细菌鉴定方法
细菌鉴定及检测方法
细菌鉴定及检测方法一、启动条件1、目的样出现坏包，若批次相同，取表现性状相同的任意一包进行细菌初步鉴定。
若批次不同则分别进行细菌初步鉴定。
2、随机样出现坏包，必须进行细菌初步鉴定。
二、胀包1、记录批次。
2、及时用72%的酒精对样品的外表进行消毒，尽量不损坏封合待以后检查。
在超净台内以无菌操作剪开包装，再避开横竖封处剪开一个圆形或三角形。
3、对样品进行微生物划线培养。
3.1采用普通营养琼脂培养基做细菌的划线培养36±1℃、48小时。
3.2分别吸取10毫升样品到两个无菌的小试管中，，分别在80和100℃的水浴中加热10分钟，冷却用营养琼脂分别做芽孢（36±1℃、72小时）和耐热芽孢（55±1℃、72小时）的划线培养。
3.3采用普通营养琼脂培养基或快速检测培养基做嗜冷菌/低温菌的划线培养（4—6℃ 10天或21±0.5℃ 25小时）。
3.4 必须用高盐察氏或虎红琼脂培养基做霉菌和酵母菌的划线培养（25—28℃ 5--7天）4、对样品做感官检测。
5、用PH计检测样品的PH值。
6、将样品倒掉，进行包装密封性检查，并进行记录。
7、记录菌落特征。
8、选区不同形态的单一菌落进行坚定。
8.1 革兰氏阴性菌和阳性菌的鉴定：8.1.1涂片、革兰氏染色、镜检。
或结晶紫染色、镜检、氢氧化钾拉丝试验。
8.1.2革兰氏染色、结晶紫染色方法见《微生物检测》8.1.3氢氧化钾拉丝试验在微生物载物片上滴一滴3%氢氧化钾，用接种针从培养皿上的菌落中挑取微生物，放在氢氧化钾溶液中用力搅拌。
7—10秒后，抬起针头，观察针头和玻片之间是否有丝状物，如果15—20 秒后二者之间无丝状物，停止搅拌。
判定：无丝状物阳性；有丝状物阴性。
8.2 过氧化氢酶试验（或过氧化氢酶试纸）（产气试验）：试剂：10%过氧化氢溶液步骤：在微生物载物片上滴一滴10%过氧化氢，用接种针从培养皿上的菌落中挑取微生物，放在过氧化氢溶液中看是否有气体产生。
内生细菌的鉴定方法
内生细菌的鉴定方法一、传统形态学鉴定。
咱先从最基础的形态看起哦。
内生细菌在显微镜下那可是各有各的模样。
有的是杆状的，就像小细棍一样，直挺挺的；还有的是球状的，圆滚滚的超级可爱。
通过革兰氏染色呢，又能把它们分成革兰氏阳性和阴性菌。
阳性菌染完色后是紫色的，阴性菌则是红色的。
这就像给细菌们穿上了不同颜色的小衣服，方便咱区分呢。
而且啊，观察细菌的芽孢、荚膜这些特殊结构也很重要。
芽孢就像是细菌的一个小保护壳，有芽孢的细菌在恶劣环境下更容易生存哦。
荚膜呢，就像是给细菌披了一层小披风，有荚膜的细菌可能会有一些特殊的功能。
二、生理生化特性鉴定。
再说说生理生化特性这一块。
这就像是看细菌的生活习性一样。
比如看它们能不能发酵某种糖，像葡萄糖、乳糖之类的。
如果能发酵，就会产生一些酸性物质或者气体，就像细菌在吃糖的时候还会打个小嗝或者排个小酸气呢。
还有看它们对氧气的需求，有些细菌是好氧的，就像我们人类一样需要大量氧气才能活得好；有些是厌氧的，氧气对它们来说就像毒药一样；还有些是兼性厌氧的，有没有氧气它们都能应付得来。
另外，像它们对不同温度的适应能力也是很重要的指标。
有些细菌喜欢热乎的环境，有些则偏爱凉飕飕的地方。
三、分子生物学鉴定。
现在分子生物学鉴定可厉害啦。
咱可以提取内生细菌的DNA，这就像是拿到了细菌的基因密码本。
然后用特定的引物对一些保守基因进行扩增，比如说16S rRNA基因。
这个基因在细菌里就像一个身份证一样，很有代表性。
把扩增出来的基因片段拿去测序，再把得到的序列和数据库里已知细菌的序列进行比对。
就像给细菌找亲戚一样，如果和某个已知细菌的序列很相似，那就能大概确定这个内生细菌是什么种类啦。
这方法可比传统方法准确得多呢，就像给细菌做了一个超级精确的基因检测。
细菌鉴定的方法有哪些
细菌鉴定的方法有哪些在临床检验中，对于细菌鉴定的流程是由多个环节组成的，而标本采集是首要步骤，只有进行规范标本采集后，才能实施下一步的菌株分离，并借助相应的仪器对细菌类型进行鉴定。
然后才能实施药敏试验，通过试验明确细菌的耐药性及敏感性，临床再以此结果为依据，为患者合理选用抗菌药物，达到促进其早日康复的目的。
但若临床治疗忽略了细菌鉴定，仅凭医师的主观判断而使用抗菌药物，那么很可能会影响到临床疗效，甚至增加耐药性，不仅给临床治疗带来较大难度，且还会增加患者的不适，延长治疗时间，浪费医疗资源和医疗费用。
由于细菌鉴定是临床较为常用的检验方法，因此，大部分人对其并不陌生，但对于细菌鉴定的具体方法有哪些，相信多数人并未进行过详细了解，文章就细菌鉴定的常用方法及注意事项进行科普。
1.细菌鉴定方法1.1形态学鉴别法形态学鉴别，顾名思义就是以细菌的形态特点作为依据对其种类进行鉴别。
细菌的形态特征以菌落形态、芽孢形态以及菌体形态为主。
其中芽孢形态的鉴别主要以分布位置、大小及形状为依据；菌落形态的鉴别则以其质地、形状、大小及颜色等特征为依据；菌体形态的鉴别以螺旋菌、杆菌、球菌及弧菌等特征为依据[1]。
形态鉴别法是现阶段进行细菌鉴别的基础手段，在细菌类型的初筛中发挥着重要作用。
1.2生化鉴别法此方法对细菌种类的鉴别依据，主要是细菌的生化反应及其代谢途径。
针对生化反应的处理及检测，能够明确细菌的具体代谢途径及酶活性，随后再对细菌的种类进行准确鉴别。
而常见的细菌代谢途径则主要包含蛋白质分解、氧化还原、有机物转化以及糖代谢等方面。
临床应用中以葡萄糖酸盐试验、酪蛋白水解试验、尿素酶试验及氧化-酵试验等方法的准确度及应用率相对较高[2]。
1.3免疫学鉴别法免疫学方法对于细菌的鉴别依据主要与细菌和宿主免疫系统之间的作用密切相关。
一般情况下，细菌与宿主的免疫系统之间会产生特异性反应，这一反应的产生主要依赖于细菌的细胞壁、表面抗原以及内毒素等组成。
细菌鉴定的方法和步骤
细菌鉴定的方法和步骤
细菌鉴定是通过一系列方法和步骤来确定细菌菌种的过程。
以下是常用的细菌鉴定方法和步骤：
1. 收集样品：从目标环境或感染部位收集细菌样品，如血液、尿液、唾液、食物等，以便后续实验。
2. 培养：将细菌样品接种到适当的培养基上，提供足够的营养物质和环境来促进细菌的生长。
3. 纯化：将单个细菌菌落分离出来，并通过连续的传代培养使其得到纯化，以避免不同细菌种类的混杂。
4. 形态观察：观察细菌在固体培养基上的形态特征，如菌落的形状、颜色、大小等，以及在显微镜下的细胞形态，如形状、大小、结构等。
5. 染色：将细菌样品进行染色，如革兰氏染色、抗酸染色等，以便观察不同细菌的染色特征。
6. 生理生化试验：进行一系列生理生化试验，如代谢产物的产生、酶活性、氧需求等，以确定细菌的代谢特征。
7. 耐受性检测：测试细菌对温度、pH值、氧气和抗生素等环境因素的耐受性，以进一步确认鉴定结果。
8. 分子生物学分析：利用分子生物学技术，如PCR、序列分析等，通过对细菌的基因组或特定基因进行分析，来确定细菌的物种。
9. 鉴定结果：根据以上步骤的结果和参考文献，将细菌归类到已知的菌属或菌种中，最终得出细菌的鉴定结果。
需要注意的是，细菌鉴定是一个复杂的过程，通常需要准备鉴别试剂和设备，以及具备相关实验操作的技术和经验。
细菌鉴定的方法范文
细菌鉴定的方法范文细菌鉴定是一种通过对细菌进行分析和检测，确定其种类和性质的方法。
这项工作对于疾病的防治、环境监测和食品安全具有重要意义。
下面将介绍一些常用的细菌鉴定方法。
1.宏观形态观察：这是最简单的一种方法，通过肉眼观察细菌的形态和特征，如颜色、形状、大小等等。
例如，大肠杆菌是革兰氏阴性杆菌，形状为短杆状。
2.静态染色法：常用的染色方法有革兰氏染色和抗酸染色。
革兰氏染色可以将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性。
抗酸染色主要用于鉴定结核杆菌等抗酸菌。
3.内容染色法：包括草绿病毒染色、亚甲蓝抗体染色等。
草绿病毒染色主要用于发现弓形虫等内寄生单细胞病毒。
亚甲蓝抗体染色主要用于鉴定豌豆疫霉菌。
4.结构染色法：主要是通过染色剂染色来鉴定细菌细胞的结构，如纤毛、鞭毛、芽孢、囊壳等。
例如，芽孢染色可以用来鉴定芽孢细菌。
5.生理生化特性检测：通过研究细菌的生理生化特性来鉴定细菌。
包括对菌落形态、产生酶类和代谢产物的检测。
例如，通过测定氧化/发酵代谢特点、生长适宜温度和环境pH值等特性，可以鉴定一些肠道细菌。
6.免疫学方法：免疫学方法主要包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫电泳等，通过检测细菌产生的特异抗原或细菌抗原抗体的存在与否，来鉴定细菌种类。
7.分子生物学方法：这是近年来发展起来的一种新的细菌鉴定方法。
它利用PCR技术、DNA测序等分子生物学方法，可以准确快速地鉴定细菌种类。
例如，16SrRNA基因测序可以精确鉴定不同细菌的亲缘关系。
8.生物学方法：生物学方法主要包括生长特性、营养要求等的检测。
例如，黄曲霉菌需要45℃温度下才能生长，这一特征可以用来鉴定黄曲霉菌。
以上所述的方法只是细菌鉴定中的一部分，随着科学技术的不断发展，细菌鉴定方法也在不断更新和完善。
细菌鉴定的准确与否对于相关研究和应用都有着重要的意义，因此，进行鉴定时需要综合利用多种方法，以提高鉴定的准确性。
细菌的生理生化鉴定方法
方法2.3.5 细菌的生理生化鉴定１、形态学观察采用插片法、埋片法, 对该拮抗细菌的菌落形态特征作镜检观察。
用革兰氏染色进行油镜观察。
①革兰氏染色溶液和试剂：革兰氏染液，草酸铵结晶紫染液，卢戈式碘液，95%乙醇，番红复染液等。
试验步骤：(1) 涂片：取活跃生长期菌种按常规方法涂片（不易过厚）、干燥和固定。
(2) 初染：滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位1～２min，用水冲洗至流出水无色。
(3) 媒染：先用卢戈氏碘液冲去残留水迹，再用碘液覆盖１min，倾去碘液，水洗至流出水无色。
(4) 脱色：在上述涂片上流加95%乙醇溶液（一般20～30s），当脱色至流出液无色时立即用水洗去乙醇。
(5) 复染：将玻片上残留水用吸水纸吸去，用番红复染液染色2min，水洗，用吸水纸吸去残水晾干。
(6) 镜检：用油镜观察。
②芽孢染色(1) 制片：按常规方法涂片、干燥及固定。
(2) 加热染色：向载玻片滴加数滴5%孔雀绿水溶液覆盖涂菌部位，用夹子夹住载玻片在微火上加热至染液冒蒸汽并维持５min，加热时应注意补充染液，切勿让涂片干涸。
脱色：待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗至流出水无色。
(3) 复染：用0.5%番红水溶液复染2min。
(4) 水洗：用缓流自来水冲洗至无色。
(5) 镜检：晾干载玻片后油镜镜检。
③鞭毛染色（硝酸银染色法）(1) 载玻片准备：将载玻片置于含洗衣粉或洗涤剂的水中煮沸20min，然后用清水充分洗净，再置于95%乙醇中浸泡，使用时取出在火焰上烧去乙醇及可能残留的油迹。
(2) 菌液制备：用接种环挑取菌落边缘菌体，悬浮于1～2mL无菌水中制成菌悬液，不能剧烈震荡。
(3) 制片：取一滴菌悬液滴到载玻片一侧，倾斜玻片，使菌悬液流向另一边，用吸水纸吸取多余的菌悬液，自然干燥。
(4) 染色：滴加硝酸银染色A液覆盖3～5min，用蒸馏水充分洗去A液，再滴加B液染色约1 min，期间可用微火加热，当涂面出现明显褐色时，立即用蒸馏水冲洗。
细菌鉴定及检测方法
细菌鉴定及检测方法细菌是一类微生物，其病原性和耐药性等特性对人类健康和环境安全有着重要影响。
因此，准确的细菌鉴定和检测方法对于疾病诊断、食品安全、环境监测以及抗生素治疗等领域至关重要。
本文将详细介绍常用的细菌鉴定和检测方法。
一、细菌鉴定方法1.形态学鉴定：通过观察细菌的形态特征，如细胞形状、大小、颜色等，可以初步判断其属于哪一类菌。
这种方法主要适用于形态特征非常典型的细菌。
2.染色法鉴定：常用的细菌染色方法有革兰氏染色、抗酸染色等。
革兰氏染色可以根据细菌的细胞壁特性将其分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类。
抗酸染色适用于检测酸忍受性细菌，如结核分枝杆菌等。
3.生理生化特性鉴定：这是一种常用的鉴定细菌的方法，通过观察细菌对特定物质的代谢反应，例如对糖、气体等的发酵、氧要求等，可以初步确定细菌的鉴定组。
4.分子生物学鉴定：分子生物学方法可以通过提取细菌基因组DNA或RNA，利用PCR扩增、序列分析、16SrRNA测序等技术，从而精确确定细菌的鉴定种属。
分子生物学方法具有高度的特异性和敏感性，广泛应用于细菌鉴定中。
二、细菌检测方法1.培养法：这是一种常用的细菌检测方法，通过在富含营养物的培养基上培养细菌，并根据菌落形态、色素、气体产生等进行初步鉴定。
培养法可以用于检测食品、水源、空气中的细菌等。
然而，一些特殊的细菌可能无法在常规培养条件下生长，所以培养法在一些情况下可能会有限制。
2.免疫学方法：包括免疫荧光、酶联免疫吸附试验（ELISA）等技术。
这些方法利用细菌表面特异的抗原与特定抗体的结合反应来检测细菌，并通过检测结果的颜色或荧光信号来判断细菌是否存在。
免疫学方法具有高度的特异性和灵敏性，适用于检测特定细菌的存在或细菌相关的抗体等。
3.分子生物学方法：分子生物学方法在细菌检测中也起着重要作用。
PCR和实时荧光PCR是常用的检测细菌DNA的方法，可以通过特定引物和探针分别扩增和检测目标细菌的DNA。
此外，基于DNA测序技术的全基因组测序也可用于快速鉴定和检测细菌。
细菌检测的方法是
细菌检测的方法是
细菌检测的方法有很多种，常用的方法包括：
1. 培养法：将样品接种于适当培养基上，通过培养和观察细菌的形态、生长特征、代谢产物等来鉴定和检测细菌。
2. PCR法：利用聚合酶链式反应（PCR）技术扩增细菌的DNA或RNA片段，通过检测扩增产物来识别和鉴定细菌。
3. 免疫学方法：包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光检测等，通过检测细菌特定抗原或抗体来鉴定和检测细菌。
4. 质谱法：利用质谱仪检测样品中细菌的蛋白质分子，通过分析质谱图谱来鉴定和检测细菌。
5. 流式细胞术：利用流式细胞仪检测样品中细菌的细胞形态、大小、表面标记物等特征，通过分析细胞的散射光和荧光信号来鉴定和检测细菌。
除了上述方法外，还有一些分子生物学、生物化学和微生物学的技术和方法可以用于细菌的检测和鉴定，具体选择方法通常根据检测的目的和样品的性质来决定。
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1.2.1 形态学特征
按照东秀珠和蔡妙英编《常见细菌系统鉴定手册》（1999），中科院微生物所编著《一般细菌常用鉴定方法》（1978）的方法进行鉴定。
芽孢杆菌属鉴定到种，参照了蔡妙英等译《芽孢杆菌属》（1980）的方法。
（1）革兰氏染色：挑选少许菌苔，涂布于干净玻片的蒸馏水中，风干固定，结晶紫染色（结晶紫2g，草酸铵0.8g，95%乙醇20 ml，加水至100 ml）1min，水洗后碘液（碘1g，碘化钾2g，水300 ml）作用1min，水洗，脱色，用番红O 液染3min，水洗，风干，光学显微镜观察。
（2）鞭毛染色：将16~24h菌龄的菌苔在载玻片上的水滴中轻蘸几下，将玻片倾斜，使菌液缓慢流到另一端，然后平放在空气中干燥。
干燥后滴甲液（丹宁酸5g，FeCl3 1.5g，15%福尔马林2ml，1%NaOH 1ml，蒸馏水100 ml）染6~10min，水洗，干燥后，用乙液（2%AgNO3溶液）加热复染30min，蒸馏水冲洗，干燥，镜检，菌体为深褐色，鞭毛为褐色。
（3）运动性：半固体琼脂穿刺法，将菌种接在可使鉴定菌生长良好的培养基中，其中含0.3~0.6%的琼脂。
适温培养，运动性可用透射光目测，如生长菌只生长在穿刺线上，边缘十分清晰，则表明鉴定菌无运动性；如生长菌由穿刺线向四周呈云雾状扩散，其边缘呈云雾状，则表示鉴定菌有运动性。
（4）芽孢染色：孔雀绿染色法。
按革兰氏染色涂片后，用饱和的孔雀绿水溶液（约7.6%）染20 min，水冲洗后在用0.5%番红O复染20~30s，水洗，吸干，镜检。
芽孢呈绿色，菌体和芽孢囊呈微红色。
（5）抗酸染色：常规涂片，石碳酸复红（10%碱性复红乙醇饱和液10 ml，5%石碳酸水溶液100 ml）加热染色5 min，倾去染液用酸性乙醇脱色，吕氏美蓝（2%亚甲基蓝乙醇饱和液30 ml，0.01%KOH 100 ml。
）复染2min，水洗，吸干，镜检。
（6）荚膜染色：在载片一端滴一滴无菌水，取少许菌苔在水滴中制成悬液。
取一滴墨汁与菌悬液混合，并用另一载片之一端将此水滴在载片上刮成薄膜风干。
用纯甲醇固定1min，加0.5%番红O液数滴滴于涂片上，冲去残余甲醇，并染30s，然后倾去染液，立即吸干，镜检。
1.2.2 培养及生理特性
（1）菌落形态：用划线法将菌种接在平板培养基上，适温培养1~2d，出现单菌落开始观察，包括形状和大小，边缘，表面，隆起形状，透明度，菌落和培养基的颜色等。
（2）生长温度和耐热性：将菌种转接到几支试管中，分别在不同温度下培养，每处理2管，目测生长情况。
（3）芽孢菌厌氧性测定：将菌种用外径为1.5mm的接种环穿刺接种在厌氧培养基（酪素水解物20g，NaCl 5g，巯基醋酸钠2g，甲基次硫酸钠1g，琼脂15g，蒸馏水1000 ml），30℃培养，3d和7d分别观察，表面生长者为好氧菌，如沿穿刺线或下部生长者为兼性厌氧菌或厌氧菌。
（4）碳源利用：将菌种接种在各种碳源斜面培养基（MgSO4•7H2O 0.2 g ，（NH4）H2PO4•H2O 0.5 g ，K2HPO40.5g，CaCl2•2H2O 0.1g，（NH4）2SO4 2.0 g ，蒸馏水1000 ml，碳源分别为蔗糖、乳糖、果糖、木糖、半乳糖、甘露醇等，终浓度为0.1%~0.2%）上，适温培养1d，以菌悬液接种，能生长者即培养基变浑浊为阳性，否则为阴性。
（5）氮源利用：将菌种接种在各种氮源斜面培养基（MgSO4•7H2O 0.2 g ，（NH4）H2PO4 1 .36g ，Na2HPO4 2.13g，CaCl2 5.00 ml，FeSO4•7H2O 0.50 ml，葡萄糖10.0 g ，蒸馏水1000 ml），氮源分别为氨态氮如磷酸氢二铵或硝态氮如硝酸钾、乳糖、果糖、木糖、半乳糖等，终浓度为0.2%~0.5%）上，适温培养1d，以菌悬液接种，能生长者即培养基变浑浊为阳性，否则为阴性。
（6）柠檬酸盐利用：将菌种接种在柠檬酸盐斜面培养基（NaCl 5g，MgSO4•7H2O 0.2 g ，（NH4）H2PO4 1 g ，K2HPO4•3H2O 1g，柠檬酸钠2g，0.04%酚红10ml，琼脂12g，蒸馏水1000 ml）上，适温培养3~7d，培养基变为桃红色者为阳性，否则为阴性。
（7）耐盐性和需盐性：将菌种分别接种在含3%，5%，7%，10% 含NaCl的肉汁胨液体培养基中，适温培养3d、7d，目测生长情况。
（8）丙酸盐利用：将菌种接种在丙酸盐斜面培养基上（丙酸钠2g，NaCl 5g，MgSO4•7H2O 0.2 g ，（NH4）HPO4 1 g ，K2HPO4•3H2O 1g，0.04%酚红10ml，琼脂12g，蒸馏水1000 ml）上，适温培养3~7d，培养基变为桃红色者为阳性，否则为阴性。
1.2.3 生化特性测定
（1）氧化酶：将1%的四甲基对苯二胺水溶液滴于干净培养皿的滤纸上，滤纸湿润即可，用牙签取18~24h的菌苔涂抹于湿润滤纸上，在10s内涂抹的菌苔呈蓝色为阳性，60s以上呈蓝色者不计，按阴性处理。
（2）接触酶：将24h培养的斜面菌种，用牙签取菌苔涂抹于已滴有3%过氧化氢的玻片上，如有气泡产生则为阳性，无气泡产生为阴性。
（3）葡萄糖氧化发酵：将24h幼龄菌种穿刺接种于休和利夫森试管培养基（蛋白胨2g，NaCl 5g，葡萄糖10g，琼脂6g，溴百里酚蓝少许，蒸馏水1000ml），每株4支，其中2支上面覆盖凡士林石蜡油，适温培养1d、3d、7d、14d观察，只有开管变黄者为氧化型，开管和闭管均变黄者为发酵型。
（4）甲基红（MR）：培养48h的菌种试管培养液（蛋白胨5g ，葡萄糖5g，NaCl 5g，水1000ml，pH 7.0～7.2）中加入一滴甲基红试剂，红色为甲基红阳性反应，黄色为阴性反应。
（5）V-P测定：将培养24h的菌种培养液（培养基成分同甲基红）与40%NaOH 等量相混，加入少许肌酸，10min如培养液出现红色，即为试验阳性反应，有时需要放置更长时间才能出现红色。
（6）淀粉水解：将菌种接在淀粉琼脂培养基（在肉汁胨中加入0.2%的可溶性淀粉）上，培养2~5d，形成明显菌落后，将碘液滴在平板上，观察菌落周围有无透明圈。
菌落周围如有不变色的透明圈，表示淀粉水解阳性；仍蓝色为阴性。
（7）脲酶：将培养3d的斜面菌苔做成菌悬液，加入一滴酚红指示剂，调pH 至7，使液体呈红色，分成2份，其中1份加入0.1g尿素，几分钟后指示剂变红者为阳性，不变为阴性。
（8）苯丙氨酸脱氨酶：将菌种接在苯丙氨酸斜面培养基（酵母膏3g，NaCl 5g，Na2HPO4 1g，琼脂12g，L-苯丙氨酸1g，蒸馏水1000ml）上，37℃培养8～24h 测定，将10%的FeCl3溶液滴在生长菌的斜面上，变绿为阳性反应，不变为阴性反应。
（9）明胶液化：将菌株接种在明胶液化培养基（蛋白胨5g，明胶150g，水1000ml，pH 7.0～7.2）上，25~28℃培养，于5、10、20、30d观察液化程度。
（10）牛奶分解：将新鲜菌种接于石蕊牛奶（2.5%石蕊水溶液，脱脂牛奶100 ml）中，25~28℃培养，于3、5、10、20、30d观察，还原-石蕊褪色变白；胨化-牛奶变清；产酸-石蕊变红；产碱-石蕊变蓝；酸凝和酶凝-牛奶结块、凝固。
（11）硝酸盐还原：将菌种接种于硝酸盐液体培养基中（肉汁胨培养基1000ml，KNO3 1g，pH 7.0～7.6）上，适温培养1d、3d、5d。
用滴加A液（对氨基苯磺酸0.5g，稀醋酸150ml）及B液（α−萘胺0.1g，蒸馏水20ml，稀醋酸150ml）溶液变为粉红色、橙色、棕色等为硝酸盐阳性，否则为阴性。