10-羟基喜树碱的研究
10-羟基喜树碱-腺病毒衍生物的合成及抗肿瘤活性研究的开题报告
10-羟基喜树碱-腺病毒衍生物的合成及抗肿瘤活性研
究的开题报告
标题：10-羟基喜树碱-腺病毒衍生物的合成及抗肿瘤活性研究
引言：
喜树碱（Camptothecin）是目前已知活性最高的天然生物碱，具有
良好的抗肿瘤活性。
10-羟基喜树碱（10-hydroxycamptothecin，简称HCPT）是喜树碱的一种衍生物，具有较高的抗肿瘤活性和低的毒副作用。
HCPT生物碱的不足之处在于其生物利用度较低。
因此，研究人员从合成角度入手，尝试通过一系列手段制备HCPT衍生物，以提高其生物利用度和治疗效果。
同时，病毒载体在肿瘤抗瘤药物靶向治疗中也发挥重要作用，其中腺病毒是一种被广泛研究和应用的病毒载体。
方法：
本研究计划在先前工作的基础上，设计并合成一系列HCPT-腺病毒
衍生物，并测试其体外和体内的抗癌活性。
步骤如下：（1）设计并合成HCPT-腺病毒衍生物；（2）测定合成衍生物的化学结构，并评估其对肿
瘤细胞的杀伤作用；（3）使用小鼠xenograft模型评估合成衍生物的抗
肿瘤活性；（4）测定衍生物的免疫学毒性和生物利用度。
预期结果：
预计合成出一系列HCPT-腺病毒衍生物，并对其进行体外体内的抗
肿瘤活性评估。
预计得到的结果可以为寻找新型肿瘤治疗药物提供有价
值的参考。
同时，本研究对于腺病毒作为载体在肿瘤治疗中的应用也具
有理论参考意义。
结论：
本计划的实验将为HCPT衍生物的合成及腺病毒载体在肿瘤治疗中的应用提供新的思路，并对这些衍生物的抗肿瘤活性和毒副作用进行系统的研究，为研发更加有效的抗肿瘤药物提供有价值的参考。
10_羟基喜树碱的提取方法及工艺优化研究
中国医药生物技术 2022年4月第5卷第2期 Chin Med Biotechnol, April 2022, Vol. 5, No. 2 147 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2022.02.014·技术与方法·赵荣国，真国辉，王贺双10-羟基喜树碱是从我国特有植物喜树（Camptotheca acuminala Decne）中分离得到的 20 多个单体中抗肿瘤作用最强的生物碱，它不仅是临床效果较好的抗肿瘤药物，而且还是制备其他喜树碱类衍生物药品的重要中间体。
由于喜树中 10-羟基喜树碱含量甚微，其制备方法的研究已成为当前热点，其中利用现代生物工程技术的方法尤为引人注目[1]。
但至今鲜有报道从喜树细胞培养物中提取天然 10-羟基喜树碱的生产工艺[2-5]表 2 试验因素水平表水平浓度 A时间（h）B0.5 1 1.5溶剂倍数 C10 15 20次数 D 1 2 31 0.1%2 0.3%3 0.5%表 3 超声提取试验表试验号时间（min）溶剂倍数1 30 152 30 203 60 154 60 20，本文就经次生代谢调控和微生物转化后的喜树细胞培养物中提取天然 10-羟基喜树碱的方法及工艺进行了研究，以期为规模化生产提供依据。
1 材料与方法1.1 主要材料1.1.1 试剂甲醇、乙醇，分析纯，购自天津东丽化学试剂厂；二氯甲烷，分析纯，购自天津瑞金化学试剂厂；氢氧化钠、石油醚、环己烷，分析纯，购自北京化工厂；10-羟基喜树碱标准品由中国药品生物制品检定所提供。
1.1.2 仪器高效液相色谱仪为美国 Waters 公司产品；Techsphere ODS 色谱柱和 KQ2250DB 超声波清洗仪均为大连依利特分析仪器有限公司产品；RS-20III 冰冻高速离心机为日本 Tokyo 公司产品；H.H.S21.6 恒温水浴锅为上海医疗器械五厂产品。
10-羟基喜树碱杂质
10-羟基喜树碱杂质10-羟基喜树碱 (11-hydroxy mitragynine) 是来自喜树 (Mitragyna speciosa) 的天然生物碱，具有潜在的药理学活性。
然而，在提取和制备过程中，可能会存在一些杂质。
本文将讨论10-羟基喜树碱杂质的来源、影响及相关解决方法。
一、来源10-羟基喜树碱作为一种天然生物碱，主要存在于喜树的叶片中。
提取10-羟基喜树碱通常需要采用化学方法，如溶剂萃取、温和蒸馏或超声波提取。
然而，这些提取方法在一定程度上可能引入一些杂质。
二、影响10-羟基喜树碱杂质的存在可能会对其药理学活性和安全性产生一定的影响。
常见的杂质包括其他喜树生物碱的衍生物、杂质来源的溶剂、氧化产物等。
这些杂质可能会干扰10-羟基喜树碱的药效评估和临床疗效。
三、分析方法针对10-羟基喜树碱杂质的分析方法也得到了不断的发展和优化。
常见的方法包括高效液相色谱-质谱联用 (HPLC-MS)、气相色谱-质谱联用 (GC-MS) 和核磁共振 (NMR) 等。
四、减少杂质的方法为了减少10-羟基喜树碱中的杂质，可以采用以下几种方法：1. 优化提取过程：在提取10-羟基喜树碱时，可以选择合适的溶剂和提取条件，以减少杂质的引入。
2. 清洁分离技术：采用纯化分离技术，如液相色谱 (LC)、固相萃取 (SPE) 等，可以有效地去除杂质。
3. 质量控制：建立标准化的质量控制程序，确保10-羟基喜树碱的纯度和安全性。
4. 选择合适的提取源：在选择提取源时，可以优先考虑那些杂质较少的植物，以减少提取过程中的杂质。
五、结论10-羟基喜树碱作为一种具有药理学活性的天然生物碱，其杂质问题需要引起我们的关注。
通过优化提取过程、采用清洁分离技术、建立质量控制程序及选择合适的提取源等方法，可以减少10-羟基喜树碱中的杂质，提高其药理学活性和安全性。
进一步的研究需要将目光放在提高10-羟基喜树碱纯度的方法上，以开发更多潜在的临床应用和药物开发的机会。
10-羟基喜树碱的研究
10-羟基喜树碱的分子式：
理化性质： 10-羟基喜树碱为淡黄色结晶性粉末，密 度1.60g/cm3 ，熔点265-270 ºC。 药理性质：遇光易变质，微有引湿性，在氯仿8份 与甲醇2份的溶液中有右旋性。在乙醇、氯仿等有 机溶剂中微溶，在水中不溶，在稀碱溶液中溶解。 进入生物体后，通过抑制拓扑异构酶I而发挥细胞毒 作用，使DNA不能复制，造成不可逆的DNA链破坏， 从而导致细胞死亡。 临床应用：用于胃癌、肝癌、头颈部癌及白血病治 疗。
10-羟基喜树碱结构表征
质谱分析 质谱分子离子峰为 364 , 主要碎片离子峰有 320 , 305 ,292 , 264 , 235。 核磁共振波谱分析 用400 MHz核磁共振波谱仪测量了目标产物的1H 谱、 13C谱、 异核多量子相干(gHMQC)谱、 异核多链相 关(gHM-BC)谱。
高效液相色谱分析 色谱条件：色谱柱 YWG C18 柱, 10 µm , 416mm × 250mm ； 流动相:甲醇- 水(45∶ 55) ;流速:110mL/ min ; 压力:1 000PSI;进样 量:20 µL ,按外标法进 行测定。
10-羟基喜树碱最佳合成工艺
以喜树碱为原料 , 通过氧化、光化两步反应 合成10-羟基喜树碱, 实验操作简单 , 回收率 高。
10-羟基喜树碱结构表征
元素分析仪测定 C , H , N 三元素的百分率分 别为 65.91(计算值 65.93) , 4.42 (计算值 4.43) , 7.71 (计算值 7.69) ,与理论值相符 , 产 物经高效液相色谱检测含量为 99.5 %。 10-羟基喜树碱与起始反应物喜树碱(CPT)的 红外光谱比较, 产物 10-羟基喜树碱比原料 CPT 增加了酚羟基的ν O-H与ν C- OH , 其他各 特征吸收基本不变。
抗肿瘤药物10-羟基喜树碱的研究与应用进展
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Ｈ Ｃ Ｔ Ｐ
Ｈ２ ｏ， Ｈ Ｏ ｓ ／ ２
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图 ２
喹 啉 环 氦 氧 化 法 制 备 ＨＣＰ 流 程 Ｔ
Ｆｉ． Ｔｈ ｒ ｐ ｒ ｔｏ ｏ ｇ２ ｅ ｐ ｅ ａ ａ ｉｎ ｆ ＨＣＰＴ ｘ ｄ ｔｏ ｆ ｂｙ ｏ ｉ ａ ｉ ｎ ｏ
ｎｉｒ ｇｅ ｑｕ ｎ ｌｎｅ ｒ ｎｇ ｔ ｏ ｎ。 ｉ ｏ ｉ ｉ
了 ＨＣ Ｔ的 主要 特 点 、 备 方 法 及 其 在 治 疗 不 同肿 瘤 中的 作 用 。 Ｐ 制
关 键 词 ： 树 碱 ；０羟 基 喜 树 碱 ； 喜 １一 制备
中 图 分 类 号 ： ６ Ｒ ９ ９ １ ＴＱ ４ ３ ７ ． 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ： ６ ２ ５ ２ （ ０ ７ １ —０ ０ —０ １７— ４５２０）２ ０９ ３
１ 一 基喜 树 碱 （ 称 ＨＣ Ｔ， ＡＳ Ｎｏ １ ６ ５０ — ０羟 简 Ｐ Ｃ ． ９８—９
７ 是 从我 国特 有植 物 喜 树 中提 取 的一 种 天 然 生 物 碱 ， ） 也是 一种 新 型 有 效 的抗 肿 瘤 药 物［ 。ＨＣ Ｔ 在 许 多 １ ］ Ｐ 国家 已获 得 广 泛 临 床 应 用 。 与 喜 树 碱 （ Ｐ 相 比， Ｃ Ｔ） ＨＣ Ｔ 在治疗 肿 瘤 方 面具 有 更 好 的 疗 效 和 较 小 的 毒 Ｐ 副作 用 。此外 ， 还 是 已获 得 Ｆ Ａ（ 国食 品 及 药 物 它 Ｄ 美 管 理局 ） 准 临 床 应 用 的喜 树 碱 类 抗 肿 瘤 药 物 Ｃ Ｔ 批 Ｐ 一 １ １和 ＴＰ 的半合 成 的前体 化合 物 。 Ｔ
一株产10-羟基喜树碱喜树内生真菌的分离和鉴定
Ｗａ ｇＸ ｅ ｕ ， ｎＣ ａ ｇｌ ＬｕＷｅ —ｏａ ｄ ｕ－ｉｇ ｎ ｕ － ｎ Ｍｉ ｈ ｎ —， ｉ ｊ ｉ ｎｂ Ｃ ｉ ｎ ｎ Ｂｏ ｙ
一
株 产 １ ． 基 喜 树 碱 喜 树 内生 真 菌 的分 离 和 鉴 定 ０羟
汪学军 闵长莉 刘文博 薄翠英
（ 皖西学院生物与制药工程 系，六安 ２ ７ １ ） ３ ０ ２
摘 要 ： 目的 从 喜 树 组 织 中筛 选 产 ｌ 基 喜 树 碱 的 内生 真 菌 ， 并 对 其 进 行 鉴 定 。 方 法 从 喜 树 （ ａ ｐ ｏｈ ｃ ｃ ｍｉａｅ ０羟 Ｃ ｍ ｔｔｅａａ ｕ ｎ ｔ Ｄｅｎ １ 皮 中 分 离 、纯 化 得 到 ６ 内生 真 菌 ，经 摇 瓶 发 酵 后 ，采 用 Ｔ Ｃ 、 Ｈ Ｌ Ｉ Ｓ 析 菌 丝 的 提 取 物 ； 用 插 片法 进 行 形 态 ｃ ｅ树 株 Ｌ 法 Ｐ Ｃ￣Ｍ 分 Ｉ 学 观 察 ， 采 用 分 子 生 物 学 方 法 对 ＸＫ ０ 菌 株 ｒ ＮＡ的Ｉ Ｓ 因 （ Ｓ５８ Ｄ ） 行Ｐ Ｒ 增 、测 序 ；利 用 ＢＬ Ｔ 件 与 Ｇ ｎ ａｋ ０２ Ｄ Ｔ基 １ 一．Ｓｒ ＮＡ 进 Ｔ Ｃ 扩 ＡＳ 软 ｅＢ ｎ 数 据 库 进 行 相 似 性 分析 ， 并 用Ｃｌｓ ｌ ．１ 件 法 构 建 系 统 发 育 树 。结 果 内生 真 菌 Ｘ ０ 可 产 １一 基 喜 树 碱 ； 菌株 ＸＫ ０ 在 ｕｔ ８ 软 ａ ＸＩ Ｋ０ ２ ０羟 ０２ Ｐ 培 养 基 上 生 长 迅 速 ， 白 色绒 毛 状 ，４ 能长 满 直 径 为 ９ｍ培 养 皿 ， １ ｄ 开 始 形 成 黑 色 的子 座 ， 产 生 大 量 的 分 生 孢 子 ；Ｉ Ｓ ＤＡ ｄ ｃ ０后 Ｔ 序 列 与 Ｖｌ ａｉ ｙ ｂ ｔ ａ ｄ ￣ 应 序 列 的相 似 性 为 １０ ａｓ ｍ ｌＭｉａｅｅ Ｙ ｍａａＨ ａ ０ ％，基 因库 接 受 号（ ｃｓｉｎＮｏ 为 Ｆ４ ８ ７ 。结 论 根 据 形 态 学 和 分 Ａｃｅｓ ｏ ． Ｊ１１０ ）
喜树规范化种植(GAP)及10-羟基喜树碱制备方法研究的开题报告
喜树规范化种植（GAP）及10-羟基喜树碱制备方法研究的
开题报告
1. 研究背景和意义
喜树是一种药用植物，主要有中药材和食用价值。
其中，喜树碱是喜树的主要有效成分之一，具有降血压、镇痛、消炎等药理作用，是一种重要的中药材。
但是，目前喜树的种植和喜树碱的提取存在一些问题，比如种植不规范、品质不稳定、提取工艺存在缺陷等。
因此，开展喜树规范化种植和10-羟基喜树碱制备方法的研究，对于改善喜树资源的利用和中药材的品质提升具有重要意义。
2. 研究内容和方法
（1）喜树规范化种植：采用GAP（Good Agricultural Practice）规范，从选地、培育管理、施肥、病虫害防治等方面进行规范化种植，比较不同处理方式对喜树生长和品质的影响。
（2）10-羟基喜树碱制备方法研究：采用超声波提取法、微波辅助提取法、蒸馏提取法、酸浸提取法等不同提取方法，比较各种提取方法对10-羟基喜树碱提取效率和品质的影响，并对提取工艺进行优化。
3. 研究预期成果
通过喜树规范化种植和10-羟基喜树碱提取方法研究，预计可以获得以下成果：
（1）建立喜树GAP规范化种植技术，并筛选出最佳的培育管理方式，提高喜树的产量和品质稳定性；
（2）比较不同提取方法对10-羟基喜树碱的提取效率和品质的影响，找出最佳提取工艺，提高10-羟基喜树碱的产量和品质。
4. 研究意义和应用价值
本研究可以推动喜树规范化种植技术的推广和应用，提高喜树产业的发展水平，推动中药材产业的健康发展。
同时，该研究可以为10-羟基喜树碱的提取和利用提供技术支撑，为药品、保健品等产品的生产提供可靠的原材料。
树脂法纯化10-羟基喜树碱的工艺研究
摘要喜树（Camptotheca acumunata)我国特有植物，蓝果树科喜树属落叶乔木。
喜树整株都含有喜树碱，近年来喜树碱及其衍生物在抗癌临床上的应用，对多种癌症的疗效取得了令人满意的效果，因此喜树的开发利用成为目前广泛研究的热点。
本论文以10-羟基喜树碱作为研究对象，优化了X-5树脂吸附解吸附工艺从喜树碱中试生产的废液分离10-羟基喜树碱的小试工艺条件：对X-5树脂在不同浓度洗脱剂、不同pH值、不同温度及不同质量等吸附参数的详细考查，确定了最佳吸附与解析附的工艺参数：吸附：pH值为5,温度50℃，质量0.1g X-5树脂,吸附时间1.5小时10-羟基喜树碱吸附量最多，流速5BV/h；解析附：75%乙醇洗脱液最佳，流速5BV/h。
本文通过用不同条件筛选对大孔吸附树脂X-5分离纯化喜树果实中抗癌活性成分10-羟基喜树碱的工艺进行研究，取得了满意的结果，为10-羟基喜树碱的研究提供了有效依据。
关键词喜树；10-羟基喜树碱；大孔吸附树脂目录摘要 (2)目录 (3)一、前言 (4)（一）喜树概况 (4)（二）10-羟基喜树碱的研究现状 (4)二、树脂纯化10-羟基喜树碱的工艺研究 (5)（一）仪器与材料 (5)1、仪器 (5)2、材料与试剂 (6)（二）检测方法 (6)（三）样品溶液的制备 (6)（四）树脂的预处理 (6)(五)树脂含水率的确定 (6)（六）吸附-解吸附实验 (6)1、吸附量和吸附率的测定 (6)2、吸附量、吸附率和解析率的计算 (6)3、洗脱剂浓度对解吸附率的影响 (7)4、pH对吸附能力的影响 (7)5、温度对吸附能力的影响 (7)6、吸附时间对吸附能力的影响 (7)7、树脂用量对吸附能力的影响 (7)（七）吸附-解吸附实验 (7)（八）结果与讨论 (7)1、洗脱剂浓度对解析率的影响 (7)2、pH值对吸附能力的影响 (7)3、温度对吸附能力的影响 (7)4、吸附时间及树脂用量对吸附率的影响 (9)（九）吸附-解析附 (9)1、X-5树脂的泄漏曲线 (9)2、X-5树脂洗脱曲线 (10)三、结论 (10)参考文献 (11)一、前言（一）喜树概况喜树（Camptotheca acuminata Decne）,为蓝果树科（Nyssaceae）喜树属（Camptotheca Decne）的落叶乔木，高达20余米，为我国特有植物。
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10-羟基喜树碱的分子式：
理化性质： 10-羟基喜树碱为淡黄色结晶性粉末，密 度1.60g/cm3 ，熔点265-270 ºC。 药理性质：遇光易变质，微有引湿性，在氯仿8份 与甲醇2份的溶液中有右旋性。在乙醇、氯仿等有 机溶剂中微溶，在水中不溶，在稀碱溶液中溶解。 进入生物体后，通过抑制拓扑异构酶I而发挥细胞毒 作用，使DNA不能复制，造成不可逆的DNA链破坏， 从而导致细胞死亡。 临床应用：用于胃癌、肝癌、头颈部癌及白血病治 疗。
10-羟基喜树碱 羟基喜树碱
10-Hydroxycamptothecin
组 员：刘玉楠
陈 星
目
录
10-羟基喜树碱的简介 10-羟基喜树碱合成工艺 10-羟基喜树碱结构表征 10-羟基喜树碱应用前景
10-羟基喜树碱的简介
喜树碱是一种植物抗癌药物，从中国中南、西南分 布的喜树中提取得到。1976年中国化学家高怡生等 合成消旋喜树碱成功。喜树碱对肠胃道和头颈部癌 等有较好的近期疗效，但对少数病人有尿血的副作 用。 10-羟基喜树碱是喜树碱分子的第10位碳原子 的氢被羟基取代，是从喜树中提取的另一种生物碱， 因此可认为是喜树碱的天然衍生物。 10-羟基喜树 碱的抗癌活性超过喜树碱，对肝癌和头颈部癌也有 明显疗效 ，而且副作用较少 。
10-羟基喜树碱结构表征
质谱分析 质谱分子离子峰为 364 , 主要碎片离子峰有 320 , 305 ,292 , 264 , 235。 核磁共振波谱分析 用400 MHz核磁共振波谱仪测量了目标产物的1H 谱、 13C谱、 异பைடு நூலகம்多量子相干(gHMQC)谱、 异核多链相 关(gHM-BC)谱。
高效液相色谱分析 色谱条件：色谱柱 YWG C18 柱, 10 µm , 416mm × 250mm ； 流动相:甲醇- 水(45∶ 55) ;流速:110mL/ min ; 压力:1 000PSI;进样 量:20 µL ,按外标法进 行测定。
10-羟基喜树碱最佳合成工艺
以喜树碱为原料 , 通过氧化、光化两步反应 合成10-羟基喜树碱, 实验操作简单 , 回收率 高。
10-羟基喜树碱结构表征
元素分析仪测定 C , H , N 三元素的百分率分 别为 65.91(计算值 65.93) , 4.42 (计算值 4.43) , 7.71 (计算值 7.69) ,与理论值相符 , 产 物经高效液相色谱检测含量为 99.5 %。 10-羟基喜树碱与起始反应物喜树碱(CPT)的 红外光谱比较, 产物 10-羟基喜树碱比原料 CPT 增加了酚羟基的ν O-H与ν C- OH , 其他各 特征吸收基本不变。
10-羟基喜树碱应用前景
10 - 羟基喜树碱可以作为 S期的特异性抗癌药物 , 毒性比喜 树碱小 ,在临床上主要用于原发性肝癌、胃癌、慢性粒细胞 白血病、直肠癌、 膀胱癌的治疗, 与常用抗癌药物无明显交 叉耐药性 , 与国外 10 - 羟基喜树碱衍生物Topotecan , CPT211 等药物相似。 10 - 羟基喜树碱除了用于针剂生产 , 还可以作为已被美国 FDA批准的抗癌药 “拓扑替康” 的原 料药。 喜树碱的两种衍生物硝基喜树碱 、羟基喜树碱已得到美国的 批准用于临床 ,其它的正处于各级临床实验阶段 。所有的衍 生物都以喜树碱为原料而合成 ,据估计 ,喜树碱的全球年需求 量很大 ,喜树碱类药物全球年销售额大约数十亿美元 。因此 , 作为一种原料药 ,喜树碱具有相当的理论和应用研究价值 。
Thanks！