恒古骨伤愈合剂对激素性坏死股骨头内VEGF基因表达的影响
恒古骨伤愈合剂怎么样？
恒古骨伤愈合剂怎么样？恒古骨伤愈合剂不但能治疗股骨头坏死，对于病因明确的股骨头坏死，还能很好地预防，因此它在临床上的应用越来越广泛，不少患者问我，恒古骨伤愈合剂怎么样？现在就来详细解答这一问题，并介绍一下股骨头坏死的预防和早发现、早治疗知识。
股骨头坏死听名字就很可怕——人体最大的骨头发生坏死，其结局不明觉厉。
而它最可怕的地方在于，虽然早期保守治疗即有望痊愈，但早期症状不明显，患者常忽视，因此大部分患者最后不免手术，花费巨大。
所以，预防和早期治疗对于避免股骨头坏死十分重要。
股骨头坏死第一位的病因是糖皮质激素的应用，其次为酗酒和外伤。
激素性股骨头坏死约占所有股骨头坏死的30-50%，不管是长期使用激素还是短期大剂量的冲击疗法，都可能造成股骨头坏死。
既然不能避免应用糖皮质激素，能否用药物预防呢？预防股骨头坏死，恒古骨伤愈合剂怎么样呢？恒古骨伤愈合剂等活血化瘀类中药对激素性股骨头坏死能起到很好的预防作用。
临床研究发现，采用中药预防的应用糖皮质激素患者仅6.7%发生股骨头坏死，远低于文献报道33%的发生率。
外伤如股骨颈骨折是股骨头坏死的另一大类原因，最常见的是股骨颈骨折，可以直接影响股骨头局部的血运供给，从而导致股骨头坏死。
如果不及时治疗，股骨颈骨折的患者中有1∕3的人会发生股骨头坏死。
虽然外伤直接破坏股骨头的血供，似乎股骨头坏死不可避免，对此类患者预防股骨头坏死，恒古骨伤愈合剂怎么样？临床试验发现，对于股骨颈骨折内固定术后患者132例分别采用不同中药进行预防性用药，采用三七伤药片预防能使股骨头坏死发生率22%，用恒古骨伤愈合剂预防能使股骨头坏死发生率进一步降低至9%，而且即使发生坏死，程度也更轻。
对于早期股骨头坏死的治疗，恒古骨伤愈合剂怎么样？用于单用或联合其他药物、方法治疗早期股骨头坏死的疗效已得到大量的临床验证。
如一项针对60名II期股骨头坏死的临床试验表明，隔日一次服用恒古骨伤愈合剂4-8个月后，单用该药的治愈率就达到74.6%，总有效率93.4%。
基于网络药理学探讨恒古骨伤愈合剂治疗股骨头坏死的作用机制
基于网络药理学探讨恒古骨伤愈合剂治疗股骨头坏死的作用机制缪敏;秦颢语;马童;陈冉;孙岩【期刊名称】《山西中医药大学学报》【年(卷),期】2024(25)3【摘要】目的:研究恒古骨伤愈合剂(Osteoking)治疗股骨头坏死(osteonecrosis of the femoral head, ONFH)的有效成分、作用靶点及作用机制。
方法:通过TCMSP数据库,挖掘Osteoking的主要成分和作用靶点;通过GEO、DisGeNET、GeneCards等数据库获取ONFH疾病相关基因。
利用Venny 2.1.0在线工具将主要成分作用靶点和疾病靶点取交集,通过DAVID在线工具对交集基因进行蛋白质组学基因结构功能通路分析;使用Cytoscape 3.9.1软件构建药物成分-化合物-靶点相互作用图,并利用STRING网络平台制作蛋白互作网络(protein-protein interaction networks, PPI)。
运用R语言软件包,开展GO功能及KEGG通路的富集分析。
结果:筛选得到Osteoking 17个主要活性成分和75个作用靶点,主要活性成分包括常春藤苷、豆甾醇等;作用靶点包括雌激素受体(ESR1)、凝血因子(F3)等。
Osteoking通过调控机体代谢、雌激素受体/配体等信号通路改善ONFH;Osteoking主要活性成分与靶点进行分子对接后的结合能均小于-5 kJ/mol,具有较好的结合活性。
结论:Osteoking能够通过修复ONFH坏死组织血管,改善骨组织血运障碍,提高成骨细胞的分化能力,从而治疗ONFH,为进一步研究Osteoking治疗ONFH的作用机制提供线索。
【总页数】8页(P273-280)【作者】缪敏;秦颢语;马童;陈冉;孙岩【作者单位】昆明医科大学药学院暨云南省天然药物药理重点实验室;昆明医科大学第二附属医院检验科;昆明医科大学现代生物医药产业学院【正文语种】中文【中图分类】R285【相关文献】1.探讨彝药恒古骨伤愈合剂治疗骨质疏松症的系统药理学作用机制2.基于网络药理学方法分析股骨头坏死愈胶囊治疗股骨头坏死的潜在靶点及作用机制3.异构信息网络驱动的恒古骨伤愈合剂“异病同治”4种骨伤疾病的作用机制4.基于cAMP/PKA/PGC1α信号通路探讨恒古骨伤愈合剂改善肌筋膜疼痛综合征大鼠能量代谢的作用机制5.基于网络药理学及分子对接探讨恒古骨伤愈合剂抑制2型糖尿病成骨细胞铁死亡的潜在机制因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
恒古骨伤愈合剂对兔骨折愈合的影响
恒古骨伤愈合剂对兔骨折愈合的影响吴建飞;占日新【期刊名称】《临床合理用药杂志》【年(卷),期】2017(10)27【摘要】目的探讨恒古骨伤愈合剂对兔骨折愈合的影响。
方法 2016年6—8月于浙江中医药大学动物实验研究中心选取普通级健康雄性兔12只,适应性饲养3 d后,随机分成治疗组与对照组,各6例。
两组兔均复制骨折模型,治疗组灌服恒古骨伤愈合剂,对照组灌服等量0.9%氯化钠溶液,两组均连续给药5周。
比较两组兔治疗前后空腹血糖(FPG)、三酰甘油(TG)、体质量,治疗1周、3周、5周后骨形态发生蛋白2(BMP-2)、转化生长因子β1(TGF-β1)、血小板衍生因子(PDGF)、碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)水平。
结果治疗前后两组兔FPG、TG水平及体质量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
治疗1周后,治疗组TGF-β1水平高于对照组(P<0.05);治疗1周后,两组BMP-2、PDGF、b FGF水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗3周后,两组BMP-2、TGF-β1、PDGF、b FGF水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗5周后,治疗组BMP-2、TGF-β1、PDGF、b FGF水平高于对照组(P<0.05)。
结论恒古骨伤愈合剂可提高骨折兔BMP-2、TGF-β1、PDGF、b FGF 水平,有利于兔骨折愈合。
【总页数】3页(P13-14)【作者】吴建飞;占日新【作者单位】浙江省杭州市萧山区第四人民医院【正文语种】中文【中图分类】R684【相关文献】1.恒古骨伤愈合剂对人骨髓间充质干细胞生长、分化的影响及机制研究2.恒古骨伤愈合剂联合闭合复位经皮锁定钢板固定对胫骨骨折术后愈合的影响3.恒古骨伤愈合剂促进兔坏死股骨头内核心结合因子α1基因表达的实验研究4.基于“异病同治”理论探讨恒古骨伤愈合剂在4种骨伤科疾病治疗中的应用5.恒古骨伤愈合剂对骨质疏松性椎体压缩性骨折术后骨代谢和骨密度的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
恒古骨伤愈合剂对绝经后骨质疏松和骨质疏松性骨折模型树鼩体成分的影响
恒古骨伤愈合剂对绝经后骨质疏松和骨质疏松性骨折模型树鼩体成分的影响目的：研究恒古骨伤愈合剂对绝经后骨质疏松（OP）和骨质疏松性骨折（OPF）模型树鼩体成分的影响。
方法：将50只雌性滇西亚种树鼩随机分为正常对照组（等体积0.9%氯化钠溶液）、OP模型组（等体积0.9%氯化钠溶液）、OP用药组（3 mL/kg）、OPF模型组（等体积0.9%氯化钠溶液）、OPF用药组（3 mL/kg），每组10只。
切除树鼩双侧卵巢和子宫以建立OP模型；取OP模型树鼩行右侧后肢胫骨骨折术以建立OPF模型。
建立OP模型180 d后/建立OPF模型成功后，灌胃相应药物，每2 d 1次，连续90 d。
给药90 d后以双能X线吸收法检测树鼩全身及各部位的体成分。
结果：与正常对照组比较，OP模型组树鼩全身（含头部和不含头部）骨矿盐含量均显著减少，肌肉组织百分比均显著降低，脂肪组织百分比均显著升高；脊柱、腰椎、腰骶骨、骨盆骨面积均显著增加，肌肉组织百分比均显著降低，脂肪组织百分比均显著升高；左骨盆、右骨盆肌肉组织百分比均显著降低，脂肪组织百分比均显著升高，差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。
与OP模型组比较，OP用药组树鼩全身（含头部）脂肪组织百分比显著降低；全身（不含头部）骨矿盐含量显著增加，脂肪组织百分比显著降低；脊柱、腰椎、腰骶骨、骨盆骨面积均显著减少，肌肉组织百分比均显著升高，脂肪组织百分比均显著降低；左骨盆、右骨盆肌肉组织百分比均显著升高，脂肪组织百分比均显著降低，差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。
与正常对照组比较，OPF模型组树鼩全身（含头部和不含头部）、脊柱、腰椎骨矿盐含量均显著减少，脂肪组织百分比均显著升高；骨盆骨矿盐含量显著减少，肌肉组织百分比显著降低，脂肪组织百分比均显著升高；腰骶骨、左骨盆、右骨盆脂肪组织百分比均显著升高，差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。
与OPF 模型组比较，OPF用药组树鼩全身（含头部和不含头部）、脊柱、骨盆肌肉组织百分比均显著升高，脂肪组织百分比均显著降低；腰椎、腰骶骨、左骨盆、右骨盆脂肪组织百分比均显著降低，差异均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。
恒古骨伤愈合剂对骨质疏松骨折树鼩雌二醇和骨代谢的影响
Journal of Kunming Medical UniversityCN 53-1221R［基金项目］国家自然科学基金资助项目（81460647）；云南省应用基础研究计划项目（2012FB022,2013FZ072,2014FB033）；云南省科技厅-昆明医科大学应用基础研究联合专项基金资助项目［2017FE467（-128）］［作者简介］李进涛（1982～），男，云南嵩明县人，博士，实验师，主要从事药学研究工作.郑红和李进涛对本文有同等贡献.［通信作者］赵宏斌.E-mail:596829191@ ；唐薇.E-mail:tangw666@昆明医科大学学报2017，38（11）：15耀18恒古骨伤愈合剂对骨质疏松骨折树雌二醇和骨代谢的影响李进涛１），郑红１），李波1），袁鑫2），唐薇2），赵宏斌3）（1）昆明医科大学实验动物学部，云南昆明650500；2）昆明医科大学第一附属医院科教中心；3）急诊创伤中心，云南昆明650032）［摘要］目的观察恒古骨伤愈合剂对骨质疏松骨折树血清雌二醇和骨代谢指标的影响．方法骨质疏松骨折树随机分为用药组和对照组，用药组实验树按体重100g 每2d 灌服恒古骨伤愈合剂0.3mL ，对照组实验树按相同剂量灌服生理盐水．实验树灌服90d ，心脏采血分离血清，应用ELISA 试剂盒检测血清中E 2、OC 、PINP 、CTX 、TRACP-5b 的含量．结果用药组实验树血清E 2含量（145.16±21.76）显著高于对照组（30.78±4.22），＜0.05，血清OC （1546.67±219.07）、PINP （10.02±1.76）、CTX （176.47±24.56）、TRACP-5b（1249.06±194.87）分别显著低于对照组（2792.96±387.23）、（28.74±4.05）、（324.67±41.32）、（2106.36±322.99），＜0.05．结论恒古骨伤愈合剂能够引起骨质疏松骨折树雌二醇和骨代谢指标的变化，说明有一定的疗效．［关键词］恒古骨伤愈合剂；骨质疏松；骨折；树；雌二醇；骨代谢［中图分类号］Q955［文献标志码］A ［文章编号］2095－610X （2017）11－0015－04Effects of Osteoking on Estradiol and Bone Metabolism of TreeShrews with Osteoporotic FractureLI Jin-tao １），ZHENG Hong １），LI Bo 1），YUAN Xing 2），TANG Wei 2），ZHAO Hong-bin 3）（1）Dept.of Laboratory Animal Science ，Kunming Medical University ，Kunming Yunnan 650500；2）Dept.of Technology ；3）Dept.of Emergency Medicine ，The 1st Affiliated Hospital of Kunming Medical University ，Kunming Yunnan 650032，China ）［Abstract ］Objective To observe the effects of Osteoking on serum estradiol and bone metabolism index oftree shrew with osteoporotic fracture.Methods Tree shrews with osteoporotic fracture were randomly divided into treatment group and control group.The tree shrews in treatment group were given 0.3mL of Osteoking by 100g body weight every two days for 90days ，while the tree shrews in the control group were given the same dose of saline.The serum samples were collected from the heart.The contents of E 2，OC ，PINP ，CTX and TRACP-5b were measured by ELISA kit.Results The serum E 2content of tree shrews in the treatment group was significantly higher than thecontrol group （145.16±21.76vs 30.78±4.22）（＜0.05），the serum OC （1546.67±219.07），PINP （10.02±1.76），CTX （176.47±24.56），TRACP-5b （1249.06±194.87）in the treatment group were significantly lower than the control group （2792.96±387.23）and （28.74±4.05），（324.67±41.32），（2106.36±322.99）（＜0.05）．Conclusion Osteoking can cause changes in estradiol and bone metabolism index of tree shrews with osteoporotic fracture ，indicating it has a certain effect［Key words ］Osteoking ；Osteoporosis ；Fracture ；Tree shrew ；Estradiol ；Bone metabolism第38卷16昆明医科大学学报恒古骨伤愈合剂是一种主要成分为黄芪、人参、红花、三七、杜仲、鳖甲、陈皮、钻地风、洋金花等棕褐色的液体制剂，其主要的功效为活血益气、补肝肾、接骨续筋、消肿止痛、促进骨折愈合．临床常用于新鲜骨折及陈旧骨折、股骨头坏死、骨关节病、腰椎间盘突出、腰损伤等症的治疗[1-3]．但其具体的作用机制机理还不清楚，有待进一步的研究探索．因此本实验采用去卵巢骨质疏松树模型来研究恒古骨伤愈合剂对骨质疏松树骨折后血清中雌二醇（E2）和骨代谢指标的影响，以更好地指导此药在临床中的使用．1材料与方法1.1材料1.1.1药品恒古骨伤愈合剂，25mL/瓶，每毫升含生药0.36g，由云南克雷斯天然药物制药厂提供，生产批号为20160136．1.1.2实验用滇西亚种树12月龄去卵巢骨质疏松滇西亚种雌性树（采用Prodigy型DXA骨密度仪检测树全身骨密度下降25%选为实验用），体重为100～130g，树由昆明医科大学实验动物学部提供，树生产许可证SCXK（滇）K2013-0002，树使用许可证SYXK（滇）K2015-0002．1.1.3实验用树饲养笼实验树饲养笼采用不锈钢丝制成长40cm×宽23cm×高30cm活动区连接与长20cm×宽10cm×高14cm底部带孔不锈钢板窝箱，连接处有不锈钢板活动阻隔，每个饲养笼配有不锈钢食槽、塑料饮水瓶．5个正常饲养笼构成一层，每层下面安置1个不锈钢粪尿盘，每个饲养架有4层，每架由20个饲养笼组成.1.1.4实验试剂盒血清E2、OC、PINP、CTX、TRACP-5b ELISA检测试剂盒来源于齐一生物科技（上海）有限公司．1.1.5实验仪器Micromax离心机、MultiskanGo 1510全自动酶标仪来源于美国Thermo Fisher Scientific公司．1.1.6全价颗粒饲料树全价颗粒饲料由昆明医科大学实验动物学部提供，饲料生产许可证SCXK（滇）2011-0005．1.2方法1.2.1实验树分组与饲养选择12月龄去卵巢骨质疏松的滇西亚种雌性树12只，体重为100～130g．随机分为用药组和对照组，每组6只．用药组实验树按体重100g每2d灌服恒古骨伤愈合剂0.3mL，对照组实验树按相同剂量灌服生理盐水．骨质疏松树右侧后肢行胫骨骨折术，采用不锈钢细管固定骨折部位．动物实验方案已获得昆明医科大学动物实验伦理委员会的审核批准（KMMU2016002）．实验树在温度为22℃～26℃、相对湿度为45％～60％环境下饲养，自由采食饮水，每天人工光照12h．1.2.2血清的采集实验树灌服90d后，禁食不禁水12h．直接心脏采血1.0mL左右装入高压灭菌离心管，4℃静置过夜后，3000r/min离心10～15min分离血清，储存于-80℃待测．1.2.3雌二醇和骨代谢指标的检测取血清参照雌二醇（E2）和骨代谢指标（OC、PINP、CTX、TRACP-5b）ELISA检测试剂盒说明书的实验步骤，采用MultiskanGo1510全自动酶标仪测定实验OD值.1.3统计学处理实验数据以均值±标准差（x±s）表示，采用SPSS软件统计分析，如数据符合正态性采用检验，＜0.05为差异有统计学意义．2结果2.1恒古骨伤愈合剂对骨质疏松骨折树血清E2的影响用药组实验树血清E2含量与对照组相比较差异有统计学意义（＜0.05），见表1．2.2恒古骨伤愈合剂对骨质疏松骨折树血清骨形成标志物的影响用药组实验树血清骨形成标志物OC、PINP 分别与对照组相比较差异有统计学意义（0.05），见表2．2.3恒古骨伤愈合剂对骨质疏松骨折树血清骨吸收标志物的影响用药组实验树血清骨吸收标志物CTX、TRACP-5b分别与对照组相比较差异有统计学意义（＜0.05），见表3．17第11期李进涛，等．鼩恒古骨伤愈合剂对骨质疏松骨折树雌二醇和骨代谢的影响3讨论研究认为树与灵长类动物具有很近的亲缘关系，并且已经在生物医学中人类疾病动物模型的研究和新药的研发中有了一定的应用[4]．特别是已经有了采用双侧切除树卵巢建立骨质疏松模型的研究报道[5]．因此笔者采用滇西亚种树去卵巢制作骨质疏松动物模型，观察恒古骨伤愈合剂对骨质疏松骨折树雌二醇和骨代谢指标的影响，以为进一步研究恒古骨伤愈合剂治疗骨质疏松作用机制机理奠定基础．判断树骨质疏松的依据我们是参照人的骨量下降25%作为骨质疏松患者诊断标准[6]．恒古骨伤愈合剂临床中人使用量为成人每2d/次口服用25mL ，树灌服药量0.3mL/100g 笔者是参考吴婷婷等按体质量/体表面积折算出人剂量到树剂量的系数，人剂量（按70kg 计算）到树剂量（按130g 计算）的换算系数为8.29来计算的[7]．按照这种换算系数计算树的给药量，使动物实验的结果更与临床实际相符合．目前有研究报道指出恒古骨伤愈合剂可以延缓双侧卵巢切除雌性骨质疏松SD 大鼠中骨量的丢失，但其具体作用机制也是不明确[8]．但是啮齿类动物与人的亲缘关系较远，实验结果推理到人有一定难度．临床研究表明女性绝经后卵巢功能衰退、内分泌失调，引起体内雌激素水平下降，易发生骨质疏松，其病理特点为骨微结构破坏、骨量减少、骨脆性增加[9]．雌激素包括雌二醇（E 2）、雌酮（E ）及雌三醇（E 3）等，主要由卵巢、胎盘及肾上腺皮质等分泌产生，其中E 2作用强、吸收快在机体内起主要作用．雌激素对机体破骨细胞（osteoclast ，OC ）与成骨细胞（osteoblast ，OB ）的增殖、分化、凋亡、活性和功能有正负调节作用，调控机体骨代谢的过程（包括骨形成与骨吸收）[10]．在本实验研究中骨质疏松骨折树灌服恒古骨伤愈合剂后，血清E 2含量（145.16±21.76）ng/L 显著高于对照组（30.78±4.22）ng/L ，＜0.05．说明恒古骨伤愈合剂能够提高骨质疏松骨折树血清中E 2的含量．血清中E 2能够调节树机体自身的骨代谢，延缓自身骨质疏松的程度．这与临床中应用雌激素来治疗绝经后女性骨质疏松症疗效相一致．临床研究表明骨代谢标志物的检测可作为骨质疏松诊断、骨流失速度监测、骨折风险预测、药物疗效评定、代谢性骨病鉴别诊断等参考和评价的重要依据[11]．骨代谢标志物有骨形成标志物和骨吸收标志物两种．骨形成标志物包括骨源骨钙素（os-teocalcin ，OC ）、I 型胶原氨基前肽（procollagen type I N propeptide ，PINP ）等，其反映成骨细胞的活动状况、活性及骨形成的代谢产物．骨吸收标志物包括血I 型胶原羧基交联肽（C-terminal crosslinking telopeptide of type I collagen ，CTX ）、血抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrate-resistant acid phos-phatase ，TRACP-5b ）等，其反映破骨细胞活动状况、活性及骨吸收时的代谢产物．骨代谢标志物可反映机体骨吸收与骨形成动态平衡的状况[12]．在本实验研究中骨质疏松骨折树灌服恒古骨伤愈合剂后，血清OC （1546.67±219.07）n g/L 、PINP （10.02±1.76）μg/L 、CTX （176.47±24.56）n g/mL 、TRACP-5b （1249.06±194.87）pg/mL ）分别显著低于对照组（2792.96±387.23）ng/L 、（28.74±4.05）μg/L ）、（324.67±41.32）ng/m L 、（2106.36±322.99）pg/mL ，＜0.05．实验结果表明骨质疏松骨折树灌服恒古骨伤愈合剂后对其骨形成标志物和骨吸收标志物有一定的影响．用药组实验树的骨形成标志物OC 、PINP 均显著低于对照组（＜0.05），说明恒古骨伤愈合剂对骨质疏松骨折树骨形成进行调控以发挥其积极治疗的作与对照组比较，#＜0.05.组别n E 2（ng/L ）用药组6145.16±21.76#对照组630.78±4.22表12组树血清中E 2含量的测定（x ±s ）Tab.1Determination of serum E 2in tree shrews oftwo group （x ±s ）组别n 用药组6对照组6OC （ng/L ）1546.67±219.07#2792.96±387.23PINP （ug/L ）10.02±1.76#28.74±4.05表22组树血清骨形成标志物的测定（x ±s ）Tab.2Determination of serum bone formation markers in tree shrews of two group （x ±s ）与对照组比较，#＜0.05.组别n CTX （ng/mL ）TRACP-5b （pg/mL ）用药组6176.47±24.56#1249.06±194.87#对照组6324.67±41.322106.36±322.99表32组树血清骨吸收标志物的测定（x ±s ）Tab.3Determination of serum bone resorption markers in tree shrews of two group （x ±s ）与对照组比较，#＜0.05.第38卷18昆明医科大学学报用．这与临床中鲑鱼降钙素治疗骨质疏松患者后OC降低、动物实验中鹿角壮骨胶囊治疗去卵巢骨质疏松SD大鼠PINP降低相一致[13-14]．用药组实验树的骨吸收标志物CTX显著低于对照组（＜0.05），这与临床中益肾活血法和仙灵骨葆胶囊治疗骨质疏松症患者后CTX降低的结果相一致[15-16]．用药组实验树的骨吸收标志物TRACP-5显著低于对照组（＜0.05），这与临床中补肾健骨胶囊治疗绝经后骨质疏松患者后和护骨胶囊治疗去卵巢骨质疏松症SD大鼠后TRACP-5降低的结果相一致[16-17]．综上所述，恒古骨伤愈合剂能够引起骨质疏松骨折树血清E2、骨形成标志物（OC和PINP）和骨吸收标志物（CTX和TRACP-5b）的变化．与对照组实验树相比，用药组树有效的提高了骨质疏松骨折树血清中E2的含量，降低了骨质疏松骨折树血清中骨形成标志物（OC和PINP）和骨吸收标志物（CTX和TRACP-5b）的含量，说明恒古骨伤愈合剂治疗骨质疏松骨折树有一定的疗效．恒古骨伤愈合剂治疗骨质疏松骨折树后血清E2、骨形成标志物（OC和PINP）和骨吸收标志物（CTX和TRACP-5b）的动态变化情况有待进一步深入研究．［参考文献］［1］胡敏，王兵，赵宏斌，等.恒古骨伤愈合剂预防性给药对股骨颈骨折术后半年股骨头坏死发生率及负重髋疼痛程度的影响［J］.中国临床康复，2005，9（14）:158-159.［2］赵宏斌，胡敏，邱智兴，等.恒古骨伤愈合剂治疗腰椎间盘突出症37例长期疗效观察［J］.云南中医中药杂志，2006，27（5）:3-4.［3］周兆文，普有登，袁晓峰，等.恒古骨伤愈合剂治疗急性腰扭伤的疗效观察［J］.云南医药，2012，33（5）:435-436.［4］YOUNG P A.Treeshrews，the primitive primate mammals for medical experimental animals［J］.Int'l J Mol Zoo，2011，1（2）:4-6.［5］杨凤，李燕皎，王运林，等.手术双侧卵巢去势法建立骨质疏松树模型［J］.昆明医科大学学报，2016，37（1）:24-27.［6］中国老年学学会骨质疏松委员会.中国人骨质疏松症诊断标准专家共识（第三稿2014版）［J］.中国骨质疏松杂志，2014，20（9）:1007-1010.［7］吴婷婷，屈会化，胡丽娜，等.基于树体表面积的树与人类及其它实验动物等效剂量换算系数的测算［J］.中华中医药杂志，2015，30（1）:203-205．［8］孙岩，陈冉，王小琦，等.恒古骨伤愈合剂对去势雌性大鼠骨质疏松模型的影响［J］.中国骨质疏松杂志，2016，22（12）:1513-1515．［9］李冠慧，李灿东，李西海，等.雌激素调控绝经后骨质疏松症骨吸收-骨形成耦联失衡的机制［J］.中医正骨，2016，28（2）:36-39．［10］薛吴罡，冷冰，马恩元，等.雌激素水平与绝经女性并发骨质疏松症的相关性研究［J］.中国妇幼保健，2011，26（26）:4106-4108.［11］李丹，孙文艳，李晶，等.老年骨质疏松患者骨折与骨代谢标志物的相关性研究［J］.临床医药实践，2015，24（7）:500-504.［12］KLINGBERG E，NURKKALA M，CARLSTEN H，et al.Biomarkers of bone metabolism in ankylosing spondylitis inrelation to osteoproliferation and osteoporosis［J］.JRheumatol，2014，41（7）:1349-1356.［13］樊险峰，黄兴华，黄运咏，等.鲑鱼降钙素治疗骨质疏松症的疗效及对骨代谢标志物水平的影响［J］.海南医学院学报，2015，21（8）:1137-1139.［14］黄继红，李溥，任一，等.鹿角壮骨胶囊对去卵巢骨质疏松大鼠骨细微结构及骨代谢影响的实验研究［J］.基层医学论坛，2016，20（7）:865-868.［15］孔西建，吴丹，叶进，等.益肾活血法对原发性骨质疏松症患者骨密度、骨代谢及脆性骨折发生率的影响［J］.中医杂志，2014，55（5）:391-395.［16］覃裕，邱冰，朱思刚，等.仙灵骨葆胶囊治疗骨质疏松症的疗效及其对骨代谢及骨转换指标的影响分析［J］.中国骨质疏松杂志，2015，21（9）:1056-1060.［17］刘冬梅，袁林，苏林冲，等.强骨康疏胶囊对去卵巢骨质疏松症模型大鼠细胞因子的影响［J］.中国免疫学杂志，2014，30（3）:338-341.（2017－09－11收稿）。
恒古骨伤愈合剂联合活血补肾汤治疗激素性股骨头坏死疗效及对骨密
较治疗前明显降低（ Ｐ均 ＜ ０ ． ０ ５ ） ， 且研 究 组 均 明 显低 于 对 照 组 （ Ｐ均 ＜ ０ ． ０ ５ ） 。 结论
碍， 致 残率 较 高 ， 严 重 影 响 患 者 生 活质 量 ¨ 。 西 医
多采用 髋关 节置 换 等 外科 手 术 进 行 治 疗 ， 但 其 费 用
高昂， 且 置换后 髋关 节使 用 时间有 限 。研 究 表 明 ， 合 理 的 中医药疗 法具 有 较 好 的 优 势 和特 色 ， 从 整 体 治 疗人 手 ， 能缓 解疼 痛 、 改善功能 ， 疗 效 显 著 。本 研
恒 古 骨 伤 愈 合 剂 联 合 活 血 补
肾汤 治疗 Ｓ Ｏ Ｎ Ｆ Ｈ疗效显著 ， 可增强骨密度 ， 改善 血 液 流 变 学及 血 脂 指 标 ， 值 得 临床 推 广 。 ［ 关键 词］ 恒古骨伤愈合剂 ； 活 血 补 肾汤 ； 激 素 性 股 骨 头坏 死 ； 骨 密度
ｄ ｏ ｉ ： １ ０． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ８—８ ８ ４ ９ ． ２ ０ １ ８ ． ０１ ． ０ ２ ４
ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｔ ｏ ｍｙ ｉ ｎ ｔ ｈｅ ｍｅ ｄ ｉ ａ ｌ ｃ ｏ ｍｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ａ ｒ ｔ ｈ ｒ ｉ ｔ ｉ ｓ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｋ ｎ ｅ ｅ
［ ８ ］ 于浩达 ， 王 秀 艳 ．中 西 医 治 疗 膝 关 节 骨 性 关 节 炎 的 研 究 进 展 ［ Ｊ ］ ．现 代 中西 医 结 合 杂 志 ， ２ ０ １ ５ ， ２ ４（ ２ ２ ） ： ２ ５ ０ ６— ２ ５ ０ ８ ［ ９ ］ 张启栋 ， 郭 万 首 ．膝 关 节 骨 关 节 炎 生 物 力 学 的 研 究 进 展 ［ Ｊ ］ ． 中 日友 好 医 院学 报 ， ２ ０ １ ４， ２ ８ （ ４ ）： ２ ３ ６—２ ３ ８ 【 １ ０ ］ 马同 敏 ， 张持晨 ， 杨辉 ， 等 ．腓 骨 近 端 段 切 术 治 疗 严 重 膝 关 节骨 性 关 节 炎 疗 效 的 队列 研 究 ［ Ｊ ］ ．中 国 骨 与 关 节 损 伤 杂 志 ， ２ ０ １ ５ ，
崇尚水晶的纯洁品质 打造骨科药物领军品牌
民营科技2018年第2期企业之窗崇尚水晶的纯洁品质打造骨科药物领军品牌云南克雷斯制药股份有限公司云南克雷斯制药股份有限公司之所以冠以“克雷斯”之名，是取英文“CRYSTAL ”译音,意为水晶,用其水晶含意,借以表达克雷斯药业崇尚水晶纯洁的优秀品质,崇尚救死扶伤的人道主义精神,竭诚为千百万骨折、骨病患者解除痛苦的美好心愿。
云南克雷斯制药股份有限公司（以下简称“克雷斯制药”）是一个集科研、生产、销售为一体的国家级高新技术企业。
于2004年通过国家首次GMP 认证，2008年通过GMP 再认证，于2013年7月率先通过了国家新版GMP 认证并获证书。
企业拥有高素质的药业专业人才，并吸收了国外的管理人员，98%的人员受过高等教育，有良好的文化背景及好的修养；有熟练的技术工人；完善的药物监测中心；先进的制药工艺设备；这些都为企业生产出高质量的产品提供了有力的保障。
必须保持药品的最高品质，才能让患者放心，才能引领企业走向成功之路。
执着和坚韧，是克雷斯制药的精神；严谨和认真，是克雷斯制药的工作习惯。
这种精神和习惯，始终贯穿克雷斯药品生产的全过程。
企业共有6个产品，其中自主研发具备独立知识产权产品有5个。
核心产品“恒古骨伤愈合剂”。
“恒古骨伤愈合剂（英文名：OsteoKing 译名骨王）”（中文曾用名：速效骨伤愈合剂）是在云南南部边陲发掘到的有百年历史古方“骨王”的基础上，经克雷斯研发团队的科技工作者历经十年艰辛不懈努力开发成的一种治疗股骨头坏死、腰椎间盘突出症、骨关节病、骨折、骨质疏松症的国准字号药品，获国家专利，已经进入规模化生产。
“恒古骨伤愈合剂”严格按国药准字的要求完成各项研究,于2002年获国药准字。
“恒古骨伤愈合剂”按国际标准采用现代生物化学、分子生物学研究基因调控水平，从多角度，多靶点探讨治病的作用机理，并获可喜研究成果。
为了深入探其治疗作用机理，率先按国际标准完成了细胞超微结构及分子生物学水平的研究。
恒古骨伤愈合剂预防性给药对股骨颈骨折术后半年股骨头坏死发生率.
中国临床康复第９卷第Ｍ期２００５．０４．１４出版１５８ＣｈｉｍｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＲｅｈａｂｉｌｉｔａｔｉｏｎ，Ａｔ）ｒｉｌ１４２００５Ｖ０１．９Ｎｏ．１４・中医康复研究・恒古骨伤愈合剂预防性给药对股骨颈骨折术后半年股骨头坏死发生率及负重髋疼痛程度的影响胡敏－，王兵ｚ，赵宏斌２，梁红锁２，张春强２，赵学凌２１昆明市卫生学校临床学科，云南省昆明市６５００３２；２昆明医学院第一附属医院骨科，云南省昆明市６５００３２胡敏，男，１９７１年生，云南省石屏县人，汉族，１９９５年昆明医学院毕业，学士，讲师，主要从事创伤外科的研究。
ｈｕｌａｏｃｈｕａｎｇ＠ｙａｈｏｏ．ｃａｍ．ｃａ通讯作者：赵宏斌，昆明医学院第一附属医院骨科，云南省昆明市６５００３２ｚｈａｏｈｏｎｇｂｉｎ＠ｖｉｐ．ｃｏｍ．１６９．ｎｅｔ中图分类号：Ｒ２４３．７文献标识码：Ａ文章编号：１６７１—５９２６（２００５）１４—０１５８—０２收稿日期：２００５一Ｏｌ一０６修回日期：２００５—０２—１８（０３／ＧＷ／ＹＨ）０ｓｔｅｏｋｉｎｇｆｏｒｔｈｅｉｎｃｉｄｅｎｃｅｏｆｆｅｍｏｒａｌｈｅａｄｎｅｃｒｏｓｉｓａｎｄｔｈｅｄｅｊｇｒｅｅｏｆｗｅｉｇｈｔｌｏａｄｉｎｇ－ｉｎｄｕｃｅｄｈｉｐａｃｈｅｈａｌｆａｙｅａｒａｆｔｅｒｔｈｅｏｐｅｒａｔｉｏｎｏｆｆｅｍｏｒａｌｎｅｃｋｆｒａｃｔｕｒｅＰｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ颈骨折内固定术后患者１３２例。
手术方式均为牵引床复位后微创经皮空心螺钉内固定。
随机分为恒古骨伤愈合剂组７４例，术后１周开始口服恒古骨伤愈合剂，成人２５ｍＬ／次，６～１２岁０．５ｍＬ／（ｋｇ・次），隔日服药１次，服用２４ｄ。
②三七伤药片组：术后１周开始Ｅｌ服三七伤药片，成人３片／次，１２岁以下儿童１片／０：，３次／ｄ，连服２４ｄ。
两组患者术后半年采用股骨头坏死诊断标准评定股骨头坏死发生率，术后１年采用疼痛目测类比评分评定负重时的髋痛程度。
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甲基强的松龙粉针剂（ＭｅｔｈｙｌｐｒｅｄＩｌｉｓｏｌｏ眦，ＭＰｓ，ＰＨＡＲＭＡＣＩＡ ＮＶ／ｓＡ，批号：ＬＫ０９８４）。生理盐水（昆明南疆制药有限公司， 批号：２００５０２０１）。 １．１．２动物健康成年新西兰大白兔１５０只，体质量２．５— ３．５ ｋｇ，雌雄不限，由昆明医学院实验动物中心提供，实验动
一仪器厂），０ｐｔｉ咖荧光定量ＰＣＲ仪（美国ⅢＲｅ吲Ｉｒｃｈ公司）。
１．１．４试剂ＶＥＧＦ（ＭＡＢ—２４３）ｓＰ免疫组织化学试剂盒（鼠 抗人，福州迈新公司）、二甲苯、梯度乙醇、ＰＢＳ（迈新编号：
ＰＢｓＪ００６０）、苏木精。ⅦＧＦ ｍＲＮＡ寡核苷酸探针杂交试剂盒 （武汉博士德公司，适用种属：人、大鼠、兔、小鼠组织）。％ｚｏｌ
ｇｅｎｌ葛ｅ印ｒ髓８ｉｏ啮ｗｅ地ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉ山龃ｃｈ ｇｒｏｕｐ．Ａｔ山ｅ ４ｔ１１，８ｔｌＩ锄ｄ １２ｔｌｌ ｗｅｅｋ，８ ｒａｂｂｉｔｓ ｗｅ他ｐｕｔ ｔｏ ｄｅａｍ ｉｎ唿ｃｈ ｇ∞ｕｐ．
ｉ舢ｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅＩＩｌｉｓｔ珂．ｉ１１ Ｔｈｅｎ ｗｅ ｔｏｏｋ ｏｕｔ ｂｏｔｈ ｆｅｍｏｒａｌ ｈｅａｄｓ，ｍａｋｅ
１．２．３给药经用人与兔体表面积用药量的换算，计算出每 只兔子所需恒古骨伤愈合剂的剂量。于造模第５周开始， Ｂ组和Ｄ组用恒古骨伤愈合剂按算出的剂量灌胃１次／２ ｄ。 Ａ组及Ｄ组用算出中药剂量的等量生理盐水灌胃，１次／２ ｄ。 造模及给药期间均未给文中所述之外的其他药物。 １．２．４取材于给药第４、８、１２周末，各组各取８只兔，用大 量空气栓塞法处死后取出双侧股骨头。一侧置于液氮罐中保 存作ＰＣＲ检测用，另一侧沿冠状面剖开，分别进行免疫组化 和原位杂交检测。 １．２．５免疫组化检测用石蜡切片免疫组织化学ＳＰ法，按 其规程操作。综合阳性着色深浅和阳性细胞数判定ＶＥＧＦ表 达强度。 １．２．６原位杂交检测按试剂盒说明书的规程操作。综合 阳性着色深浅和阳性细胞数判定ＶＥＧＦ表达强度。 １．２．７实时荧光定量ＰｃＲ检测
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
Ｍ讥，鼢Ｊ｝ｖＧ耽ｉ一班，Ⅱｎｎ珈Ｌ’Ｄ厅的Ｐ０ｅ舭Ｄ印叭融膨矿ｔｋ见阿ｔ够ｆ池“Ｈ呷讧越矿‰ｒ蒯昭删幻口ｚ
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·７５７·
·基础研究·
恒古骨伤愈合剂对激素性坏死股骨头内ＶＥＧＦ 基因表达的影响
赵宏斌１，胡敏２，王维琦３，李林芝１ （Ｌ昆明医学院第一附属医院骨科，云南昆明６５００３２；２．昆明市卫生学校；３．昆明医学院第三附属医院）
【摘要】 目的：研究中药恒古骨伤愈合剂对兔坏死股骨头内ＶＥＧＦ基因表达的影响。方法：成年新西兰大白兔 分为４组：Ａ组（空白对照组），Ｂ组（正常兔服用恒古骨伤愈合剂），ｃ组（造模后不喂恒古骨伤愈合剂），Ｄ组（造模后
ｉｎ刚ｐ ｙｌｐ帕“∞Ｌ啪ｅ（ＭＰＳ）（２０ ｍｇ／ｋｇ ｂｏｄｙ ｗｅｉｇｌｌｔ，ａｔ ａｔ妇ｉｎｔｅｒｖａｌ ０ｆ２４ ｈｏｕｒｓ）．０ｎｃｅ ｅｖｅｒｙ ２ ｄａｙ８，ｔｌｌｅ ｓｔｏＩｎａｃｈ
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８ａｌｉ他．觚ｅｒ ｔｌｌｅ ｔｒｅａｔｎｌｅｍ ｗｉＩｌｌ ０ｓ搬灿Ｉｌｇ，ｔｌＩｅ ｃｈ柚ｇｅ８ ｉＩｌ ＶＥＧＦ
物生产许可证号：ｓｃｘＫ（滇）２００５枷０８，实验动物使用许可证
号：刚ｘＫ（滇）２００５枷４。实验兔均在昆明医学院实验动物
中心饲养用药，饲养期间给兔颗粒饲料（由昆明医学院实验
动物中心提供），自由饮水，通风，单笼饲养，适应性喂养２周。 １．１．３仪器ＣＭ２０００ｃ型北航医学病理图像分析仪。高速离
心 （辆机ｄ（ｏＥｌｐｆｐＢｅｉｎ叩ｄ０ｈ１ｏｆ啪Ｃ坝ｅｎ盯ｔ，ｍｇ德ｅ 国５８）０，４－电Ｒ， 泳德 槽国 （Ｄ）Ｙ， Ｙ－Ⅲ紫型外，分北光京光市度六计
ＶＥＧＦ ｇｅ∞唧嘲ｓｉ蛐０ｆ ＦＨＮ；ａＩｌｄ ｎｌｅ ｌｏｎｇｅｒ ｔｌｌｅ ｔｉ眦ｉｔ ｌｌａｓ ｈ嘞ｕｓｅｄ，血ｅ妇ｅｒ山ｅ如ｔｉｓ ｏｂｖｉ叫．ｏ蚍∞ｋｊｆＩｇ ｌｌａｓ∞ｄ胁
ｔｏ恤ｆ÷唧ｍ ｈｅａｄ ｖＥＧＦ ｇｅ∞唧惜ｓｉ锄ｆｏｒ ｎｏｒＩｌｌａｌ ｒａｂｂｉｔ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ ０８ｔｅ０＿ｋｉｎｇ； Ｆｅｍｏｒａｌ ｈｅａｄ ｎｅｃｍｓｉｓ； Ｉ姗岫ｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｈｙ； ＩＩｌ ｓｉｔｕ ｈ姗ｄｉｚａｔｉｏｎ，ｎｕｏ陀ｓｃｅｎｃｅ； Ｖ鹪ｃＩＩｌ盯
态观察兔股骨头内、ｍＧＦ基因表达的变化特点。结果：喂药至第４、８周时，比较Ｄ组与ｃ组股骨头内ＶＥＧＦ基因表达 量的差别无统计学意义。喂药至第１２周时，Ｄ组与Ｃ组股骨头内ＶＥｃＦ基因表达量的差别具有统计学意义（Ｐ＝ Ｏ．０４２＜０．０５）。Ｂ组与Ａ组比较差别无统计学意义。结论：ＬＰＳ加ＭＰｓ制作的兔股骨头坏死模型中股骨头内ｖＥＧＦ 基因表达受抑制。中药恒古骨伤愈合剂可促进坏死股骨头内源性ＶＥＧＦ基因的表达，以用药时间长者效果明显。恒
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ＰＣＲ．Ｔｈｅ ｄｙｌｌ锄ｉｃ ｃｈ锄ｇｅｓ ０ｆ ｔ王ｌｅ ＶＥＧＦ ｇｅｎｅ ｅ）【ｐｒｅｓｓｉｏ璐ｗｅ陀ｓｕｃ啷Ｂｆ皿ｙ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉ璐ｉｄｅ ｔｈｅ ｆｂｍｏＥａｌ ｈｅａｄ ｏｆ ｒｅｂｂｉｔｓ．Ｒｅ－
（Ｉｎ订叻ｇｅｎ，美国，批号：１５５９６旬１８），ＤＮａ∞Ｉ（ＲＮａｓｅ Ｆｒｅｅ， ５∥ｐｌ，大连宝生生物工程有限公司），ＲＮａ靶Ｉｎｈｊｂｉｔｏｒ
（加∥ｍ，美国Ｐｒｏ眦ｇａ公司）。１０×Ｂ哦ｒ ＲＴ（德国Ｑｉａｇｅｎ
公司），ｄＮ７ｒＰ（５ ｍＭ，德国Ｑｉａｇｅｎ公司），Ｑｍｍｉ∞ｒｉｐｔ ＲＴ （４０∥山，德国Ｑｉａｇｅｎ公司），ＲＮａ∞一Ｆｒｅｅ眦ｔｅｒ（德国Ｑｉａｇｅｎ 公司）。ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｓｕｐｅ肿ｉｘ荧光定量染料（加拿大Ｂｉｏ—Ｒａｄ
喂恒古骨伤愈合荆），每组２４只。以大肠杆菌内毒素（吣）（１０彬ｋｇ体重）间隔２４ ｈ静注２次加甲基强的松龙
（ＭＰｓ）肌注３次制作兔股骨头坏死模型后，Ｂ组和Ｄ组用恒古骨伤愈合剂，Ａ组和Ｃ组用等量生理盐水，按计算出的
药量灌胃，１西沈ｄ。于喂药至第４、８、１２周时取股骨头行免疫组化、原位杂交并提取总ＲＮＡ行实时荧光定量ＰｃＲ，动
（１）从液氮中取股骨头，置于无菌的研钵研成粉末状后， 转入离心管，以％∞ｌ试剂加入该管后，按％ｚｏｌ法的操作规 程提取兔股骨头总ＲＮＡ。
（２）引物设计及合成：ＶＥＧＦ上游引物：５’．ＧＴＧＧＡ－ ＣＡＴＣｒＩＴＩ＇ＣＣＡＧＧＡＧＴＡＣＣ一３’。下游引物：５ ７－ＣＡＴＣＣＧｃＡＴ． ＧＡＴＣＴＧｃＡＴＧＧＴＧ－３’。Ｂ—ａｃｔｉｎ上游引物：５’－ＣＧｃＴ（沁ＡｃＴ－
１．１．１药物恒古骨伤愈合剂（由三七、黄芪、人参、红花、杜 仲、鳖甲、陈皮等配方制成，每毫升生药含量Ｏ．３６ ｇ），规格 ２５ ｎ∥瓶（云南克雷斯天然药物制药厂，批号：２００５０５１３）。大
肠杆菌内毒素（１ｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈ耐ｄｅｓ劬ｍ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｌｌｉａ ｃｏｌｉ ０１１ １：
Ｂ４，Ｌ－３０１２，Ｐｌｌｒｉｆｉｅｄ ｂｙ ｃｈｒ咖ｌｏｇｍｍｐｈｙ，Ｕ咯，ＳＩＧＭＡ，ＵＳＡ），
、’。 ｋｍｌ６９．ｎｅｔ
恒古骨伤愈合剂是源自云南的国药准字药物，主要由三 七、人参、红花、杜仲等配制成，股骨头坏死（ｆｅｍｏｒａｌ ｈｅａｄ ｎｅｃ－ 瞄ｉ８，ＦＨＮ）是其治疗适应证之一。为了探索中药恒古骨伤愈
万方数据
·７５８·
合剂治疗ＦＨＮ的作用机制，我们通过免疫组化、原位杂交和 实时荧光定量ＰＣＲ（ｒｅａｌ．ｔｉｍ Ｑ．ＰＣＲ）等技术，研究了恒古骨 伤愈合剂对ＦＨＮ修复过程中血管内皮生长因子（ｖ∞ｃｕｌ缸ｅｎ． ｄｏｔｈｅｌｉａｌ鲫眦ｈ ｆａｃｔｏｒ，ＶＥＧＦ）基因表达的影响。 ｌ材料和方法 １．１材料
ｇ唧ｗｉｔｌｌｏｕｔ ｓ．１Ｉ缸：ｒ１１ｌｅｒｅ ｗｅｒｅ呐ｓｉ印ｉｆｉｃ蚰ｔ ｄｉ瞻ｒｅｎｃｅ ｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏ珊０ｆ ｔｌＩｅ ＶＥＧＦ ｇｅ舱ｂｅｔ’佗蛐珊）ｄｅｌ
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ＴＣＧＡＧＣＡＧＧＡＧ．３’，下游引物：５’－ＣＡＧＧ从ＧＧＡＧＧＧＣ７ｒｏＧＡＡ－
ＣＡ－３’。
以上引物均由上海生工生物工程公司合成、纯化。 （３）实时荧光定量ＰＣＲ：加入２５０ ｎｇ／山的ｃＤＮＡ模板 ２山，１０一ｓＹＢＲ Ｇ陀ｅｎ Ｉ荧光染料，上下游引物各０．５一，双 蒸水７山，每个反应体系２０一，加入定量ＰｃＲ仪专用毛细管