SDS-PAGE标准操作规程
SDS-PAGE蛋白电泳标准操作规程
SDS-PAGE蛋白电泳标准操作规程----(纯度检测)一.目的：检测蛋白质的纯度是否达到生产抗体的要求。
二.依据：《分子克隆手册》，Ab-mart公司内部标准。
三. 职责：质量控制部。
四.试剂与水：所有试剂为分析纯（AR）；水为蒸馏水或超纯水。
五. 器皿与耗品：所有玻璃器皿使用前用玻璃清洁剂清洗, 80℃烤干。
tube、tip一次性使用。
六. 仪器设备：电泳仪（电源1--300V）电泳槽灌胶模具染色具凝胶扫描仪七. 环境要求：相对洁净环境，室温。
八. 溶液的配置：1.A液：1.5MTris·HCl pH8.8称取18.15gTris碱(分析纯)加适量的超纯水溶解,用浓盐酸(分析纯)调pH值至8.8,加超纯水定容至100 ml。
贴上标贴，4℃保存。
此溶液有效使用期限为三个月。
（溶液配置台帐见附件）2.B液: 1MTris·HCl pH6.8称取12.1gTris碱(分析纯)加适量的超纯水溶解,用浓盐酸(分析纯)调pH值至6.8,加超纯水定容至100 ml。
贴上标贴，4℃保存。
此溶液有效使用期限为三个月。
（溶液配置台帐见附件）3.C液: 30%丙烯酰胺称取29.2g丙烯酰胺(分析纯),0.8gN,N’-甲叉双丙烯酰胺(分析纯), 加适量的超纯水溶解,再定容至100 ml,用滤纸过滤,。
贴上标贴，避光4℃保存。
此溶液有效使用期限为三个月。
（溶液配置台帐见附件）4.D液:10%SDS称取10gSDS(分析纯),用超纯水溶解至100 ml.贴上标贴，室温储存。
此溶液有效使用期限为三个月。
（溶液配置台帐见附件）5.E液:10%过硫酸胺称取10g过硫酸胺(分析纯), 用超纯水溶解至100 ml。
贴上标贴，-20℃保存。
此溶液有效使用期限为三个月。
（溶液配置台帐见附件）6.F液:TEMED(amersco)7.电泳缓冲液(10X)称取60.57g Tris碱(分析纯),288.268g甘氨酸(分析纯),20gSDS(分析纯),加超纯水定容至2000ml，临用前加超纯水稀释10倍，贴上标贴，室温储存。
SOP-CSDS-PAGE凝胶电泳标准操作规程
文件编号文件名称SDS-PAGE!胶电泳标准操作规程生效日期有效期至审批及颁发:部门签名日期起草质量部审核质量部批准质量受权人颁发质量部会审: 部门签名日期部门签名日期Copy-1Copy-2Copy-3Copy-4Copy-5Copy-6Copy-7Copy-8Copy-9Copy-10Copy-11Copy-12Copy-13Copy-14Copy-15文件编号文件名称SDS-PAGIE!胶电泳标准操作规程生效日期有效期至、目的建立重组人生长激素电泳检查标准操作规程，使中间产品检验有据可依、范围适用丁本公司中间产品“重组人生长激素”的电泳检查。
二、职责1质量部负责制定本规程。
2 QC人员负责按照本操作规程的规定操作，并做好记录。
3 QC室主任负责监督QC人员按照本规程的规定操作实施四、术语无五、内容1仪器、设备包压电源、垂直板泳槽和制胶模具。
2试剂2.1检查所需试剂是否在有效期内，未准备好的及时配制，缺少的试剂及时申购。
2.2所需试剂有：2.2.1 水：电阻率应不低丁18.2MQ .cm。
2.2.2 A 液：（1.5mol/L三羟基氨基甲烷-盐酸缓冲液）称取18.15g三羟基氨基甲烷，加适量水溶解，用盐酸调pH值至8.8，加水稀释至100ml。
2.2.3 B 液：30初烯酰胺-0.8%N, N'-业甲基双丙烯酰胺溶液（避光保存）。
2.2.4 C 液：1咐二烷基磺酸钠溶液。
2.2.5 D 液：10%3甲基乙二胺溶液。
2.2.6 E 液：10%±硫酸铉，临用前配置。
2.2.7 F 液：（0.5mol/L三羟基氨基甲烷-盐酸缓冲液）称取6.05g三羟基氨基甲烷加适量水溶解，用盐酸调pH值至6.8，加水稀释至100ml。
文件名称SDS-PAGE!胶电泳标准操作规程文件编号生效日期有效期至水溶解，用盐酸调PH值至8.3，加水稀释至1000ml。
2.2.9 供试品缓冲液：称取0.303g三羟基氨基甲烷，0.189ml盐酸，4ml甘油，2mg漠酚蓝, 0.8g十二烷基磺酸钠，加水溶解并稀释至10ml，此溶液用丁非还原SDS-PAGE如用丁还原SDS-PAGE则再加2m l6-筑基乙醇。
SDS-PAGE蛋白电泳检测标准操作规程（非还原还原）
SDS-PAGE蛋白电泳检测标准操作规程（非还原还原）GOOD RESEARCH & DEVELOPMENT PRACTICESDS-PAGE蛋白电泳检测标准操作规程（还原&非还原）编号：SDS-PAGE蛋白电泳检测起草人：部门审核：QA审核：替代：□新订：□日期：日期：日期：修订号：0批准：年月日生效日期：年月日文件分发部门：GOOD RESEARCH & DEVELOPMENT PRACTICESDS-PAGE蛋白电泳检测编号：SDS-PAGE蛋白电泳检测一目的保证产品电泳电泳分子量和纯度检测按规范进行和检定结果的准确可靠。
二范围用于规范电泳电泳分子量和纯度的测定。
三责任质量控制部人员。
四内容1试剂与水：所有试剂为分析纯（AR）；水为蒸馏水或超纯水。
2 溶液的配制2.1A液：1.5MTris·HCl pH8.8称取90.75gTris碱(分析纯)加适量的超纯水（约400ml）溶解,用6M盐酸调pH值至8.8,加超纯水定容至500 ml。
贴上标贴，室温储存。
此溶液有效使用期限为三个月。
6M盐酸（调pH用）：浓盐酸50ml，加50ml纯化水，混匀。
2.2、B液: 0.5MTris·HCl pH6.8称取60.5gTris碱(分析纯)加适量的超纯水（约400ml）溶解,用6M盐酸调pH值至6.8,加超纯水定容至1000 ml。
贴上标贴，室温储存。
2.3C液: 30%丙烯酰胺-0.8%N,N-亚甲基双丙烯酰胺溶液称取300g丙烯酰胺(分析纯),8gN,N’-甲叉双丙烯酰胺(分析纯), 加适量的超纯水溶解(一般500ml，因为丙烯酰胺具有溶胀性的特点),再定容至1000 ml,用滤纸过滤。
贴上标贴，避光4℃保存。
2.4D液:1%SDS称取2gSDS(分析纯),用超纯水溶解至200 ml.贴上标贴，4℃保存。
2.5E液:10%过硫酸铵GOOD RESEARCH & DEVELOPMENT PRACTICESDS-PAGE蛋白电泳检测编号：称取10g过硫酸铵(分析纯)，用超纯水溶解至100 ml，以1ml/支分装，贴上标贴，－20℃保存。
SDS-PAGE电泳标准操作规程（SOP）rosoftOfficeWord文档
SDS-PAGE电泳标准操作规程（SOP）rosoftOfficeWord文档SDS-PAGE电泳标准操作规程(SOP)一．仪器装置1．电泳仪2．夹心式垂直电泳槽3．玻璃板：长14.5×11.5×2mm、短14.0×11.5×2mm4．可调微量移液器5．微量进样器6．转移脱色摇床二．试剂配制1．丙烯酰胺液（30%T/2.7%C）用天平分别称取58.4g丙烯酰胺（Acr）和1.6g N,N’-亚甲双丙烯酰胺（Bis），溶于120ml温热（37℃左右，以利于溶解Bis）的去离子水中，然后转移至200ml容量瓶中，补加去离子水至刻度，摇匀，用滤纸过滤后，检查其pH值应不大于7.0，贮存在棕色瓶中，4℃保存。
每隔2个月重新配制。
小心：丙烯酰胺具有神经毒性，操作时应戴手套。
如不慎接触皮肤，应立即用水和肥皂清洗。
2．分离胶缓冲液（1.5M Tris-HCl，pH8.8）用天平称取36.3g三羟甲基氨基甲烷（Tris），溶于160ml去离子水中，用HCl调pH 值至8.8~8.9（先加5ml浓HCl，再逐滴加1M HCl调节），用去离子水定容至200ml，置棕色瓶中4℃保存。
3．浓缩胶缓冲液（0.5M Tris-HCl，pH6.8）用天平称取12.1g Tris，溶于160ml去离子水中，用HCl调pH 值至6.7~6.8（先加8ml浓HCl，再逐滴加1M HCl调节），用去离子水定容至200ml，置棕色瓶中4℃保存。
4．10% 十二烷基硫酸钠溶液用天平称取20.0g 电泳级十二烷基硫酸钠（SDS），加180ml去离子水，68℃水浴使溶解后，用去离子水定容至200ml，室温保存。
5．10% 过硫酸铵溶液用天平称取0.50g过硫酸铵（APS），溶于5ml去离子水中，分装Eppendof管冰冻保存。
6．四甲基乙二胺（TEMED）液7．分离胶覆盖液（（0.375M Tris-HCl，pH8.8，0.1% SDS）取分离胶缓冲液25ml、10% SDS溶液1.0ml，混匀，加去离子水定容至100ml，室温保存。
SDS-PAGE电泳SOP
SDS-PAGE电泳标准操作规程1.目的：制定本规程以规范还原性SDS-PAGE和非还原性SDS-PAGE电泳方法分离蛋白的操作过程。
2.范围：抗原或是抗体的定性鉴定、纯度鉴定和相对定量比较。
3.责任：质量分析人员熟悉并遵守该标准操作规程。
4.定义：N/A5.设备、材料和试剂：5.1设备、材料设备名生产商型号/货号设备编号备注电泳仪伯乐PowerpacHC TM HV JS026垂直电泳槽伯乐Miniprotean JS025干式恒温浴K30 JS045离心机eppendorf F-45-12-11 JS020单道移液器（10ul,100ul）Eppendorf Research plus JH07931,GH15898冰箱TCL BCD-211KD3 N/A摇床QILIM BEIER N/APH仪梅特勒5.2试剂试剂名称生产商货号批号APS国药集团化学试剂F20111213甲醇国药集团化学试剂20130407 冰醋酸国药集团化学试剂130420考马斯亮蓝R-250 国药集团化学试剂20130322 Tris-HCl 国药集团化学试剂201300422 甘油国药集团化学试剂F201000115 溴酚蓝国药集团化学试剂20120929 无水乙醇国药集团化学试剂甘氨酸国药集团化学试剂SDSDTTProtein Marker盐酸国药集团化学试剂2×PAGE 7.5%凝胶制备试剂盒Promoton PG111 分离胶缓分离胶溶液4%浓缩胶Promoton 浓缩胶预混液6.溶液配制6.1分离胶以1mm板，配两块为例：取7.5%的分离胶缓冲液和分离胶各5ml混匀，再向其加入10%的APS溶液100μl混匀。
6.2 浓缩胶以1mm板，配两块为例：取浓缩胶的预混液4ml，向其加入10%的APS溶液40μl混匀。
6.3 上样缓冲液（loading buffer）：6.4 10%过硫酸铵称取1g APS，加入10ml纯水搅拌溶解（现配现用）也可储存4~8℃冰箱中保存，保存期为1-2周。
SDS-PAGE电泳的标准操作规程
SDS-PAGE电泳的标准操作规程（编号：039）1、目的及适用范围SDS-PAGE电泳的分离原理，是根据大多数蛋白质都能与阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠（SDS）按重量比结合成复合物，使蛋白分子所带的负电荷远远超过天然蛋白分子的净电荷，消除了蛋白分子的电荷效应，使蛋白按分子大小分离，主要用于蛋白质分子量的测定、蛋白质混合组分的分离和蛋白质亚基组分的分析等方面。
2、主要仪器恒压或恒流电源、垂直板、制胶模具3、试剂及配制方法试剂配制方法或要求H2O 电阻率不低于18.2 MΩ.cm1.5 M Tris-HCl 1.5 moL/L Tris-HCl缓冲液，pH 8.830% Acrylamide 30% 丙烯酰胺溶液（避光保存）10% SDS 10% SDS溶液10% APS 10% 过硫酸铵溶液（临用前配制）TEMED TEMED溶液1 M Tris-HCl 1 moL/L Tris-HCl缓冲液，pH 6.815.1g、甘氨酸94 g、SDS 5 g，水稀释至1 L，pH 8.35×电极缓冲液 Tris2×Loading buffer 100 mM Tris-HCl（pH6.8）、4% SDS、0.2% 溴酚蓝、20% 甘油，用于非还原SDS-PAGE电泳，如用于还原SDS-PAGE电泳，则再加2% β-巯基乙醇5×Loading buffer 250 mM Tris-HCl（pH6.8）、10% SDS、0.5% 溴酚蓝、50% 甘油，用于非还原SDS-PAGE电泳，如用于还原SDS-PAGE电泳，则再加5% β-巯基乙醇考马斯亮蓝染色液 0.1%考马斯亮蓝R250、25%异丙醇、10%冰醋酸，水稀释至1 L考马斯亮蓝脱色液醋酸100 mL、乙醇50 mL、水850 mL4、操作步骤4.1 制胶：取合适的密封垫片和两块已清洁的干燥的玻璃板，组装成灌胶的模具，按下表制成分离胶，灌入模具内一定高度（一般离玻璃板上端3.5 cm），小心加水或异丙醇封顶（约0.5 cm高），室温下聚合（温度不同，聚合时间不同，20℃大约需30 min）。
SDS-PAGE标准操作规程
SDS—PAGE标准操作规程一、试剂（一)储存液(1)2M Tris-HCl （pH8.8),100ml称取24.2g Tris碱；加50ml蒸馏水;缓慢的加浓盐酸至pH8.8（约加4ml）；让溶液冷却至室温，pH将会升高;加蒸馏水至100ml.(2)1M Tris—HCl（pH6.8）,100ml称取12。
1g Tris碱；加50ml蒸馏水；缓慢的加浓盐酸至pH6。
8（约加8ml）；让溶液冷却至室温，pH将会升高；加蒸馏水至100ml.(3)10%(w/v)SDS，100ml。
室温保存称取10g的SDS；加蒸馏水至总量为100ml.(4)50%（v/v）甘油，100ml倒取50ml 100%的甘油；加入50ml蒸馏水。
(5)1%(w/v)溴酚蓝，10ml称取100mg溴酚蓝；加蒸馏水至10ml，搅拌直到完全溶解；过滤除去聚合的染料。
（二)工作液(1)30％（w/v)丙烯酰胺/0。
8%（w/v）双丙烯酰胺30g丙烯酰胺0.8g双丙烯酰胺注意：未聚合的丙烯酰胺是一种皮肤刺激物和神经毒素，操作时必须戴手套在通风柜操作，加蒸馏水至100ml,缓慢搅拌直至丙烯酰胺粉末完全溶解，过0.45μm滤膜。
可在4℃存放数月。
(2)4×Tris-Cl/SDS (pH8。
8 1。
5M Tris-Cl Containing 0.4%SDS)91g Tris base2g SDS加水300ml,用1N HCl调pH至8.8,再加水至500ml过0.45μm滤膜，4℃存放(3)4×Tris-Cl/SDS (pH6.8 0.5M Tris—Cl Containing 0.4%SDS)6。
05g Tris base0.4g SDS加水40ml，用1N HCl调pH至6。
8，再加水至100ml过0.45μm滤膜，4℃存放(4)10％过硫酸铵APS0.1g过硫酸铵1ml蒸馏水长期不用应-20℃干燥分装保存，临用前再加D。
电泳纯度(非还原型SDS-PAGE)测定标准操作规程
细胞因子电泳纯度（非还原型SDS-PAGE）测定标准操作规程依据：《中华人民共和国药典》2005年版第三部。
范围：适用于细胞因子纯度的检测。
目的：检测细胞因子蛋白质纯度。
原理：蛋白质具有不同的电荷和分子量，在经过阴离子去污剂SDS处理后，蛋白质分子上的电荷被中和，在聚丙稀酰胺凝胶电泳时，不同的蛋白质按照其分子量大小进行分布，电泳迁移率仅取决于蛋白质的分子量。
由于不连续的PH梯度作用，样品被压缩成一条狭窄区带，采用染色液染色，经扫描仪扫描胶片可及时观察结果。
内容：1 材料1．1样品：经二人复核批号无误后检测1．2试剂甲醇 CH3OH 分析纯无水乙醇 CH3CH2OH 分析纯浓盐酸 HCl 分析纯甘油 C3H8O3分析纯硝酸银 AgNO3分析纯重铬酸钾 K2Cr2O7分析纯正丁醇 C4H9OH 分析纯甲醛 HCHO 分析纯丙烯酰胺 CH2CHCONH2分析纯甲叉双丙烯酰胺（CH2CHCONH2）2CH2分析纯过硫酸铵（NH4）2S2O8分析纯TEMED（四甲基乙二胺）(CH3)2N(CH2)2N(CH3)2分析纯甘氨酸 C2H5NO2分析纯SDS（十二烷基硫酸钠）C12H25O4SNa 分析纯乙酸 CH3COOH 分析纯碳酸钠 Na2CO3分析纯溴酚蓝 C19H10Br4O5S 分析纯1．3注射用水：符合《中华人民共和国药典》2005年版要求。
1．4设备1．4．1扭力天平上海第二天平仪器厂1．4．2垂直板状电泳槽北京东方仪器厂1．4．3恒温恒流电泳仪法玛西亚公司1．4．4快速电泳槽BIORAD USA1．4．5全自动扫描仪CS-930 日本岛津1．4．6TS-1型摇床1．5器皿：500ml瓶、100ul移液器、1ml吸管、10ml吸管3000ml三角瓶、平皿、1000ml烧杯、80ml烧杯，以上器皿经本室洗刷组处理。
2 方法2．1准备工作2．1．1工作环境：控制区，确认场地清场合格，摘下“清场合格”标志牌，挂上“使用中”标志牌。
(完整word版)SDS-PAGE电泳具体步骤
SDS电泳具体步骤一、清洗玻璃板1、洗洁精轻轻擦洗2、自来水冲3、蒸馏水冲4、筐里晾干5、梳子用水洗二、配胶材料：玻璃板、梳子、架子、枪（100-1000、20-200、2-20）、DDW、30%Arc-Bis、Tris(pH8.8)、Tris(pH6.8)、10%SDS、10%AP、TEMED。
1、玻璃板对齐后放入夹中卡紧2、配分离胶3、加入玻璃板中4、加入乙醇1ml等待０.5小时5、用注射器吸出乙醇，6、用水冲洗分离胶3次，第4次最后(加入AP、TEMED前)再用注射器吸出7、配浓缩胶8、将玻璃板加满9、放入小梳子等待０.5小时三、上样材料：蛋白、marker、针筒、电泳槽、电泳液、枪（2-20ul）1、把玻璃板取下，放入小架子，固定于电泳槽（大玻璃板朝外），拔梳子，（若只有一块胶，对面用塑料板）2、将小架子加满电泳液，标记位置，用针筒抽电泳液通膜3、根据要求上样蛋白（如海马），最外侧加马克，用2-20ul枪四、电泳1、放入电泳盒中，盒中加少量电泳液，放上盖子2、开电泳机电压先60V，马克到达分离胶后调制110V，等待约2小时五、转膜材料：6张滤纸、1张PVDF膜（根据分离胶剪，无水甲醇中浸泡1min~2min）、转膜夹、转膜缓冲液1、取胶，将浓缩胶轻轻刮去，去掉多余的分离胶，2、将裁好的胶、浸过甲醇的PVDF膜和滤纸放入转膜缓冲液中，10min左右，3、黑色板在下面，纸—胶—膜—纸（注意赶走气泡）4、转膜夹放入电泳槽，放满转膜缓冲液，外面放冰块，加满水等待120分钟，电压100V六、免疫反应材料：丽春红、TBST、5%牛奶、一抗、二抗1、取出一小盒，加入少量丽春红，（用完回收）2、把膜取出，扔掉胶，依次放丽春红——TBST，（摇床上)3、膜剪成小条带，放入方格盒，放入TBST（摇床），几分钟后放入5%牛奶中封闭抗原（摇床）等待1小时4、配一抗：配5%的牛奶（5g牛奶，加TBST至100ml），将抗体放入牛奶中。
SDS-PAGE电泳标准操作流程
SDS-PAGE电泳标准操作规程1、目的建立SDS-PAGE电泳的标准操作规程,确保电泳操作有序进行，保证电泳的安全性、有效性。
2.范围与职责适用SDS-PAGE电泳操作岗位。
配制岗位操作人员对本标淮实施负责，QA检查员、生产主管负责监督。
3.程序：3.1. 制胶3.1.1组装胶架将洁净、无水的玻片对齐，形成空腔，插入塑料框的凹槽中，注意箭头向上，并确保下端平齐。
放于制胶架上夹紧，下端紧贴密封条。
3.1.2 分离胶的配置3.1.2.1 10%分离胶配方如下表：3.1.2.2 灌胶混匀后用移液枪将凝胶溶液沿玻棒小心注入到长、短玻璃板间的狭缝内(胶高度距样品模板梳齿下缘约1cm)。
3.1．2.3液封在凝胶表面沿短玻板边缘轻轻加一层水以隔绝空气，使胶面平整。
静置约30min观察胶面变化，当看到水与凝固的胶面有折射率不同的界限时，表明胶已完全凝固，倒掉上层水，并用滤纸吸干残留的水液。
3.1.3浓缩胶的配置3.1.3.1 5%浓缩胶配方下表：3.1.3.2插入制胶梳混匀后用移液枪将凝胶溶液注入到长、短玻璃板间的狭缝内(分离胶上方)，轻轻加入样品模板梳，小心避免气泡的出现。
约30分钟，聚合完全。
3.2. 电泳3.2.1 安装电泳槽将制备好的凝胶板取下，小心拔下梳子。
两块10%的凝胶板分别插到U形橡胶框的两边凹形槽中，可往上提起使凝胶板紧贴橡胶。
将装好玻璃板的胶模框平放在仰放的贮槽框上，其下缘与贮槽框下缘对齐，放入电泳槽内。
倒入1X tris-gly电泳缓冲液。
3.2.2 样品处理对于蛋白样品直接取80µl的样品，依次加上20µl 5x buffer (加了B-巯基乙醇)，混匀。
对于菌体或组织等固体样品，取少量样品加100ul 2x buffer (加了B-巯基乙醇)煮沸10分钟。
3.2.3 加样用移液枪取处理过的样品溶液10μl，小心地依次加入到各凝胶凹形样品槽内，marker 加入到其中一个槽内，为区别两块板，marker可加在不同的孔槽中。
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SDS-PAGE标准操作规程
一、试剂
（一）储存液
(1)2M Tris-HCl (pH8.8)，100ml
称取24.2g Tris碱；
加50ml蒸馏水；
缓慢的加浓盐酸至pH8.8(约加4ml)；让溶液冷却至室温，pH将会升高；
加蒸馏水至100ml。
(2)1M Tris-HCl(pH6.8)，100ml
称取12.1g Tris碱；
加50ml蒸馏水；
缓慢的加浓盐酸至pH6.8(约加8ml)；让溶液冷却至室温，pH将会升高；
加蒸馏水至100ml。
(3)10%(w/v)SDS，100ml。
室温保存
称取10g的SDS；
加蒸馏水至总量为100ml。
(4)50%(v/v)甘油，100ml
倒取50ml 100%的甘油；
加入50ml蒸馏水。
(5)1%(w/v)溴酚蓝，10ml
称取100mg溴酚蓝；
加蒸馏水至10ml，搅拌直到完全溶解；
过滤除去聚合的染料。
（二）工作液
(1)30%(w/v)丙烯酰胺/0.8%(w/v)双丙烯酰胺
30g丙烯酰胺
0.8g双丙烯酰胺
注意：未聚合的丙烯酰胺是一种皮肤刺激物和神经毒素，操作时必须戴手套在通风柜操作，加蒸馏水至100ml，缓慢搅拌直至丙烯酰胺粉末完全溶解，过0.45μm滤膜。
可在4℃存放数月。
(2)4×Tris-Cl/SDS (pH8.8 1.5M Tris-Cl Containing 0.4%SDS)
91g Tris base
2g SDS
加水300ml，用1N HCl调pH至8.8，再加水至500ml过0.45μm滤膜，4℃存放
(3)4×Tris-Cl/SDS (pH6.8 0.5M Tris-Cl Containing 0.4%SDS)
6.05g Tris base
0.4g SDS
加水40ml，用1N HCl调pH至6.8，再加水至100ml过0.45μm滤膜，4℃存放
(4)10%过硫酸铵APS
0.1g过硫酸铵
1ml蒸馏水
长期不用应-20℃干燥分装保存，临用前再加D.W。
(5)5×电泳缓冲液
15.1g Tris碱
72.0g甘氨酸
5.0g SDS
加蒸馏水至1L，pH应该在8.3左右。
(6)5×样品缓冲液，10ml
0.6ml 1mol/L的Tris-HCl(pH6.8) 60mmol/L
5ml 50%的甘油25%
2ml 10%的SDS 2%
0.5ml 2-巯基乙醇14.4mmol/L
1ml 1%溴酚蓝0.1%
0.9ml的蒸馏水
可在4℃保存数周，或在-20℃保存数月。
(7)考马斯亮兰染色液
1.0g R-250
450ml甲醇
450ml D.W
100ml冰醋酸
(8)脱色液
100ml甲醇
100ml冰醋酸
800ml D.W
(9)
二、步骤
1.准备先将电泳玻璃平板洗干净，用95%乙醇擦净，晾干，固定于平板固定架上。
（注
意：①高低板方向正确，底面要平，必要时可用凡士林封底；②玻璃平板固定高低时四个螺丝应依次适当旋紧，再装于固定器架）
2.制胶
按如下顺序配制和添加试剂
注意：配胶时勿搅起气泡，先配好其它成分，在灌胶前用枪头分别吸好适量TEMED和AP后，再先加TEMED摇匀，后加AP，摇匀后灌胶。
3.灌胶
①插入梳子使梳子凹孔略低于低的平板，略低于梳子底沿处划好高度线，拿去梳子，
Seperating gel从一固定位置（中部）快速倒入平板内至划线处，再吸取约1ml D.W
缓缓注在Seperating gel面上（起压平胶面作用），静置约50mins待胶凝结；
②倒出D.W，亦可再用滤纸小心地将残余水分吸干，插入梳子，沿一侧缓缓注入适
量的Stacking gel（勿产生气泡），静置约20mins（其间可加入少量SDS电泳buffer
防止蒸干）；
③移去梳子出现几个样品槽，用电泳buffer冲洗样品槽2遍。
4.平板等装入电泳槽，加入电泳buffer淹没低板
5.加样将样品用适量的样品buffer稀释后煮沸三分钟，再小心地将样品加入电泳凝胶
槽中，加样时不能用气泡。
上样量要根据凝胶槽大小而定，过多会溢出到相邻孔而影响结果。
6.走胶（约45mins-1hr）先低电压70V 20mA，待样品进入分离胶后再调高电压约140V
40mA直至指示色带到达平板底端，停止电泳关闭电源。
7.染色脱色倒去电泳buffer，自来水冲洗，取下凝胶，用考马斯亮兰染色，染色5-10min，
脱色1hr左右。
三、注意事项
1. 检查电极不要插反，开始电泳后要观察电极丝附近是否有气泡冒出，从而确认电流正
常。
2. 过硫酸铵最好现配现用，若要留存一星期，必须冻于-20℃
3. TEMED和丙烯酰胺是神经毒，操作时要小心。