基于荧光标记核酸探针及核酸染料SYBR GreenⅠ定量检测单链DNA
SYBR GreenⅠ 核酸染料
6μl
ddH O 2
补足至50μl
上海美季生物技术有限公司 Tel : 021-61452531 Fax : 021-61452532 Email : info@
该产品可用作实时定量 PCR专用荧光指示剂。用于任何一台 real-time PCR 仪上进行 PCR 反应。一般 使用时将 SYBR GREEN Ⅰ 稀释至 1X 浓度。 为了得到更高的荧光信号强度，根据所使用的聚合酶对其 耐受程度的不同，可以选择性的提高SYBR GREEN Ⅰ的浓度至3-4×。
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模板DNA
引物1[10 μM] 引物2[10 μM] 10×PCR Buffer dNTP Mixture (2.5mM each) Taq （2.5U/μl）
20×SYBR Green Ⅰ
<0.1μg
1μl 1μl 5μl 4μl
0.5-2μl
2.5μl
25mM MgCl2
特点
操作简单 价格便宜 适用范围广
储存方法
长期储存在 -20 ℃ 以下，避光 ；4Tel : 021-61452531 Fax : 021-61452532 Email : info@
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产品简介
SYBR GreenⅠ 核酸染料
SYBR Green Ⅰ是一种结合于小沟中的双链DNA结合染料。与双链DNA结合后，其荧光大大增 强。这一性质使其用于扩增产物的检测非常理想。 SYBR Green Ⅰ的最大吸收波长约为 497nm，发射波长最大约为520nm。在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR Green Ⅰ荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射强荧光信号，而不掺入链中的SYBR Green Ⅰ染料分子仅有微弱荧光信号背景，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加同步。
核酸的定量分析方法
其他比值法
总结词
除了染料法和酶法之外，还有一些其他的比值法用于 核酸的定量分析。
详细描述
这些方法包括荧光定量PCR法、基因芯片法、数字 PCR法等。荧光定量PCR法是一种实时定量PCR技术 ，通过在反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的 积累与核酸浓度之间的线性关系来实现对核酸的定量 分析
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基于荧光染料的方法
。
优点
简单易行，对样品预处理要求 较低，定量准确度高。
荧光光谱法
原理
荧光光谱法是通过特定波长的激发光激发核酸分子中的荧光基团，产生荧光信号，通过测量荧光信号的强度，对核酸进行定 量分析。
应用范围
该方法主要应用于低浓度核酸样品的定量分析，如基因芯片、蛋白质芯片等。
优点
灵敏度高，可实现多通道检测，特异性较强。
应用
核酸质谱法在基因突变筛查、基因表达差异分析、基因测序 等方面有广泛的应用。
基质辅助激光解吸/电离质谱
原理
基质辅助激光解吸/电离质谱是一种将样品固定在某种基质上，再用激光束照 射，使样品瞬间气化并离子化的方法。
应用
基质辅助激光解吸/电离质谱在蛋白质组学、代谢组学、生物医药等领域有广 泛的应用。
同位素标记法
原子光谱法
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原理
原子光谱法是通过原子能 级跃迁时吸收或发射特定 波长的光，对核酸中的元 素进行定量分析。
应用范围
该方法主要应用于分析核 酸中的元素种类和含量， 如P、S等。
优点
可同时检测多种元素，灵 敏度高，精密度高。
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基于质谱的方法
核酸质谱法
原理
核酸质谱法利用质谱技术，将核酸分子离子化并分离出不同 质量的离子，从而实现对核酸的定量分析。
荧光定量PCR中探针法与染料法的区别
荧光定量PCR中探针法与染料法的区别：一、荧光定量PCR中探针法与染料法的描述：1.荧光定量PCR探针法：探针法即除了引物外另外设置一个探针，在探针的两端分别带上发光集团和淬灭集团，这个时候，两个平衡不发光，但是当DNA 通过引物合成的时候，探针被折断，释放出发光集团和淬灭集团，两个距离较远，发光集团产生荧光，被机器收集到信号，从而检测基因的量2、荧光定量PCR SYBR Green 染料法：染料能够与双链结合，当PCR扩增的时候，染料结合到DNA上，从而发光，单个的染料不发光，这样就能收集到信号，我们可以看出，染料法特异性不强，只要是双链的DNA都回结合发光。
二、荧光定量PCR中探针法与染料法的优缺点1、探针法通过探针可以增加反应收集信号的特异性，只有探针结合的片段上发生扩增才能收集到信号，能够用多重体系反应的方法，能够预测和提前进行反应条件的优化，缺点是要合成探针，成本高2、染料法经济实惠，可以做溶解曲线，分析全部PCR产物的TM值，缺点就是特异性没有探针法好【分享】定量pcr仪选则宝典:各自精彩的选择如何选择合适的定量PCR仪定量PCR仪主要由两部分组成，一个是PCR系统，一个是荧光检测系统。
选择定量PCR仪的关键——由于定量PCR必需借助样本和标准品之间的对比来实现定量的，对于定量PCR系统来说，重要的参数除了传统PCR的温控精确性、升降温速度等等，更重要的还在于样品孔之间的均一性，以避免微小的差别被指数级放大。
至于荧光检测系统，多色多通道检测是当今的主流趋势——仪器的激发通道越多，仪器适用的荧光素种类越多，仪器适用范围就越宽;多通道指可同时检测一个样品中的多种荧光，仪器就可以同时检测单管内多模版或者内标+样品，通道越多，仪器适用范围越宽、性能就更强大。
荧光检测系统主要包括激发光源和检测器。
激发光源有卤钨灯光源、氩离子激光器、发光二极管LED光源，前者可配多色滤光镜实现不同激发波长，而单色发光二极管LED价格低、能耗少、寿命长，不过因为是单色，需要不同的LED才能更好地实现不同激发波长。
染料法和探针法荧光定量PCR(RT-qPCR)的优缺点比较
染料法和探针法荧光定量PCR（RT-qPCR）的优缺点比较一、荧光染料法(SYBR Green)其原理是：在PCR反应体系中加入过量荧光染料，DNA扩增的过程中，荧光染料特异性地掺入DNA双链，发射荧光信号，随着反应的进行，荧光强度逐渐增强，并且可以实时测量。
如果你要扩增你的目标样品40个循环，在最后一个循环结束时检测到的荧光会比在第10个循环测得的荧光强很多。
优点：1、成本较低，适合大规模的实验。
2、在实验设计阶段非常省时，因为它只需要合适的引物设计。
缺点：1、特异性不是很高。
染料可以插入任何双链DNA，包括引物二聚物和非特异性产物。
2、如果引物二聚体存在或者产物受到污染，得到的结果会不可靠。
3、更容易与低丰度的目标产生非特异性荧光。
需要更多的时间进行结果分析。
二、寡核苷酸探针(Taqman)这种方法涉及使用荧光标记的寡核苷酸(短DNA分子)，探针通常在5 端和3 端都被标记。
在探针的5’端有报告基团，3’端设计淬灭基团，当报告基团接近淬灭基团时，不会检测到荧光信号。
RT-qPCR反应时，寡核苷酸两个基团分离，即可检测到荧光信号，并与PCR产物同步。
使用这种方法的荧光检测依赖于两个过程:1)引物与目标序列的结合(2)探针与引物下游互补序列的结合。
优点：1、更有可能只放大所需的产物，由于引物和探针的结合具有特异性。
2、不需要解离曲线，只有探针与正确的目的序列结合时才能检测到荧光。
3、由于具有特异性，数据更可靠。
4、数据分析时节省时间。
缺点：1、需要大规模实验时耗费成本高。
2、需要更长的时间来设计实验，因为需要好的引物和探针。
总的来说，这两种荧光检测方法都很有效，但对于你的具体实验，可以选择适合的方法。
Taqman探针及SYBR Green I荧光染料技术
半定量RT-PCR步骤 步骤 半定量
步骤： 抽提 抽提RNA，2.反转录获得 反转录获得cDNA，3.以cDNA 步骤： 1.抽提 ， 反转录获得 ， 以 为模板做PCR 为模板做 注意： 步骤 ，RNA抽提质量一定要好，注意污染。内 抽提质量一定要好， 注意： 步骤1， 抽提质量一定要好 注意污染。 参的选择，常用的有 两种。 参的选择，常用的有βactin和GAPDH两种。步骤 ，半 和 两种 步骤3， 定量RT-PCR应该在两管中进行，既内参和目的基因各一 定量 应该在两管中进行， 应该在两管中进行 管，这样便于控制，做图的时候可以放在一各泳道里跑！ 这样便于控制，做图的时候可以放在一各泳道里跑！ 指数期和平台期一定要摸清楚！ 指数期和平台期一定要摸清楚！
TaqMan探针法 探针法
TaqMan探针法是高度特异的定量 探针法是高度特异的定量PCR技术，其核心是利用 技术， 探针法是高度特异的定量 技术 其核心是利用Taq酶的 酶的 5′→3′外切核酸酶活性，切断探针，产生荧光信号。由于探针与模板 外切核酸酶活性， 外切核酸酶活性 切断探针，产生荧光信号。 是特异性结合，所以荧光信号的强弱就代表了模板的数量。 是特异性结合，所以荧光信号的强弱就代表了模板的数量。 在TaqMan探针法的定量 探针法的定量PCR反应体系中，包括一对PCR引物和一条 反应体系中，包括一对 引物和一条 探针法的定量 反应体系中 探针。探针只与模板特异性地结合，其结合位点在两条引物之间。 探针。探针只与模板特异性地结合，其结合位点在两条引物之间。探 针的5′端标记有报告基团 端标记有报告基团(Reporter, R)，如FAM、VIC等，3′端标记 针的 端标记有报告基团 ， 、 等 端标记 有荧光淬灭基团(Quencher, Q)，如TAMRA等。当探针完整的时候， 有荧光淬灭基团 ， 等 当探针完整的时候， 报告基团所发射的荧光能量被淬灭基团吸收，仪器检测不到信号。 报告基团所发射的荧光能量被淬灭基团吸收，仪器检测不到信号。随 着PCR的进行，Taq酶在链延伸过程中遇到与模板结合的探针，其 的进行， 酶在链延伸过程中遇到与模板结合的探针， 的进行 酶在链延伸过程中遇到与模板结合的探针 3′→5′外切核酸酶活性就会将探针切断，报告基团远离淬灭基团，其 外切核酸酶活性就会将探针切断， 外切核酸酶活性就会将探针切断 报告基团远离淬灭基团， 能量不能被吸收，即产生荧光信号（ ）。所以 能量不能被吸收，即产生荧光信号（图4）。所以，每经过一个 ）。所以，每经过一个PCR 循环，荧光信号也和目的片段一样，有一个同步指数增长的过程。 循环，荧光信号也和目的片段一样，有一个同步指数增长的过程。信 号的强度就代表了模板DNA的拷贝数。 的拷贝数。 号的强度就代表了模板 的拷贝数
sybrgreen荧光染料原理
sybrgreen荧光染料原理SybrGreen荧光染料原理引言：SybrGreen是一种常用于生物实验中的荧光染料，它能够与DNA 结合并发出荧光信号。
本文将介绍SybrGreen荧光染料的原理及其在实验中的应用。
一、SybrGreen荧光染料的原理SybrGreen是一种结构简单的荧光染料，其分子中含有一个芳香环和一对氮碱基。
当SybrGreen与DNA结合时，其芳香环可以穿过DNA的双螺旋结构，而氮碱基可以与DNA的碱基配对形成氢键。
这种结合使得SybrGreen的荧光受到DNA的影响而发生变化。
二、SybrGreen荧光染料在实验中的应用1. DNA凝胶电泳实验SybrGreen常用于DNA凝胶电泳实验中，通过与DNA结合并发出荧光信号，可以快速、准确地检测DNA的存在及其迁移距离。
只需将SybrGreen加入DNA样品中，然后进行凝胶电泳，便可通过观察荧光信号来判断DNA的大小和纯度。
2. 实时荧光定量PCR实时荧光定量PCR是一种用于测量特定DNA序列的数量的技术。
在PCR反应中，SybrGreen被添加到PCR混合物中，当PCR反应进行时，SybrGreen与扩增的DNA结合并发出荧光信号。
通过测量荧光信号的强度，可以确定PCR反应的进程和扩增的DNA数量。
3. DNA定量测序SybrGreen还可以用于DNA定量测序中。
在测序反应中，SybrGreen与扩增的DNA结合，并随着测序的进行发出荧光信号。
通过测量荧光信号的强度，可以确定测序反应的进程和DNA的数量。
4. 细胞成像SybrGreen还可以用于细胞成像实验中。
将SybrGreen加入细胞培养物中，它会与细胞内的DNA结合并发出荧光信号。
通过观察荧光显微镜下的细胞图像，可以获得关于细胞核DNA含量和分布的信息。
结论：SybrGreen荧光染料是一种常用的生物实验荧光染料，其原理是通过与DNA结合并发出荧光信号来检测DNA的存在和数量。
荧光定量pcr的应用及其常用的荧光探针和荧光染料
荧光定量pcr的应用及其常用的荧光探针和荧光染料下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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基于功能性核酸识别的荧光各向异性分析方法与应用
基于功能性核酸识别的荧光各向异性分析方法与应用吴熙;裴晓静;林若韵;刘锋;李娜【摘要】荧光各向异性方法又称荧光偏振法,基于相互作用的分子结合前后发射光退偏振的不同而实现对相互作用的研究或对目标物的检测。
20世纪50年代Gregorio Weber 用荧光各向异性法研究了氮磺酰氯与牛血清白蛋白和卵清白蛋白的作用,开启了该方法在生物化学研究中应用的先河。
而20世纪90年代开始的功能性核酸(FNAs,包括核酸适配体和核酸酶等)的发现与合成,使基于功能性核酸的传感得到了广泛的应用。
核酸适配体能够特异性识别目标分子,基于核酸识别的荧光各向异性分析方法具有高选择性、高灵敏度、高通量等优势,在研究蛋白质、核酸和小分子的相互作用中起到重要作用,然而如何提高结合前后的荧光各向异性信号变化,尤其是小分子识别前后,在基于功能性核酸识别的分析方法发展中是一个挑战。
介绍了基于功能性核酸识别的荧光各向异性的方法应用于检测蛋白质、核酸及其他在生命活动中起重要作用的小分子的基本原理及设计理念。
%Based on the difference of the depolarization of the emitted light before and after the interaction of molecules,fluores-cence anisotropy,also known as fluorescence polarization,can be beneficial for the study of interactions and the detection of the targets.In 1950s,Gregorio Weber first studied the interactions between dansyl chloride and bovine serum albumin or ovalbumin with fluorescence anisotropy method,which paved the way for fluorescence anisotropy in biochemical applications.Since the ear-ly 1990s,functional nucleic acids (FNAs,including aptamers,and nucleic acid enzymes)were discovered and synthesized,which have been widely used in functional nucleic acid-based sensing.Aptamers are oligonucleotides thatcan recognize and bind specif-ically to various molecular targets.The fluorescence anisotropy methods which are based on aptamer recognition have the advan-tages of high selectivity,sensitivity and through-put.They play an important role in the study of interaction with protein,nucle-ic acids and small molecules.However,the way of enhancing the fluorescence anisotropy change of small molecules associated with the binding events is challenging.This paper reviews the basic principles and designs of fluorescence anisotropy methods bases on functional nucleic acid recognition for study and detection of proteins,nucleic acids and small molecules that play an im-portant role in the life activity.【期刊名称】《光谱学与光谱分析》【年(卷),期】2017(037)001【总页数】8页(P13-20)【关键词】功能性核酸;识别;荧光各向异性【作者】吴熙;裴晓静;林若韵;刘锋;李娜【作者单位】北京大学化学与分子工程学院，北京 100871;北京大学化学与分子工程学院，北京 100871;北京大学化学与分子工程学院，北京 100871;北京大学化学与分子工程学院，北京 100871;北京大学化学与分子工程学院，北京 100871【正文语种】中文【中图分类】O657.3荧光传感由于信号丰富，灵敏度高，选择性好，可以实现多种模式的测量，如荧光增强与猝灭、荧光共振能量转移、荧光各向异性(荧光偏振)、瞬态荧光、双光子激发，以及共聚焦荧光显微成像等[1]。
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基于荧光标记核酸探针及核酸染料SYBR GreenⅠ定量检测单链DNA
作者：郑爱华朱庆向东山何治柯
来源：《分析化学》2013年第03期
摘要：建立了同步双色荧光定量检测单链DNA的方法。
利用氧化石墨烯将荧光标记核酸探针的荧光猝灭，而当其与待测液中的目标DNA发生杂交反应，生成的双链DNA脱离氧化
石墨烯而使得染料荧光得以恢复，同时生成的双链DNA与核酸染料SYBR GreenⅠ结合，使荧光增强。
在优化条件下，目标DNA浓度在
关键词：氧化石墨烯；SYBR GreenⅠ；同步双色荧光谱；单链DNA；定量检测。