鸡血细胞的体外融合
实验十 PEG法诱导鸡血细胞融合
（7）詹纳绿染液。
四、方法与步骤
（一）鸡血细胞的体外融合
1.鸡血细胞的获得 用肝素溶液润洗注射器，从家鸡的翼根静脉用注射器采血，
注入试管后，速加入肝素（100U肝素/5ml全血）混合，制 成抗凝全血。 2.鸡血细胞储备液的制备 在抗凝全血的试管中，加入4倍体积的0.85%NaCl溶液，制 成红细胞储备液，置于4℃冰箱内可供一周内使用。
• 影响原生质体融合的因素。 （1）首先是酶解条件： 渗透压稳定剂 Ca2+ 、Mg2+、蔗糖 可保持原生质体稳定利于再生；随着酶解时间的增加原生 质体的释放量增大；酶解浓度到达一定浓度后，原生质体 的再生率下降；再就是酶解温度。 （2）原生质体的脱壁是否完全会影响融合效果。有的原生质 体会很快再生细胞壁，因此在洗去酶液后，应立即进行融合 处理。 （3）原生质体的悬浮状况也会影响融合，如果两亲本原生质 体密度相差较大，就难以混和均匀，接触机会减少，这时应 用离心方法强迫它们密集
实验 十 PEG法诱导鸡血细胞融合
College of Life Science and Technology, XINJIANG Univercity
一、实验目的
了解聚乙二醇（PEG）诱导体外细胞融合 的基本原理。
通过PEG诱导鸡血细胞之间的融合实验， 初步掌握细胞融合的基本方法。
二、实验原理
荧光标记的细胞融合
三．实验仪器、材料和试剂
仪器、用具：注射器、刻度离心管、离心 机、血细胞记数板、水浴锅、滴管、显微 镜、烧杯、容量瓶、凹面载玻片、盖玻片、 酒精灯等。
材料：成年家鸡。
■ 试剂
（1）0.85%NaCl溶液:
《细胞生物学实验》教学大纲
《细胞生物学实验》教学大纲课程名称：细胞生物学实验课程编号：12030037课程类别：专业基础课/必修课学时/学分： 24/0.75开设学期：第四学期说明一、课程性质细胞生物学实验是生物科学和生物工程专业一门重要的必修基础课程，在生命学科的本科教学中有着十分重要的地位。
通过实验，不仅使学生加深对细胞生物学理论知识的理解和认证，同时通过对细胞生命现象的观察和亲手操作，使学生获得有关细胞生命活动的感性知识，有效地提高理论课的教学效果，并使学生掌握细胞生物学实验的基本原理、方法和技能，培养和提高学生实验设计和应用各种实验技术的能力，培养和训练学生的创新意识和创新能力，培养严谨的科学态度和实事求是的作风，提高发现问题、分析问题和解决问题的能力，为今后独立从事教学或科学研究打下坚实的基础。
二、教学目标通过细胞生物学实验，使学生们更加牢固地掌握细胞生物学基本知识和基本理论，对细胞的结构和功能有全面、真实的认识，使学生们掌握细胞生物学的基本实验方法和技能。
三、学时分配表序号实验项目实验时数实验类型内容与要求小计实验1细胞膜的渗透性及细胞凝集反应4设计性了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度，掌握细胞凝集反应的实验方法及细胞凝集的原理实验2叶绿体的分离与荧光观察3验证性掌握荧光显微镜的原理和使用方法；观察叶绿体的自发荧光与次生荧光；通过对植物叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法实验3植物细胞骨架的观察4验证性掌握光学显微镜观察植物细胞骨架的原理和方法实验4鸡血细胞的体外融合6综合性了解PEG诱导细胞融合的基本原理，通过PEG诱导鸡红细胞之间的融合实验，初步掌握细胞融合技术实验5巨噬细胞吞噬现象的观察7综合性通过对小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞的活动观察，加深理解细胞吞噬作用的过程和意义；掌握小白鼠腹腔注射给药方法和颈椎脱臼处死法合计24四、实验方法与要求建议本课程采用传统的实验教学方法，2人一组操作，结合多媒体、小组讨论与集体讨论、实验设计、教学录像、细胞生物学小知识和小技巧介绍等多种教学手段，帮助学生通过本课程的学习全面地掌握细胞生物学的基本实验方法与技能以及实验设计的思路，以提高学生从事教学和科学研究的综合素质。
鸡血细胞的体外融合
实验目的
实验原理 实验步骤
作
思
业
考
细胞生物学实验
实验原理：
东北师大 生科院
依据融合过程采用的助融剂 的不同，细胞融合可分为： 病毒诱导的细胞融合、化学 因子诱导的细胞融合、电场 作用下诱导的细胞融合。
实验目的
实验原理 实验步骤
作
思
业
考
鸡血细胞的体外融合
实验原理：
细胞生物学实验
业
考
细胞生物学实验
实验原理：
东北师大 生科院
体外细胞融合是细胞工程范畴的 概念，细胞融合(cell fusion)又称 体细胞杂交，是指用人工方法使 两个或两个以上的体细胞融合成 异核体细胞，随后，异核体同步 进入有丝分裂，核膜崩溃，来自 两个亲本细胞的基因组合在一起， 形成只含有一个细胞核的杂种细 胞（hybrid cell）。
1.绘出镜下观察到的细胞融合 情况。 2.计算细胞融合率。
实验目的
实验原理 实验步骤
作
思
业
考
鸡血细胞的体外融合
细胞生物学实验
思 考：
东北师大 生科院
试分析哪些因素可能影响 本实验的细胞融合率？
实验目的
实验原理 实验步骤
作
思
鸡血细胞的体外融合
业
考
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鸡血细胞的体外融合
实验目的
实验原理 实验步骤
作
思
业
考
细胞生物学实验
作 业：
东北师大 生科院
（细胞融合率系指在显微镜的视野内， 已发生融合的细胞其细胞核总数与该视 野内所有细胞(包；括已融合的细胞)的 细胞核总数之比，称为融合率，通常以 百分比表示，而且要进行多个视野测定, 再加以平均统计，更为准确。 ）
鸡血细胞融合实验报告
鸡血细胞融合实验报告鸡血细胞融合实验报告引言细胞融合是一种重要的实验技术，通过将两种或多种细胞融合在一起，可以研究细胞间的相互作用、基因表达调控以及细胞发育等方面的问题。
在本次实验中，我们选择了鸡血细胞作为研究对象，通过融合不同类型的鸡血细胞，探究其对细胞功能和特性的影响。
实验材料与方法1. 实验材料：- 鸡血细胞样本：从鸡体内提取鲜血样本，分离出鸡血细胞。
- 细胞培养基：含有适宜的营养物质和生长因子，维持细胞生长和分裂。
- 细胞培养器具：培养皿、离心管、移液器等。
2. 实验方法：- 细胞培养与扩增：将鸡血细胞接种于含有细胞培养基的培养皿中，放置于恒温培养箱中，控制适宜的温度和湿度，使细胞能够正常生长和分裂。
- 细胞融合：选取两种不同类型的鸡血细胞，分别标记为A和B。
将细胞A和细胞B分别收集，离心沉淀后，用细胞培养基将其悬浮于一起。
利用电融合或化学融合等方法，使细胞A和细胞B融合为一个细胞群体。
- 细胞观察与分析：观察融合后细胞的形态变化、生长速率、基因表达等特性，并与原始细胞进行对比分析。
实验结果与讨论通过实验观察和数据分析，我们得到了以下结果和结论：1. 细胞融合后形态变化融合前的细胞A和细胞B在形态上存在明显的差异。
然而，经过细胞融合后，新形成的细胞群体呈现出一种中间状态，既保留了细胞A和细胞B的一些特征，又具有自身的特点。
这表明细胞融合可以导致细胞形态的重塑和变异。
2. 细胞融合后生长速率我们观察到，在细胞融合后的细胞群体中，生长速率明显高于单独培养的细胞A和细胞B。
这可能是由于融合后细胞的互补性增强，使得细胞能够更有效地利用培养基中的营养物质和生长因子。
3. 细胞融合后基因表达通过实时荧光定量PCR等技术，我们检测了融合后细胞中一些关键基因的表达水平。
结果显示，融合后细胞的基因表达模式发生了明显的变化，一些基因的表达水平显著上调或下调。
这表明细胞融合可以影响基因的转录水平，从而影响细胞的功能和特性。
鸡血细胞融合实验报告
鸡血细胞融合实验报告鸡血细胞融合实验报告引言：细胞融合是生物学领域中的一个重要研究课题，通过将两种或多种细胞融合在一起，可以产生新的细胞，从而探索细胞的特性和功能。
本实验旨在通过将鸡血细胞进行融合，观察融合细胞的形态特征和生理功能，以期对细胞融合的机制和应用进行深入研究。
材料与方法：1. 实验动物：选取健康成年鸡作为实验对象。
2. 细胞培养：从鸡体内提取血液样本，分离出鸡血细胞，并进行细胞培养。
3. 细胞融合：选择适当的融合剂，将两种不同来源的鸡血细胞进行融合。
4. 观察与记录：通过显微镜观察融合细胞的形态特征，记录细胞的大小、形状、颜色等信息。
结果与讨论：通过实验观察，我们发现融合细胞在形态上与原始细胞有所不同。
融合细胞的大小较原始细胞更大，形状也更加不规则，颜色也呈现出混合的特征。
这表明细胞融合可能导致细胞的形态改变，从而影响其生理功能。
为了进一步验证融合细胞是否具有新的生理功能，我们进行了一系列实验。
首先，我们检测了融合细胞的代谢活性。
结果显示，融合细胞的代谢活性明显增强，相比于原始细胞，其能够更快地吸收营养物质并释放代谢产物。
这表明细胞融合可能导致代谢途径的改变，从而增强细胞的生理功能。
接下来，我们对融合细胞进行了增殖实验。
结果显示，融合细胞的增殖速度明显加快，相比于原始细胞，其能够更快地分裂并形成新的细胞。
这表明细胞融合可能导致细胞增殖机制的改变，从而增强细胞的生长能力。
此外，我们还对融合细胞进行了细胞凋亡实验。
结果显示，融合细胞的凋亡率明显降低，相比于原始细胞，其更容易存活并继续进行细胞分裂。
这表明细胞融合可能导致细胞凋亡途径的改变，从而增强细胞的生存能力。
综上所述，通过鸡血细胞融合实验，我们发现融合细胞在形态特征和生理功能上与原始细胞有所不同。
细胞融合可能导致细胞形态的改变、代谢活性的增强、增殖速度的加快以及凋亡率的降低。
这些发现为细胞融合的机制和应用提供了新的线索，有望在组织工程、再生医学等领域发挥重要作用。
动物细胞融合实验实验报告
动物细胞融合实验实验报告
实验目的：1、了解动物细胞融合的常用方法
2、学习化学融合的基本操作过过程
3、观察动物细胞融合过程中的细胞行为和变化
实验材料：鸡血红细胞、50%PEG溶液、0.85%氯化钠溶液、显微镜、离心机、载玻片、盖玻片等
实验原理：聚乙二醇（PEG）能够改变细胞膜脂质分子的排列，在去除这些物质之后，细胞膜趋向于恢复原有的有序结构。
在恢复过程中相接触的细胞由于接口处脂质双分
子层的互相亲和与表面张力，细胞膜融合，胞质流通，发生融合。
实验步骤：1、取鸡血，离心后去除上清液，以0.85%氯化钠溶液制成5%~10%的悬液
2、加入GKN液4ml，混匀
3、加入14滴PEG液，静置3~5min后混匀，放于显微镜下观察
实验结果：显微镜下可观察到有些细胞发生质膜融合
分析与讨论：细胞融合的应用有微生物原生质体融合构成新菌株、利用原生质体融合和培养技术培育新植物、细胞杂交瘤技术与单克隆抗体、用于基因定位和绘制人类基因
图谱、用于生产树突状细胞抗肿瘤疫苗、用于动物育种、用于细胞疗法等。
实验十一 鸡血细胞融合
1
实验目的
掌握细胞融合原理 应用聚乙二醇（PEG）融合细胞的方法 细胞融合率的计算。
2
实验用仪器及材料
实验仪器及材料
一、材料 鸡红细胞 二、器材和仪器：显微镜、离心机、水浴箱、 刻度离心管、试管、载玻璃片、盖玻片 三、试剂 50％PEG(MW4,000)、Hanks液(pH7.4)
3
实验原理
细胞融合(Cell fusion)，即在自然条件下或用人工方法(生物的、物理 的、化学的)使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的过程。人 工诱导的细胞融合，在六十年代作为一门新兴技术而发展起来。由于 它不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合，因此细胞融 合技术目前被广泛应用于细胞生物学和医学研究的各个领域。 细胞融合技术是研究细胞遗传、基因定位、细胞免疫、病毒和肿瘤的 重要手段。 细胞融合的诱导物种类很多．常用的主要有灭活的仙台病毒(Sendai virus)，聚乙二醇(Polyethyleneglycol，PEG)、电脉冲和激光诱导。 目前应用最广泛的是聚乙二醇，因为它易得、简便，且融合效果稳定。 PEG的促融机制尚不完全清楚，它可能引起细胞膜中磷脂的酰键及极 性基团发生结构重排。
6
数据记录
结果观察 在高倍镜下可以看到有两个或两个以上的鸡红细胞膜 融合在一起，形成一个异核体细胞。 融合的各个阶段：部分融合、全部融合 要注意辨别融合细胞与重叠的鸡红细胞。 融合率的计算 在高倍镜下随机计数100个细胞(包括融合的与未融合的 细胞)，以融合细胞(含两个或两个以上的细胞核的细胞) 的细胞核数除以总细胞核数(包括融合与未融合的细胞核) 即得出融合率。公式如下：
7Leabharlann 业在显微镜下按顺序绘制所观察到的细胞融 合各阶段，并注明主要特点。 你测定的细胞融合率为多少?
细胞生物学实验-鸡血细胞的体外融合
鸡血细胞的体外融合
应用领域（微生物）： 对微生物而言，细胞融合技术主要用于改良微生物菌种特性、提高目的
鸡血细胞的体外融合
细胞融合的方法： 聚乙二醇诱导融合：聚乙二醇具有强烈的吸水性以及凝聚和沉淀蛋白质
的作用，能够有效地促进植物原生质体和动物细胞的融合。在不同种类的动 物细胞混合液中加入聚乙二醇，就会发生细胞凝集作用，在稀释和除去聚乙 二醇的过程中，就会发生细胞融合。聚乙二醇诱导细胞融合的分子机理还不 太清楚。作为化学试剂，聚乙二醇使用起来很方便，诱导细胞融合的频率比 较高，但是它有一定毒性，对有些细胞（如卵细胞等）不适用。
鸡血细胞的体外融合
成纤维细胞
Байду номын сангаас
鼠肿瘤细胞
植物细胞A
植物细胞B
仙台病毒 融合培养基
融合
去掉细胞壁
原生质体A
原生质体B
形成杂种细胞
在选择性培养 基中杂种细胞 增殖形成克隆
异核体 杂种细胞
原生质体融合 再生细胞壁
杂种细胞 细胞分裂
愈伤组织
杂种细胞克隆
杂种植株
鸡血细胞的体外融合
实验器材：
普通光学显微镜、剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、注射器、滤纸、胶头吸管、 离心机、血细胞计数板、水浴锅、烧杯、容量瓶、酒精灯。
鸡血细胞的体外融合
应用领域（动物细胞）：
1. 用于基因定位和绘制人类基因图谱：根据杂种细胞中某一染色体或其片段的存 在与否和细胞的某一性状表达与否相联系，从而可以实现把基因定位于某一染 色体或某一区段上。
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鸡血细胞的体外融合
细胞融合的方法： 聚乙二醇诱导融合：聚乙二醇具有强烈的吸水性以及凝聚和沉淀蛋白质
的作用，能够有效地促进植物原生质体和动物细胞的融合。在不同种类的动 物细胞混合液中加入聚乙二醇，就会发生细胞凝集作用，在稀释和除去聚乙 二醇的过程中，就会发生细胞融合。聚乙二醇诱导细胞融合的分子机理还不 太清楚。作为化学试剂，聚乙二醇使用起来很方便，诱导细胞融合的频率比 较高，但是它有一定毒性，对有些细胞（如卵细胞等）不适用。
病毒诱导融合：病毒是最早采用的融合剂。常用于诱导动物细胞融合的 病毒有仙台病毒、新城鸡瘟病毒、疱疹病毒等，其中仙台病毒最常用。用作 融合剂的病毒必须事先用紫外线或β-丙内酯灭活，使病毒的感染活性丧失而 保留病毒的融合活性。
优点：融合率较高，对各种动物细胞都适宜，病毒繁殖快，容易培养； 缺点：不稳定，在保存过程中病毒的融合活性会降低，而且制备过程比 较烦琐，病毒还有可能会对细胞的生命活动产生干扰。
3. 用于生产单克隆抗体：使小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合形成能产生单克隆抗体 （monoclonal antibody, mAb）的杂交瘤细胞，单克隆抗体具有专一性和灵敏性， 是重要的生命科学研究工具。
4. 用于动物育种：体细胞核移植技术（Somatic Cell Nuclear Transfer Technique, SCNT）是将细胞核移植到另一细胞的细胞质中的生物技术。动物体细胞融合后， 杂种细胞难以发育再生为一个个体，但借助于细胞核移植的方法将融合后杂种 细胞的细胞核移入去核成熟卵内，可培育新的杂种动物体。
有性繁殖时发生的精卵结合是正常的细胞融合，即由两个配子融合形成 一个新的的二倍体。体细胞融合可形成四倍体或多倍体细胞，最终形成杂种 细胞的特性会有很大变化。
鸡血细胞的体外融合
细胞融合的历史： 科学家很早就注意到了在自然条件下发生的细胞融合现象，最初是在病
理组织中发现了由细胞融合产生的多核细胞，紧接着发现在脊椎动物和无脊 椎动物的正常细胞中也有融合的细胞，随后在体外组织培养中也发现了离体 细胞的融合现象。活病毒可在体内介导癌细胞融合的发现帮助科学家实现了 利用灭活病毒促进动物异种细胞的融合，从而打破了细胞融合的种属屏障， 推动细胞融合技术跃上新的台阶。由于原生质体的大量制备较为困难，限制 了植物细胞融合技术的发展，因此植物细胞融合的起步较动物细胞融合要迟 10年左右。直到用酶法大量制备有活力的原生质体获得成功后，才使植物原 生质体的融合工作迅速发展起来。细胞融合的方法和手段始终朝操作方便、 简单，便于量化研究，同时融合率又能得到不断提高的方向发展。
PEG）、物理方法（电脉冲和激光融合）。某些病毒的被膜中有融合蛋白 （Fusion Protein），可介导病毒同宿主细胞融合，也可介导细胞与细胞的融 合，因此可以用灭活处理的此类病毒诱导细胞融合。化学和物理方法可造成 膜脂分子排列的改变，去掉作用因素之后，质膜恢复原有的有序结构，在恢 复过程中便可诱导相接触的细胞发生融合。
鸡血细胞的体外融合
应用领域（动物细胞）：
1. Байду номын сангаас于基因定位和绘制人类基因图谱：根据杂种细胞中某一染色体或其片段的存 在与否和细胞的某一性状表达与否相联系，从而可以实现把基因定位于某一染 色体或某一区段上。
2. 用于生产树突状细胞抗肿瘤疫苗：一般认为肿瘤细胞表面抗原不能诱导强的免 疫应答反应，但是树突状细胞（Dendritic Cells, DCs）与肿瘤细胞融合形成的树 突状细胞疫苗能够有效地激发机体的细胞免疫应答，已经在动物研究和人体早 期临床试验中证明这是一种方便、安全、可行的方法。
5. 在基础理论研究方面：用于研究细胞的核质关系和个体发育；用于揭示疾病发 生的机制；用于膜蛋白动力学研究等。
鸡血细胞的体外融合
应用领域（植物细胞）： 植物细胞融合技术目前主要是作为扩大变异的手段，同时也正朝着将抗
药性和胞质雄性不育等细胞质基因导入另一个体细胞的方向发展，有可能形 成新的核质杂种。如果获得了有用性状的细胞系，在还不能形成植株时，就 可以通过快速大量繁殖细胞加以利用。
植物细胞融合配合常规育种技术，可望选出优良材料，加之体细胞杂交 来自双亲的遗传物质并非简单的堆积，而是发生了复杂的遗传重组，这正是 改良作物所期望的。植物细胞融合的作用主要表现在：通过植物细胞融合培 育抗病新材料；合成新的物种；转移细胞质基因。
鸡血细胞的体外融合
应用领域（微生物）： 对微生物而言，细胞融合技术主要用于改良微生物菌种特性、提高目的
产物的产量、使菌种获得新的性状、合成新产物等。与基因工程技术相结合， 使对遗传物质进一步修饰提供了各种各样的可能性。目前，微生物细胞融合 的对象已扩展到酵母、霉菌、细菌、放线菌等多种微生物的种间以至属间， 不断培育出用于各种领域的新菌种。
鸡血细胞的体外融合
细胞融合的方法： 诱导细胞融合的方法有三种：生物方法（病毒）、化学方法（聚乙二醇
鸡血细胞的体外融合
鸡血细胞的体外融合
实验目的： 1. 了解聚乙二醇（PEG）诱导体外细胞融合的基本原理。 2. 通过PEG诱导鸡血细胞融合实验，初步掌握细胞融合的基本方法。
实验原理： 细胞融合是在自发或人工诱导（诱导剂或促融剂）下，两个或两个以上
的异源（种、属间）细胞或原生质体相互接触，发生膜融合、胞质融合和核 融合并形成杂种细胞的现象称为细胞融合。基本过程包括细胞融合形成异核 体（heterokaryon）、异核体通过细胞有丝分裂进行核融合、最终形成单核 杂种细胞。