法林用于预防血栓栓塞的患者入组。

应注意临床准确性验证的充分性，确保入组研究具有统计学意义的样本量，对每个声称可检测的位点、每种突变类型（纯合、杂合）和野生型进行充分的一致性研究。

样本量与该检测试剂的性能，如重复性等相关，应提供样本入组量统计分析。

对于已有同类产品上市的产品，建议采用实验用体外诊断试剂与已上市产品针对临床样本进行比较研究。

在比较与已上市产品的检测结果一致性的基础上，还应对所有声称检测基因位点，每个位点不少于30例，进行用药相关临床实验，以验证基因型别与临床用药之间的关系。

对于与药物代谢酶相关位点检测试剂，可以用药物代谢特征（如慢代谢、快代谢）来反应检测靶点与药物之间的关系；对于与药物作用靶点相关位点检测试剂，则可以用临床药效（敏感性）作为观察指标。

（下转第32页）7.China Medical Device Information |中国医疗器械信息.32中国医疗器械信息 | China Medical Device Information标准检测Standard and T esting6.运输稳定性体外诊断试剂运输稳定性主要是考察试剂在实际销售运输过程中的各种条件，对诊断试剂性能的影响。

目前进行运输稳定性主要有模拟试验和实际运输两种方式。

在进行运输稳定性之前，应掌握试剂在实际销售过程中的运输情况，对于大多数试剂而言，在实际运输稳定性研究时，结合目前实际，选取终端客户最远端，充分考虑天气条件、货物转运周期及运输方式，将产品递送至目的地，在此过程中，实时记录温度和湿度等参数，在此条件下评估产品的性能。

运输稳定性的研究建议结合目前监管部门对体外诊断试剂冷链管理的有关要求执行。

对于模拟试验，运输条件的模拟应当基于对实际运输条件的了解，如运输时间、预温度和湿度等）。

值得注意的是，对于不同类型的产品，影响运输稳定的因素各有侧重，比如胶体金试纸条类产品，只要保证密封良好，运输过程中湿度的要求可以适当放宽；对于核酸类试剂，必须要保证运输过程的温度要符合企业的要求。

随着大众医疗需求的不断提高，高质量的体外诊断信息，对于切实发挥临床诊断的指导作用具有重要意义，而体外诊断试剂的稳定是临床诊断信息质量的重要保证，因此，建议诊断试剂制造商重视体外诊断试剂的稳定性研究，按照法规要求，结合产品实际，规范、合理地开展研究工作，保证体外诊断试剂的安全有效。

对于全新无同类上市产品的申报产品，可进行与测序方法的比对研究，验证检测准确性。

另外还需特别注意验证待测位点与用药之间的关系。