地中海贫血基因检测的临床应用
血红蛋白电泳联合地中海贫血基因检测在地中海贫血早期诊断中的应用价值及准确性分析
CHINESE COMMUNITY DOCTORS 地中海贫血是一种隐性基因遗传疾病，又称之为珠蛋白生成障碍性贫血、海洋性贫血，具有危害严重、发病率高、分布范围广等特点，早期可因为遗传基因缺陷导致血红蛋白肽链的完全受抑制或合成部分受抑制，进而引起病理状态或贫血状态，若得不到及时有效治疗，可严重影响日后生活质量和生命安全。
为了尽早治疗，还需注重早期诊断工作[1]。
目前诊断正确率较高的一项技术为基因检测，虽具有较高诊断价值，但价格昂贵、操作繁琐，且对设备要求较高，导致难以广泛开展，随着相关研究增多，临床学者发现血红蛋白电泳分析可发挥一定作用，包含毛细管电泳法、醋酸纤维薄膜电泳法、琼脂糖凝胶电泳法，可更好地发现机体异常现象[2]。
而本文进一步探索血红蛋白电泳联合地中海贫血基因检测在地中海贫血中的应用价值，现报告如下。
资料与方法选取2018年3月-2019年10月健康体检者85例，作为对照组；选取同期疑似地中海贫血患者85例，作为观察组。
观察组男44例，女41例；年龄35～74岁，平均(52.49±13.54)岁；体质量52～68kg，平均(60.48±5.49)kg。
对照组男43例，女42例；年龄34～75岁，平均(52.28±13.31)岁；体质量51～69kg，平均(60.55±5.67)kg。
两组一般资料比较，差异无统计学意义(P ＞0.05)，具有可比性。
纳入标准：①各项资料齐全；②本研究经伦理委员会批准。
排除标准：①镰状细胞贫血、遗传性球形细胞增多症、自身免疫性溶血性贫血、小细胞低色素性贫血等其他类型溶血性贫血者；②其他系统性疾病者；③存在抵触情绪。
方法：(1)血红蛋白电泳：抽取受检者5mL 空腹静脉血，进行乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝后保持5000r/min 进行离心，维持5min，离心半径13.5cm，随后采用10倍体积的0.9%氯化钠溶液进行洗涤，反复进行3次血浆祛除，完成后取10μL 红细胞加入溶血液(130μL)中，震荡混匀10s 后保持5min 的室温培育。
基因检测技术在地中海贫血诊断中的意义
于基因的点突变，少数为基因缺失；α 珠蛋白生成障碍性贫
二分之一的机会成为轻型贫血患者，四分之一的机会成为中
血（ α 地中海贫血） 。 大多数 α 珠蛋白生成障碍性贫血（ 地
型或重型贫血患者。 鉴于本病缺少根治的方法，临床中、重
病理相当复杂，已知有 １００ 种以上的 β 基因突变，主要是由
轻型或轻型地贫患者，子女将有四分之一的机会完全正常、
血胎儿的价值分析［ Ｊ］ ．中国当代医药，２０１５（１０） ：４－６．
［５］ ．唐爽．绵阳地区孕前人群地中海贫血基因型分布情
况［ Ｊ］ ．医药前沿，２０１８（２６） ：３９－４０．
作者简介：
朱林，三台县人民医院。
但输血治疗后的血液学检查会与实际结果有所不同。 所以
进行遗传学和分子生物学检查才能最后确诊。 遗传学检查
可确定为纯合子、杂合子以及双重杂合子等。
·１７４·
参考文献：
［１］ 陈建文，叶菀华，李颖清． 彩色多普勒在早孕期诊断
重度 α 地中海贫血胎儿中的应用［ Ｊ］ ． 中国继续医学教育，
２０１７（９） ：８６－８９．
列一种或数种方法给予治疗。 输血和去铁治疗，在目前仍是
散发病例，北方则少见。 它的医学专用名称是珠蛋白生成障
重要治疗方法之一。
碍性贫血又称海洋性贫血，是一组遗传性溶血性贫血疾病。
地中海贫血由于遗传的基因缺陷致使血红蛋白中一种
或一种以上珠蛋白链合成缺如或不足所导致的贫血或病理
（１） 注意休息和营养，积极预防感染，适当补充叶酸和维
基因检测技术在地中海贫血诊断中的意义
朱 林
地中海贫血病例广泛分布于世界许多地区，东南亚即为
轻型地贫无需特殊治疗。 中间型和重型地贫应采取下
β-地中海贫血基因检测(PCR-反向点杂交法)
pcr扩增
DNA提取
利用特定的试剂从血细胞中提取出DNA。
pcr扩增
使用聚合酶链式反应（PCR）技术对DNA进行扩增，使其数量增加，便于后续 的检测。反向点Fra bibliotek交制备探针
将目标基因序列设计成特定的探针，并固定在尼龙膜上。
杂交反应
将扩增后的DNA与固定在膜上的探针进行杂交，通过碱基互 补配对原则，将目标基因序列特异性地结合在膜上。
纳米技术
利用纳米材料和纳米技术提高检测的灵敏度和特异性，降 低检测误差。
要点二
基因组编辑技术
利用CRISPR-Cas9等基因组编辑技术，对β-地中海贫血基因 进行精确编辑和修复，从根本上治疗地中海贫血。
临床应用的拓展
早期筛查
将β-地中海贫血基因检测纳入新生儿筛查 计划，实现早期发现和干预，降低疾病对 患儿的影响。
β-地中海贫血基因检测(pcr反向点杂交法)
• β-地中海贫血基因检测介绍 • pcr-反向点杂交法介绍 • β-地中海贫血基因检测(pcr-反向点
杂交法)流程 • β-地中海贫血基因检测(pcr-反向点
杂交法)的临床意义
• β-地中海贫血基因检测(pcr-反向点 杂交法)的未来发展
01
β-地中海贫血基因检测介绍
03
耗时长：需要进行PCR扩增和杂交反应， 整个过程需要一定时间。
04
对实验条件要求高：需要严格控制实验条 件，避免交叉污染和假阳性结果。
03
β-地中海贫血基因检测(pcr-反 向点杂交法)流程
样本采集和处理
血液样本采集
从患者静脉抽取适量血液，用于 后续的基因检测。
样本处理
将采集的血液进行离心，分离出 血浆和血细胞，保留血细胞用于 后续的DNA提取。
地中海贫血基因检测临床应用
流行情况
疾病概述
第一章
省份
携带率（%）
α-地贫
β-地贫
合计
广西
17.6
6.4
24.0
广东
13.3
4.5
16.8
云南
9.8
7.3
17.1
海南
12.7
2.7
15.4
贵州
4.2
5.1
9.3
香港
7.3
1.2
8.5
重庆
5.2
2.0
7.2
江西
3.5
2.9
6.4
地中海贫血基因检测临床应用
C O N T E N T S
目 录
地中海贫血疾病概述地中海贫血的分类及临床表现地中海贫血的筛查与诊断地中海贫血的遗传咨询与产前诊断
SECTION TITLE
疾病概述
01
地中海贫血
地中海贫血是由于珠蛋白基因缺失或突变导致血红蛋白中的某种珠蛋白链合成障碍，造成α链或β链合成失去平衡而导致的溶血性贫血。是一种典型的血红蛋白病。根据合成障碍的肽链不同，可将地中海贫血分为α-地贫和β-地贫。
疾病分类
第二章
α-地贫
a2
a1
a2
a1
1
Exon 1 Exon 2 Exon 3
CD125 (CTG>CCG or Leu>Pro )
CD142 (TAA>CAA or Thr>Gln)
CD122(CAC>CAG,or His>Gln)
鼓励县、市妇保院申请试点单位试点单位需具备血红蛋白电泳初筛能力试点单位筛查及诊断费用由省、市、县财政统一拨款
血红蛋白电泳及地中海贫血基因联合检测对地中海贫血诊断价值
血红蛋白电泳及地中海贫血基因联合检测对地中海贫血诊断价值1. 引言1.1 研究背景地中海贫血，又称地中海贫血症，是一种常见的遗传性血液疾病。
在地中海地区及其周边地区，地中海贫血患病率相对较高，因此被称为地中海贫血。
地中海贫血主要包括地中海贫血型、地中海贫血β地中海贫血及δ地中海贫血三种类型。
地中海贫血还包括地中海贫血E型和地中海贫血H型。
地中海贫血是由基因突变引起的血红蛋白合成障碍所致，患者通常表现为贫血、溶血、脾大等症状。
目前，常规的地中海贫血诊断方法主要包括临床表现、红细胞形态学、血清学检测和地中海贫血基因检测等方法。
单一的诊断方法存在一定局限性，对于一些特殊类型的地中海贫血可能无法准确诊断。
血红蛋白电泳及地中海贫血基因联合检测成为了一种新的诊断方法，通过综合利用血红蛋白电泳和地中海贫血基因检测的优势，可以提高地中海贫血的诊断准确性和敏感性。
本研究旨在探讨血红蛋白电泳及地中海贫血基因联合检测对地中海贫血的诊断价值，为临床地中海贫血的早期诊断和治疗提供参考依据。
1.2 研究目的地中海贫血是一种遗传性血液病，严重影响患者的健康和生活质量。
本研究旨在探讨血红蛋白电泳及地中海贫血基因联合检测对地中海贫血的诊断价值，深入了解这一联合检测方法在临床实践中的应用情况，为地中海贫血的早期诊断和个体化治疗提供更准确的依据。
通过探究血红蛋白电泳和基因检测的原理与方法，我们希望能够揭示这两种检测技术的互补作用和优势，为临床医生提供更全面、准确的诊断结果。
我们还将研究地中海贫血的临床特征，探讨血红蛋白电泳与地中海贫血基因联合检测在诊断中的独特优势，为地中海贫血患者的个体化治疗和预防提供可靠的依据，希望通过本研究为地中海贫血的诊断和治疗进一步提升水平，为患者带来更好的医疗体验和生活质量。
1.3 研究意义地中海贫血是一种遗传性疾病，临床上表现为贫血、黄疸、脾大等症状，严重影响患者的生活质量。
随着基因检测技术的不断发展，血红蛋白电泳及地中海贫血基因检测联合应用在地中海贫血的诊断中具有重要意义。
地中海贫血基因检测研究进展
地中海贫血基因检测研究进展施建刚广西壮族自治区贵港市人民医院检验科，广西贵港 537100[摘要] 地中海贫血在临床上也称为“海洋性贫血”，是一组遗传性溶血性贫血疾病。
根据流行病学的相关调查数据显示，地中海贫血的高发区域为东南亚，在我国多分布于两广、四川等地。
目前，地中海贫血基因检测是预防地中海贫血胎儿活产的主要检测方法，也是诊断出地中海贫血疾病的重要手段。
而随着各类检测技术的快速发展，地中海贫血基因检测技术质量也在不断提高，逐渐应用于临床诊断中。
[关键词] 地中海贫血；基因；检测；进展[中图分类号] R556 [文献标识码] A [文章编号] 2095-0616（2020）23-50-04Research progress of thalassemia gene detectionSHI Jian'gangDepartment of Clinical Laboratory, Guigang City People's Hospital, Guangxi, Guigang 537100, China[Abstract] Thalassemia, also known as 'marine anemia', is a group of hereditary hemolytic anemia diseases. According to epidemiological survey data, the high incidence area of thalassemia is Southeast Asia, and it is mostly distributed in Guangdong, Guangxi and Sichuan, etc. of China. At present, thalassemia gene detection is the main detection method to prevent live birth of thalassemia fetus, and it is also an important method to diagnose thalassemia disease. With the rapid development of various detection technologies, the quality of thalassemia gene detection technology is also constantly improving and gradually applied to clinical diagnosis.[Key words] Thalassemia; Gene; Detection; Progress[基金项目] 广西壮族自治区卫生健康委员会科研课题（Z20190320）。
血红蛋白电泳及地中海贫血基因联合检测对地中海贫血诊断价值
血红蛋白电泳及地中海贫血基因联合检测对地中海贫血诊断价值地中海贫血是一种常见的遗传性血液病，主要发病于地中海沿岸地区。
这种疾病的特点是患者的红细胞中存在异常的血红蛋白，导致贫血等症状。
对于地中海贫血的确诊，血红蛋白电泳及地中海贫血基因联合检测被认为是一种非常有价值的诊断方法。
本文将介绍血红蛋白电泳及地中海贫血基因联合检测的原理、操作流程及其对地中海贫血诊断的价值。
血红蛋白是一种由蛋白质和铁组成的红色血液色素，它可以将氧气输送到人体各个组织和细胞中。
血红蛋白的结构是由四个亚基组成，其中包括两个α-链和两个β-链。
在地中海贫血患者中，由于这些链的基因突变，导致血红蛋白的正常结构发生变化，进而导致患者出现贫血等症状。
血红蛋白电泳是一种通过电泳法对血红蛋白的性质进行检测的方法。
其基本原理是根据血红蛋白在不同电场下的迁移速度不同，从而分离出不同类型的血红蛋白。
通过血红蛋白电泳检测，可以清晰地观察到患者血液中异常的血红蛋白类型，进而帮助医生进行地中海贫血的初步诊断。
除了血红蛋白电泳外，地中海贫血基因联合检测也是一种重要的诊断手段。
在地中海贫血患者中，常见的基因突变类型包括α-地中海贫血和β-地中海贫血。
通过对患者进行基因检测，可以直接发现患者体内的血红蛋白基因是否存在异常，从而确定患者是否患有地中海贫血。
这种基因检测方法可以帮助医生更加准确地进行地中海贫血的诊断，尤其是在一些症状不典型的患者中具有很大的价值。
需要注意的是，血红蛋白电泳及地中海贫血基因联合检测在一些特殊情况下可能会产生假阳性或假阴性的结果。
在进行这种检测时，需要结合临床症状和其他相关检查结果进行综合分析，以减少诊断错误的可能性。
由于这种检测方法的操作复杂性，需要专业的医疗人员进行操作，同时还需要配备相应的设备和试剂。
在开展这种检测时，需要具备一定的技术和设备条件，以保证检测结果的准确性和可靠性。
孕检地中海贫血3385例筛查结果分析及临床意义
轻型为 Ｈ ｂ Ａ ２介 于 ３ ． ５ ％～ ８ ％， Ｈｂ Ｆ正 常 或 轻 度增 加
地 贫基 因携带 率为 ８ ． ５ ３ ％， Ｂ 一 地 贫 基 因携 带 率 为 红蛋 白带 。若 Ｈ ｂ Ａ ２ ≤２ ． ０ ％， 或 出现 异常血 红 蛋 白带 ２ ． ５ ４ ％ｔ ” 。一方 面 由于 血红 蛋 白的珠 蛋 白肽 链合 成 障
碍， 另 一 方 面 由 于合 成 速率 降低 致 使 血 红 蛋 白的成 ３ ． ５ ％或 出现 异 常血红 蛋 白带 （ Ｈ ｂ Ｆ ＞ ２ ． Ｏ ％） ， 则判 为 Ｂ 一
（ 不超过 ５ ％） ； 中间 型为 Ｈｂ Ｆ介 于 ５ ％～ ３ ０ ％； 重 型 为 Ｈ ｂ Ｆ介 于 ３ ０ ％一 ９ ０ ％。 若 出现 其他 异 常血红 蛋 白区带 则判 为异 常 血红 蛋 白病阁 。 １ ． ３基 因诊 断 基 因诊 断是 地贫 诊 断 的金 标 准 ， 对 于 初 筛 可疑 阳性 标 本进 行 基 因检 测 ． 用 美 国应 用 生 物
布 于世 界 多地 ， 东 南亚 是 高发 地 之一 。我 国 以广 东 、 广西 、 海南 等 沿 海 地 区人 群 携 带率 最 高 ， 广东省 仪 一 的Ｇ ２ ６全 自动琼 脂糖 电泳 仪 。地 贫诊 断 Ｈｂ电泳标 准： 成人男 女 Ｈ ｂ Ａ ２为 ２ ． Ｏ ％～ ３ ． ５ ％， 并 且未 出现异常血 （ Ｈ ｂ Ｈ、 Ｈ ｂ Ｂ ａ ｒ ｔ ｓ ） ， 判为 ０ ｌ 地贫表 型 阳性 ； 若 Ｈ ｂ Ａ ２ ＞ 地贫 表 型 阳性 。Ｂ 一 地 贫 按 病情 轻 重 可 分 如下 ３型 ：
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.
地区
地贫
携带率(%) β地贫 合计
广东 广西 四川
8.53 14.95
1.92
2.54 6.78 2.18
11.07 21.73
4.1
台湾
4.20
1.10
5.3
香港
5.02
3.41
8.43
Xu, et al. J Clin Pathol 2004, 57:517-22.
Cai, et al. Chi J Epidemiol 2002,23:281-5.
HbA2、 HbF
HbA2、 HbF
重型
中重度贫血
HbE、HbF
重型
中重度贫血
HbE、1H4bF
β地中海贫血血红蛋白组成
表现型 正常 静止型携带者 β THAL 轻型 β THAL 中间型 β THAL 重型
Hb A 正常 正常 降低 降低 降低
Hb A2 正常
Hb F 正常
.
正常
正常
正常或增加 正常或增加
16
.
地贫患者的困境
➢ 4000元：重型地贫患儿平均每月需4000元的治疗费用以维持生
命。成年人每月的治疗费用接近万元，每年治疗费用至少10万元，每例 重症地贫患儿出生给社会和家庭带来的经济负担高达100-300万元。
➢ 20岁：重型β地贫患儿需要终生输血治疗，平均存活年龄仅10岁左
右，得不有效治疗的重型地贫患儿很难活到20岁。
0.3～0.6 缺失3个或突变 α-/--，ααT/--
阳性
11
缺失4个 --/--
α-地贫血红蛋白比较
.
表型 Hb A Hb Bart’s Hb H
正常人
97-98%
静止型携带者 96-98%
轻型地贫症状 85-95%
Hb H 疾病
下降
0
0-2% (At birth)
2-8% (At birth)
正常或增加 增加
通常增加
增加
15
.
地贫的危害
➢ 轻度地贫患者无特别不良反应 ➢ 中、重度地贫患者有贫血症状，如浑身 无力、 肝脾肿大等，随着年龄增长会越来 越严重。 ➢ 重型α地贫患儿在出生24－48小时之内 死亡，而且产妇因胎儿水肿、大胎盘，极 易导致死产。 ➢ 重型β地贫以及部分中间型α地贫患者在 出生后半年左右出现进行性贫血，只能靠 输血维持生命，多在童年夭折。
点突变，病变基因 不成β肽链
点突变，仍可做成 β肽链
β肽链合成减少， βE肽链合成
β肽链合成减少， βS肽链合成
.
重型
重型或 中间型 重型或 中间型
轻型
轻型
重度贫血
取决于β基因缺失程 度和α基因代偿和度
一般重于β +/β+纯合子
无症状，偶然发现
无症状，偶然发现
HbF 99.6%
HbF、 HbA2
HbF、 HbA2
＜3个月
轻型或标准型 （α地贫1）
儿童，成人
中间型（HbH病 /CS 型HbH病）
儿童，成人
重型HbBart’s 胎儿水肿综合征）
胎儿
贫血程度
无
无或轻度
中度～重度
重度
.
黄疸
无
无
轻度～中度
无或轻度
肝脾肿大 血片RBC： 形态异常
血红蛋白电泳
HbF
无 正常 正常 正常
无或轻度 轻度 正常 正常
轻度～中度
重度
中度～重度
HbH带或伴 HbBart’s HbConstantSpring
正常或轻度减少
重度
大量HbBart’s 伴HbPortland
少量HbH
无
HbH包涵体 α/β
基因诊断
无
1∶1 缺失1个或突变 αα/α-，ααT/αα
无或可有
0.7～0.95 缺失2个或突变 αα/--或αα/αT-
强阳性
6
.
地中海贫血定义及分类
根据珠蛋白肽链基因（简称α基因或β基因）缺失、缺陷或 基因突变和珠蛋白肽链合成障碍的不同，可将地贫分为α型、 β型、δβ型和δ型四种，其中以α型和β型地贫较为常见。
7
人类血红蛋白的合成和演变
.
胚胎期
gower 1- ζ2ε2 gower 2- α2ε2 Portland- ζ2γ2
4
4
.
遗传性血红蛋白病三大类
♪地中海贫血 (地贫)（Thalassemias ）
常见为-地贫 和 -地贫
♪异常血红蛋白病
珠蛋白结构异常，绝大部分没有或有轻度临床诊断
♪遗传性持续性胎儿血红蛋白
珠蛋白的合成不随着胎儿的发育而发生改变，胎儿血 红蛋白持续表达。
5
.
地中海贫血定义及分类
地中海贫血（Thalassemia）简称地贫（Thal），是由于 血红蛋白的珠蛋白肽链基因突变或缺失，使某种珠蛋白肽 链合成障碍而致的一种遗传性慢性溶血性贫血。 血红蛋白分子是由珠蛋白+血红素组成，珠蛋白由两对（4 条）肽链构成。
Xβ Gene
Xβ Gene
13
β地中海贫血的基因型和临床类型
基因型
遗传型
β0/β0
纯合子
β+/β+
纯合子
β0/β+ 双重杂合子
β0/β
杂合子
β+/β
杂合子
β+/βE 双重杂合子
β+/βS 双重杂合子
分子遗传基础
临床类型
临床特点
Hb电泳
无β肽链合成
有少量β肽链合成
等位基因均有病 变，β肽链合成10%
➢ 造血干细胞：根治重型地贫患儿的唯一方法移植造血干细胞。费
2 1
2 1 2
2 1 2 1
2 1 2 1
2 1 2 1
.
血红蛋白正常
静止型： 1个 α缺失或 突变
轻型： 2个α基因 缺失或突 变
中间型（HbH 疾病）：3个 α 基因缺失或 突变
Hb Bart‘s： 3个 α 基 因缺失或 突变
10
α地中海贫血的临床特征
临床特点 发病年龄
静止型 （α地贫2）
.
1 地中海贫血基因检测的临床应用
.
一、地中海贫血
2
地中海贫血的地域分布
.
α-地贫分布
β-地贫分布
➢ 全球有3.5亿人为地中海贫血基因携带者（占总人口的2%） ➢ 中国南方高发地区人群携带率最高可达到24%
3
中国南方地贫基因携带率
在我国，地中海贫血主要在南方广东、广西、海南、四川、 重庆等省市发病率较高，以广西、广东最为严重。
<10% (At birth)
0 0 <2% 5-40%
Hb Bart‘s
0
70-80% (with 20% Hb Portland)
0-20%
12
β地中海贫血及基因型
两个基因正常 :纯合子 β Gene β Gene
一个正常，另一个 :杂合子 不正常
两个基因都不正常 :纯合子
.
β Gene
Xβ Gene
胎儿期
成人
HbF- α2γ2 HbA- α2β2
HbA- α2β2 HbA2- α2δ2 HbF- α2γ2
8
.
地贫血红蛋白的组成
正常成人血红蛋白（Hb）有三种：HbA(α2β2)( 2.5—3.5%)、 HbA2(α2δ2)(96.5-97.5%)、HbF(α2γ2)(0-1.0%)。
9
α地中海贫血及基因型