冬虫夏草对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞ILK表达的影响
冬虫夏草提取物对糖尿病肾病及肾小球系膜细胞TGF-β1基因的影响
相 同作用时间各组与高糖组比较 （ Ｐ＜ ０ ． ０ １ ） ， 高糖培养 ｍ Ｒ Ｎ Ａ的表达增加 ， 明显 高于正常对照组 （ Ｐ＜ Ｏ ． ０ ５ ） 。结 论 ： 冬 虫夏 草发 酵 茵粉 明显 改善 Ｄ Ｎ患者 中医症候 ， 降低 患者尿蛋 白 ， 可 能与其 下调 Ｔ Ｇ Ｆ—Ｂ １
两组均在基础治疗基础上加缬 沙坦 （ 商品名代文 ， 诺 华公司） ， 每日８ ０ ｍｇ口服 ； 治 疗 组 加 服 冬 虫 夏 草 提 取 物金水宝胶囊 （ 江西济民可信金水宝制药有限公 司） ， 每次 ５粒 ， 每 日 ３次 ， 服 药 ３个 月 ， 比较两 组 治 疗 前 后
的Ｈ ｂ Ａ１ ｃ 、 Ｂ ＭＩ 、 Ｓ Ｂ Ｐ、 Ｄ Ｂ Ｐ ， 无 显著差 异 （ Ｐ＞ ０ ． ０ ５ ） 。
基 因表达 延缓 肾小球硬 化有 关 。
关键 词 ： 冬 虫夏 草 ； 糖尿 病 肾病 ； 肾小球 系膜 细 胞 ； 转 化 生长 因子 一Ｂ １ 中图分类 号 ： Ｒ ２ ８ ５ ． ５ ； Ｒ ５ ８ ７ ． ２ 文 献标 识码 ： Ｂ 文章 编 号 ： １ ０ ０ ２— ２ ３ ９ ２ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ３— ０ １ ５ ４— ０ ２ Ｄ Ｎ是 糖 尿 病 （ Ｄ Ｍ） 常 见 的 慢 性微 血 管并 发 症 之
中
・
医
药
学
报
２ ０ １ ３年第 ４ １ 卷第 ３期
Ｖｏ １ ． ４ １， Ｎｏ ． ３， ２ ０ １ ３
１ ５ ４・
Ａ ｃ ｔ ａ Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ａ ｎ ｄ Ｐ ｈ ａ ｒ ｍａ ｃ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ
冬虫夏草对糖尿病大鼠组织蛋白酶B及其抑制剂C表达的影响
冬虫夏草对糖尿病大鼠组织蛋白酶B及其抑制剂C表达的影响方华伟;傅余芹;韩亚莉;陈叶【期刊名称】《中国老年学杂志》【年(卷),期】2009(29)7【摘要】目的应用虫草菌丝对糖尿病肾病(DN)模型大鼠进行干预,探讨其作用效果及可能的作用机制.方法将Wistar大鼠分成正常组和糖尿病(DM)组,DM组大鼠给予链脲佐菌素(STZ)55 mg/kg腹腔内注射,成模后随机分为模型组和治疗组每组大鼠分别在第4、8、16周各处死10只,在处死前留取24 h尿量测24 h尿白蛋白和尿肌酐,留取血标本离心后测血肌酐,留取肾脏标本用免疫组化和实时荧光定量PCR方法测胱抑素(CC),组织蛋白酶B(CB),Ⅳ型胶原(ColⅣ)和纤维连接蛋白(FN)的表达.结果与正常组比较模型和治疗组大鼠内生肌酐清除率(Ccr)和24 h尿白蛋白第4周开始升高(P＜0.01),免疫组化和PCR结果显示CB、CC、ColⅣ、FN在第8周出现明显上调(P＜0.01或P＜0.05),模型组CB在16 w下调(P＜0.01),与模型组相比,治疗组的CB,CC,ColⅣ,FN在前8周无显著变化,第16周C C,ColⅣ,FN表达下调(P＜0.01或P＜0.05),CB的表达上调(P＜0.01).结论虫草菌丝通过调节CB、CC的平衡来减少DN细胞外基质(ECM)的沉积,起到对DN的保护作用.【总页数】4页(P782-785)【作者】方华伟;傅余芹;韩亚莉;陈叶【作者单位】山东大学第二医院肾内科,山东,济南,250012;山东大学第二医院肾内科,山东,济南,250012;山东大学第二医院肾内科,山东,济南,250012;山东大学第二医院肾内科,山东,济南,250012【正文语种】中文【中图分类】R587.1【相关文献】1.冬虫夏草对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞ILK表达的影响 [J], 金永东;宁建平;张义雄;李文星2.补脏通络方对糖尿病大鼠肾组织Ⅳ型胶原、转化生长因子-β表达及基质金属蛋白酶-9/金属蛋白酶抑制剂-1平衡的影响 [J], 杨化冰;张茂林;张翀;付玉山3.冬虫夏草对糖尿病肾病大鼠肾组织HIF-1α及VEGF表达的影响 [J], 袁明霞;唐荣;周巧玲;刘抗寒;肖舟;Veeraragoo Pouranan4.冬虫夏草对糖尿病大鼠肾组织ED-1及CoⅣ表达的影响 [J], 彭琳;张浩;徐果5.γ-分泌酶抑制剂对体外培养的糖尿病大鼠血管平滑肌细胞Notch信号通路相关蛋白表达的影响 [J], 冯东凡;范东旭;金松;韩梅;杨婷;刘彦东;王凯峰;孙瑶因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
冬虫夏草对肾小球硬化大鼠肝脏白蛋白及胰岛素样生长因子-Ⅰ基因表达的影响
冬虫夏草对肾小球硬化大鼠肝脏白蛋白及胰岛素样生长因子-Ⅰ基因表达的影响张宏;刘丽秋【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2007(011)001【摘要】目的探讨冬虫夏草对肾小球硬化大鼠肝脏白蛋白(ALB)及胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)mRNA表达的影响.方法健康Wistar大鼠分为正常对照组,模型组和冬虫夏草组,模型组和冬虫夏草组制备进行性肾小球硬化模型,冬虫夏草组给予冬虫夏草水提液(2.5 g/kg·d)灌胃.术后4周和9周分别处死大鼠,测定血生化指标和24小时尿蛋白排泄量;采用RT-PCR法检测肝脏ALB及IGF-ⅠmRNA的表达.结果(1)与模型组相比,冬虫夏草组术后尿蛋白排泄量降低(P＜0.01),血浆白蛋白升高(术后4周P＜0.05,术后9周(P＜0.01),肝脏ALB mRNA表达增加(P＜0.01),IGF-ⅠmRNA表达增加(术后4周P＜0.05,术后9周P＜0.01).(2)肝脏ALBmRNA与IGF-ⅠmRNA相对表达量呈显著正相关,相关系数r=0.932(P＜0.01).结论冬虫夏草能减少尿蛋白,增加肝脏白蛋白mRNA表达,增加血浆白蛋白,从而改善肾小球硬化大鼠的低白蛋白血症,其机制可能是通过上调肝脏IGF-Ⅰ mRNA表达而增加肝脏白蛋白合成.【总页数】5页(P68-72)【作者】张宏;刘丽秋【作者单位】青岛大学医学院附属医院,肾内科,山东,青岛,266000;青岛大学医学院附属医院,肾内科,山东,青岛,266000【正文语种】中文【中图分类】R2【相关文献】1.冬虫夏草制剂对肾小球硬化大鼠细胞外基质成分和TIMP-1mRNA表达影响的研究 [J], 李春梅;刘丽秋;周海燕;董晖;宋起;李宁2.不同运动方式对大鼠肝脏胰岛素样生长因子-1、胰岛素样生长因子结合蛋白-3及瘦素受体的影响 [J], 邵月3.冬虫夏草对一次性力竭运动大鼠肝脏、肌肉部分生化指标和运动能力的影响 [J], 张辉4.腹腔感染对大鼠肝脏白蛋白基因表达的影响 [J], 李维勤;黎介寿5.大豆黄酮对大鼠肝脏氮代谢和胰岛素样生长因子生成和分泌的影响 [J], 郑元林;艾晓杰;刘根桃;韩正康;陈杰因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
冬虫夏草对糖尿病大鼠肾组织ED—1、Col—Ⅳ表达的影响
冬虫夏草对糖尿病大鼠肾组织ED—1、Col—Ⅳ表达的影响目的：用虫草菌粉（Cs-4）对链脲佐菌素（STZ）诱导的糖尿病大鼠模型干预治疗，动态观察ED-1、CoⅣ在肾组织中的表达，探讨Cs-4能否通过抑制肾组织炎症细胞浸润从而达到减轻肾脏纤维化的作用。
方法：36只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组和Cs-4治疗组，于4周、14周末每组分别处死6只大鼠，处死前测24小时尿蛋白定量，处死后免疫组织化学染色观察ED-1、CoⅣ在肾组织中的表达。
结果：1.正常肾组织ED-1有少量表达，模型组的表达均显著增高，Cs-4组各时间点与相应模型组比均显著降低。
2.正常肾组织CoⅣ有少量表达，模型组的表达均显著增高，Cs-4组各时间点与相应模型组比均显著降低。
结论：Cs-4可能是通过减少单核/巨噬细胞在肾组织中的浸润，在早期抑制肾组织炎症反应，减轻肾脏细胞外基质的积聚，进而对延缓肾脏纤维化具有一定的保护作用。
标签：糖尿病；冬虫夏草；ED-1；CoⅣ糖尿病肾病（diabetic nephropathy）是糖尿病常见和严重的慢性并发症之一，在我国的患病率逐年上升，已成为导致终末期肾病（ESRD）的第二大病因[1]。
其发病机制十分复杂，炎性细胞早期在肾组织中的浸润和活化是糖尿病肾病进展的一个重要特点。
冬虫夏草（Cordyceps sinensis），简称虫草（CS），是一种名贵强壮滋补中药。
为麦角菌科真菌冬虫夏草寄生在蝙蝠蛾科昆虫上的子座及其幼虫尸体的复合体。
现代药理学证明，虫草含总量达22.7%的18种氨基酸，有抗氧化、调节免疫、抑菌、抗病毒等多种作用[2]，虫草菌粉（Cs-4）是天然冬虫夏草的Cs-4菌株培养而成，与天然冬虫夏草一样含有多种活性成分，具有双向调节免疫、抗肿瘤、抗衰老等效应，本研究通过用Cs-4早期干预糖尿病肾病大鼠，观察单核/巨噬细胞表面特异性标志抗原（ectodermal dysplasia 1）的浸润情况，探讨Cs-4对糖尿病大鼠的肾脏保护机制。
冬虫夏草对糖尿病大鼠肾组织骨桥蛋白表达的影响_崔京男
第28卷 第12期2010年12月中 华 中 医 药 学 刊CH I NESE ARCH I VES O F TRAD I T I O NAL CH I NESE M E D I C I NEVo.l 28N o .12Dec .2010中华中医药学刊冬虫夏草对糖尿病大鼠肾组织骨桥蛋白表达的影响崔京男1,崔海月2(1.延边第二人民医院内分泌科,吉林延吉133000;2.延边大学中医学院,吉林延吉133000)摘 要:目的:探讨冬虫夏草对糖尿病大鼠肾组织中骨桥蛋白(O PN )表达的影响。
方法:将W ist a r 大鼠建成链脲佐菌素诱导的糖尿病模型。
设对照组(VH 组);糖尿病肾病组(DN 组);冬虫夏草治疗组(CS 组)。
16周后观察各组大鼠血糖、血肌酐、24h 尿蛋白排泄量、肾组织血管紧张素(A ng)Ò含量等指标及肾间质纤维化评分,并用免疫组织化学方法和N o rt hern b l o tting 法分别观察肾组织O PN 、单核巨噬细胞表面特异性标志抗原(ED -1)的表达及OPNmRNA 的活性。
结果:冬虫夏草能降低血糖、血肌酐、24h 尿蛋白排泄量、肾组织A ng Ò含量,减轻肾间质纤维化,减少肾组织O PN 的表达、OPNmRNA 的活性;同时间质单核巨噬细胞浸润显著减少,且与肾小管骨桥蛋白的表达呈正相关。
结论:冬虫夏草的肾脏保护作用可能与下调肾组织OPNmRNA 活性介导的间质巨噬细胞的浸润有关。
关键词:糖尿病肾病;冬虫夏草;骨桥蛋白中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1673-7717(2010)12-2635-03The Effec ts of Cordyceps on Osteopnti n Expressi o n i n Rats w ith D i a beti c Nephr opathyCU I Jing-nan 1,CU I H ai-yue 2(1.Depart m en ts of endocrinol ogy ,t he Second Peop l e H os p ital ofYanb ian ,Yan ji 133000,Jili n ,C hina ;2.Trad itionalC h i nes e M edical Co ll ege of Yanbian Un i versit y ,Yan ji 133000,J ili n,Ch i na)A bstrac t :O bjecti ve :To observe t he eff ec t of Co rdyceps(CS)on o steoponti n(OPN )expression in ra ts w it h diabe tic neph ropa t hv .M ethods :W istar rats we re random ized into three g roups :VH g roup(sham g roup);DN group(untreated dia-be tic g roup);CS g roup(CS trea ted d i abetic g roup).D i abeti c ra tsw ere i nduced by intrape ritonea l strep t o zotoeia i niec tion (50mg /kg).The changes o f blood g l uco se(BG ),serum creati nine(Sc r),u ri nary pro tein excreti on(ALB -n),t ubu-l o i n t e rstiti a l fi b rosis sco re(TFS),rena l angio t ensi n(A ng )Òwe re eva l uated a fte r 16w eeks .In additi on ,i mmunohisto-chem ical m ethod and N orthe rn b l o tti ng ana l y sis w ere used to de t ec t O PN i m m unoreac tiv it y,ED 1-positi ve mono cy te /mac rophage and O PN mRNA expression .R esults :CS significan tl y decreased B G,Scr ,A IB -n ,TFS ,leve ls o fA ng Ò.CS cou l d i nhi b it ED 1-positive ce ll i n filtrati on ,acco m panied w it h down -regulati on of OPN i mm uno reac tivit y and O PN -m RNA exp ression .Conclus i on :CS cou l d anenuate diabe tic nephropathy ,and t h is may be a ssocia t ed w ith reducing m ono-cyte /m acrophage i nfiltrati on induced by OPN in rena.lK ey w ords :diabe tic neph ropa t hy ;Cordyceps ;osteopontin 收稿日期:2010-06-28作者简介:崔京男(1977-),男(朝鲜族),吉林延吉人,主治医师,硕士,研究方向:糖尿病的基础与临床治疗学。
冬虫夏草菌粉对糖尿病大鼠对比剂肾损伤的影响
冬虫夏草菌粉对糖尿病大鼠对比剂肾损伤的影响许蔚;赵凯;高巧营;宗春辉;高晟【摘要】目的观察冬虫夏草菌粉对糖尿病大鼠对比剂肾病的影响,探讨其可能的肾保护机制.方法将100只雄性SD大鼠腹腔注射链脲佐菌素(60 mg/kg)制备成糖尿病模型,造模成功大鼠84只,随机分为对照组(N组),对比剂肾病组(M组),冬虫夏草干预组(C组),普罗布考干预组(P组,阳性对照组)4组.糖尿病造模饲养9周后,C组大鼠给予冬虫夏草菌粉(3 g/kg/d)灌胃,P组给予普罗布考(500 mg/kg)灌胃,其余各组给予等量的生理盐水灌胃,连续7天;第8天经尾静脉注射碘克沙醇注射液(2.0g iodine/kg)制备CIN模型,于注射对比剂前及注射24 h后,血标本检测Scr、BUN;尿标本检测NGAL、KIM-1.开腹后采集双侧肾脏,取左肾用于病理;右肾用于Western blotting检测抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白在肾内的表达量变化水平.结果①与M组相比,C、P组BUN、Scr均明显减低(P均<0.05).②与M组比较,C、P组肾脏Bax、caspase-3表达水平降低,Bcl-2表达升高(P均<0.05).结论冬虫夏草可减轻糖尿病大鼠CIN的早期肾脏损伤,其机制可能与下调Bax、caspase-3表达,上调Bcl-2/Bax比值,抗细胞凋亡有关,且效果与普罗布考相当.【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2018(022)012【总页数】5页(P2136-2140)【关键词】冬虫夏草;对比剂肾病;糖尿病大鼠;细胞凋亡【作者】许蔚;赵凯;高巧营;宗春辉;高晟【作者单位】天津市南开医院心内一科,天津 300100;天津中医药大学研究生院,天津 300193;天津市南开医院心内一科,天津 300100;天津市南开医院中西医结合急腹症研究所,天津 300100;天津市南开医院中西医结合急腹症研究所,天津 300100;天津市南开医院心内一科,天津 300100【正文语种】中文【中图分类】R587随着冠状动脉介入诊疗技术的广泛应用和普遍发展，介入治疗逐渐成为冠心病患者主要的治疗手段，对比剂使用频率的增加促使对比剂肾病(contrast induced nephropathy，CIN)的发生率呈上升趋势，越来越受到临床医师的重视。
冬虫夏草制剂治疗糖尿病肾病的作用机制研究进展
冬虫夏草制剂治疗糖尿病肾病的作用机制研究进展作者：施海涛王雪峰董春玲潘淑杰国春玲于海涛来源：《健康必读·下旬刊》2011年第09期【中图分类号】R97 【文献标识码】A 【文章编号】1672－3783(2011)09－0332－01【摘要】冬虫夏草制剂可用于治疗糖尿病肾病，具体作用机制包括它能够降低肾小球高滤过，减轻肾小球细胞外基质积聚，提高SOD水平、清除自由基,改善肾脏细胞外基质蛋白代谢、抑制糖尿病肾病细胞凋亡的发生等密切相关【关键词】冬虫夏草，糖尿病肾病，发病机制。
据统计分析糖尿病发病呈显著上升趋势，糖尿病肾病 ( D N ) 已成为导致终末肾衰竭的最主要疾病。
糖尿病肾病的发生、发展是受多种因素影响如：高血糖、高血压、多种细胞因子的异常表达及影响，以及遗传等多因素相互作用。
微量白蛋白尿被认为是临床诊断糖尿病肾病的早期主要线索 ,早期干预糖尿病肾病对延缓DN进展具有重要作用，如不采取干预治疗，90％糖尿病肾病患者将发展为临床肾病，近年来临床应用冬虫夏草治疗糖尿病肾病。
在西药常规治疗的同时,加用虫草菌发酵制剂治疗30例，结果尿白蛋白定量、血尿素氮均较治疗前显著下降。
冬虫夏草治疗 D N的可能机制如下：1 降低肾小球高滤过冬虫夏草制剂能减轻早期糖尿病肾病的高滤过，在糖尿病肾病发生机制中，持续的高滤过使肾小球滤过膜通透性增加，大分子在系膜区积聚，加速小球硬化。
实验研究表明［1］，虫草菌丝提取物能减轻肾小球内压力，降低肾小球跨壁毛细血管静水压，从而减轻肾小球高滤过，阻止其向肾小球硬化的发展。
2 减轻肾小球细胞外基质积聚过多的葡萄糖集聚在肾组织内是引起 D N的根本原因，而高血糖可经蛋白质非酶糖化、甘油二酯-蛋白激酶 C通路及多元酵通路激活等环节产生早产物和晚期糖基化终末产物，激活丝裂原活化蛋激酶和核转录因子，使T G F –β1基因的表达明显增强，引发细胞外基质积聚［2,3］。
实验结果表明，给予冬虫夏草后 DN大鼠肾组织中 T G F-β1 mR NA含量及纤维化评分降低，且呈剂量相关性，提示冬虫夏草可抑制 D N大鼠肾组织中T G F-β1 基因表达，进而阻止肾脏纤维化。
冬虫夏草提取物对模型大鼠血糖及氧化应激的影响
冬虫夏草提取物对模型大鼠血糖及氧化应激的影响目的观察冬虫夏草提取物（CSE）对链脲菌素（Streptozotocin，STZ）诱导的糖尿病模型大鼠血糖、氧自由基及一氧化氮（NO）、一氧化氮合酶（NOS）的影响，初步探讨其可能的作用机制。
方法采用STZ腹腔一次注射法（60 mg/kg）建立糖尿病大鼠模型。
将成功模型随机分为模型组、二甲双胍组（0.2 g/kg）和CSE（0.5、1.0、1.5 g/kg）组，每组10只。
各给药组连续灌肠给药8周，模型组与对照组给予等容量的蒸馏水。
第8周末测定空腹血糖（FBG）及糖化血清蛋白（GSP）；末次给药24 h后，腹主动脉取血，采用化学比色法分别检测血清和肝脏中的超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性及丙二醛（MDA）含量变化，检测血清中NO、总一氧化氮合酶（T-NOS）、诱生型一氧化氮合酶（iNOS）和结构型一氧化氮合酶（cNOS）的含量。
结果CSE（1.0、1.5 g/kg）组能够降低糖尿病大鼠FBG（P＜0.05）和GSP（P＜0.05）；CSE各剂量组均提高糖尿病大鼠血清和肝脏的SOD和GSH-Px水平（P＜0.05），降低MDA 含量（P＜0.05）；与模型组比较，CSE（1.0、1.5 g/kg）组血清NO、T-NOS和iNOS 含量均明显下降（P＜0.05），cNOS含量无明显变化（P>0.05）。
结论CSE可以降低STZ诱导的糖尿病大鼠的血糖，改善糖尿病大鼠体内异常的氧化应激水平，降低血清NO含量可能是通过抑制iNOS的表达实现的。
Abstract：Objective To investigate the effects of Cordyceps Sinensis extract （CSE）on blood sugar，oxygen free radicals，NO and NOS in streptozocin （STZ）-induced diabetic rats，and explore its possible mechanism. Methods The rats model of diabetes were established by injecting STZ （60 mg/kg）into abdominal cavity. Fifty model rats were randomly divided into 5 groups （n=10）：diabetic model，CSE （0.5， 1.0， 1.5 g/kg）and melbine （0.2 g/kg）group. All administration group were given drugs by clyster for 8 weeks，model group and control group were given distilled water of the same volume. After 8 weeks，FBG，GSP，SOD，GSH-Px and MDA levels in blood serum and liver were determined. T-NOS，iNOS and cNOS in blood serum were assayed. Results FBG and GSP levels of CSE （1.0，1.5 g/kg）group reduced. SOD and GSH-Px level of three dose group of CSE increased and MDA content in serum and liver of diabetic rats lowered. Compared with model group，NO，T-NOS and iNOS levels were markedly decreased in CSE （1.0，1.5 g/kg）group，but cNOS did not changed significantly. Conclusions CSE can lower FBG and change abnormal levels of oxidative stress in diabetic rats induced by STZ. Decreased level of NO content may be related with inhibition of iNOS activity.Key words：Cordyceps Sinensis extract；diabetes mellitus rats；oxidative stress；blood sugar糖尿病患者体内存在着明显的氧化应激现象，有人推测糖尿病的发生发展与体内氧化应激的水平密切相关[1]。
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・论著・冬虫夏草对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞IL K表达的影响金永东 宁建平3 张义雄 李文星(中南大学湘雅医院肾内科,湖南 长沙 410008) [摘要]【目的】观察糖尿病大鼠肾小管上皮细胞整合素连接激酶(IL K)的表达及冬虫夏草对其表达的影响。
【方法】雄性Wistar大鼠随机分为3组:正常对照组(N组,n=12)、糖尿病模型组(D组,n=12)、糖尿病冬虫夏草干预组[C组,n=12,冬虫夏草1000mg/(kg・d)灌胃]。
成模后第8周末及16周末各组分别处死6只大鼠,测定24h尿蛋白排泄量、血肌酐;H E及MASSON染色法观察肾脏病理改变;免疫组织化学法检测IL K、E钙粘蛋白(E2cad)、α平滑肌肌动蛋白(α2SMA)及转化生长因子β1(T GF2β1)的表达。
【结果】①与N组比较,D组大鼠肾小管间质损伤指数、肾间质胶原面积明显增加(P<0.01)。
②D组大鼠肾小管上皮细胞E2cad阳性表达显著低于N组,T GF2β1、IL K和α2SMA阳性表达均显著高于N组;E2cad表达和T GF2β1表达呈负相关(rs=-0.60,P<0.05);IL K、α2SMA表达和T GF2β1表达呈正相关(rs=0.88,P<0.01;rs=0.91,P<0.05)。
③C组大鼠肾小管间质损伤指数、肾间质胶原面积较D组明显减弱,其肾小管上皮细胞的E2cad的表达较D组明显增加,T GF2β1、IL K和α2SMA表达较D组均明显减弱(P<0.01)。
【结论】冬虫夏草能通过下调IL K表达发挥肾脏保护作用。
[关键词] 冬虫夏草/治疗应用; 糖尿病/中医药疗法; 蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶/生物合成; 肾小管/细胞学; 大鼠E ffects of Cordyceps Sinensis on Expression of I L K in Kidney of Diabetic R ats J I NYong2Dong, N I N G J ian2Ping, Z HA N G Yi2X iong,et al(Department of N e p hrolog y,Xiang y aHos pital of the Cent ral S outh Universit y,Changsha,410008,China) [Abstract]【Objective】To study the effect and mechanism of Cordyceps sinensis on the process of tubularepithelial2mesenchymal transformation in kidney of diabetic rats.【Methods】Wistar male rats were randomlyassigned to3groups:control group(N group,n=12),diabetic group(D group,n=12),Cordycep s sinensistreatment group(C group,n=12).The rats in Cordycep s sinensis treatment group were treated with daily in2tragastric administration of1000mg/(kg・d)of Cordyceps sinensis after the models were successf ully estab2lished.Six rats of each group were killed respectively at8and16weeks after experiment.The excretion of uri2nary protein and serum creatine were measured.Renal histological changes were observed by H E and MAS2SON staining.Immunohistochemistry was performed to investigate the expressionS of T GF2β1,IL K,E2cad2herin andα2SMA in kidney.【Results】①Compared with the control group,the tubulointerstitial injury and theaccumulation of extracellular matrix protein in diabetic models were obvious(P<0.01);②Compared withthe control group,the expression of E2cad was decreased significantly and the expressions of T GF2β1,IL K andα2SMA were increased significantly in diabetic group.E2cad was negatively correlate to T GF2β(rs=-0.60,1P<0.05),and IL K andα2SMA were positively correlate to T GF2β1(rs=0.88,P<0.01;rs=0.91,P<0.05);③In comparison with diabetic group,Cordycep s sinensis could up2regulate the expression of E2cad anddown2regulate the expressions of T GF2β1,IL K andα2SMA in renal tubular epithelial cells(P<0.01).【Con2clusion】Cordyceps sinensis could inhibit tubular epithelial2mesenchymal transformation(EM T),protect kidneyby ameliorating interstitial fibrosis in diabetic rats.The mechanism may depend on downregulating the expres2sions of T GF2β1and IL K. [K ey w ords] cordycep s sinensis/TU; diabetes mellitus/ZH; protein2serine2threonine kinases/BI; kidney tubules/C Y; rats[中图分类号] R587.1 [文献标识码] A [文章编号] 167127171(2008)06210222043通讯作者,E2mail:ningjp632@ 整合素连接激酶(ingeglin2linked kinase,IL K)是细胞内丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,是一种新发现的促纤维化因子。
近年研究表明,在糖尿病肾病和梗阻性肾病的大鼠模型中,IL K在肾小管上皮细胞中高表达,参与肾小管间质损伤过程[123]。
冬虫夏草(Cordcep s sinensis)是我国传统的名贵中药。
有研究表明,冬虫夏草对慢性肾脏病具有肾脏保护作用[4],其机制尚在探索中。
本实验应用糖尿病肾病模型,动态观察糖尿病大鼠肾小管上皮细胞IL K表达及冬虫夏草对其表达的影响,初步探讨冬虫夏草治疗糖尿病肾病的新机制。
1 材料与方法1.1 实验动物与分组 36只雄性Wistar大鼠随机分为对照组(N组,n=12)、糖尿病模型组(D组,n =12)和糖尿病冬虫夏草干预组(C组,n=12)。
D 组和C组大鼠给予腹腔内一次注射链脲佐菌素(STZ)55mg/kg诱导糖尿病模型。
C组大鼠于糖尿病模型成功后每日给予冬虫夏草1000mg/kg一次灌胃,D组和N组给予等量羟基纤维素钠溶液灌胃。
监测血糖,控制血糖在16.7～27.0mmol/L之间。
各组于成模后第8周末及16周末分别处死6只大鼠,处死前,用代谢笼收集大鼠24h尿,双缩脲法测定24h尿蛋白排泄量;心脏采血用终点酶法测血清肌酐(SCr);取左肾测定左肾体重比(L KW/ BW T),取左肾称重后用10%中性福尔马林固定,石蜡包埋,待切片用于H E染色、Masson染色及免疫组化染色。
1.2 肾组织病理检查 肾脏组织进行H E、MAS2 SON染色,按以下方法评估肾小管损害程度及肾间质纤维化程度:H E染色每张切片低倍镜下选取5个皮质区视野,单盲依序观察左上、右上、左下、右下及中间视野,按文献[3]介绍的8项标准评分,计算平均值,作为该标本肾小管间质损伤指数,以观察肾小管损害程度。
Masso n切片每张观察10个互不重叠肾间质视野(×400),应用Image2p roplus图像分析系统测定每个视野胶原绿染区面积与视野面积比,取其平均值,以反映肾间质纤维化程度。
1.3 免疫组化染色 采用PV系列法。
4μm石蜡切片脱蜡至水,以3%H2O2去离子水孵育30min,以阻断内源性过氧化物酶。
用0.01M的枸橼酸缓冲液浸泡玻片,T GF2β1、E2Cad进行微波抗原热修复,IL K、α2SMA进行高压锅热修复,然后待其自然冷却。
分别滴加小鼠抗大鼠E2cad单克隆抗体(美国Santa Cruz Biotechnology公司),兔抗大鼠T GF2β1(美国Santa Cruz Biotechnology公司)、IL K(美国Stressgen Biotechnologies公司)及α2SMA(美国abcam公司)多克隆抗体,4℃孵育过夜。
分别滴加辣根酶标记羊抗小鼠及羊抗兔工作液(PV26001、PV26002二步法免疫组化检测试剂盒,北京中杉金桥生物技术有限公司)。
应用DAB溶液(北京中杉金桥生物技术有限公司)显色。
苏木素复染。
常规脱水,透明,封片。
均以PBS代替一抗作阴性对照。
阳性着色呈棕黄色、颗粒状分布于胞浆内。
随机于肾皮质区采取5个不连续、不包含肾小球和动脉的肾小管视(×200),用Image2proplus图像分析系统测定每个视野肾小管上皮细胞阳性表达面积与视野面积的比值,取其平均值。
1.4 统计学分析 实验数据采用x±s表示,各组间比较采用单因素方差分析(One2way ANOVA),两变量相关分析采用Spearman直线相关分析。