细菌的培养方法
培养细菌真菌的方法
培养细菌真菌的方法
培养细菌和真菌是在实验室中进行的，以下是常用的方法：
1. 导入培养基：将所需的细菌或真菌菌株转移到含有适当培养基的培养皿中。
培养基通常包含适当的碳源、氮源、矿物质和生长因子，以促进微生物的生长。
2. 纯化培养：为了获得单一的细菌或真菌菌株，可以将其经过多次传代分离纯化。
这可以通过涂布、稀释等方法来实现。
3. 温度控制：细菌和真菌对温度的要求各不相同，通常会在适宜的温度下进行培养。
常见的温度范围为20-37摄氏度，但也有一些需要较低或较高温度的菌株。
4. 培养条件：不同菌株对于pH值、氧气和二氧化碳的要求也有所不同。
为了促进生长，可以调整培养条件以满足其需求。
5. 培养器具：常用的培养器具包括培养皿、试管、烧杯等。
这些器具应经过灭菌处理，以防止外部微生物的污染。
6. 培养时间：不同的细菌和真菌菌株具有不同的生长速度和生长周期。
培养时间的长短也会因此而有所不同。
需要注意的是，在进行细菌和真菌培养时，必须遵循实验室的安全操作规程，以防止对人员和环境造成污染和危害。
培养后的微生物菌株也应按照相关规定进行安全处理，以防止对环境和生物多样性造成影响。
细菌培养基本方法及其影响因素
概述细菌培养是一种用人工方法使细菌生长繁殖的技术.细菌在自然界中分布极广,数量大,种类多,它可以造福人类,也可以成为致病的原因.大多数细菌可用人工方法培养,即将其接种于培养基上,使其生长繁殖.培养出来的细菌用于研究、鉴定和应用.细菌培养是一个复杂的技术. 培养方法以光合细菌培养方法为例.光合细菌培养的方法,按次序分为容器、工具的消毒,培养基的制备,接种和培养管理四个步骤.（一）培养基的制备1．培养用水如果培养的光合细菌是淡水种,菌种培养可用蒸馏水,生产培养可用消毒的自来水（或井水）配制.如果培养的光合细菌是海水种,则用天然海水配制培养基,注意在海水中加入磷元素时,不能用磷酸氢二钾,应用磷酸二氢钾,不然会产生大量沉淀.2．灭菌和消毒菌种培养用的培养基应连同培养容器用高压蒸气灭菌锅灭菌.小型生产性培养可把配好的培养液用普通铝锅或大型三角烧瓶煮沸消毒.大型生产性培养则把经沉淀砂滤后的水用漂白粉（或漂白液）消毒后使用.3．培养基配制根据所培养种类的营养需要选择合适的培养基配方.按培养基配方把所需物质称量,逐一溶解,混合,配成培养基.也可先配成母液,使用时按比例加入一定的量即可.（三）接种培养基配好后,应立即进行接种.光合细菌生产性培养的按种量比较高,一般为20％～50％,即菌种母液量和新配培养液虽之比为1∶4～1∶1,不应低于20％,尤其是微气培养,接种量更应高些,否则光合细菌在培养液中很难占绝对优势,影响培养的最终产量和质量.（四）培养管理光合细菌的培养过程中,管理工作包括日常管理操作和测试,生长情况的观察、检查以及出现问题的分析处理等三个方面.1．日常管理和测试（1）搅拌和充气：光合细菌培养过程中必须充气或搅拌,作用是帮助沉淀的光合细菌上浮获得光照,保持菌细胞的良好生长.小型厌气培养常用人工摇动培养容器的方法使菌细胞上浮,每天至少摇动三次,定时进行.大型厌气培养则用机械搅拌器或使用小水泵使水缓慢循环运转,保持菌体悬浮.微气培养是通过充气帮助菌体上浮,因为培养液中溶解氧含量增加,光合细菌繁殖受到抑制,产量下降,所以必须严格控制充气量.一般采用定时断续充气,充气量控制在1～1.5升／（升?h）之间,溶解氧量保持在1×10-6以下.（2）调节光照度：培养光合细菌需要连续进行照明.在日常管理工作中,应根据需要经常调整光照度.白天可利用太阳光培养,晚上则需要人工光源照明,或完全利用人工光源培养.人工光源一般使用碘钨灯或白炽灯泡.不同的培养方式所要求的光照强度有所不同.一般培养光照强度应控制在2000～5000lx之间.如果光合细菌生长繁殖快,细胞密度高,则光照强度应提高到5000～10000lx.光照强度可通过调整培养容器与光源的距离或使用可控电源箱调节.（3）调节温度：光合细菌对温度的适应范围很广,一船在23～39℃的范围内均能正常生长繁殖,可不必调整温度.在常温下培养也可通过调整,将温度控制在光合细菌生长繁殖最适宜的范围内,使光合细菌更好地生长.（4）酸碱度的测定和调整：在培养光合细菌的过程中,必须注意酸碱度的变化.由于光合细菌的大量繁殖,菌液的pH值上升,这意味着光合细菌正处于指数生长期.但当pH值超过最适范围甚至生长的适应范围时,光合细菌的生长达到顶点,随后生长下降.如果能及时调整菌液的酸碱度,使pH值保持在最适范围,则光合细菌能继续生长繁殖.为了延长光合细菌的指数生长期,提高培养基的利用率和单位水体的产量,测定和调整PH值是非常重要的.一船采用加酸的办法来降低菌液的酸碱度,醋酸、乳酸和盐酸部可使用,最常用的是醋酸.在日常的管理工作中,必须每天或隔天测定菌液的pH值,当pH值上升超出最适范围,即加酸调整.如果在培养过程中不测定、调整酸碱度,当光合细菌的生长达到一定密度后pH值也上升到9以上,细菌生长受阻,此时应采收或再扩大培养.在培养过程中不调整PH值,获得的最终产量低.2．生长情况的观察和检查光合细菌生长情况的好坏是培养成败的标准.在培养过程中,可以通过观察菌液的颜色及其变化来了解光合细菌生长繁殖的大体情况,菌液的颜色是否正常,接种后颜色是否由浅变深,均反映光合细菌是否正常生长繁殖以及繁殖速度的快慢.必要时可通过显微镜检查,了解情况.3．问题的分析和处理通过日常管理、检测、检查,了解光合细菌的生长情况,就可以结合当时环境条件的变化进行分析,找出影响光合细菌生长繁殖的原因,采取相应的措施.影响光合细菌生长的原因很多,内因是菌种是否优良,外因是光照、温度、营养、敌害和厌气程度等.温度、光照和pH值都能影响着光合细菌的生长,而且温度、光照和pH值之间是互相制约的,温度与光照的强弱是对立统一的,所以光合细菌生长的最适条件应是互应的,即温度高,光照应弱；温度低,光照应强.如果是温度高,光照强,pH值就会迅速升高,培养基产生沉淀,抑制光台细菌的生长；如果温度低,光照弱,光合细菌得不到最佳能源,生长速度也慢.经试验得出光合细菌生长的最适条件是：①温度15～20℃时,光照30000～50000lx,培养基pH值为7.0；②温度25～30℃时,光照为3000～5000lx,培养基的pH值为7.0.。
《细菌的培养方法》课件
细菌的培养是一项重要的实验技术，本课件将介绍细菌培养的各种方法和技 巧，以及培养过程中需要注意的条件和控制。
培养基的选择
培养基的种类和配方
了解不同种类和配方的培养基，选择适合特定细菌的培养基。
不同细菌所需的基本营养成分
掌握不同细菌所需的营养成分，为其提供合适的生长环境。
3
接种
学习不同接种方法，将细菌转移到培养基上进行生长。
4
培养箱的使用
了解培养箱的操作和使用技巧，提供稳定的培养环境。
常见细菌的培养方法
普通细菌的培养
介绍培养常见细菌的 方法和技巧，如大肠 杆菌等。
必需营养物细菌 的培养
了解必需营养物细菌 的培养方法，满足其 特殊的营养需求。
厌氧菌的培养
掌握培养厌氧菌的技 术，为其提供合适的 生长环境。
培养技术
1 纯培养
学习如何进行细菌的纯培养，以获得纯净的 细菌培养物进行研究。
2 混合培养
了解混合培养技术，用于培养多种细菌共存 的环境。
3 原代培养
学习如何进行原代培养，从样品中分离出单 个细菌菌落进行培养。
4 经过子代培养
掌握细菌的连续培养方法，保持菌株的稳定 性和可用性。
培养条件的控制
温度
难以培养细菌的 培养
解决难以培养细菌的 挑战，探索新的培养 方法和技术。
语
细菌培养的实际应用
探索细菌培养在科学研究、医学和工业中的实际应 用。
细菌培养的限制和进展
讨论细菌培养所面临的限制，并展望未来的发展和 创新。
了解细菌对温度的适 应性，并控制培养环 境的温度以促进生长。
pH值
掌握细菌生长所需的 最适pH范围，并调节 培养基的酸碱度。
细菌的培养方法
细菌的培养方法细菌的培养是微生物学实验中的重要步骤，正确的培养方法可以保证实验结果的准确性和可靠性。
在进行细菌培养之前，首先需要准备好培养基和培养条件。
培养基的选择应根据所需培养的细菌种类和实验目的来确定，而培养条件则包括温度、湿度、气体成分等因素。
接下来，我将介绍一些常用的细菌培养方法，希望能对您有所帮助。
首先，无菌操作是细菌培养的基础。
在进行细菌培养之前，需要做好无菌操作准备工作，包括清洁工作台、灭菌培养器具等。
操作者需要穿戴无菌手套，并在无菌条件下进行操作，以防止外界微生物的污染。
其次，常用的细菌培养方法包括表面培养和深层培养。
表面培养是将细菌培养在培养基表面，通常使用琼脂平板进行培养。
在进行表面培养时，需要将琼脂平板加热至液态状态后，倒入培养皿中，待琼脂凝固后，用无菌的接种环在琼脂表面划线接种。
而深层培养则是将细菌培养在培养基的深层，通常使用琼脂斜板或管内培养。
在进行深层培养时，需要将琼脂斜板或管内培养加热至液态状态后，倒入培养器具中，倾斜或斜放使琼脂凝固成斜面，然后用无菌的接种环在斜面上划线接种。
另外，对于不同种类的细菌，其培养条件也有所不同。
一般来说，大多数细菌的培养温度在30℃至37℃之间，但也有一些特殊的细菌需要在较低或较高的温度下进行培养。
此外，一些厌氧菌需要在无氧条件下进行培养，因此在培养这类细菌时需要使用厌氧培养器具，并在无氧条件下进行操作。
最后，细菌的培养时间也是需要注意的。
一般来说，细菌在培养基上的生长速度与培养条件、细菌种类等因素有关，因此在进行细菌培养时，需要根据具体情况控制培养时间，以保证细菌的生长和繁殖。
综上所述，正确的细菌培养方法对于微生物学实验的准确性和可靠性至关重要。
在进行细菌培养时，需要做好无菌操作准备工作，选择合适的培养基和培养条件，掌握常用的细菌培养方法，并根据不同细菌的特性进行相应的调整，以保证实验结果的准确性和可靠性。
希望本文对您有所帮助，谢谢阅读。
细菌的培养实验原理与方法
细菌的培养实验原理与方法
细菌的培养实验通过提供适宜的营养物质和环境条件，使细菌在实验室中快速繁殖和生长。
培养实验通常包括以下几个步骤：
1. 准备培养基：培养基是供细菌生长的营养物质的混合物。
根据细菌的需求，可以选择富含蛋白质、碳源、氮源、矿物质和水的培养基。
常用培养基包括营养琼脂糖平板、液体培养基等。
2. 预处理样本：如果从自然环境中获取样本，需要先进行预处理，如样本的稀释、过滤或接种到含有抗生素的培养基中。
3. 涂布或接种：将样本涂布在固体培养基的表面上，或者将样本接种到液体培养基中。
涂布可以通过将样本擦拭在琼脂糖平板上等方式进行。
4. 培养条件：在适宜的温度下，通常在30-37摄氏度之间，培养细菌。
温度过高或过低可能会抑制细菌的生长。
5. 培养时间：根据细菌的生长速度，选择适当的培养时间。
通常需要培养24-48小时，有些细菌可能需要更长的时间。
6. 细菌形态观察：使用显微镜观察细菌的形态特征，如形状、大小、颜色等。
7. 细菌计数：可以使用平板计数法或液体对数法对细菌进行计数。
需要注意的是，在进行细菌培养实验时，需要遵循无菌操作的原则，以防止其他细菌或霉菌的污染。
此外，实验室中还需要遵守相关的安全操作规程，如使用个人防护装备、正确处置废弃物等。
细菌的培养和检测方法
细菌的培养和检测方法细菌是一类微小的单细胞生物，广泛存在于自然界的各个角落中。
它们既可以对人类和其他生物造成危害，也可以为我们提供很多重要的服务。
因此，对细菌的培养和检测方法的研究非常重要。
本文将介绍一些常见的细菌培养和检测方法，希望能为读者提供一些有用的信息。
一、细菌的培养方法1. 培养基的选择细菌的培养需要提供适合其生长和繁殖的环境，而培养基就是提供这种环境的物质。
常见的培养基有富含营养物质的琼脂糖培养基、含有特定成分的选择性培养基等。
根据不同的细菌需求，选择合适的培养基对于细菌的培养至关重要。
2. 培养条件的控制细菌的培养需要一定的温度、湿度和氧气等条件。
一般来说，常见的细菌培养温度为37摄氏度，湿度保持在适宜的水分含量，氧气浓度也需要根据细菌的需求进行调控。
此外，光照条件对一些细菌的生长也有一定的影响。
3. 细菌的分离和纯化在进行细菌培养之前，需要对细菌进行分离和纯化。
分离是将不同种类的细菌从混合物中分开，纯化则是将同一种细菌的纯种分离出来。
这一步骤可以通过在琼脂糖培养基上进行菌落选择，或者使用特定的选择性培养基来实现。
二、细菌的检测方法1. 基于显微镜的观察显微镜是一种常用的细菌检测工具。
通过显微镜观察细菌的形态、大小和结构等特征，可以初步确定细菌的种类。
同时，显微镜还可以观察细菌在培养基上的生长情况，以及细菌与其他细胞或物质的相互作用。
2. 生物化学检测生物化学检测是通过检测细菌产生的代谢产物来鉴定细菌的种类。
例如，通过观察细菌在特定培养基上的气体产生情况，可以初步判断细菌是否产生某种代谢产物。
此外，一些特定的酶活性检测也可以用来鉴定细菌。
3. 分子生物学检测分子生物学技术在细菌检测中发挥着越来越重要的作用。
例如，通过PCR技术可以检测细菌DNA中的特定序列，从而确定细菌的种类。
另外，基于DNA测序的方法也可以用来鉴定细菌，并进一步研究其基因组结构和功能。
4. 免疫学检测免疫学检测是通过检测细菌与免疫系统之间的相互作用来鉴定细菌的方法。
细菌培养方法
根据培养细菌的目的和培养物的特性培养方法分为一般培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法三种。
1、一般培养法：将已接种过的培养基,置37℃培养箱内18－24小时,需氧菌和兼性厌氧菌即可于培养基上生长。
少数生长缓慢的细菌，需培养3－7天直至一个月才能生长。
为使培养箱内保持一定湿度，可在其内放置一杯水。
培养时间较长的培养基，接种后应将试管口塞棉塞后用石腊凡士林封固，以防培养基干裂。
2、二氧化碳培养法：某些细菌，如牛流产布氏杆菌和胎儿弧菌等需要在含有10％二氧化碳的空气中才能生长，尤其是初代分离培养要求更为严格。
将已接种的培养基置于二氧化碳环境中进行培养的方法即二氧化碳培养法。
3、厌氧培养法：常用的厌氧培养方法有厌氧罐法、气袋法及厌氧箱三种。
培养真菌细菌的一般方法
培养真菌细菌的一般方法
培养真菌和细菌的一般方法包括以下步骤：
1. 配制培养基：选择适合真菌或细菌生长的营养物质，如牛肉汁、蛋白胨等，与琼脂混合在一起配置成营养基。
2. 高温灭菌：将配置好的营养基进行高温灭菌，目的是杀死培养基中原有的细菌和真菌及他们的孢子。
3. 冷却接种：在无菌环境下，将少量的的细菌或真菌转移到培养基上。
接种时应在无菌环境下进行，并且做好环境与器械的消毒灭菌工作，防止杂菌感染。
培养基冷却后方可接种，以防止高温而杀死细菌或者真菌。
4. 恒温培养：将接种后的培养皿放在恒温箱中进行培养，保持一定的温度和湿度，使细菌或真菌在适宜的环境中生长繁殖。
以上步骤完成后，就可以观察和记录细菌或真菌的生长情况了。
需要注意的是，不同种类的细菌或真菌对生长条件的要求不同，因此在实际操作中需要根据具体情况进行调整。
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注意事项： 用手指或物品按培养基时，接触面可稍微
大一些，但切勿用力，否则，易将培养基压破， 影响结果的判断。如果不慎压破，可在临近未 破处重新按一下。
三线法分离接种
细菌的分离接种
1. 琼脂平板划线分离接种法（固体培养 基） 三线法
2. 穿刺接种法（半固体培养基） 3. 液体培养基接种法
接种时要注意无菌操作，避免污染，防止细 菌外溢污染环境。
方法： （1块／3人） 打开血平板，将平板置于口腔前约15cm处，
对准培养基表面用力咳嗽3～4次，然后盖好平 板盖，放置于37℃孵箱内培养24小时观察 结果。
正常人体皮肤及随身物品的细菌检查
在人体的皮肤表面有多种细菌存在，用水洗手或 用肥皂洗手，可以除去皮肤上的污垢和灰尘，从而减少 手上细菌的数量，但并不能有效的杀死细菌。而日常医 疗、试验工作中常用的化学消毒剂如碘酒、酒精等有很 好的杀菌作用，它们不仅对细菌的繁殖体，对芽孢也有 一定的杀灭效果，所以在临床医疗中广泛应用。
操作与注意事项（1块／3人） 1、将平板底部用mark笔划线分成均匀的8个区，分别标 记为①②③④⑤⑥⑦⑧。 2、用右手的食指在①区上轻轻按一下，然后用肥皂在流 水下将手洗干净，用无菌棉签拭干右手食指皮肤上的水， 再轻轻在②区培养基上按一下。 3、用左手食指轻轻在③区按一下，然后用棉签蘸碘酒消 毒左手食指皮肤，待干后轻轻在④区按一下。 4、任取随身物品在⑤⑥⑦⑧区各按一下。 5、盖好平板，送37℃孵箱培育24小时后观察结果。
培养基的制备
一、培养基（culture medium）
由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使 用的混合营养物制品。
（一）培养基的类型及应用 1、按用途划分 1）基础培养基 能满足一般细菌生长繁殖的营养需要，如肉 汤（包括牛肉膏、蛋白胨、氯化钠等）。
2）营养培养基
在基础培养基中加入葡萄糖、血液、血清、 酵母浸膏等。
实验三、 细菌接种及分离培养； 自然界及正常人体的细菌检查
昆明学院医学院病原生物学教研室
教学目标
1. 熟悉常用的纯种细菌的接种方法。 2. 掌握标本中细菌的分离培养技术。 3. 了解细菌广泛分布于自然界及正常人 体，树立“有菌观念”。 4. 深刻认识“无菌操作”对于微生物实 验及医药学实践的重要性。 5．进一步理解“正常菌群”的概念。
操作：将血平板打开盖，放到教 室的四个角上，静止15分钟后，合上 盖后送37℃孵箱培养。
沉降法简单易行，缺点是不够准 确。但它客观地反映了空气污染的程 度和卫生通风状况，对手术室、食品 业等有重要的参考意义，是判断空气 污染的指标之一。
据推算，每100cm²培养基在空气中暴露5 分钟，其表面接受自然沉降的细菌数约相当 于10升空气中所含的细菌量。
所以： 每m³空气中活菌数=（100cm²培养基上 菌落平均数/30）x1000。
鼻咽喉及口腔中细菌的检查 — 咳碟试验
鼻咽喉及口腔是人体与外界相通的腔道，常 常有不同种类的细菌存在。这些细菌常是条件 致病菌，在一般情况下并不致病，但是当机体 的抵抗下降时，可引起疾病而对机体造成危害。
由于寄居人体的关系，这些细菌对营养的 要求较高，所以常用含血的培养基进行分离。
5）厌氧培养基
大肠埃希菌
沙门菌
志贺菌
SS琼脂培养基 （Salmonella-Shigella agar）
2、根据物理状态划分
液体培养基：增菌 固体培养基（琼脂浓度为2－3％）：
增菌，分离培养 半固体培养基（琼脂浓度为0.2-0.5%）：动
力检查，保种
液体培养基
固体培养基
半固体培养基
（二）细菌生长繁殖的条件
气体环境
氧和二氧化碳
按细菌对氧的需求可分为四种类型：
（1）专性需氧菌（obligate aerobe, O2 >20%）
（2）兼性厌氧菌（facultative anaerobe, O2 : Yes or no ） （3）微需氧菌（microaerophilic bacterium , O2 :2~10% ） （4）专性厌氧菌（obligate anaerobe, O2 : No ）
3）鉴别培养基 用于鉴别不同类型细菌的培养基。特定的化学
反应，产生明显的特征性变化，根据这种特征性变 化，可将该种细菌与其他细菌区分开来。
4）选择培养基 将某种细菌从混杂的细菌群体中分离出来的培养
基。根据不同种类细菌的特殊营养需求，在培养基中 加入相应的特殊营养物质；或者加入某些化学物质， 抑制不需要的细菌生长，有利于所需细菌的生长。
某些细菌如奈瑟菌在培养时需要提供5-10%二氧化碳；
二、细菌在培养基中的生长现象
1．固体培养 单个微生物在适宜的固体培养基表面生长、繁
殖到一定程度，可以形成肉眼可见的有一定形 态结构的细菌集团，称为菌落（colony）。 菌落特征是鉴别细菌的重要依据之一。
2 液体培养
沉
混
淀
浊
生
生
长
长
表 面 生 长
1．充足的营养物质； 2．适宜的温度； 3．合适的酸碱度（ph）； 4．必要的气体环境；
温度
嗜冷菌 (10-15℃) 嗜温菌（30-40℃）：绝大多数病原菌 嗜热菌（50-85℃）
pH
嗜中性菌（ 5 to 8） 嗜酸性菌（below 5.5） 嗜碱性菌（above 8.5）
多数病原菌最适酸碱度为PH7.2-7.6 霍乱弧菌耐碱 PH8.4-9.2 结核分支杆菌耐酸 PH6.5-6.8
实验主要内容
1．录相：细菌的培养方法 2．操作： ⑴空气中细菌的检查 （沉降法 血平板 1块/6人） ⑵呼吸道细菌的检查 （咽拭子法培养 血平板 1块/3人） ⑶随身物品的细菌检查（手指消毒前后 普通平板1块/3 人） ⑷细菌的接种法（液体、半固体、固体 1套/3人）
材料： ⑴ 大肠埃希菌培养物 （1支/6人） ⑵ 碘酒、75%酒精、棉签等 （1套/6人）
3 半固体培养
常用于检查细菌动力
无动力 有动力
本次试验的操作：
1. 空气中细菌的检查（沉降法，血平板） 2. 呼吸道细菌的检查（咽拭子或咳碟培养，
血平板） 3. 随身物品细菌检查（普通平板） 4. 细菌的接种法：液体、半固体、固体培养
基
检查空气中细菌的方法很多，沉降法 是其中的一种。它是利用含有细菌的尘粒 或气溶胶粒因重力作用而自然下降于培养 基表面，通过细菌培养，计数其菌落数， 而粗略地进行评估。
斜面培养基接种
半固体穿刺
液体培养基接种
思考题
1.“三线法”分离接种细菌的主要目的是么？ 2. 为什么有的时候在接种细菌后，通过培养
没有细菌生长？
3. 酒精的最佳杀菌浓度？