游离脂肪酸(NEFA)测定试剂盒(ACS-ACOD酶法)产品技术要求百奥泰康
游离脂肪酸(NEFA)测定试剂盒（ACS-ACOD酶法）适用范围：该产品用于体外定量测定人血清中游离脂肪酸的浓度。
1.1产品规格
1.2 组成成分
1.2.1 试剂组成
试剂1：磷酸盐缓冲液（pH=7.0） 50mmol/L；
辅酶A 0.5mmol/L；
ATP 3 mmol/L；
乙酰辅酶A合成酶（ACS ） 0.4KU/L；
）2mmol/L；
氯化镁（MgCl
2
偶联终点比色法结合成份（Trinder结合成份）0.5g/L；
表面活性剂和稳定
剂＜1%；
试剂2：磷酸盐缓冲液（pH=7.0） 50mmol/L；
乙酰辅酶 A 氧化酶（ACOD ）30KU/L；
过氧化物酶（POD ） 45KU/L；
4-氨基安替比林（4AAP） 1.5g/L；
表面活性剂和稳定剂＜1%
1.2.2 校准品的组成
单水平的液体校准品，在50mM pH7.0的磷酸盐缓冲液中添加十六烷酸纯品，稳定剂<0.5%；定值范围：0.8-1.2mmol/L。
1.2.3质控品的组成
两个水平的液体质控品，在牛血清(20g/L)中加入十六烷酸纯品，添加的牛血清的比例为5%-10%，稳定剂<0.5%；目标浓度范围：低水平（0.30-0.60）mmol/L，高水平（0.80-1.20）mmol/L。
2.1 外观
液体双试剂：试剂1：无色或淡黄色澄清液体；试剂2：黄色澄清液体。
校准品：无色或淡黄色澄清液体。
质控品：无色或淡黄色澄清液体。
2.2 净含量
液体试剂的净含量不得低于标示体积。
2.3 空白吸光度
试剂空白吸光度应≤0.3。
2.4 分析灵敏度
浓度为0.5mmol/L时，吸光度差值的绝对值在0.01-0.2范围内。
2.5 线性
在(0,3.0]mmol/L线性范围内，线性相关系数r 应≥0.995；在(0,1.2] mol/L 时绝对偏差不超过0.18mmol/L；在（1.2,3.0]mmol/L范围内的相对偏差不超过±15%。
2.6 精密度
变异系数CV应≤6%
2.7 批间差
不同批号之间测定结果的相对极差应≤10%。
2.8 准确度
回收实验：回收率在90%-110%。
2.9 质控品赋值有效性
测定值在质控靶值范围内。
2.10校准品溯源性要求
根据GB/T21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品控制物质赋值的计量学溯源性》及有关规定提供游离脂肪酸校准品的来源、赋值过程以及测量不确定度等内容。校准品溯源至十六烷酸纯品（来源：Sigma；纯度≥98%）。
2.11试剂稳定性
原包装试剂（含校准品和质控品），在2℃～8℃下有效期为12个月，取到效期的试剂盒检测其试剂空白吸光度、分析灵敏度、线性、批内精密度、准确度和质控品赋值有效性应分别符合2.3、2.4、2.5、2.6、2.8和2.9的要求。
NEFA游离脂肪酸测定试剂盒(ACS-ACOD法)产品说明书
游离脂肪酸测定试剂盒（ACS-ACOD 法）说明书 【产品名称】通用名称：游离脂肪酸测定试剂盒（ACS-ACOD 法） 英文名称：Nonestesterified fatty acid Assay Kit (Enzymic Method)（NEFA ） 【包装规格】R1：2?60ml 、R2：2?20ml ；R1：2?45ml 、R2：2?15ml ；R1：1?45ml 、R2：1?15ml ； 校准品（选配）：1?2ml （1个水平）。 【预期用途】用于体外定量测定人血清中游离脂肪酸的含量。 临床上主要用于高血脂症、冠心病和动脉粥样硬化的辅助诊断。 【检验原理】游离脂肪酸和辅酶A 在乙酰辅酶A 合成酶（ACS ）的作用下反应生成乙酰辅酶A 。乙酰辅酶A 在乙酰辅酶A 氧化酶（ACOD ）的作用下生成H 2O 2，随后通过Trinder ’s 底物在过氧化物酶（POD ）的作用下生成有色物质。 【主要组成成分】由试剂R1、R2和校准品组成。试剂R1：乙酰辅酶A 合成酶（ACS ）0.8KU/L 、MgCl 2(氯化镁)5mmol/L 、吐温-20 0.1%；试剂R2：乙酰辅酶A 氧化酶(ACOD)20KU/L 、过氧化物酶（ POD ）30KU/L 、吐温-20 0.1%；校准品：含十六（烷）酸水溶液。校准品可以溯源至北京华宇亿康校准品，注：校准品浓度见每批瓶标示。不同批号试剂盒中各组分不可以互换。 【储存条件及有效期】试剂和校准品在2℃～8℃避光条件下保存可以稳定365天。试剂和校准品开瓶后2℃～8℃可稳定15天。备注：生产日期及失效日期见外盒或瓶标签。 【适用仪器】日立7180、奥林巴斯AU680、贝克曼LX-20/DXC800、迈瑞BS-380、朕江T900全自动生化分析仪。 【样本要求】 1、空腹静脉采血，样本为新鲜的血清样本。 2、样本采集后立即离心分离，并在当日检测，如当日不能检测，冷藏2℃～8℃下可稳定48h ；避免反复冻融。 【检验方法】 （1）双试剂无需配制，直接使用。 （2）试验条件：样本（S ）：5 μl 试剂1(R1) ：225 μl 试剂2（R2）：75 μl 温度：37 ℃ 测定类型：终点法 主波长：546 nm 副波长：700 nm 反应方向：向上 方法：先将样本与R1混合，37 ℃5分钟后加入R2试剂，然后测定加入R2后5分钟的反 应吸光度。 测定空白吸光度（A 1） 测定反应吸光度（A 2） 0 5 10 （反应时间：10min ） 37℃ （3）校准程序：使用配套校准品进行校准，每次更换试剂批次时都应进行校准。校准后，各实验 室要用质控品验证。如果质控结果不在可接受范围值内，则需要进行重新校准。 （4）质量控制程序：选用Randox2、3（HN1530、HE1532）进行质量控制。各实验室建立各自的 质控频率和可接受范围值。当测定结果超出可接受范围时，有必要采取相应措施。 （5）结果的计算 （A 2 - A 1）样本 NEFA （mmol/L ）= ———————— × 校准品浓度(mmol/L) （A 2 - A 1）校准品 【参考区间】（0.129～0.769） mmol/L （建议各实验室建立自己的参考区间）。依照《医学研
MM FS CNG 油料中油的游离脂肪酸含量测定法
MMFSCNG0107 油料 游离脂肪酸 滴定法 MM_FS_CNG_0107 油料中油的游离脂肪酸含量测定法 1.适用范围 本方法适合于油料中油的游离脂肪酸含量测，不适用于月桂酸含量较高的油料。 2.原理概要 试样在索氏抽提器中用石油醚作溶剂浸出，所得到的油用碱标准溶液滴定存在游离脂肪酸。 3.主要仪器和试剂 3.1.主要试剂 30～60℃石油醚、乙醚、95％乙醇、氢氧化钾或氢氧化钠。 乙醚、95％乙醇等体积混合液(用前调至中性)。 0.1mol/L 氢氧化钾(或氢氧化钠)95％乙醇标准溶液：需在5d 前配制，使用前过滤用苯二甲酸氢钾准确标定。 1％酚酞指示剂：1g/100mL 95％乙醇酚酞指示剂溶液。 石英砂、脱脂棉、沸石。 3.2.仪器 分析天平（感量0.0001g）、粉碎机、研钵、电热干燥箱(103±2℃)。 索氏抽提器带250mL 接收瓶。 干燥器。 10mL 碱式滴定管，最小分度值0.05mL。 滤纸筒：与索氏抽提器适宜规格。 4.过程简述 4.1.样品的制备 分析样品的制备：用四分法从2kg 原始样品中分取出所需样品量，保存于具塞试样瓶中备用。 试验样品的干燥：按(MM_FS_CNG_O106)油料水分及挥发物含量测定法测定水分含量。如样品水分大于10％，则需将样品干燥至10％以下。 试样的制备：含油量在20％以下的样品用粉碎机粉碎后称取10g 装入滤纸筒内。含油在20％以上的样品称取10g 后按下述方法处理：较大籽粒样品切碎，小籽粒直接用研钵加少量石英砂研后装入滤纸筒中。处理好的试样要立即进行浸出。 4.2.油的浸出： 上述装好样品的滤纸筒口用脱脂棉封好后放入索氏抽提器内，用石油醚在水温约75℃的水浴上抽提4h。回收溶剂。取下已知质量的接收瓶擦干水迹后在103℃干燥箱内干燥至恒重。两次称量结果相差不得超过5mg。 4.3.测定： 用100mL 乙醚、95％乙醇等体积混合液洗涤接收瓶。将浸出油全部转移到200mL 锥形瓶中，加入酚酞指示剂2～3滴，用0.1mol/L 碱液，滴定至溶液呈粉红色(持续1min)记下所用体积V 。 5.结果计算 5.1.游离脂肪酸含量按下式计算： 100) －(0001282＝)(01×××m m C V ％游离脂肪酸含量
游离脂肪酸测定试剂盒(ACS-ACOD法)产品技术要求haifeng
游离脂肪酸测定试剂盒（ACS-ACOD法） 适用范围：本产品适用于体外定量测定人血清中游离脂肪酸（NEFA）含量。 1.1 产品规格 1.2主要组成成分
注：校准品、质控品具有批间、赋值特异性，具体值详见靶值单。 2.1外观 2.1.1试剂盒标签标识清晰，外包装完整无破损； 2.1.2 试剂1：无色或淡黄色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；2.1.3 试剂2：无色或淡黄色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；2.1.4 校准品：无色或浅黄色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物；2.1.5 质控品：无色或浅黄色澄清液体，目测不得有任何沉淀及絮状悬浮物。2.2 净含量 净含量不低于标示值。 2.3 空白吸光度 在主波长546nm、副波长700nm、37℃条件下，试剂空白吸光度A≤0.2。 2.4 线性范围 （0.05,3.00）mmol/L范围内，相关系数r≥0.990；
（0.05,1.00]mmol/L范围内，绝对偏差不超过±0.10mmol/L； （1.00,3.00)mmol/L范围内，相对偏差不超过±10.0%。 2.5分析灵敏度 在产品说明书规定参数设定条件下，测定浓度1.0mmol/L的样本，吸光度变化△A≥0.05。 2.6 精密度 2.6.1批内重复性 CV≤10.0%。 2.6.2 批间差 相对极差R≤10.0%。 2.7 准确度 与已上市产品比对：（0.05,3.00）mmol/L范围内，相关系数r≥0.990；（0.05,1.00]mmol/L范围内，绝对偏差不超过±0.10mmol/L； （1.00,3.00)mmol/L范围内，相对偏差不超过±10.0%。 2.8 校准品 2.8.1 均一性CV≤5.0% 2.8.2 开瓶稳定性：开瓶后3天，相对偏差不超过±10.0%。 2.9 质控品 2.9.1赋值有效性：测定值在质控靶值范围内。 2.9.2 均一性：CV≤5.0%。 2.9.3 开瓶稳定性：开瓶后3天，测定值在质控靶值范围内。 2.10 稳定性
脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)活性试剂盒说明书
货号：MS1108 规格：100管/96样脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，FAS）活性试剂盒说明书 微量法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： FAS是脂肪酸合成关键酶，催化乙酰辅酶A和丙二酰辅酶A而生成长链脂肪酸。FAS普遍表达于各种组织细胞中，在哺乳动物肝、肾、脑、肺和乳腺以及脂肪组织中表达丰富。 测定原理： FAS催化乙酰CoA、丙二酰CoA和NADPH生成长链脂肪酸和NADP+；NADPH在340nm有吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm 光吸收下降速率，计算FAS活性。 自备实验用品及仪器： 研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪和蒸馏水。 试剂组成和配制： 试剂一：液体100mL×1瓶，－20℃保存。用前1d取出置于4℃充分解冻后混匀。 试剂二：粉剂×1瓶。临用前加入440μL试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。 试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入440μL试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。 试剂四：液体20mL×1瓶, 4℃保存。 试剂五：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加入840μL试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。 粗酶液提取： 1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加 入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。12000g，4℃离心40min，取上清置冰上待测。 2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500 万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后12000g，4℃，离心40min，取上清置于冰上待测。 3.血清等液体：直接测定。 FAS测定操作： 1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。 2. 试剂四置于40℃水浴中预热30 min。 3. 在96孔板或EP管中依次加入20μL上清液、4μL试剂二、4μL试剂三、164μL试剂四和8μL试剂五，混匀后于340nm处测定吸光值，记录第30s和90s时吸光值，分别记录为A1和A2。△A测=A1-A2。 FAS活性计算： a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下 （1）按照蛋白浓度计算 第1页，共2页
游离脂肪酸NEFA检测的临床意义
游离脂肪酸N E F A检测 的临床意义 文件编码（GHTU-UITID-GGBKT-POIU-WUUI-8968）
游离脂肪酸(NEFA)检测的临床意义 游离脂肪酸（NEFA）是指血清中未与甘油、胆固醇等酯化的脂肪酸，又称非酯化脂肪酸或未酯化脂肪酸。正常情况下，血浆中含量极少，仅占总脂肪酸含量的5%～10%，在血浆中半衰期2～3分钟，主要与血清蛋白结合转运到全身组织利用。 游离脂肪酸(NEFA)有很强的细胞毒性，可损害细胞膜、线粒体和溶酶体膜等，引起细胞内微器损害，而且能增强细胞因子毒性，在许多疾病的病理生理中起重要作用。 游离脂肪酸在临床上的应用: 一、游离脂肪酸与心血管疾病 1.与动脉粥样硬化的关系高浓度NEFA能引起高纤维蛋白原血症，血粘度升高，血管纤溶活性降低，血管壁纤维蛋白原沉积，对肝素有拮抗作用。高纤维蛋白原常促使血小板及红细胞凝集，纤溶活性降低，使动脉向着粥样硬化方向发展，原有的粥样硬化加重。 2.与心律失常的关系急性心肌梗塞早期，心肌对游离脂肪酸的利用明显增加，并可动员脂肪组织中游离脂肪酸进入血液，使血浆游离Ca2+浓度降低，并使氧化磷酸化解偶联，诱发心率失常。 3.与缺血心肌收缩力的关系高浓度NEFA可加重缺血心脏泵功能的损害。有氧条件下NEFA 不改变心肌的收缩功能，而在低氧、缺氧条件下则可降低其收缩力，增加其静息张力，浓度越高，抑制作用越强，甚至还会引起心肌挛缩。 二、游离脂肪酸与代谢综合症 代谢综合征(MetabolicSyndrome)，也称X综合征(XSyndrome)、胰岛素抵抗综合征(InsulinResistanceSyndrome，IRS)，它包括一系列与胰岛素抵抗有关的代谢及生理紊乱，包括：中心性肥胖、高血压、胰岛素抵抗、高胰岛素血症、糖耐量减低、脂代谢紊
快速诊断试剂盒化学反应原理
快速检测试剂盒化学反应原理 1.硫氰酸钠：白色斜方晶系结晶或粉末，易溶于水、乙醇、丙酮等溶剂，水溶液呈中性， 遇铁盐生成血红色的硫氰化铁，遇亚铁盐不反应，与硫酸生成黄色的硫酸氰钠，与钴盐作用生成深蓝色的硫氰化钴，与银盐或铜盐作用生成白色的硫氰化银或黑色的硫氰化铜沉淀，在空气中易潮解。 2.液体石蜡：即矿物油，珍珠大米的检测方法：取大米于样品杯中一半体积，加入70℃以 上的热水至样品杯近满处，用洁净牙签轻轻搅动30秒以上，静置片刻使溶液温度降低到50℃以下(固体石蜡的熔点为50～65℃)，如果样品中掺有石蜡，液面上会出现细微的油珠，随着温度的降低和时间的延长液体石蜡的油珠会聚集加大，固体石蜡的油珠会结成白色片状物浮于液面上。 3.工业碱：一般指（碳酸钠）、工业烧碱（氢氧化钠）、工业重碱（碳酸氢钠）。碳酸钠也 被称为纯碱。碱性溶液遇到酚蓝试剂变成紫红色，碳酸钠与钙的可溶性盐生成沉淀，而氢氧化钠或者碳酸氢钠遇到钙的可溶性盐则不会发生沉淀。 4.甲醇：工业酒精，甲醇经氧化试剂氧化后形成甲醛，甲醛可与品红-亚硫酸作用生成蓝紫 色化合物。（氧化剂配制：高锰酸钾-磷酸溶液，混合后不容易保存，所以分开配制逐一添加。品红-亚硫酸溶液：混合后不易保存，同样是分开配制逐一添加。亚硫酸为亚硫酸钠与盐酸配制所得，可百度。） 5.甲醛：乙酰丙酮法原理是利用甲醛与乙酰丙酮及氨生成黄色化合物二乙酰基二氢卢剔啶 后，412nm下进行分光光度测定。此法最大的优点是操作简便，性能稳定，误差小，不受乙醛的干扰，有色溶液可稳定存在12hr；缺点是灵敏度较低，最低检出浓度为 0.25mg/L，仅适用于较高浓度甲醛的测定；方法缺点是反应较慢，需要约60min；SO2 对测定存在干扰(使用NaHSO3作为保护剂则可以消除)。变色酸法也称铬变酸法,甲醛在浓硫酸溶液中可与变色酸(1,8-二羟基萘-3,6-二磺酸)作用形成紫色化合物。该法的优点是操作简便、快速灵敏；缺点是在浓硫酸介质中进行，不易控制，且醛类、烯类化合物及NO2等对测定有干扰。酚试剂法原理是甲醛与酚试剂反应生成嗪，嗪在酸性溶液中被高铁离子氧化形成蓝绿色化合物，颜色深浅与甲醛含量成。正比副品红法原理是在甲醛存在下，亚硫酸根离子与副品红生成紫色络合物，其最大吸收峰在570nm处，检测限为50μg/L。本法的优点是简便灵敏，其它醛和酚不干扰测定；缺点是褪色快，灵敏度不高，易受温度影响，使用了有毒的汞试剂。AHMT法原理是甲醛与4-氨基-3-联氨-5-巯基-1，2，3－三氮杂茂（AHMT）在碱性条件下缩合,然后经高碘酸钾氧化成6- 基-5-三氮杂茂[4,3-b]-S-四氮杂苯紫红色化合物,比色定量。该方法优点是抗干扰能力强，对乙酰丙酮法、MBTH法及副品红法干扰严重的六胺对此测定方法无干扰，因此，该法是测定树脂交联过程释放甲醛的有效方法；灵敏度较高，最低检出限为0.01mg/m3，较适宜与一般情况下室内空气的检测；缺点是颜色随时间逐渐加深，要求标准溶液的显色反应和样品溶液的显色反应时间必须严格统一，在显色体系最大吸收波长550nm测定，Co2+、Cu2+干扰测定。溴酸钾－次甲基蓝法原理是在酸性介质中，甲醛可促进溴酸钾氧化次甲基蓝反应，降低体系吸光度的特点来快速测定甲醛含量。次甲基蓝在665nm处有最大吸收峰，在H2SO4介质中加入KBrO3能使其吸收峰微降，而再加入甲醛后，其吸光度会显著下降，△A降低与甲醛浓度成正比。银－Ferrozine法原理为水合氧化银能氧化甲醛并被还原为Ag，产生的Ag与Fe3+定量反应生成Fe2+，Fe2+与菲洛嗪（Ferrozine）形成有色配合物 6.溴酸钾：见附页。 7.硫酸镁：络合滴定法取供试品适量，加水溶解，以铬黑T为指示剂，用乙二胺四醋酸钠 滴定液（0.05mol/L)滴定至溶液自紫红色转变为纯蓝色。每1mL乙二胺四醋酸钠滴定液
测定方法-游离脂肪酸
2.1.4游离脂肪酸测定方法2.141 试剂 乙醇-乙醚混合溶液：无水乙醚与95沱醚1:1（V）混合，每100mL溶剂加入0.3mL酚酞指示剂 0.1M KOH标准溶液：称取5.8gKOH溶于1000mL新沸冷却蒸馏水中，摇匀，按下 法标定其摩尔浓度。称取在125 C烘至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾 0.8608g ,精确至0.0002g ,置于250mL锥形瓶中，以50mL蒸馏水溶解， 加入2-3滴酚酞指示剂，用上述KOH容液滴定至粉红色，同时做空白试 验，KOH标准溶液摩尔浓度M G— （V V。）0.2042 式中：G—邻苯二甲酸氢钾质量，g V —KOH容液用量，mL V 。一空白试验KOH溶液的用量，mL 0.2042 —每mol邻苯二甲酸氢钾的质量,g 计算结果：M KOH二0.86080.0942 （44.85 0.10） 0.2042 1獅酞指示剂：1g酚酞溶于100mL95乙醇中 2.1.4.2 仪器 250mL锥形瓶，25mL滴定管分析天平 2.2.5游离脂肪酸（FFA）含量的测定⑴: 精确称取样品5.0g，置于锥形瓶中，用水浴微热熔融，加入预先中和的乙醚、乙醇混合液50mL使之溶解，加入1%酚酞5滴，然后用氢氧化钾标准溶液滴至呈粉红色，10s 内不退色为终点，记录消耗氢氧化钾标准液的毫升数。游离脂肪酸质量分数（以油酸计）为
m 式中FFA 游离脂肪酸的质量分数 V-消耗氢氧化钾标准溶液的体积（mL C-氢氧化钾标准溶液的浓度（mol/L ） 282-油酸的摩尔质量（g/mol ） m 样品质量（g ） 2.1.5游离氨基酸测定方法 2.1.5.1 试齐I 」 40%中性甲醛：40mL 甲醛溶于60mL 蒸馏水中，用1mol/L NaOH 调pH 为8.1 0.1%百里酚酞：0.1g 百里酚酞溶于90mL 乙醇，加水至100mL 0.1M NaOH B 准溶液：称取110gNaOH 溶于100mL 无CO 的水中，摇匀，注入聚乙烯容器 中，密闭放置至溶液清亮。用塑料管量取5.1m 上层清液，用无CO 的水稀释至1000mL 摇匀。 称取0.75g 于105-110 C 烘至恒重的邻苯二甲酸氢钾，加入无 CO 水溶解，加2滴酚酞指示液，用配好的NaOH 底至溶液呈粉红色， 并保持30s ，同时做空白实验。NaOH 标准溶液的摩尔浓度 M NaOH m 1000 (V 1 V 2)M 式中:m —邻苯二甲酸氢钾 质量， g V 1 —NaOH 体积，mL V 2 —空白试验消耗NaO 啲体积， mL M —邻苯二甲酸氢钾的摩尔质量， 204.22g/mol 计算结果： M NaOH =—— 0.7512 1000 — =0.11026 (33.41 0.05) 204.22 FFA V C 282 1000 100
游离脂肪酸(NEFA)测定试剂盒(ACS-ACOD酶法)产品技术要求百奥泰康
游离脂肪酸(NEFA)测定试剂盒（ACS-ACOD酶法）适用范围：该产品用于体外定量测定人血清中游离脂肪酸的浓度。 1.1产品规格 1.2 组成成分 1.2.1 试剂组成 试剂1：磷酸盐缓冲液（pH=7.0） 50mmol/L；
辅酶A 0.5mmol/L； ATP 3 mmol/L； 乙酰辅酶A合成酶（ACS ） 0.4KU/L； ）2mmol/L； 氯化镁（MgCl 2 偶联终点比色法结合成份（Trinder结合成份）0.5g/L； 表面活性剂和稳定 剂＜1%； 试剂2：磷酸盐缓冲液（pH=7.0） 50mmol/L； 乙酰辅酶 A 氧化酶（ACOD ）30KU/L； 过氧化物酶（POD ） 45KU/L； 4-氨基安替比林（4AAP） 1.5g/L； 表面活性剂和稳定剂＜1% 1.2.2 校准品的组成 单水平的液体校准品，在50mM pH7.0的磷酸盐缓冲液中添加十六烷酸纯品，稳定剂<0.5%；定值范围：0.8-1.2mmol/L。 1.2.3质控品的组成 两个水平的液体质控品，在牛血清(20g/L)中加入十六烷酸纯品，添加的牛血清的比例为5%-10%，稳定剂<0.5%；目标浓度范围：低水平（0.30-0.60）mmol/L，高水平（0.80-1.20）mmol/L。 2.1 外观 液体双试剂：试剂1：无色或淡黄色澄清液体；试剂2：黄色澄清液体。
校准品：无色或淡黄色澄清液体。 质控品：无色或淡黄色澄清液体。 2.2 净含量 液体试剂的净含量不得低于标示体积。 2.3 空白吸光度 试剂空白吸光度应≤0.3。 2.4 分析灵敏度 浓度为0.5mmol/L时，吸光度差值的绝对值在0.01-0.2范围内。 2.5 线性 在(0,3.0]mmol/L线性范围内，线性相关系数r 应≥0.995；在(0,1.2] mol/L 时绝对偏差不超过0.18mmol/L；在（1.2,3.0]mmol/L范围内的相对偏差不超过±15%。 2.6 精密度 变异系数CV应≤6% 2.7 批间差 不同批号之间测定结果的相对极差应≤10%。 2.8 准确度 回收实验：回收率在90%-110%。 2.9 质控品赋值有效性 测定值在质控靶值范围内。 2.10校准品溯源性要求
干扰物试剂盒
商品号/79370 干扰物检查A PLUS Interference Check.A Plus 说明干扰物检查A PLUS试剂盒是用于检测胆红素（游离型、结合型）、溶血、乳糜等物质对检查结果影响程度的干扰物检查用的专用试剂盒。 制品成分 1、胆红素*F(游离型）－－－－－－－－－－－－－－2mL*1 2、胆红素*F(空白）－－－－－－－－－－－－－－－2mL*1 3、胆红素*C(结合型）－－－－－－－－－－－－－－2mL*1 4、胆红素*C(空白）－－－－－－－－－－－－－－－2mL*1 5、溶血血红蛋白－－－－－－－－－－－－－－－－2mL*1 6、溶血血红蛋白（空白）－－－－－－－－－－－－2mL*1 7、乳糜－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－2mL*1 8、乳糜（空白）－－－－－－－－－－－－－－－－2mL*1 使用方法 各瓶用精制水2mL溶解，当天使用。（根据所需添加浓度不同，精制水量不同） 操作方法 1、溶解后的样本（干扰物质）1.0ml和事先准备好的混合血清9.0ml混合制成样本A 2、溶解后的样本（空白）1.0ml和事先准备好的混合血清9.1ml混合制成样本B 3、样本A和样本B按以下表格配制稀释系列 对照 1/10 2/10 3/10 4/10 5/10 6/10样本A----0.10.20.30.40.50.6 样本B 1.00.90.80.70.60.50.4 7/10 8/10 9/101 样本A0.70.80.9 1.0 样本B0.30.20.1---- 4、对以上稀释系列进行检测 组成 1、胆红素*F（游离型）T-BIL# 牛蛋白 3.2g/dL Tris.缓冲液 Ph8.5100mmol/L 2、胆红素*F（空白）牛蛋白 3.2g/dL Tris.缓冲液 Ph8.5100mmol/L 3、胆红素*C（结合型）T-BIL/D-BIL# 牛蛋白 4.0g/dL Tris.缓冲液 Ph8.020mmol/L 4、胆红素*C（空白）牛蛋白 4.0g/dL Tris.缓冲液 Ph8.020mmol/L 5、溶血血红蛋白溶血血红蛋白＃ 蔗糖10g/dL
游离脂肪酸与肿瘤
游离脂肪酸在肝脏疾病和癌症中的应用 游离脂肪酸定义： 游离脂肪酸（NEFA）是指血清中未与甘油、胆固醇等酯化的脂肪酸，又称非酯化脂肪酸或未酯化脂肪酸(nonesterified fatty acid)。正常情况下，血浆中含量极少，仅占总脂肪酸含量的5%～10%，在血浆中半衰期2～3分钟，主要与血清蛋白结合转运到全身组织利用。 游离脂肪酸(NEFA)有很强的细胞毒性，可损害细胞膜、线粒体和溶酶体膜等，引起细胞内微器损害，而且能增强细胞因子毒性，在许多疾病的病理生理中起重要作用。 游离脂肪酸在肝脏疾病和癌症中的应用: 非酒精性脂肪肝病是代谢综合征的一种重要临床表现，从简单的脂肪肝到脂肪性肝炎，肝硬化，直至肝癌。非酒精性脂肪肝病的重要表现就是三酰基甘油（TAG）在肝脏的堆积。在非酒精性脂肪肝病患者中，其堆积于肝脏的三酰基甘油60%是游离脂肪酸（NEFA），来源于血浆游离脂肪酸池，血浆游离脂肪酸的浓度直接决定了进入肝脏的游离脂肪酸的绝对量，与非酒精性脂肪肝病的发病机制密切相关。据相关文献，在禁食状态，80%的脂肪酸由脂肪组织生成并释放到血浆游离脂肪酸池中，哪怕在进食状态下，此数值仍达到60%，因此由脂肪组织过度生成的脂肪酸将经由血浆游离脂肪酸池流入肝脏，从而造成三酰基甘油在非酒精性脂肪肝病患者肝脏中形成堆积[1]。高浓度的游离脂肪酸作用于肝细胞可致肝细胞线粒体肿胀和通透性增加，肝细胞变性、坏死和炎性浸润。即使极低浓度的游离脂肪酸也可改变粘膜的通透性，导致粘膜受损，损伤内皮细胞。因此，血清或肝脏中NEFA浓度略有增加即可损伤肝细胞。 检测血浆游离脂肪酸浓度可作为癌症死亡率的独立相关指标（相对风险可达1.66，95% 置信区间1.25,2.21，根据年龄，吸烟史，心率和体质指数调整）[2]。高浓度血浆游离脂肪酸可作为癌症死亡的预示，尤其是在最高浓度的20%患者中，如果是与吸烟或酒精相关癌症中，则其预示性将更为强烈。众所周知，过多饱和脂肪饮食，将导致某些癌症的发生。在禁食状态下，储存的甘油三酯将分解为游离脂肪酸，造成游离脂肪酸在人体中循环流通。高血压、伴胰岛素抵抗的糖尿病、向心性肥胖，系统性的游离脂肪酸循环流通升高，已经被证实可作为某些癌症的风险因子，如胰腺癌，肝癌，肾癌和子宫内膜癌等。升高的游离脂肪酸可作为这些癌症的常规检测指标[2]。游离脂肪酸可能与癌症诱发和生长相关，但是目前仍没有明确的关于这方面的解释。 无论如何，在肝脏疾病中检测游离脂肪酸对于监测肝脏疾病进程非常有效，而对于癌症病人检测游离脂肪酸，其强烈的癌症患者死亡率预示性则更加具有临床价值。 参考文献： [1] High Plasma Nonesterified Fatty Acids Are Predictive of Cancer Mortality but Not of Coronary Heart Disease Mortality: Results from the Paris Prospective Study, Am J Epidemiol Vol. 153, No. 3, 2001:292-298 [2]Contribution of adipose tissue and de novo lipogenesis to nonalcoholic fatty liver disease, J Clin Invest. 2005;115(5):1139–1142.
食品中脂肪酸的测定
食品中脂肪酸的测定 基础知识： 油脂是食品的重要组分和营养成分。油脂中脂肪酸组分的测定最常用的方法是气相色谱法。样品前处理采用酯交换法（甲酯化法），图谱解析采用归一化法。 气相色谱(GC) 是一种把混合物分离成单个组分的实验技术它被用来对样品组分进行鉴定和定量测定。 一个气相色谱系统包括： ? 可控而纯净的载气源能将样品带入GC系统 ? 进样口同时还作为液体样品的气化室 ? 色谱柱实现随时间的分离 ? 检测器当组分通过时检测器电信号的输出值改变从而对组分做出响应 ? 某种数据处理装置 氢火焰离子化检测器(FID) ：氢气和空气燃烧所生成的火焰产生很少的离子。在氢火焰中，含碳有机物燃烧产生CHO+离子，该离子强度与含量成正比。该检测器检出的是有机化合物，无机气体及氧化物在该检测器无响应。 当纯净的载气（没有待分离组分）流经检测器时产生稳定的电信号就是基线。
1——载气(氮气)； 2——氢气； 3——压缩空气； 4——减压阀(若采用气体发生器就可不用减压阀)；5——气体净化器(若采用钢瓶高纯气体也可不用净化器)；6——稳压阀及压力表； 7——三通连接头； 8——分流／不分流进样口柱前压调节阀及压力表；10——尾吹气调节阀； 11——氢气调节阀； 12——空气调节阀； 13——流量计(有些仪器不安装流量计)； 14——分流／不分流进样口； 15——分流器； 16——隔垫吹扫气调节阀； 17——隔垫吹扫放空口； 18——分流流量控制阀； 19——分流气放空口； 20——毛细管柱； 21——FID检测器； 22——检测器放空出口；
方法来源： GB 5009.168-2016 食品安全国家标准食品中脂肪酸的测定 1、范围 本方法规定了食品中脂肪酸含量的测定方法。 本方法适用于游离脂肪酸含量不大于2%的油脂样品的脂肪酸含量测定。 2、原理 样品中的脂肪酸经过适当的前处理（甲酯化）后，进样，样品在汽化室被汽化，在一定的温度和压力下，汽化的样品随载气通过色谱柱，由于样品中组分与固定相间相互作用的强弱不同而被逐一分离，分离后的组分到达检测器（detceter）时经检测口的相应处理（如FID的火焰离子化），产生可检测的信号。根据色谱峰的保留时间定性，归一化法确定不同脂肪酸的百分含量。 3、试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 3.1石油醚：沸程30℃~60℃。 3.2甲醇(CH3OH)：色谱纯。 3.3正庚烷[CH3(CH2)5CH3]：色谱纯。 3.4无水硫酸钠(Na2SO4)。 3.5异辛烷[(CH3)2CHCH2C(CH3)3]：色谱纯。 3.6硫酸氢钠(NaHSO4)。 3.7氢氧化钾(KOH)。 3.8氢氧化钾甲醇溶液(2mol/L)：将13.1g氢氧化钾溶于100mL无水甲醇中，可轻微加热，加入无水硫酸钠干燥，过滤，即得澄清溶液，有效期3个月。 3.9混合脂肪酸甲酯标准溶液：取出适量脂肪酸甲酯混合标准移至到10mL容量瓶中，用正庚烷稀释定容，贮存于-10℃以下冰箱，有效期3个月。 3.10单个脂肪酸甲酯标准溶液：将单个脂肪酸甲酯分别从安瓿瓶中取出转移到10mL容量瓶中，用正庚烷冲洗安瓿瓶，再用正庚烷定容，分别得到不同脂肪酸甲酯的单标溶液，贮存于-10 ℃以下冰箱，有效期3个月。 3.11丙酮：色谱纯。 5、仪器和设备 5.1实验室用组织粉碎机或研磨机。 5.2气相色谱仪：具有氢火焰离子检测器(FID)。
游离脂肪酸(NEFA)检测的临床意义
游离脂肪酸(NEFA)检测的临床意义 游离脂肪酸（NEFA）是指血清中未与甘油、胆固醇等酯化的脂肪酸，又称非酯化脂肪酸或未酯化脂肪酸。正常情况下，血浆中含量极少，仅占总脂肪酸含量的5%～10%，在血浆中半衰期2～3分钟，主要与血清蛋白结合转运到全身组织利用。 游离脂肪酸(NEFA)有很强的细胞毒性，可损害细胞膜、线粒体和溶酶体膜等，引起细胞内微器损害，而且能增强细胞因子毒性，在许多疾病的病理生理中起重要作用。 游离脂肪酸在临床上的应用: 一、游离脂肪酸与心血管疾病 1.与动脉粥样硬化的关系高浓度NEFA能引起高纤维蛋白原血症，血粘度升高，血管纤溶活性降低，血管壁纤维蛋白原沉积，对肝素有拮抗作用。高纤维蛋白原常促使血小板及红细胞凝集，纤溶活性降低，使动脉向着粥样硬化方向发展，原有的粥样硬化加重。 2.与心律失常的关系急性心肌梗塞早期，心肌对游离脂肪酸的利用明显增加，并可动员脂肪组织中游离脂肪酸进入血液，使血浆游离Ca2+浓度降低，并使氧化磷酸化解偶联，诱发心率失常。 3.与缺血心肌收缩力的关系高浓度NEFA可加重缺血心脏泵功能的损害。有氧条件下NEFA不改变心肌的收缩功能，而在低氧、缺氧条件下则可降低其收缩力，增加其静息张力，浓度越高，抑制作用越强，甚至还会引起心肌挛缩。 二、游离脂肪酸与代谢综合症 代谢综合征(Metabolic Syndrome)，也称X综合征(X Syndrome)、胰岛素抵抗综合征(Insulin Resistance Syndrome，IRS)，它包括一系列与胰岛素抵抗有关的代谢
及生理紊乱，包括：中心性肥胖、高血压、胰岛素抵抗、高胰岛素血症、糖耐量减低、脂代谢紊乱、高尿酸血症等。NEFA是人体最活跃的代谢脂质，半衰期仅2～3分钟，是一项能比TG、LDL、HDL和APOA1/B更早、更灵敏反应血脂代谢紊乱的指标。 三、游离脂肪酸与Ⅱ型糖尿病 血清中的NEFA在生理浓度范围内对葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)有加强作用，但是长期的NEFA浓度升高有抑制葡萄糖的氧化和转运、抑制糖原的合成、促进糖异生、影响胰岛素的分泌和信号转导、影响β细胞的凋亡等作用。目前监测、控制NEFA浓度已成为防治2型糖尿病新的途径。 四、游离脂肪酸与肝脏疾病 高浓度的NEFA作用于肝细胞可致肝细胞线粒体肿胀和通透性增加，肝细胞变性、坏死和炎性浸润。即使极低浓度的NEFA也可改变粘膜的通透性，导致粘膜受损，损伤内皮细胞。因此，血清或肝脏中NEFA浓度略有增加即可损伤肝细胞。 脂肪肝的发生与脂代谢紊乱密切相关。高脂血症时，脂肪分解NEFA加快使血中NEFA含量增加；当肝细胞摄取过多的NEFA，超过了线粒体对NEFA的氧化能力，促使其合成TG增加，当肝细胞内TG合成的速度过快，并蓄积达到一定程度，即形成脂肪肝。 五、游离脂肪酸与抗精神病药品 长期服用抗精神病药（APS），易导致代谢紊乱综合征，某精神病福利院对长期住院的308名患者进行检测统计，其中体重增加或肥胖患者比例高达40.91%，糖耐量降低（IGT）患者占24.35%；2型糖尿病患者占13.64%。因此，长期使用APS时应密切关注控制血清NEFA浓度，以保护胰岛β细胞的功能。
游离脂肪酸(NEFA)测定试剂盒(ACS-ACOD法)产品技术要求sainuopu
游离脂肪酸（NEFA）测定试剂盒（ACS-ACOD法） 适用范围：用于体外定量测定人体血清中游离脂肪酸的含量。 1.1 试剂盒包装规格 试剂1：1×15ml，试剂2：1×5ml；试剂1：2×54ml，试剂2：2×18ml； 试剂1：3×39ml，试剂2：3×13ml；试剂1：4×54ml，试剂2：4×18ml；试剂1：2×300ml，试剂2：1×200ml；试剂1：2×30ml，试剂2：2×10ml。校准品（选配）：1×1ml；1×3ml。 质控品（选配）：1×1ml；1×3ml。 1.2试剂盒主要组成成分
2.1 外观 试剂1：无色至淡黄色澄清液体；试剂2：黄色澄清液体。 校准品：无色至淡黄色澄清液体。 质控品：无色至淡黄色澄清液体。 2.2 净含量 液体试剂的净含量不得低于标示体积。 2.3 试剂空白吸光度 在37℃、600 nm波长、1cm光径条件下，试剂空白吸光度应不大于0.3。 2.4 分析灵敏度 测定浓度为0.5mmol/L样本时，吸光度变化值（ΔA）应在（0.01，0.2）范围内。 2.5 线性范围 在（0，3）mmol/L范围内，线性相关系数r应不小于0.995。在[1，3）mmol/L 范围内线性相对偏差应不大于±15%；测定浓度（0，1）mmol/L时线性绝对偏差应不大于±0.15mmol/L。 2.6 重复性 重复测试两份高低浓度的样本，所得结果的变异系数（CV%）应不大于6%。 2.7 批间差 不同批号试剂测试同一份样本，测定结果的批间相对极差应不大于10%。
2.8 准确度 回收试验：回收率应在85%～115%之间。 2.9 质控品赋值有效性 测定结果在靶值范围内。 2.10 校准品溯源性 依据GB/T 21415-2008《体外诊断医疗器械生物样品中量的测量校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求，校准品溯源至企业工作校准品。 2.11 稳定性 效期稳定性：试剂盒在2℃～8℃下有效期为12个月，取失效期的试剂盒进行检验，试验结果满足2.1、2.3、2.4、2.5、2.6、2.8、2.9的要求。
游离脂肪酸(free fatty acid ,FFA )含量测定试剂盒说明书
货号：MS2400 规格：100管/48样游离脂肪酸(FFA)含量测定试剂盒说明书 微量法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： FFA既是脂肪水解的产物，又是脂肪合成的底物。FFA的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌功能有关，也可反映食物贮藏中的品质变化。 测定原理： 在弱酸性条件下，FFA与铜盐反应生成铜皂，在715nm处有特征吸收峰，在一定范围内游离脂肪酸含量与显色程度呈线性关系。 自备实验用品及仪器： 研钵、台式离心机、震荡仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。 试剂组成和配制： 试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存。 试剂二：液体20mL×1瓶，4℃保存。 试剂三：液体20mL×1瓶，4℃保存。 样品中FFA提取： 1、血液：将所取血液，室温静置1 h 后，于4 ℃ 离心机3500 rpm离心15min，取上清0.1mL， 加1mL试剂一，震荡提取3h，8000g，4℃离心10min，取上清液待测。 2、组织：组织用蒸馏水冲洗干净后，用吸水纸吸取表面水分，捣碎后按照组织质量（g）：提 取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）加入试剂一，震荡提取3h，8000g，4℃离心10min，取上清液待测。 3、细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500 万细胞加入1mL试剂一）加入试剂一，冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声2秒，间隔3秒，总时间3min）；震荡提取3h，然后8000g，4℃，离心10min，取上清待测。 测定操作： 1. 分光光度计/酶标仪预热30 min，调节波长到715 nm。 2. 对照管：取上清液0.4mL，加0.2mL试剂二，充分震荡5min，室温静置5min，取上层200μL于微量石英比色皿/96孔板，调零。 3. 测定管：取上清液0.4mL，加0.2mL试剂三，充分震荡5min，室温静置5min，取上层200μL于微量石英比色皿/96孔板，测定吸光值，记为A。 FFA含量计算： a. 使用微量石英比色皿测定的计算公式如下 标准曲线：y=0.0075 x+ 0.0055，R2=0.994 1.血液中FFA含量计算 FFA（nmol/mL）=(A-0.0055)÷0.0075×V1÷(V3×V1÷V2)=1333×(A-0.0055) 2. 组织、细菌或细胞中FFA含量计算 （1）按样本蛋白浓度计算 第1页，共2页
脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)
货号：QS1108-25 规格：25管/24样脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，FAS）活性试剂盒说明书 紫外分光光度法 注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： FAS是脂肪酸合成关键酶，催化乙酰辅酶A和丙二酰辅酶A而生成长链脂肪酸。FAS普遍表达于各种组织细胞中，在哺乳动物肝、肾、脑、肺和乳腺以及脂肪组织中表达丰富。 测定原理： FAS催化乙酰CoA、丙二酰CoA和NADPH生成长链脂肪酸和NADP+；NADPH在340nm有吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm 光吸收下降速率，计算FAS活性。 自备实验用品及仪器： 研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液枪和蒸馏水。 试剂组成和配制： 试剂一：液体25mL×1瓶，－20℃保存。用前1 d取出置于4℃充分解冻后混匀。 试剂二：粉剂×1支，4℃保存。临用前加入550 μL试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。 试剂三：粉剂×1支，4℃避光保存。临用前加入550 μL试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。 试剂四：液体25mL×1瓶，4℃保存。 试剂五：粉剂×1支，4℃避光保存。临用前加入1050 μL试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。 粗酶液提取： 1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约 0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。12000g，4℃离心40min，取上 清置冰上待测。 2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的 比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后12000g，4℃，离心40min，取上清置于冰上待测。 3.血清等液体：直接测定。 FAS测定操作： 1. 分光光度计预热30min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。 2. 试剂四置于40℃水浴中预热30 min。 3. 测定管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、20μL试剂二、20μL 试剂三、820μL试剂四和40μL试剂五，迅速混匀后于340nm处测定吸光值，记录第30s和90s时吸光值，分别记录为A1和A2。△A测=A1-A2。
游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)
货号: QS2400 规格：50管/24样游离脂肪酸（free fatty acid，FFA）含量测试盒 可见分光光度法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： FFA既是脂肪水解的产物，又是脂肪合成的底物。FFA的浓度与脂类代谢、糖代谢、内分泌功能有关，也可反映食物贮藏中的品质变化。 测定原理： 在弱酸性条件下，FFA与铜盐反应生成铜皂，在715nm处有特征吸收峰，在一定范围内游离脂肪酸含量与显色程度呈线性关系。 自备实验用品及仪器： 研钵、台式离心机、震荡仪、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿。 试剂组成和配制： 试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存。 试剂二：液体25mL×1瓶，4℃保存。 试剂三：液体25mL×1瓶，4℃保存。 样品中FFA提取： 2、血液：将所取血液，室温静置1 h 后，于4 ℃ 离心机3500 rpm离心15min，取上清0.1mL， 加1.2mL试剂一，震荡提取3h，8000g，4℃离心10min，取上清液待测。 3、组织：组织用蒸馏水冲洗干净后，用吸水纸吸取表面水分，捣碎后按照组织质量（g）：提 取液体积(mL)为1：5~12的比例（建议称取约0.1g组织，加入1.2mL试剂一）加入试剂一，震荡提取3h，8000g，4℃离心10min，取上清液待测。 4、细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1.2的比例（建议 500万细胞加入1.2mL试剂一）加入试剂一，冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声2秒，间隔3秒，总时间3min）；震荡提取3h，然后8000g，4℃，离心10min，取上清待测。 测定操作： 1. 分光光度计预热30 min，调节波长到715 nm。 2. 对照管：取上清液1mL，加0.5mL试剂二，充分震荡5min，室温静置5min，取上层0.8mL 于1mL玻璃比色皿，调零。 3. 测定管：取上清液1mL，加0.5mL试剂三，充分震荡5min，室温静置5min，取上层0.8mL 于1mL玻璃比色皿，测定吸光值，记为A。 注意：对照管每个样品都需要测定一次。 FFA含量计算公式： 标准曲线：y=0.0075 x+ 0.0055，R2=0.994 1.血液中FFA含量计算 FFA（nmol/mL）=(A-0.0055)÷0.0075×V1÷(V3×V1÷V2)=1600×(A-0.0055) 2. 组织、细菌或细胞中FFA含量计算 （1）按样本蛋白浓度计算 第1页，共2页