菌种划种LB琼脂平板检查标准操作规程
琼脂平板测定法
琼脂平板测定法1. 简介琼脂平板测定法是一种常用的微生物检测方法，用于定量测定液体中微生物的数量。
其原理是将待测样品与含有琼脂的培养基混合，然后将混合液倒入琼脂平板中，在适当条件下培养微生物，通过观察生长的菌落数量来估计样品中的微生物数目。
琼脂平板测定法广泛应用于食品、饮料、药品等领域，以及环境监测和医疗卫生等领域。
它具有操作简便、结果可靠、灵敏度高等优点，并且可以同时检测多种不同类型的微生物。
2. 实验步骤2.1 准备工作•清洁实验台面和仪器设备，消毒操作区域。
•准备所需材料：琼脂平板、待测样品、无菌移液器、无菌试管、无菌培养皿等。
•配制适当的琼脂培养基，并进行无菌处理。
2.2 样品处理•将待测样品进行适当的预处理，如稀释、均匀搅拌等。
•取适量的样品，使用无菌移液器将其滴入无菌试管中。
2.3 倒平板•将琼脂培养基加热至液态状态，并保持在适宜的温度。
•将琼脂培养基倒入无菌培养皿中，约15-20ml左右。
•等待琼脂培养基凝固。
2.4 涂布样品•将待测样品与琼脂培养基混合均匀。
•将混合液倒入凝固的琼脂平板中。
•使用无菌棉签或针头，在平板表面上均匀地涂布样品。
•注意避免压力过大，以防止伤害琼脂平板表面。
2.5 培养•将涂布好的琼脂平板倒置放置于恰当的培养条件下（如适宜的温度、湿度等）。
•根据需要选择不同的培养时间和环境条件。
2.6 菌落计数•在适当的时间后，观察琼脂平板上的菌落生长情况。
•使用无菌计数器或放大镜进行菌落计数。
•记录菌落数量并进行统计分析。
3. 实验注意事项•操作过程中要保持严格的无菌操作，避免样品受到外界污染。
•遵守实验室安全规范，使用个人防护装备。
•注意培养条件的控制，如温度、湿度等。
•注意样品的合适稀释，以确保在合适范围内进行菌落计数。
•记录实验过程中的操作细节和结果，以备后续分析和验证。
4. 实验结果分析通过琼脂平板测定法得到的结果可以用于估计待测样品中微生物的数量。
根据菌落数量和相应的标准曲线或经验值，可以确定样品中微生物的含量是否符合相关标准要求。
菌种划种LB琼脂平板检查标准操作规程
菌种划种LB琼脂平板检查标准操作规程菌种划种LB琼脂平板检查标准操作规程依据：《中华人民共和国药典》2005年版第三部。
范围：适用于大肠杆菌表达的重组人基因工程产品。
目的：检查该菌种的菌落形态是否与标准大肠杆菌菌落形态一致，并检查是否染有杂菌。
原理：将该菌种在LB琼脂平板上划线分离培养，以检查菌落形态以及是否染有杂菌。
内容：1 材料1．1 材料1．1．1 菌种：PBV888/DH5α，来源于主种子批或工作种子批。
1．1．2 注射用水：符合《中华人民共和国药典》2005年版的要求。
1．1．3 药品氯化钠 NaCl 分析纯琼脂粉分析纯酵母粉蛋白胨无水乙醇 CH3CH2OH 分析纯1．1．4 器皿平皿、三角烧瓶（3L）、量筒（1L）、玻棒、试剂瓶。
1．1．5 其它材料线绳、牛皮纸、硫酸纸、剪刀、接种环、煤气灯。
1．2 仪器设备生物安全台Ⅱ级A型安徽蚌埠净化设备厂恒温培养箱 HG303-5B型湖北省黄石市医疗器械厂扭力天平 TN-100B型上海第二天平厂2 方法2．1 准备工作2．1．1 生产环境：在十万级洁净间进行。
场地摘下“清场合格”标志牌，挂“使用中”标志牌。
2．1．2 器皿的洁净要求玻璃器皿经洗刷组处理完毕后，用硫酸纸及牛皮纸包好，用线绳系紧，送高压灭菌（121.3℃60分钟）。
脱脂棉用硫酸纸、牛皮纸包好，高压灭菌121.3℃60分钟。
2．1．3 调试仪器设备2．1．3．1确认扭力天平运行状态良好，已挂有“备用”标志牌。
2．1．3．2确认恒温培养箱运行状态良好已挂有“运行”标志牌。
2．1．3．3确认生物安全台运行状态良好已挂有“备用”标志牌。
2．2 溶液的配制2．2．1 LB琼脂培养基的配制1000ml摘下扭力天平“备用”标志牌，挂上“运行”标志牌。
用扭力天平称取酵母粉5克，蛋白胨10克，NaCl 10克，琼脂粉20克，倒入三角烧瓶中，加注射用水1000ml，用玻棒搅匀，分别用硫酸纸、牛皮纸包口，用线绳扎紧，标明名称、配制时间， 115.6℃30分高压灭菌。
平板菌落计数法的步骤
平板菌落计数法是一种常用的微生物计数方法，通过稀释液体样品、平铺在琼脂平板上、培养和计数菌落数量，可以确定原液中微生物的浓度。
这种方法可以应用于食品、环境和医药等领域的微生物数量测定，为微生物研究和质量控制提供了重要的手段。
平板菌落计数法的基本步骤如下：
1、准备无菌的培养基、试管、吸管、平皿、酒精灯等器材，以及待测的样品和适合的稀释液（如无菌水或盐水）。
2、将样品制成一系列的稀释液，通常采用10倍递增的稀释法，即每次取1mL的上一级稀释液加入9mL的稀释液中，充分混匀，得到下一级稀释液。
3、从每个稀释液中分别取出一定量（如0.1mL或1mL）置于灭菌平皿中，与已熔化并冷却至45℃左右的琼脂培养基混合，或者涂抹在已凝固的琼脂培养基上，使菌液均匀分布于培养基内。
4、在一定的温度下，培养一定的时间（通常为24至48小时），使菌液中的单个细胞生长繁殖成可见的菌落。
5、从每个平皿中计数菌落数量，选择菌落数在30至300之间的平皿，用计数器或计数板辅助计数，避免重复或遗漏。
6、根据计数结果和稀释倍数，计算原液中的菌落数量和浓度，通常用每毫升或每克的活菌数（CFU/mL或CFU/g）表示。
菌种检定操作规程
菌种检定操作规程
《菌种检定操作规程》
一、目的
菌种检定操作规程旨在规范菌种检定过程，确保检定结果准确可靠，保障实验室菌种质量。
二、适用范围
本规程适用于各类实验室对菌种进行检定的操作。
三、设备和试剂
1. 必备设备：无菌工作台、培养箱、平板计数器等。
2. 必备试剂：琼脂培养基、生理盐水、甘油等。
四、菌种检定操作流程
1. 取样准备：将待检菌种进行悬浮液制备或直接取样，保证单一菌种在接种时的质量。
2. 培养基接种：将取样溶液均匀涂敷于琼脂培养基表面，将琼脂培养基放入培养箱进行培养。
3. 孵化：将接种后的琼脂培养基置于培养箱中，进行相应的温度和时间的培养。
4. 菌落计数：使用平板计数器对菌落进行计数，记录结果。
5. 结果分析：根据计数结果，对菌种进行鉴别和鉴定。
五、结果确认与报告
1. 只有经过两名以上实验人员的确认，结果方可出具。
2. 将检定结果填写在检定记录表上，并进行备份存储。
六、质量控制
1. 定期对实验室设备和试剂进行检验、校正。
2. 定期进行内部质量控制，对检定结果进行复核和比对。
七、附则
1. 对于异常情况的处理：出现异常结果时，要及时进行排查并记录处理过程。
2. 本规程未尽事宜，由实验室主管负责进行详细规定。
以上即为《菌种检定操作规程》的内容，希望各实验室严格按照此规程进行菌种检定工作，确保实验室菌种质量及检定结果的准确性。
平板保存菌种的方法
平板保存菌种的方法引言在微生物学研究中，保存菌种是非常重要的一项工作。
菌种的保存能够确保菌种的长期保持活性和纯度，为后续的实验提供可靠的菌种来源。
平板保存是一种常见且有效的保存菌种的方法，本文将介绍平板保存菌种的具体步骤和注意事项。
方法准备培养基平板保存菌种需要使用适合菌种生长的培养基。
常用的培养基包括琼脂糖平板、LB平板等。
首先，准备培养基的原材料，并按照相应比例配制培养基。
然后，在适当的温度下煮沸培养基，使其溶解均匀。
最后，将培养基倒入培养皿中，待其凝固。
菌种分离从原始菌株中分离需要保存的菌种。
首先，将菌株转移到液体培养基中进行扩增培养。
然后，将液体培养物均匀涂布在已经凝固的平板上。
使用火焰灭菌的铁环将液体培养物均匀涂布在平板表面。
最后，用无菌的铁环在平板上划出菌落并进行标记。
培养菌种将涂有菌落的平板置于适宜的温度下进行培养。
根据菌种的要求设置合适的培养条件，如温度、湿度和光照等。
一般来说，大部分菌种需要在25-37摄氏度下培养。
在培养过程中要注意观察菌落的生长情况，包括颜色、形态和大小等。
菌种保存当菌落生长到合适的大小时，可以开始进行菌种的保存。
首先，用无菌的微量吸管将菌落挑取到保存管中，并加入适量的保存液。
保存液的选择根据菌种的特性而定，可以选择生理盐水、液体培养基或甘油等。
然后，将保存管进行封闭，以防止空气和外界细菌的污染。
最后，将保存管标记清楚，包括菌种名称、保存日期和保存条件等。
保存条件菌种的保存条件对于保持菌种的活力和纯度非常重要。
常用的保存条件有两种：冰箱保存和低温冻存。
冰箱保存一般在4摄氏度下进行，适合于较短时间的保存，一般保存3个月以内。
低温冻存一般在-80摄氏度下进行，适合于长期保存，可以保存数年甚至数十年不变异。
为了确保菌种的保存质量，应定期检查保存菌种的生长情况，并定期更换保存液。
注意事项1. 严格遵守无菌操作规范，防止外界细菌的污染。
2. 选择合适的培养基和保存液，根据菌种的特性进行选择。
双歧杆菌实验操作
双歧杆菌实验操作双歧杆菌是一种对人体有益的细菌，它能帮助消化、增强免疫系统以及维持身体健康。
为了了解双歧杆菌的生长和培养条件，进行了以下实验操作。
实验名称：双歧杆菌的培养和生长条件研究实验目的：探究双歧杆菌的最佳生长和培养条件，为后续研究提供基础。
实验材料：1.LB琼脂平板和培养基2.双歧杆菌培养液3.双歧杆菌菌株4.灭菌剂5.培养皿6.培养瓶7.石棉网8.无菌吸管9.无菌培养箱实验步骤：1.准备工作a.所有实验器材要进行高温高压灭菌处理，确保无菌条件。
b.双歧杆菌菌株从冻存物中取出，置于LB琼脂平板上，37℃恒温培养箱中培养过夜。
c.同时准备LB琼脂平板，在培养箱中恒温保持。
2.建立原始菌种a.从培养过夜的LB琼脂平板上选取一个单独的菌落，用无菌吸管轻轻吸取，均匀涂布于另一个LB琼脂平板表面。
b.将新的LB琼脂平板颠倒放置于培养箱中，37℃恒温培养24小时。
c.检查平板上是否有单独的菌落，若有则进行后续实验。
3.建立培养液a.准备LB培养基，加入适量的琼脂，煮沸溶解后静置至37℃。
b.预测双歧杆菌菌株的生长曲线，选择合适的培养液和培养时间。
c.将适量的培养液倒入无菌培养瓶中，盖上无菌瓶盖，并用石棉网覆盖。
4.培养和生长a.在培养液中加入适量的双歧杆菌菌株，以达到适合培养的细菌浓度。
b.将培养瓶置于37℃恒温培养箱中。
c.每天监测双歧杆菌的生长情况，记录菌株的数量和培养液的浑浊度。
5.结果分析a.观察双歧杆菌的生长情况，包括生长速度、最适生长温度和最适培养液pH值。
b.对实验数据进行统计分析，绘制生长曲线和生长速率图。
c.比较不同因素对双歧杆菌生长的影响，并得出结论。
实验注意事项：1.所有实验用具和培养基要进行高温高压灭菌处理。
2.在操作过程中要保持无菌环境，避免外界细菌的污染。
3.严格遵守实验室安全规范，避免接触到有害物质。
4.在实验过程中要定期检查和记录双歧杆菌的生长情况，以便后续分析和对比。
菌种鉴定标准操作规程
菌种鉴定标准操作规程目的：建立菌种鉴定标准操作规程范围：适用于******鉴定标准操作职责：内容：1整体操作步骤1.1纯化、分离待鉴定菌用接种环挑取待鉴定菌落或少许含菌溶液到相应的培养基上（如TSA），划线分离，以出现微生物单菌落为止。
1.2挑取纯化后的单菌落，进行革兰染色、镜检，以确定待鉴定菌的革兰属性。
1.3如镜检结果为革兰阴性杆菌，则先进行发酵实验。
如发酵实验结果为阴性，则选用API20NE试剂条进行鉴定；如发酵实验结果为阳性，则在经过细胞色素氧化酶实验后选用API20E试剂条进行鉴定。
1.4如镜检结果为革兰阳性球菌，则先进行过氧化氢酶实验。
如实验结果为阴性则选用API Strep试剂条进行鉴定，如实验结果为阳性则选用API Staph试剂条进行鉴定。
1.5假如镜检结果为革兰阳性杆菌并且有内生芽胞，则选用API 50CHB试剂条进行鉴定；否则，根据运动性实验和过氧化氢酶实验结果选用API Coryne或其他试剂条进行鉴定。
1.6选定正确的试剂条以后，根据不同的API试剂条的标准操作规程准备接种物，进行接种、培养等操作并将结果形成数码，用API鉴定软件鉴定或查询待检菌的名称均可。
鉴定结果应记录，必要时，给出相应解释。
2革兰氏染色2.1染色剂的配制2.1.1结晶紫染色液：甲液：结晶紫 1.0g95%的酒精20ml乙液：草酸铵0.8g水80ml将甲液和乙液混合均匀，静置48h使用，置密闭棕色瓶中储存。
2.1.2碘液：碘 1.0g碘化钾 2.0g水300ml配制时先用3～5ml水将碘化钾溶解，再加入碘，用力摇匀，使之全部溶解后，再加水稀释至300ml，摇匀，分装在棕色瓶中储存。
2.1.3稀石碳酸红溶液:碱性品红 1.0g石碳酸 5.0ml95%乙醇10.0ml配制时用乙醇溶解碱性品红，然后加入石碳酸溶液，使用时加水稀释至100ml，摇匀。
2.2操作:2.2.1涂片：用接种环挑取液体培养物中菌体在载玻片上涂成薄层，固体培养物则先在载玻片上滴一滴蒸馏水或生理盐水，用接种环挑取少量菌体在载玻片上涂成薄层。
琼脂检验操作规程
琼脂检验操作规程琼脂检验是一种常用的微生物检测方法，用于确定食品、水源、药物等样品中的细菌和真菌的存在及其数量。
下面是琼脂检验的操作规程，请参考。
一、实验前的准备工作1.检验琼脂的质量：检查琼脂的生产日期、有效期等信息，确保琼脂的质量符合要求。
2.器皿准备：将所需的琼脂培养基倒入试管或培养皿中，覆盖好，灭菌处理。
二、样品处理1.选取样品：根据要检测的目标细菌或真菌的特点，选择适当的样品。
如食品样品应选取有疑似污染的部分。
2.样品处理：对于液体样品，按照一定比例将样品加入琼脂培养基中，并均匀摇匀。
将固体样品加入适量的无菌蒸馏水，用均匀器均匀悬浮。
如有必要，可进行稀释。
三、平板接种法1.器皿准备：将培养基恢复至饱和状态，加热至55~60℃，然后均匀倒入培养皿中，覆盖好，使其凝固。
2.接种：取少量处理好的样品，在无菌工作台上，用无菌（或经过消毒处理的）铁钻，分次刺入琼脂中，在琼脂表面扩散。
3.培养：即刻培养接种好的琼脂培养皿，依样品不同分别在适当的温度和时间下培养。
四、管内接种法1.器皿准备：将培养基恢复至饱和状态，并倒入试管中，一定量，高度不超过试管的1/32.接种：取少量处理好的样品，通过无菌长管（或乳针）将样品加入琼脂中，然后迅速倒置，使培养基液体均匀悬浮。
3.培养：接种完毕后，将试管紧闭，放入适当的温度和时间下培养。
五、菌落计数及结果判定1.计数：培养结束后，将琼脂培养皿或试管放在反照镜下观察，记录生长的菌落的数量。
如需要，可以通过放大镜观察。
2.结果判定：根据琼脂培养基上生长的菌落形态、颜色、大小等特征，结合相关文献资料，对菌落进行鉴定，并判定样品是否合格。
六、结果记录和处理1.记录：将菌落数量和相关信息记录在实验记录表格中。
2.处理：根据结果，对菌落数量和污染程度进行评估，如果样品被检测出细菌或真菌，应及时采取相应措施，消除污染。
琼脂检验是一项重要的微生物检测方法，操作规程的严谨与准确性直接关系到检测结果的可靠性。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
菌种划种LB琼脂平板检查标准操作规程
菌种划种LB琼脂平板检查标准操作规程
依据：《中华人民共和国药典》2005年版第三部。
范围：适用于大肠杆菌表达的重组人基因工程产品。
目的：检查该菌种的菌落形态是否与标准大肠杆菌菌落形态一致，并检查是否染有杂菌。
原理：将该菌种在LB琼脂平板上划线分离培养，以检查菌落形态以及是否染有杂菌。
内容：
1 材料
1．1 材料
1．1．1 菌种：PBV
888/DH
5α
，来源于主种子批或工作种子批。
1．1．2 注射用水：符合《中华人民共和国药典》2005年版的要求。
1．1．3 药品
氯化钠 NaCl 分析纯
琼脂粉分析纯
酵母粉
蛋白胨
无水乙醇 CH
3CH
2
OH 分析纯
1．1．4 器皿
平皿、三角烧瓶（3L）、量筒（1L）、玻棒、试剂瓶。
1．1．5 其它材料
线绳、牛皮纸、硫酸纸、剪刀、接种环、煤气灯。
1．2 仪器设备
生物安全台Ⅱ级A型安徽蚌埠净化设备厂
恒温培养箱 HG303-5B型湖北省黄石市医疗器械厂扭力天平 TN-100B型上海第二天平厂
2 方法
2．1 准备工作
2．1．1 生产环境：在十万级洁净间进行。
场地摘下“清场合格”标志牌，挂“使用中”标志牌。
2．1．2 器皿的洁净要求
玻璃器皿经洗刷组处理完毕后，用硫酸纸及牛皮纸包好，用线绳系紧，送高压灭菌（121.3℃60分钟）。
脱脂棉用硫酸纸、牛皮纸包好，高压灭菌121.3℃60分钟。
2．1．3 调试仪器设备
2．1．3．1确认扭力天平运行状态良好，已挂有“备用”标志牌。
2．1．3．2确认恒温培养箱运行状态良好已挂有“运行”标志牌。
2．1．3．3确认生物安全台运行状态良好已挂有“备用”标志牌。
2．2 溶液的配制
2．2．1 LB琼脂培养基的配制1000ml
摘下扭力天平“备用”标志牌，挂上“运行”标志牌。
用扭力天平称取酵母粉5克，蛋白胨10克，NaCl 10克，琼脂粉20克，倒入三角烧瓶中，加注射用水1000ml，用玻棒搅匀，分别用硫酸纸、牛皮纸包口，用线绳扎紧，标明名称、配制时间， 115.6℃30分高压灭菌。
2．2．2 75%酒精溶液1000ml
取750ml无水乙醇，加注射用水定容1000ml，混匀，装入试剂瓶中，贴标签，标明液体名称、浓度、配制日期，室温备用。
2．3操作步骤
2．3．1 摘下生物安全台“备用”标志牌，挂上“运行”标志牌。
用75%酒精棉擦拭台内，接通电源，打开风机，无菌风吹30分钟，待已灭菌LB琼脂培养基冷却至50℃左右，倒平板，每皿20-30ml，待凝固后，放入恒温培养箱中，37℃倒置培养24小时，如无杂菌生长，即可继续实验用。
2．3．2 划线分离：用接种环（经火焰灭菌，冷却后）取1环菌种于LB平板上划线分离。
2．3．3 将划线分离的平板置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
2．3．4操作结束后，场地摘下“使用中”标志牌，挂上“待处理”标志牌。
3 结果判定
3.1判定标准：菌落形态如为圆形，湿润、光滑，中等大小（直径约2-3mm），即为典型大肠杆菌菌落。
3.2判定结果
判定结果经二人复核后，填写检定记录，注明菌种名称、批号、判定日期、检定结果、工作者及复核者等。
4清场
4．1 配液清场
4．1．1 药品称量之后，将药品瓶盖紧，放回原处。
4．1．2 将扭力天平处理干净，放回原处。
摘下“运行”标志牌，挂上“备用”标志牌。
并填写使用记录。
4．1．3生物安全台内用75%酒精棉擦拭干净，继续吹10分钟后，关闭风机，切断电源，摘下“运行”标志牌，挂上“备用”标志牌，并填写使用记录。
4．1．4操作台面用专用抹布擦干净。
4．2 操作清场
4．2．1 将带有细菌的LB平板送高压灭菌（121.3℃60分钟），灭菌后将平皿内容物倒入垃圾桶中。
4．2．2 玻璃器皿用纯化用水冲洗干净，送本室洗刷组处理。
4．2．3清场合格后，由车间工序负责人或质量监督员检查合格后，摘下“待处理”标志牌，“清场合格”标志牌，并填写清场记录。
5注意事项
5．1清场时，必须将带有细菌的平板先送高压灭菌处理后再送到洗刷组处理。
5．2所有工作均应二人复核，并填写工作记录。