容量分析法的验证
第四章 药物定量分析与分析方法验证
1、含卤素有机药物
含卤素有机药物是指分子结构中所含卤素直接与芳环
如果测得理论板数低于规定的最小理论板数， 应改变色谱柱的某些条件（如柱长、载体性能、色 谱柱填充的优劣等），使理论板数达到要求。
(2)分离度(R)
在定量分析时，要求定量峰与其他峰 或内标峰之间有较好的分离度。除另有规定 外，分离度应大于1.5。
分离度（R）的计算公式见下式：
R 2 t R2 t R1
含量（CX）= f
AX AS / CS
式中，AX为供试品峰面积或峰高；CX为供
试品的浓度 。
丙酸睾酮含量测定采用高效液相法：取本品 对照品适量，精密称定，加甲醇定量稀释成 每lmL中约含1mg的溶液。精密量取该溶液 和内标溶液（1．6mg/ml苯丙酸诺龙甲醇溶 液）各5ml，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至 刻度，摇匀，取10μl注入液相色谱仪，记录
例
取盐酸麻黄碱0.1532g，精密称定， 加冰醋酸10ml溶解后，加醋酸汞试液 2ml与结晶紫指示液1滴，用HClO4滴 定至绿色，用去0.1022mol/L的高氯 酸滴定液7.50m1，空白试验消耗高氯 酸滴定液0.08ml。已知每1ml高氯酸 滴定液（0.1mol/L）当于20.17mg的 C10H15ON·HCl。试计算盐酸麻黄碱 的百分含量？（99.80％）
1.分离原理
吸附色谱 分配色谱 离子交换色谱 排阻色谱
吸附色谱
根据填充剂吸附活性 对样品的吸收系数不 同而分离
充填剂：硅胶
分配色谱
根据固定相与流动相的极性不同而分为 正相分配色谱和反相分配色谱 两者的区别如下图所示：
固定相
流动相
正相分配
极性
药物的分析方法与验证
• （4）对于易水解的酯类药物，可采用定量过量加入碱滴定液水解后，用酸 滴定液回滴的剩余滴定法。如氯贝丁酯、阿司匹林片的含量测定。
• 示例： 氯贝丁酯(Clofibrate，降血脂药)的含量测定
• 取本品2 g，精密称定，置锥形瓶中，加中性乙醇(对酚酞指示液显中 性)10mL与酚酞指示液数滴，滴加氢氧化钠滴定液(0.lmol/L)至显粉红色，再 精密加氢氧化钠滴定液(0.5mol/L)20mL，加热回流1小时至油珠完全消失， 放冷，用新沸过的冷水洗涤冷凝管，洗液并入锥形瓶中，加酚酞指示液数滴， 用盐酸滴定液(0.5mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1mL氢 氧化钠滴定液(0.5mol/L)相当于121.4mg的C12H15ClO3。
第二法：测定有机弱酸及其盐类（异维A酸、苄氟噻嗪、环吡酮等）
• 第二法：除另有规定外，精密称取供试品适量 [约消耗碱滴定液(0.1 mol/L)8 mL]，加各品种 项下规定的溶剂使溶解，再加规定的指示液 1~2滴，用规定的碱滴定液(0.1 mol/L)滴定。 终点颜色应以电位滴定时的突跃点为准，并将 滴定的结果用空白试验校正。
• 为消除这些酸性物质的干扰，采用两步滴定法：
第一步—中和供试品中的各种酸性杂质，消耗的氢氧化钠量较少，故采用较 稀的碱滴定液(0.1mol/L)
第二步—水解后返滴定，加入定量过量较浓的碱滴定液(0.5mol/L)，进行加热 回流1h，以保证水解完全，并可以准确滴定剩余量。
（三）氧化还原滴定法
• 该法是以氧化还原反应为基础的滴定分析法，既可直接测定具有氧化性或还 原性的物质，又可间接测定不具有氧化性或还原性的物质。
容量法
酸碱滴定中的缓冲溶液
缓冲溶液是一种对溶液的酸度起稳定左右的溶液，
它一般是由浓度较大的弱酸及其共轭碱所组成。衡 量缓冲溶液缓冲能力大小的尺度被称为缓冲容量。 几种标准缓冲溶液：饱和酒石酸氢钾(pH3.56)， 0.05M邻苯二甲酸氢钾(pH4.01)， 0.025MKH2PO4(pH6.86)，0.01M硼砂(pH9.18)。 几种常用的缓冲溶液：HAc-NaAc，NH3-NH4Cl， 柠檬酸-Na2HPO4等。通过不同比例的混合，可以 得到缓冲能力各异，缓冲区间不同的缓冲液。
克当量(1)
在滴定分析中，被测物质与滴定剂的反应不
一定是按照1：1的摩尔关系进行的。象 K2Cr2O7和Fe2+的反应， Fe2+ 消耗的摩尔数 是K2Cr2O7的6倍。为了简化这种情况，引入 了克当量的概念。 克当量定义：是指反应中相当于1摩尔H或1 摩尔电子的某物质以克为单位的重量。
克当量(2)
非水溶液的酸碱滴定
为什么需要非水滴定：
1、酸度常数小于10-7的弱酸或弱碱，一般不能准确滴定。 2、许多有机化合物在水中的溶解度小，使滴定无法进行。 3、由于水的拉平效应，使强酸或强碱不能分别进行滴定。 最常用的非水滴定：HClO4的冰HAc溶液为滴定剂。因为冰 HAc是高氯酸盐酸硫酸的分辨性溶剂，其中高氯酸酸性最强， 而且滴定过程中生成的高氯酸盐具有较大的溶解度，所以一 般选择高氯酸。为了除去由高氯酸带来的水分，一般需要加 入一定量的醋酸酐，但对于滴定伯胺仲胺等易于乙酰化的样 品，要避免加入过量醋酸酐，否则会破坏它的碱性，使滴定 无法进行。
常用掩蔽剂
无机掩蔽剂：氰化物(KCN) 、氟化物(NH4F
或NaF) 有机掩蔽剂：乙酰丙酮、柠檬酸、酒石酸、 草酸、磺基水杨酸、邻二氮菲、乙二胺、三 乙醇胺等
药物分析方法学验证中各项指标的深度剖析
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方法学认证中溶液稳定性的全面判定 不能单从主成分入手！ 还要注意所有组分的百分比变化，
绝对值变化！
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45002 22.729 0.42
mAU
mAU
160 150 140
元素测定法如定氮法，在其它方法均不适宜 时可采用，但因不能反映化合物含量的变化 情况，此法不可用于稳定性考察中。
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药品含量测定方法的设计——制剂
应考虑辅料等的干扰，首选方法一般为HPLC法， 在有关物质、辅料不干扰的情况下，也可选用 UV法或原料药项下的容量法 。
复方制剂首选HPLC法 。
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质量标准中制订有关物质的原则
● 采用杂质对照品法、用于降解产物的准确测定， 如氢氯噻嗪、对乙酰氨基酚等。
● 采用强破坏试验破坏出杂质。如中国药典中的氧 氟沙星所有品种，均在HPLC法的色谱条件下拟定 了：取供试品溶液，置紫外灯下（254nm）照射4 小时以上，使产生的紧邻主峰前的杂质峰与主峰 的分离度应符合规定。
⑥灵敏度：作为常量分析法，此项可不作主要要 求。
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UV法的验证：①精密度：RSD≤1%（n＝5）；②准 确度：方法同HPLC法，回收率应在98%～102%之 间（n＝9, RSD≤2%），同时要求辅料、有关物质 或降解产物在测定波长处无吸收。
③线性范围：用已知含量的精制品配制一系列浓 度的溶液（n＝5～7，吸收度A在0.3～0.7间）， 用浓度C对A进行回归处理，线性方程的相关系数 r应≥0.9990，截距应趋于零，并提供线性关系图；
容量分析的概念和原理
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（2）重铬酸钾作氧化剂进行的滴定反应（见化学需氧量测定方法）
K2Cr2O7也是一种强氧化剂，在酸性溶液中，Cr2O72+被还原成Cr3+。 重铬酸钾法的优点是：K2Cr2O7试剂易于提纯，可以直接称量后配制标准溶液， 不必进行标定； K2Cr2O7相当稳定，可以长期保存；在酸性溶液中，Cr2O72-作 氧化剂，不会把Cl–氧化，故不受溶液中的Cl－干扰。使用K2Cr2O7滴定时，需 使用氧化还原指示剂，如二苯胺磺酸钠等。
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（二）络合滴定法（配位滴定法）
基本原理：络合滴定法是以络合反应为基础的滴定分析方法。络合滴定 所用的指示剂是金属指示剂，在酸性条件下可用二甲酚橙（XO）作指示剂， 可测定Bi3+、Pb2+、Zn2+、Al3+等金属离子；在碱性条件下（pH=10），可用 铬黑T（EBT）作指示剂，可测定Zn2+、Pb2+、Ca2+、Mg2+等金属离子。
Ag
2CrO4↓（砖红色）
莫尔法中指示剂的用量和溶液的酸度是两个主要问题。
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①指示剂的用量
在实际工作中，若CrO42-的浓度太高，颜色太深，会影响终点的判断；但 CrO42-的浓度太低，又会使终点出现过缓，影响滴定的准确度。实验证明加入 K2CrO4的浓度以5.0 × 10–3 mol·L–1为宜。这样实际使用的CrO42-的浓度较计 算值偏低，那么要使Ag2CrO4沉淀析出，必然要使AgNO3溶液过量得稍多一点。 这样的话也不致引起较大的误差，完全可以满足滴定分析的要求 。
KMnO4标准溶液浓度的确定是以草酸钠来标定的。在H2SO4溶液中， MnO4-C2O42-反应如下：
滴定分析法(容量分析法)概述
滴定分析法（容量分析法）概述滴定分析法（容量分析法）概述一、滴定分析法的原理与种类1.原理滴定分析法是将一种已知精准浓度的试剂溶液，滴加到被测物质的溶液中，直到所加的试剂与被测物质按化学计量定量反应为止，依据试剂溶液的浓度和消耗的体积，计算被测物质的含量。
这种已知精准浓度的试剂溶液称为滴定液。
将滴定液从滴定管中加到被测物质溶液中的过程叫做滴定。
当加入滴定液中物质的量与被测物质的量按化学计量定量反应完成时，反应达到了计量点。
在滴定过程中，指示剂发生颜色变化的变化点称为滴定尽头。
滴定尽头与计量点不肯定恰恰符合，由此所造成分析的误差叫做滴定误差。
适合滴定分析的化学反应应当具备以下几个条件：（1）反应必需按方程式定量地完成，通常要求在99.9%以上，这是定量计算的基础。
（2）反应能够快速地完成（有时可加热或用催化剂以加速反应）。
（3）共存物质不干扰重要反应，或用适当的方法除去其干扰。
（4）有比较简便的方法确定计量点（指示滴定尽头）。
2.滴定分析的种类（1）直接滴定法用滴定液直接滴定待测物质，以达尽头。
（2）间接滴定法直接滴定有困难时常采纳以下两种间接滴定法来测定：a 置换法利用适当的试剂与被测物反应产生被测物的置换物，然后用滴定液滴定这个置换物。
铜盐测定：Cu2+＋2KI→Cu＋2K+＋I2│用Na2S2O3滴定液滴定、以淀粉指示液指示尽头┗————————————————————→b 回滴定法（剩余滴定法）用定量过量的滴定液和被测物反应完全后，再用另一种滴定液来滴定剩余的前一种滴定液。
二、滴定液滴定液系指已知精准浓度的溶液，它是用来滴定被测物质的。
滴定液的浓度用“XXX滴定液（YYYmol/L）”表示。
（一）配制1.直接法依据所需滴定液的浓度，计算出基准物质的重量。
精准称取并溶解后，置于量瓶中稀释至肯定的体积。
如配制滴定液的物质很纯（基准物质），且有恒定的分子式，称取时及配制后性质稳定等，可直接配制，依据基准物质的重量和溶液体积，计算溶液的浓度，但在多数情况是不可能的。
容量分析法
当反应完全时，被测药物的量（WA）与滴定剂的量（WB）之间的关 系为WA/aMA=WB/bMB， 被测药物的量可由下式计算： WA=WB/bMB*aMA=nB*a/b*MA=mB*VB*a/b*MA 式中， a与b:分别为被测药物与滴定剂进行反应的最简摩尔数（mol）; MA与MB分别为被测药物与滴定剂的摩尔量（分子量， g/mol）； nB为被测药物消耗的滴定剂的摩尔数（mol）; mB为滴定液的摩尔浓度（mol/l）； VB为被测药物消耗的滴定液的体积（ml）。
单位体积（VB=1ml）的滴定液相当于被测药物的 量WA=mB*a/b*MA，被称为“滴定度”，以T表示， 量纲为mg/ml. T是滴定液浓度的一种特殊表示形 式。使用T可使滴定结果的计算简化， WA=T*VB 因为不同被测药物的摩尔质量以及与滴定剂反应 的摩尔比不同，同一滴定液对不同被测药物的滴 定度是不同的，计算通式： T（mg/ml）=m*a/b*M m为滴定液的摩尔浓度（mol/l）； a为被测药物的摩尔数； b为滴定剂的摩尔数； M为被测药物的毫摩尔质量（分子量，mg）.
等操作步骤，
含量（%）=（V0B-VsB）*FB* TA/W *100%
V0B为空白试验时消耗的滴定液B的体积（ml）； VsB为样品测定时消耗的滴定液B的体积（ml）； FB为滴定液B的浓度校正因数（mg/ml）； TA为滴定液A的滴定度； W为供试品的称取量。
容量分析法
概念
容量分析法（滴定法）：是将已知浓度的滴
定法（标准物质溶液）由滴定管滴加到被 测药物的溶液中，直至滴定液与被测药物 反应完全（通过适当方法指示），然后根 据滴定液的浓度和被消耗的体积，按化学 计量关系计算出被测药物的含量。
当滴定液与被测药物完全作用时，反应达到化学计量点。 在进行容量分析时，当达到化学计量点时应停止滴定，并 准确获取滴定液被消耗的体积。但在滴定过程中反应体系 常常无外观现象的变化，必须借助适当的方法指示化学计 量点的到达。其中，最常见的方法是借助指示剂的颜色或 者电子设备的电流或电压变化来判断化学计量点。即，在 滴定过程中，当反应体系中的指示剂（如甲基红或酚酞） 的颜色或与反应体系相连的检测设备输出的电信号（如电 流计的mA或者电位计的mV数）发生突变时终止滴定。指 示剂的颜色或检测设备的电信号的突变点通常被称为滴定 终点。但滴定终点与滴定反应的化学计量点不一定恰好符 合，二者之差被称为滴定误差。滴定误差是容量分析法中 系统误差的重要来源之一，为了减少滴定误差，就需要选 择合适的指示剂或者指示方法（如在非水溶液滴定中常用 电位滴定法），使滴定终点尽可能地滴定反应的化学计量 点。
容量法原理
容量法原理
容量法原理是指在流体力学中，通过对流体的容积变化进行研究，来分析流体的性质和行为的一种方法。
在流体力学中，对流体的容积变化进行研究是十分重要的，因为流体的容积变化直接影响着流体的压力、密度等性质，而容量法原理正是基于这一点展开研究的。
容量法原理的基本思想是，通过对流体在不同状态下的容积进行比较和分析，来揭示流体的性质和行为。
在实际应用中，容量法原理常常与连续性方程和动量方程等流体力学基本方程相结合，从而得出流体在不同条件下的压力、速度、流速等重要参数，为工程实践提供理论依据。
容量法原理的研究对象主要是流体的容积变化规律，而流体的容积变化受到多种因素的影响，如温度、压力、流速等。
因此，容量法原理的研究内容涉及到流体的热力学性质、动力学性质以及流体在不同条件下的行为特点等方面。
在实际工程中，容量法原理常常被应用于流体的输送、储存、控制等方面。
例如，在管道输送系统中，通过对流体容量的计算和分析，可以确定管道的尺寸、流速等参数，从而保证流体的正常输送。
在液压传动系统中，容量法原理也被用来分析液压缸的工作性能，优化系统的工作效率。
总之，容量法原理作为流体力学中的重要方法，对于揭示流体的性质和行为具有重要意义。
通过对流体容积变化的研究，可以为工程实践提供理论支持，指导工程设计和实际应用，促进流体力学理论的发展和应用。
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容量分析法的验证：①精密度：用原料药精制品考察方法精密度，平行试验5个样本的RSD≤0.2%；②准确度：以测定原料精制品（含量>99.5%）的回收率（测定值与理论值的比值）计算，应在99.7%～100.3%之间（n＝5,RSD≤0.1%）；③滴定终点确定的依据：包括滴定曲线的绘制，如用指示剂法确定终点，应用电位法校准终点颜色，提供指示剂颜色与电位变化情况的对比结果；④耐用性：考察测定条件（供试液稳定性、样品提取次数、时间等）有微小变动时，测定结果不受影响的承受程度，如测试条件要求苛刻时则应在方法中注明。