利用原生质体育种技术获得优良酵母菌设计实验路线
酵母菌的分离纯化酵母菌的分离纯化实验方案
酵母菌的分离纯化酵母菌的分离纯化实验方案导读:就爱阅读网友为您分享以下“酵母菌的分离纯化实验方案”资讯，希望对您有所帮助，感谢您对的支持!酵母菌的分离纯化实验目的1. 了解培养基的配置与灭菌技术;2. 无菌操作技术;3. 工业微生物的分离与纯化技术;4. 工业微生物的检测及保藏。
基本原理1、培养基是人工配置的用于培养、分离、鉴定和保存各种微生物的营养基质。
也适合微生物在生命活动中积累各种代谢产物。
由于微生物种类不同，营养类型各异以及实验目的不同，因此培养基的种类也很多。
不同微生物对营养的要求不同，在配置时根据微生物对PH的要求选择合适的PH。
1由于本次实验主要是分离纯化酵母菌，所以配置的培养基是适合酵母菌生长麦芽汁平板培养基，同时添加抗生素抑制霉菌及其它菌的生长。
2、接种和培养过程中必须保证不被其它微生物所污染，关键在于严格进行正确的无菌操作，但是绝对无菌是不可能的，只能人工创造相对无菌的环境。
所以本次实验无菌操作是在超净工作台的酒精灯火焰旁进行。
3、把特定微生物从混杂的微生物群体中分离出来而获得某一种或某一株微生物的过程叫微生物的分离与纯化。
首先根据其生长特性设计只利于此菌生长的条件，再根据各种稀释法使他们在固体培养基上单独长成菌落。
分离纯化的方法通常有:稀释混合倒平板法、稀释涂布平板法和平板划线。
此次实验采用梯度稀释涂布平板法。
4、微生物检测项目最常用的是细胞数的检测，方法比较多，主要有显微镜直接计数法、平板菌落计数法(CFU)、光电比浊计数法等。
本次实验设计酵母菌的数量检测，选用显微镜直接计数法和平板菌落计数法。
实验器材仪器设备恒温水浴锅、电热干燥箱、蒸汽灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、恒温摇床、水浴锅、电炉、铜锅、酒精灯、接种环、电子天平、研钵、光学显微镜、血细胞计数器玻璃器2皿烧杯、锥形瓶、大小试管、培养皿、漏斗、三角涂棒、吸管、试管架、玻璃涂棒、盖玻片试剂与材料苹果、大麦芽、琼脂、蒸馏水、碘液、抗生素、染色液其它纱布、滤纸实验内容及操作步骤(一)、样品的选择酵母菌一般在果园的土壤中或者水果的表面含量较多，因此选择苹果为样品。
酵母菌的纯培养实验原理
酵母菌的纯培养实验原理酵母菌是一种单细胞真核生物，广泛存在于自然界中，常见于土壤、果皮和发酵食品等环境中。
酵母菌的纯培养实验是一种常用的实验手段，通过这种实验可以得到纯净的酵母菌培养物，为后续的研究提供了可靠的基础。
酵母菌的纯培养实验主要包括以下几个步骤：酵母菌的分离、酵母菌的培养和酵母菌的纯化。
酵母菌的分离是实验的第一步。
我们可以从自然界中采集到含有酵母菌的样品，比如果皮、土壤等。
将样品放入培养基中，利用其富含的养分和适宜的温度等条件，促使酵母菌开始生长。
然后，通过显微镜观察，可以看到培养基中存在着许多酵母菌细胞。
选取单个酵母菌细胞，将其转移到另一个培养基中，再次进行培养。
经过多次的分离，我们可以得到纯净的酵母菌培养物。
酵母菌的培养是纯培养实验的关键步骤。
酵母菌的培养基一般由碳源、氮源、矿物质和维生素等组成，提供了酵母菌生长所需的养分。
培养基的配制需要根据酵母菌的需求来确定，以确保酵母菌能够正常生长和繁殖。
在培养过程中，温度和氧气供应也是需要注意的因素。
一般情况下，酵母菌的最适生长温度为28-30摄氏度，过高或过低的温度都会对其生长产生不利影响。
此外，酵母菌对氧气的需求较高，需要提供充足的氧气供应。
酵母菌的纯化是实验的最后一步。
在酵母菌培养物中，可能会存在其他微生物的杂菌。
为了获得纯净的酵母菌培养物，我们可以采用多种方法，如温度选择法、抗生素选择法和营养选择法等。
这些方法可以通过调节培养基中的温度、添加抗生素或改变培养基中的营养成分，来选择性地培养酵母菌，排除其他微生物的干扰。
通过以上的步骤，我们可以得到纯净的酵母菌培养物。
这些纯净的酵母菌培养物可以用于研究酵母菌的生理特性、代谢途径、基因表达和蛋白质功能等方面的问题。
同时，纯培养的酵母菌也为酵母菌在工业生产中的应用提供了基础。
总结起来，酵母菌的纯培养实验是一种重要的实验手段，通过分离、培养和纯化等步骤，可以得到纯净的酵母菌培养物。
这些纯净的酵母菌培养物可以为酵母菌的研究提供可靠的基础，也为酵母菌在工业生产中的应用提供了有力支持。
高中生物学新课程选择性必修3实验教学设计2：酵母菌的纯化培养
杂菌不混入发酵物 毒。
验 中呢？
教
环节二 实验探究
学 活 动 设 计
1. 视频展示酵母 菌培养基的成分、 配置方法，倒平板 和平板划线操作的 基本流程。 2.巡回检查学生进 行实验的过程，提 醒学生安全操作。 3.针对学生的疑问 进行点拨解答。
1.观看视频，明确实验的流 程和操作步骤，归纳培养基 的组成成分，分析平板倒置 的原因和平板划线法纯化分 离微生物的原理。 2.小组分工合作完成培养基 的配置。 3.完成倒平板和平板划线操 作。
让学生在感性 认识的基础上理性 分析归纳培养基的 配置、平板倒置的 原因、平板划线法 的原理，加深对基 础知识的理解。 通过观看视频，规 范实验操作。
环节三 思维提升
1.平板倒置原因？ 2.设置未接种平板 组的意义是什么？ 3.为什么每一次划 线前，要用酒精灯 灼烧接种环，并且 要从上一次划线的 末端开始划线？ 4.为什么最后一次 划线和第一次的划 线不能相连？ 5.划线完毕后灼烧 接种环的原因？
学生活动 环节一 情景导入
设计意图
设问：自制酸奶容
思考并回答问题
实
易引发肠胃不适， 主要是由于在制作 过程中有杂菌混 入。那么，怎样才 能保证无处不在的
首先要尽量做到密封条 件下的发酵；其次，所用器 具材料使用之前要做好消毒 工作；最后，制作环境要清 洁卫生，并经常用紫外灯消
让学生初步认 识防止杂菌污染， 获得纯净的微生物 培养物的重要性。
环节四 分享交流
引导、评价
与教师一起梳理和总结，结 合已有知识储备，发表观点， 并为自己的观点寻求证据。
培养学生的批判性 思维。
环节五 课堂小结
展示 PPT 概念图 体会、必记。
增强模型建构意 识。
酵母实验教案设计方案模板
一、实验名称酵母发酵实验二、实验目的1. 了解酵母在发酵过程中的作用。
2. 掌握酵母发酵的基本原理和实验操作方法。
3. 培养学生的实验操作技能和观察能力。
三、实验原理酵母是一种单细胞真菌，在适宜的条件下，酵母能够将糖类物质转化为酒精和二氧化碳。
本实验通过观察酵母发酵过程中酒精和二氧化碳的产生，验证酵母的发酵作用。
四、实验材料与试剂1. 实验材料：酵母粉、葡萄糖、琼脂、蒸馏水、烧杯、试管、酒精灯、酒精、滴管、pH试纸、碘液、锥形瓶、玻璃棒等。
2. 实验试剂：酵母粉、葡萄糖、琼脂、蒸馏水、碘液、酒精等。
五、实验步骤1. 准备实验材料：将琼脂加入蒸馏水中，加热溶解后，冷却至室温备用。
2. 配制培养基：将葡萄糖加入琼脂溶液中，搅拌均匀，倒入锥形瓶中，待凝固后，制成固体培养基。
3. 接种酵母：用无菌滴管将酵母粉接种于固体培养基上，用玻璃棒轻轻搅拌，使酵母均匀分布。
4. 观察酵母发酵：将接种后的培养基置于37℃恒温培养箱中培养，每隔一定时间观察酵母菌的生长情况和酒精、二氧化碳的产生。
5. 测定pH值：用pH试纸测定发酵过程中培养基的pH值变化。
6. 验证二氧化碳产生：将装有发酵培养基的锥形瓶倒置，观察瓶底是否有气泡产生。
7. 验证酒精产生：用碘液检测发酵过程中酒精的产生。
六、实验注意事项1. 实验过程中要保持无菌操作，避免污染。
2. 实验过程中要严格遵守实验操作规程，确保实验结果准确。
3. 注意观察实验现象，做好实验记录。
七、实验报告要求1. 实验报告应包括实验目的、原理、材料与试剂、实验步骤、实验结果、实验讨论等内容。
2. 实验结果应包括酵母菌的生长情况、pH值变化、二氧化碳和酒精的产生情况等。
3. 实验讨论应结合实验结果，分析酵母发酵过程中的变化和原因。
八、实验拓展1. 探究不同温度、不同浓度的葡萄糖对酵母发酵的影响。
2. 研究其他微生物的发酵作用，如乳酸菌、醋酸菌等。
3. 了解发酵技术在食品、医药、化工等领域的应用。
酵母菌的纯培养实验原理
酵母菌的纯培养实验原理酵母菌是一种单细胞真菌，广泛存在于自然界各种环境中，包括土壤、水体和植物表面等。
酵母菌的纯培养实验是一种基本的实验手段，用于研究酵母菌的生长、代谢以及其他生物学特性。
本文将探讨酵母菌的纯培养实验的原理和方法。
酵母菌的纯培养实验是指将酵母菌分离出单个纯种，使其在培养基上单独生长。
这样可以避免不同种类的酵母菌相互干扰，从而更好地研究其生物学特性。
纯培养实验的关键是分离出单个酵母菌，实验过程大致分为以下几个步骤。
需要选择适当的培养基。
常用的培养基有酵母抽提物培养基、酵母营养盐琼脂培养基等。
培养基应提供适当的碳源、氮源和其他必需的营养物质，以满足酵母菌的生长需求。
需要从自然环境中分离出酵母菌。
可以通过取样、稀释和涂布等方法，将样品均匀地分布在培养基表面。
然后，将培养皿放置在适当的温度和湿度条件下，等待酵母菌的生长。
接下来，需要进行单菌分离。
当培养皿上出现酵母菌生长的斑点时，可以使用显微镜和接种针等工具，将单个酵母菌菌落转移到新的培养基上。
这个步骤需要非常细心和准确，以确保每个菌落只含有一个酵母菌。
需要进行鉴定和纯化。
通过观察酵母菌的形态特征、生长性状和代谢产物等，可以初步鉴定酵母菌的种类。
然后，可以将纯培养的酵母菌菌落转移到新的培养基上，进行进一步的培养和研究。
酵母菌的纯培养实验不仅可以研究其基本生物学特性，还可以应用于酵母菌的育种和工业生产等领域。
例如，通过培养高产酵母菌株，可以提高酵母菌的发酵产物的产量和质量；通过培养抗逆性强的酵母菌株，可以提高发酵过程的稳定性和效果。
酵母菌的纯培养实验是一种重要的实验手段，用于研究酵母菌的生物学特性和应用价值。
通过适当的培养基和实验方法，可以成功地分离和纯化酵母菌，并进行进一步的研究和应用。
酵母菌的纯培养实验对于推动酵母菌研究的发展和应用具有重要意义。
酵母菌诱变育种
酵母菌原生质体融合育种第一部分：酵母菌原生质体融合育种一、基本原理进行微生物原生质体融合时，首先必须消除细胞壁，它是微生物细胞之间进行遗传物质交换的主要障碍。
在酵母属进行细胞融合时，通常采用蜗牛酶除去细胞壁，采用聚乙二醇促使细胞膜融合。
细胞膜融合之后还必须经过细胞质融合、细胞核重组、细胞壁再生等一系列过程，才能形成具有生活能力的新菌株。
融合后的细胞有两种可能：一是形成异核体，即染色体DNA 不发生重组，两种细胞的染色体共存于一个细胞内，形成异核体，这是不稳定的融合。
另一是形成重组融合子，通过连续传代、分离、纯化，可以区别这两类融合。
应该指出，即使真正的重组融合子，在传代中也有可能发生分离，产生回复或新的遗传重组体。
因此，必须经过多次分离，纯化才能获得稳定的融合子二、实验材料（一）菌种：酵母菌（二）培养基：1、完全培养基（液体CM）2、完全培养基（固体CM）在液体培养基加入2%琼脂3、基本培养基（MM）葡萄糖柠檬酸钠培养基或YNB培养基4、再生完全培养基固体完全培养基中加入0.5mol/L的蔗糖(三) 缓冲液(1) 0.1 mol/L pH 6.0 磷酸缓冲液。
(2) 高渗缓冲液，于上述缓冲液中加入0.8 mol/L 甘露醇。
(四) 原生质体稳定液(SMM)0.5 mol/L 蔗糖、20 mol/L MgC12、0.02 mol/L 顺丁烯二酸，调pH 6.5。
(五) 促融剂40％聚乙二醇 (PEG)的SMM 溶液。
(六) 器皿培养皿、移液管、试管、容量瓶、锥形瓶、离心管、玻璃棒、显微镜、离心机等。
四、试验内容(一) 原生质体的制备1．活化菌体将单倍体酿酒酵母菌Y-1 和Y-4 活化分别转接新鲜斜面。
自新鲜斜面分别挑取一环接入装有25 mL 完全培养基的锥形瓶中，30℃培养16 h 至对数期。
2．离心洗涤、收集细胞分别取5 mL 上述培养至对数生长期的酵母细胞培养液，3000 r/min 离心 10 min，弃上清液，向沉淀的菌体中加入5 mL 缓冲液，用无菌接种环，搅散菌体，振荡均匀后离心洗涤一次，再用5 mL 高渗缓冲液离心洗涤一次。
酵母菌表面展示操作步骤实验流程
酵母菌表面展示操作步骤实验流程引言：酵母菌是一种广泛应用于生物学实验的微生物模型，其表面展示系统成为研究蛋白质结构和功能的理想工具。
本篇回复将详细介绍酵母菌表面展示的操作步骤以及实验流程。
实验流程：1. 酵母菌培养：a. 准备培养基：制备合适的酵母菌培养基，如YPD培养基（酵母粉、蛋白胨和葡萄糖混合）。
b. 培养酵母：将酵母菌的冻存样品接种到含有YPD培养基的试管中，培养16-18小时，温度控制在30℃。
2. 质粒构建：a. 选择目标基因：根据研究目的选择需要表达或展示的蛋白质基因。
b. 购买质粒：购买适合表达或展示目标蛋白质的酵母质粒。
c. 转化质粒：将质粒导入酵母菌中，可采用电穿孔法或利用酵母菌的自然转化能力。
3. 筛选酵母菌：a. 选择培养基：制备含有选择性物质的培养基，如缺少某种氨基酸的培养基。
b. 生长筛选：将转化的酵母菌悬浮液均匀涂布在含有选择性物质的培养基平板上，培养18-24小时。
4. 筛选酵母菌克隆：a. 选择单克隆：从培养基平板上选择单个克隆，通过划线法或用取样棒分别转移到新的培养基平板上。
b. 培养单克隆：将细菌筛选出的单个克隆分别培养，培养时间根据实验要求确定。
5. 表面展示：a. 酵母细胞表面展示系统：选择适合的表面展示系统，如酵母菌表面展示蛋白质的α-型肽酶底物反应。
b. 表面展示融合蛋白构建：将目标蛋白质与酵母表面展示系统进行融合构建，如利用重组DNA技术。
c. 酵母培养：将酵母菌在含有特定诱导物的培养基中培养，诱导表面展示蛋白质的表达。
6. 验证表面展示：a. 检测方法：根据实验要求和研究目的选择合适的检测方法，如荧光显微镜观察、ELISA或Western blot等。
b. 检测结果：分析检测结果，确认酵母菌表面是否成功展示目标蛋白质。
7. 进一步研究：a. 功能研究：根据实验目的，可以进行目标蛋白质功能的研究，如与其他蛋白质的相互作用。
b. 应用研究：利用酵母菌表面展示的结果进行应用研究，如药物筛选、疫苗研发等。
设计型实验 酵母菌
• 三、实验材料
• （一）菌种：从安琪酵母中分离的酵母菌 菌种： • （二）培养基 • 基础培养基 基础培养基YPD： ： • 酵母浸粉1% 蛋白胨2% 葡萄糖 2% 固体培养 基再加琼脂2% • 优化 源培养基： 优化N源培养基 源培养基： • 酵母浸粉1% (NH4)2SO4 2% 葡萄糖 2% ； • 酵母浸粉1% (NH4)2SO4 4% 葡萄糖 2% ； 酵母浸粉1% NH4NO3 2% 葡萄糖 2% ； • 酵母浸粉1% NH4NO3 4% 葡萄糖 2% ； • 酵母浸粉1% NaNO3 2% 葡萄糖 2% ； • 酵母浸粉1% NaNO3 4% 葡萄糖 2% ；
?在发酵过程中定时地取样测定包括对菌体进行镜检测定不同时期发酵液的菌体浓度残留的还原糖等参数动态地了解发酵过程中过程变量的变化分析菌体生长基质消耗产物生成的速度研究发酵动力学为生产中优化培养条件提供数据依据
设计型实验 酵母菌的分离及培养 条件的优化
一、目的要求
1、掌握培养基的配置及灭菌方法，能够正确的配制 培养基并在高压灭菌锅内进行灭菌。 2、熟知培养基成分的选择原则，能够对培养基的成 分和配比进行优化设计。 3、掌握固体斜面、平板的制备技术，能够通过划线、 涂布等方法分离菌种。 4、熟知影响酵母菌生长繁殖各种培养条件，能够对 摇瓶培养条件进行优化设计。 5、了解酵母菌培养过程的代谢变化规律。掌握酵母 菌培养过程参数的测定和分析方法。
四 实验内容
1、分离单菌落 、
（1）实验物品灭菌 ）
仪器：包扎9个移液管、9个涂布器、9个装有9ml 蒸馏水的试管、16个平板、 液体：3g酵母浸粉1%、6g蛋白胨2%、6g葡萄糖 2%，配成300ml溶液，取240ml溶液平均分装两个三 角瓶中，然后每个三角瓶放入2.4g琼脂，剩下60ml 为液体培养基，然后将以上设备拿去灭菌
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
利用原生质体育种技术获得优良酵母菌设计实验路线
1. 引言
原生质体育种技术是一种用于获得优良酵母菌的重要方法。
本文将探讨如何设计一个实验路线，利用原生质体育种技术获得优良酵母菌。
2. 实验目的
本实验的目的是通过原生质体育种技术，获得具有优良性状的酵母菌株。
具体目标包括： - 提高酵母菌的产酒能力 - 提高酵母菌对环境胁迫的适应能力 - 提高酵母菌的耐受性和稳定性
3. 实验设计
3.1 材料准备
•酵母菌菌株：选择适合的酵母菌菌株，如Saccharomyces cerevisiae
•培养基：准备适当的培养基，如YPD培养基
•原生质体提取试剂盒：选择合适的试剂盒，用于提取酵母菌的原生质体
3.2 实验步骤
3.2.1 酵母菌培养
1.从酵母菌冻存管中取出适量的酵母菌菌株，接种到含有YPD培养基的琼脂糖
平板上。
2.在30℃的恒温培养箱中培养酵母菌菌株，直到菌落生长到适当大小。
3.2.2 原生质体提取
1.从培养好的酵母菌菌落中，挑取一些菌落放入离心管中。
2.加入适量的原生质体提取试剂盒中的试剂，按照试剂盒说明书的操作步骤进
行原生质体提取。
3.2.3 原生质体融合
1.准备两个含有原生质体的酵母菌株。
2.将两个酵母菌株的原生质体混合在一起，并进行电融合或化学融合。
3.2.4 原生质体育种
1.将融合后的酵母菌菌株接种到含有YPD培养基的琼脂糖平板上。
2.在适当的温度下培养酵母菌菌株，直到菌落生长到适当大小。
3.重复以上步骤，进行多次原生质体育种。
3.2.5 优良酵母菌筛选
1.从原生质体育种的酵母菌菌落中，挑取一些菌落放入含有YPD培养基的琼脂
糖平板上。
2.在适当的温度下培养酵母菌菌株，观察其生长情况和产酒能力。
3.选择生长良好且产酒能力较高的菌落，进行进一步鉴定和培养。
4. 结果分析
通过上述实验步骤，我们可以获得经过原生质体育种的酵母菌菌株。
这些菌株可能具有更好的产酒能力、环境适应能力、耐受性和稳定性。
进一步的鉴定和培养可以确定这些菌株的优良性状，并用于相关应用。
5. 结论
利用原生质体育种技术可以获得优良酵母菌。
本文设计了一个实验路线，包括酵母菌培养、原生质体提取、原生质体融合、原生质体育种和优良酵母菌筛选等步骤。
通过这些步骤，可以获得具有优良性状的酵母菌菌株，用于相关应用。
参考文献
1.Smith, J. D., & Hodge, R. P. (2019). Optimizing yeast fermentation
performance. Annual review of food science and technology, 10,
255-276.
2.Gunge, N., & Nakatomi, Y. (1972). A protoplast fusion technique
for inter-and intraspecific hybridization in Saccharomyces.
Journal of General and Applied Microbiology, 18(6), 417-427.
3.Kondo, A., & Ueda, M. (2004). Yeast cell-surface display—
applications of molecular display. Applied microbiology and
biotechnology, 64(1), 28-40.。