各种细菌的培养
培养观察细菌的简易方法
培养观察细菌的简易方法一、牙垢中的细菌用消毒牙签，在自己牙齿缝里挑下一些碎屑，放在洁净载玻片上的水滴中，调匀，制成涂片。
待涂片干燥后，在酒精灯火焰上徐徐来回掠过3～4次，细菌外面的一些胶质粘着在载玻片上，使细菌固定、稍冷，加一滴亚甲基蓝溶液，染色1～2分钟后，用清水冲洗，然后盖上盖玻片。
置显微镜下，先用低倍镜观察，再换高倍镜，可观察到杆菌、弧菌、球菌等。
若使用油镜观察，效果更清楚明显。
二、粪池里的细菌在粪池用吸管吸取一滴沤过的粪混合液上层液体，滴在洁净的载玻片上，盖上盖玻片。
置显微镜下观察，先用低倍镜，后用高倍镜。
可见到活的螺旋菌及杆菌。
注意在观察时光线应暗些，效果好。
三、酸莱、酸奶中的细菌取酸菜液上部的白色薄膜或酸奶澄清液，制成临时装片，放在高倍镜下观察，可看到乳酸杆菌。
四、根瘤菌的观察取豆科植物[大豆、蚕豆、花生]的根瘤用刀片切开，用针挑取一小块内容物，放在载玻片上的水滴中，制成涂片，晾干后，用酒精灯火焰烘烤固定，然后滴一滴亚甲基蓝溶液，染色2～3分钟，清水冲洗，盖上盖玻片，吸干后，用500倍高倍镜观察，可见到短杆状根瘤菌。
五、枯草杆菌的培养和观察把25克新鲜干草切成小段，放在盛200毫升清水烧杯中，加热煮沸15分钟，待溶液呈暗褐色时，倒入烧瓶，放在黑暗、20～30℃的温暖环境中。
2～3天后，液体混浊，表面形成薄膜。
用吸管吸取浮在上层的液体，制成临时涂片，放在高倍镜下观察，可看到连成线的枯草杆菌。
若将培养液放在低温处1～2天，再取出制成临时涂片，用600倍或更高倍数的显微镜观察还能看到枯草杆菌的芽孢。
微生物学实验细菌细胞的生化反应实验一、实验目的了解并掌握细菌鉴定中常用生理生化反应的原理和方法。
二、实验原理各种细菌由于具有不同的酶系统，致使它们能利用不同的底物，或虽然可以利用相同的底物，却产生不同的代谢产物，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别细菌。
糖发酵是最常用的生化反应，存在于大多数细菌中。
实验6细菌的培养法
氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等
细菌在固体培养基中的生长现象
菌落： ★定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形
成单一肉眼可见的细菌集团。 ★菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透
明度、湿润度、黏度、溶血性 ★菌落类型：光滑型（S）、粗糙型（R）、黏液型
斜面接种法
培养基：斜面固 体培养基；
接种方法：斜面 培养基接种法；
用途：扩增细菌、 保存菌种；或用 于观察其某些生 化特性。
琼脂斜面培养基接种法
Hale Waihona Puke 刺接种半固体培养基：接种方法：穿刺接 种法。用接种针垂 直地穿入培养基中 心至底部
然后沿着原接种线 将针拔出
用途：检验细菌的 运动性或观察细菌 的生化反应。
（M） 菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。
菌落
菌落与菌苔
细菌在液体培养基中的生长现象
混浊：多见于兼性厌氧菌 沉淀：多见于厌氧菌 菌膜：多见于专性需氧菌
液体培养基的细菌生长
细菌在半固体培养基中的生长现象
有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向 外扩散生长，穿刺线边缘模糊。
无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线 边缘清晰。
微生物的分离—平板划线法
1.分区划线法： 2.连续划线法：
微生物的分离—平板划线法
分区划线法
第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环
连续划线法
（二）细菌的接种法
当细菌分离成纯种后，常需要接种到相 关的培养基中，以测试其各种生物学性 状。一般可用斜面、半固体、液体培养 基来检验细菌的培养特性，相应培养基 的接种方法有三种。
液体培养基接种法
培养细菌真菌的方法
培养细菌真菌的方法
培养细菌和真菌是在实验室中进行的，以下是常用的方法：
1. 导入培养基：将所需的细菌或真菌菌株转移到含有适当培养基的培养皿中。
培养基通常包含适当的碳源、氮源、矿物质和生长因子，以促进微生物的生长。
2. 纯化培养：为了获得单一的细菌或真菌菌株，可以将其经过多次传代分离纯化。
这可以通过涂布、稀释等方法来实现。
3. 温度控制：细菌和真菌对温度的要求各不相同，通常会在适宜的温度下进行培养。
常见的温度范围为20-37摄氏度，但也有一些需要较低或较高温度的菌株。
4. 培养条件：不同菌株对于pH值、氧气和二氧化碳的要求也有所不同。
为了促进生长，可以调整培养条件以满足其需求。
5. 培养器具：常用的培养器具包括培养皿、试管、烧杯等。
这些器具应经过灭菌处理，以防止外部微生物的污染。
6. 培养时间：不同的细菌和真菌菌株具有不同的生长速度和生长周期。
培养时间的长短也会因此而有所不同。
需要注意的是，在进行细菌和真菌培养时，必须遵循实验室的安全操作规程，以防止对人员和环境造成污染和危害。
培养后的微生物菌株也应按照相关规定进行安全处理，以防止对环境和生物多样性造成影响。
细菌的培养法
实验一细菌的培养法一般细菌均可用人工方法进行培养，使其生长繁殖，以便进一步观察和研究它们的各种生物学特性。
为了获得良好的细菌培养物，在分离培养细菌时，除采用适宜的培养基并考虑到其他的培养条件（如温度、湿度、酸碱度、气体等）之外，掌握各种分离培养和接种的基本技术，也是重要环节。
在土壤、水、空气、以及人和动、植物体中，不同种类的细菌混杂地生活在一起。
若要研究其中某种细菌，就必须先将各种细菌进行分离，以得到只含有这一种细菌的纯培养。
分离培养细菌的方法有多种，平板划线法即是其中之一。
该法主要是借划线而将混杂的细菌在琼脂平板表面分散开，使单个细菌能固定在某一点，生长繁殖后形成单个的细菌集团（即菌落）以达到分离纯种的目的。
当细菌分离成纯种后，常需要接种到有关的培养基中，以测试其各种生物学性状。
一般可用斜面、液体和半固体培养基来检验细菌的培养特征，因此接种方法可相应的分为三种。
斜面培养基接种法常用于细菌的大量繁殖，保存菌种，或观察其某些生化特性。
琼脂斜面、尿素培养基、双糖铁培养基、柠檬酸盐培养基等具有斜面外形的固体培养基均可用此法接种。
液体培养基接种法可用于观察细菌不同的生长状况，有的呈均匀混浊，有的呈沉淀生长，还有的在液体表面形成菌膜；另外还可以供测定细菌生化特性之用。
凡是肉汤、葡萄糖蛋白胨水以及各种单糖发酵管等液体培养基均用此法接种。
穿刺接种法常用于半固体琼脂培养基、醋酸铅培养基、双糖铁培养基等的接种，前者用于测定细菌的动力，后二者则用于观察细菌的生化反应。
目的要求1．学习和掌握细菌分离和培养的各种基本技术。
2．进一步熟悉和掌握微生物的无菌操作技术。
材料1．菌种和培养基平板划线接种法斜面培养基接种法液体培养基接种法穿刺接种法菌种葡萄球菌和大肠杆菌的混合菌液大肠杆菌培养物大肠杆菌培养物枯草杆菌培养物变形杆菌培养物痢疾杆菌培养物培养基* 普通琼脂平板琼脂斜面培养基普通肉汤培养基半固体琼脂培养基*各培养基的组成及配置方法参见书后附录。
细菌的培养方法
细菌的培养方法根据培养细菌的目的和培养物的特性培养方法分为一般培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法三种。
1. 一般培养法将已接种过的培养基,置37℃培养箱内18－24小时,需氧菌和兼性厌氧菌即可于培养基上生长。
少数生长缓慢的细菌，需培养3－7天直至一个月才能生长。
为使培养箱内保持一定湿度，可在其内放置一杯水。
培养时间较长的培养基，接种后应将试管口塞棉塞后用石腊凡士林封固，以防培养基干裂。
2. 二氧化碳培养法某些细菌，如牛流产布氏杆菌和胎儿弧菌等需要在含有10％二氧化碳的空气中才能生长，尤其是初代分离培养要求更为严格。
将已接种的培养基置于二氧化碳环境中进行培养的方法即二氧化碳培养法，常用方法有以下几种：(1) 二氧化碳培养箱可将已接种的培养基直接放入箱内孵育，即可获得二氧化碳环境。
(2) 烛缸法将已接种的培养基，置于容量为2 000ml的磨口标本缸或干燥器内。
缸盖或缸口处均需涂以凡士林，然后点燃蜡烛直立置入缸中，密封缸盖。
待燃自行熄灭时，容器内约含5－10％的CO2 容器置37℃培养。
(3) 重碳酸钠－盐酸法每升容积的容器内，重碳酸钠与盐酸按0.4g与3.5ml的比例，分别将两种药各置一器皿内（如平皿内），连同器皿置于标本缸或干燥器内，盖严后使容器倾斜，两种药品接触后即可产生二氧化碳。
3. 厌氧培养法目前常用的厌氧培养方法有厌氧罐法、气袋法及厌氧箱三种。
(1) 厌氧罐法是目前应用较广泛的一种方法，共分为以下几种。
抽气换气法：该法适用于一般实验室，其特点是较经济并可迅速建立厌氧环境。
标本接种后，将平板放入厌氧罐，拧紧盖子，用真空泵抽出罐中空气，使压力真空表至-79.98KPa，停止抽气，充入高纯氮气使压力真空表指针回0位,连续反复3次,最后在罐内-79.98KPa的情况下,充入70%的N2 、20%H2 、10%CO2 （有人改用20%CO2 及80%H2 ,亦可获得好结果）。
罐中需放入冷催化剂钯粒，可催化罐中残余的O2 和H2 化合成水。
常用的细菌培养方法
常用的细菌培养方法
细菌培养呀，这可真是个神奇又有趣的事儿呢！你知道吗，就好像我们人类需要一个舒适的家一样，细菌也需要特定的环境来生长和繁衍。
培养细菌，首先得有合适的培养基呀。
这培养基就像是细菌的美食大餐，要营养丰富，能满足它们的需求。
不同的细菌就像不同口味的食客，有的喜欢这种培养基，有的喜欢那种。
就好比有些人爱吃甜食，有些人爱吃辣的一样。
然后呢，还要注意温度和湿度。
这可太重要啦！温度不合适，细菌可能就会不高兴，不愿意好好生长。
湿度也是一样，太干或太湿都不行。
这就好像我们人一样，在舒适的环境里才会心情好，工作效率高嘛。
还有啊，无菌操作也是关键。
就像我们做饭要保证干净卫生一样，培养细菌也要避免其他杂菌的混入。
不然的话，就像一锅好汤被一粒老鼠屎给坏了，那可就糟糕啦！
培养细菌的过程中，我们要像照顾小宝宝一样细心和耐心。
时刻关注它们的状态，看看有没有长好呀，有没有出现什么问题呀。
这可不是一件轻松的事儿，但却是非常有意义的。
想想看，如果我们能成功培养出有用的细菌，那能给我们的生活带来多大的帮助呀！比如在医学上，可以帮助研究疾病的发生和治疗；在工业上，可以用于生产各种有用的物质。
这就像是打开了一扇通往新世界的大门，充满了无限的可能！
总之，细菌培养是一门既神秘又实用的学问。
它需要我们的智慧和努力，也能给我们带来惊喜和收获。
让我们一起探索这个奇妙的细菌世界吧！。
细菌培养的基本技术
例1、根据下面“枯草杆菌的培养和观察”的实验步骤， 回答问题 1、实验前一周，取少许新鲜的干稻草切成碎段，放入 锥形瓶中，加水（水 ：草=10 ：1）并煮沸30分钟后， 即用棉塞塞住瓶口，放在不见光的温暖处，或恒温箱 中。3---5天后，观察到液体混浊，表面出现一层白色 薄膜。 2、用玻璃棒挑少量薄膜，涂在载玻片上，盖上盖玻片， 在高倍镜下可以观察到许多不活动的枯草杆菌群体。
5
方法步骤
一、培养基的配制
1．称量 用天平称取0.5g牛肉膏、1g蛋白胨、
0.5gNaCl、2g琼脂。将称好的牛肉膏、蛋白
胨和NaCl放入烧杯。
2．溶化 向上述烧杯中加入蒸馏水100 mL，
用玻璃棒搅匀后，放到酒精灯上加热。当牛
肉膏和蛋白胨溶化后，加入琼脂，并继续用
微火加热。在琼脂溶化的过程中，要控制火
26
6、微生物接种时各项操作必须在___无__菌____条件 下进行.因此必须在___无__菌__箱____中操作.接种环境 在___酒__精__灯____上用灼烧去灭菌,双手用___7_5___% 的酒精消毒. 7、接种时将灭菌的接种环挑取少许___菌__体___,迅 速插入培养基试管里,在斜面上由_____里____向 ___外_____连连续划几道___蛇__形__细___线,然后将试管 口在火焰上灼烧,塞上____棉__塞_______.
正确的是（
）D
A、二者用的都是脱脂棉，可以防止水分吸附
B、二者的都不是脱脂棉，有利于水分的吸附
C、②所用的棉塞应该比①更紧，以防杂菌污染
D、①所用的棉塞应该比②更紧，以防滤一 捆，并且在管口外面包上一层牛皮 纸，然后，用线绳扎好。在每捆试 管外挂上标签，注明培养基名称、 配制日期和制作者姓名
培养细菌和真菌的一般方法
培养细菌和真菌的一般方法
培养细菌和真菌是微生物学研究的基础，也是生物技术发展的重要基础。
培养细菌和真菌
的一般方法包括：
1、培养基的选择：培养基是培养细菌和真菌的基础，选择合适的培养基是培养细菌和真
菌的关键。
一般情况下，细菌和真菌的培养基都是由碳源、氮源、矿物质、维生素等组成
的复合培养基。
2、培养条件的选择：培养条件是指温度、湿度、光照等环境条件，不同的细菌和真菌对
培养条件的要求不同，因此，在培养细菌和真菌时，要根据不同的细菌和真菌的要求，选择合适的培养条件。
3、培养方法的选择：培养方法是指培养细菌和真菌的方法，一般有悬浮培养、滴液培养、液体培养、固体培养等。
根据不同的细菌和真菌，选择合适的培养方法。
4、培养时间的控制：培养时间是指培养细菌和真菌的时间，一般情况下，细菌和真菌的
培养时间都是24-48小时，但也可以根据不同的细菌和真菌的要求，调整培养时间。
以上是培养细菌和真菌的一般方法，在培养细菌和真菌时，要根据不同的细菌和真菌的要求，选择合适的培养基、培养条件、培养方法和培养时间，以获得较好的培养效果。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
海水中的微生物分离
（一）厌气细菌的分离和无氧装置
在水层及沉积物中都有厌气细菌生长着。
要将它们分离培养需要创造缺氧环境，其方法很多，通常可分为物理、化学和生物三类方法。
物理方法是将接种物置于抽气（或加充非氧气）密闭箱中，使其在缺氧下培养长出。
化学吸氧法是用化学药品把培养器中的氧气吸去．造成缺氧的培养环境。
生物吸氧法是利用燕麦萌发时的旺盛呼吸作用，吸收培养环境中的氧气，形成缺氧的环境条件．
1.焦性没食子酸吸氧法
利用焦性没食子酸在碱性溶液中吸收游离氧气，造成决氧的培养环境．此法较适用于小型的科学实验。
每克没食子酸（淡绿色）在过量碱性溶液中能吸收100毫升空气中的氧．生成深棕色的焦性没食橙。
试验步骤
①把样品稀释液接种于加1%葡萄糖、0.1%硫化甘醇酸钠和0.0002%美蓝的2216E 培养基中，这种培养基灭菌后应避免与大气接触。
如果所接种的是淡水样品，可用葡萄糖肉膏蛋白胨培养基替代2216E 培养基。
②吸20%氢氧化钠溶液2.5 毫升于小玻璃皿或试剂瓶的塑料盖中，将此皿放于玻璃板或搪瓷盘上。
③加焦性没食子酸0.5 克。
④立即将预先接种好的培养皿倒扣于小玻璃皿上。
⑤用溶化的石腊将培养皿与玻璃板之间的缝隙封固，置于适当温度下培养至长出明显的菌落后进行观察。
注意事项：
①可将吸氧剂改用等量的焦性没食子酸与无水碳酸钠混合物（l -2 克），不必加水，这样有利于吸水，便于形成单颗菌落。
②必须选用适当高度的培养皿和盛吸氧剂小皿（或试剂瓶盖）以防吸氧剂同培养基接触．
2 ．圆形玻璃板隔绝空气培养法
当平板培养基接种后．立即用比平皿稍小的无菌圆形玻璃板盖上，以避免培养基同空气接触。
而后送入培养箱培养。
在长出菌落后．除玻璃圆板周围外 , 美蓝的颜色会很快恢复，即处于还原状态．没有同氧起氧化作用，这说明培养基上的细菌处于缺氧状态，长出的菌落为厌氧细菌菌落。
3 ．机械抽气法
把已接种的平板培养物立即放入干燥器中，用真空泵抽出空气，而后通入CO2以维持干燥器内外压力平衡，以利于细菌生长。
在一定温度下培养至长出明显菌落，观察其形态。
4 ，生物吸氧法
将培养有发芽旺盛的燕麦小平皿放在玻璃板上，把已接种的大培养皿倒盖在上面，以石蜡密封大平皿与玻璃板间的缝隙，置一定温度下培养至长出明显的菌落 . 将其中的小玻璃皿换成培养有发芽旺盛燕麦芽的小平皿）。
5 ．注意事项
厌氧菌的培养必须符合以下三个条件：
（1）当氧气与培养基接触期间和在培养基制备中不能产生有毒的氧化作用产物。
（2）保温和培养期间．需保持培养基排除空气的条件．
（3）在培养装置中可维持低氧化还原作用。
并非所有方法都能符合这些条件，但必须尽量符合。
采用对实验有利和方便的方法。
（二）芽孢杆菌的分离
水中有芽孢杆菌属（Bacillus），如玻璃样芽孢杆菌、杆状芽孢杆菌、华丽芽孢杆菌等好气菌属。
也有嫌气性的梭状芽孢杆菌属。
淡水中常有蜡质芽孢杆菌、蕈状芽孢杆菌等．
1 ．培养基成分及其制备
（1）芽孢杆菌培养基（I）:
K2HPO4 0.5 克
MgSO4 ·7H2O 0.5 克
柠檬酸钢铁铵0.5克
柠檬酸2 克
甘油20 克
L-谷氨酸4 克
陈海水（或自来水）1000 毫升
pH 7.4
( 2 ）巨大芽孢杆菌培养基（II）:
酵母膏2.5 克
胰胨1 克
陈海水或蒸馏水1000毫升
琼脂18 克
将各成分放于水中加热溶解，调pH 为7.2 分装，121℃蒸汽下灭菌20 分钟，制成平板和斜面。
( 3 ）刺激芽孢生长培养基：
蛋白胨10 克
酵母浸出膏3 克
淀粉3 克
MgSO4 0.1 克
KH2PO4 1.5 克
Na2HPO4 50 克
水1000 毫升
制法：将上述的成分混和，加热溶解。
调pH 为7.8 ，用滤纸过滤。
分装于15 × 155 毫米的试管，每管约10 毫升．于121 ℃下的蒸汽压下灭菌15分钟，存于冰箱备用。
用途：用于刺激梭状菌迅速产生芽孢，即使非常不易产生芽孢的魏氏杆菌，在此培养中也能迅速长出芽孢。
2 ．分离步骤
（1）将样品制成悬浮液．置于80 ℃水浴锅中加热10-20 分钟，杀死不形成芽孢的其他种菌体（包括所要分离的菌体也被杀死，但芽孢不死，可萌发）。
（2）取出静置10 分钟。
（3）按划线法或稀释法进行分离纯化。
（三）海洋发光细菌的分离培养
发光细菌所发的光是冷光，在转变化学能为光能中。
效率接近百分百．所以发光细菌是研究光源材料之一，细菌灯可作为危险品仓库的照明，在细菌发光时绝对需要氧气，故可应用于低浓度氧的测定，发光细菌也可用于毒物和抗菌素的测定，将来还可能用于宇宙航行时对地球外的生命物质的探测。
海洋发光细菌既可从鱼的体表、内脏，发光器官分离而得，也可从海水或河口水及其沉积物中分离得到。
发光细菌在新鲜的海洋鱼类体表多于腐败的鱼体。
鱼体一旦腐败，腐生菌繁殖很快．并且取代发光细菌。
故分离发光细菌时要用新鲜鱼或其他新鲜海洋动物。
典型的发光细菌是筒状细菌，大小约1.1×42.2微米，也有球状和弧状，又分单极鞭毛和周生鞭毛，多数为革兰氏阴性菌．我国已分离的发光细菌目前有四种。
1 ．增殖培养
（1）取一条新鲜鱼，放在无菌的大培养皿内，向鱼体上倒入无菌的3 %食盐水，使液面高度在鱼体腹线处．不可将鱼体完全淹没。
将鱼的内脏拉出用无菌剪刀剪开胃肠．取出内含物放于无菌培养皿中，同样加入无菌的3%食盐水．不淹没鱼内脏，浸入二分之一即可。
（2）置于15 ℃温箱中培养l-2 天后，在微暗处观察。
鱼体表面微弱的亮点便是发光细菌，则应及时挑出分离，否则腐生菌滋长，而发光菌就会消失。
2 ．第一次分离
（1）鸡蛋培养基的制备，将一个鸡蛋的蛋白及蛋黄全部倒入烧杯中，加入3%食盐水100 毫升，搅匀，分装于培养皿中；每个培养皿约倒15-20毫升，在121 ℃的蒸汽下灭菌30 分钟。
（2）在黑暗处用接种环分别从鱼体表面和鱼内脏内含物上的亮点处挑取少许亮度较大的发光细菌菌落。
在鸡蛋培养基上划线分离，挑取亮度较弱的菌落分别在另两个鸡蛋培养基上划线。
（3）在15 ℃温箱中培养1-2 天，则可在培养基表面看到发光细菌的菌落。
此时发光细菌菌落中发光细菌己占优势，但还混有许多腐生纽菌。
若不及时分离纯化．由于腐生细菌的大量繁殖会抑制发光细菌生长。
最后，将取而代之。
3.第二次分离
（1）蛋白胨牛肉膏的制备；
蛋白胨1 克
牛肉膏l 克
K2HPO4 0.1 克
MgSO4·7H2O 5 克
NaCl 3 克
琼脂1.5-2.0克
将以上物质加蒸馏水至100 毫升，混匀，加热溶解，调pH7.4 ，于121 ℃蒸汽压下灭菌30 分钟。
冷至45 ℃后分装培养皿上，制成平板培养基．（2）在黑暗处分别挑选培养基上发光细菌菌落少许，在平板培养基上划线分离。
（3）在15℃温箱中培养1-2 天，则可看到单个的发光细菌菌落。
（4）挑取各种菌落少许分别涂片，各用革兰氏染色法和鞭毛染色法染色，观察其菌落形态。
（5）若形态一致可视为纯种．选亮度较强的．不同形态的菌落移种于斜面培养基上．在15℃下培养1-2 天保存，供其他研究．若不是纯种应继续作划线分离培养，直到纯化。
（6）将纯的发光细菌接种到蛋白胨液体培养基中，在15℃温室内振荡培养l-2 天，便可得到大量发光细菌的悬液。
（若在300 毫升锥形瓶内有100 毫升发光细菌的悬液，发光细菌的亮度在暗处足以照清一般报纸上的字迹．
4 ．其他分离法培养基
（1）甘油碳酸钙培养基：甘油1.0%、牛肉膏1.0%、蛋白胨2.0%、NaCl 3.0%，CaCO30.5%，pH6.9 .
（2）酵母膏蛋白胨培养基．酵母膏0.3%，蛋白胨0.5%，NaCl3.0%，pH6 .9 （3）蛋白胨天冬酰胺培养基：蛋白胨1.0%、天冬酰胺0.5%，NaCl 3.0%、K2HPO4 0.1%，MgSO4·7H2O 0.05%，pH6.9 .
（4）蛋白胨酵母膏甘油培养基：
蛋白胨5 克
酵母膏1 克
甘油3 毫升
琼脂15 克
人工海水1000毫升
曾用厦门港湾水1 毫升注入无菌培养皿，倒入冷至45 ℃的此种蛋白胨酵母膏甘油培养基．摇匀后，置于室温（24 ℃左右）下培养1 天以上可分离到发光细菌，重复性良好。
另将此培养基制成平板，用鲜鱼的内脏或腮直接在上面划线也都能分离到发光细菌。
注：人工海水：NaCl 20.0克、MgCl2· 6H2O 7.2 克、MgSO4·7H2O 3.6 克CaCl2·H2O 0.7克，蒸馏水1000 毫升．。