溶血性链球菌的检验共29页
溶血性链球菌
氏染色阳性，球形或卵圆形，常排列成短链状。
3.3 触酶试验 挑取可疑菌落于洁净的载玻片上，滴加适量3%
过氧化氢溶液，立即产生气泡者为阳性。β型溶血 性链球菌触酶为阴性。
3.4 链激酶试验 吸取草酸钾血浆0.2 mL于0.8 mL灭菌生理盐水中混
2 分离 将增菌液划线接种于哥伦比亚CNA血琼脂平板，
36 ℃±1 ℃厌氧培养18 h～24 h，观察菌落形态。 溶血性链球菌在哥伦比亚CNA血琼脂平板上的典
型菌落形态为灰白色、半透明、光滑、表面突起、 圆形、边缘整齐，并产生β型溶血。 3 鉴定 3.1 分纯培养
挑取可疑菌落分别接种哥伦比亚血琼脂平板和接 种TSB增菌液， 36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。
3.5 杆菌肽敏感试验
取可疑菌纯培养物，在0.5 mL灭菌生理盐水 中混匀，用棉签沾取TSB增菌液均匀涂布于 哥伦比亚血琼脂平板上，用灭菌镊子夹取 杆菌肽纸片，放于琼脂表面，36 ℃±1 ℃培 养18 h～24 h，如出现抑菌圈即为敏感，同 时用已知敏感菌株作为阳性对照。β型溶血 性链球菌为杆菌肽敏感。
3.6 可选择使用生化鉴定试剂盒或生化鉴定 卡对可疑菌落进行鉴定。
结果与报告
综合以上试验结果，报告每25 g（mL）检 样中检出或未检出β型溶血性链球菌
亚血琼脂代替了血琼脂平板； —— 完善了操作步骤； —— 在人血浆的基础上增加了兔血浆和绵羊血浆； —— 增加了规范性附录A。
本标准所代替的历次版本发布情况为： GB 4789.11－1984、 GB/T 4789.11－1994、 GB/T 4789.11－2003。
溶血性链球菌检验程序
Байду номын сангаас报告
溶血性链球菌的检验
(三)生化特性
1、均分解葡萄糖产酸，产酸不产气。
2、对乳糖、甘露醇、水杨苷等的分解因菌株而异。 3、能使牛奶产酸而不凝固，不液化明胶 4、A群菌对杆菌肽敏感 5、一般不分解菊糖，不被胆汁或 1% 去氧胆酸钠所溶解。这两 种特性用来鉴定甲型溶血型链球菌和肺炎球菌。 6、链球菌与葡萄球菌不同，不产生过氧化氢酶。
溶血性链球菌的检验
溶血性链球菌在自然界分布较广，可存在于水、空气、 尘埃、牛奶、粪便及人的咽喉和病灶中，按其在血平板 上溶血能力分类，可分为甲型溶血性链球菌、乙型溶血 性链球菌、丙型溶血性链球菌和亚甲型溶血性链球菌。 与人类疾病有关的大多属于乙型溶血性链球菌，其血清 型90%属于A族链球菌，常可引起皮肤和皮下组织的化脓 性炎症及呼吸道感染，还可通过食品引起猩红热、流行
对氧稳定链球菌溶血素“S”，是一种小分子的糖肽，无抗原 性。对氧稳定，对热和酸敏感。血平板所见透明溶血是由“S” 所引起，能破坏白细胞和血小板，给动物静注可迅速致死。注 射小鼠腹腔，引起肾小管坏死。
2、致热外毒素 曾称红疹毒素或猩红热毒素，是人类猩红热的主要毒性 物质，会引起局部或全身红疹、发热、疼痛、恶心、呕吐、
周身不适。
该毒素是蛋白质，对热稳定，具有抗原性，则产生的毒 素能中和该毒素的活性。但可分为A、B、C三种不同抗原
性的毒素。无交叉保护作用。该毒素还有内毒素样的致热 作用，对细胞或组织有损害作用。
3、透明质酸酶：又称扩散因子，能分解细胞间质的透明 质酸，故能增加细菌的侵袭力，使病菌易在组织中扩散。 4、链激酶：又称链球菌纤维蛋白溶酶，能使血液中纤维
蛋白酶原变成纤维蛋白酶，具有增强细菌在组织中的扩散
作用，该酶耐热，100℃50分钟仍可保持活性。 5、脂磷壁酸（LTA）：与细菌粘附于宿主细胞表面有关， 大多数LAT位于细胞膜和肽聚糖之间，通过肽聚糖孔伸展 至细菌细胞表面，人类口腔粘膜和皮肤上皮细胞、血细胞 等细胞膜上均有LAT的结合位点。
中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验.
中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验1 主题内容与适用范围本标准规定了食品中溶血性链球菌的检验方法。
本标准适用于食品和食物中毒样品中溶血性链球的检验。
2 引用标准GB 4789.28 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3 设备和材料3．1 温箱：36±1℃。
3．2 水浴：36±1℃。
3．3 显微镜。
3．4 离心机。
3．5 试管架。
3．6 灭菌平皿。
3．7 灭菌小试管。
3．8 载玻片。
3．9 灭菌吸管：1 mL、10 mL。
3．10 灭菌镊子。
3．11 均质器。
3．12 酒精灯。
3．13 接种环。
4 培养基和试剂4．1 葡萄糖肉浸液肉汤：按GB 4789.28 中4.1 规定，在肉浸液肉汤内加入1%葡萄糖。
4．2 肉浸液肉汤：按GB 4789.28 中4.1 规定。
4．3 匹克氏肉汤：按GB 4789.28 中4.62 规定。
4．4 血琼脂平板：按GB 4789.28 中4.6 规定。
4．5 人血浆。
4．6 0.25%氯化钙。
4．7 灭菌生理盐水。
4．8 杆菌肽药敏纸片（含 0.04 单位）。
5 检验程序6 操作步骤6．1 样品处理称取 25 g 固体检样；称取25 mL 液体检样，加入 225 mL 灭菌生理盐水，研成匀浆制成混悬液。
6．2 一般培养将上述混悬液吸取 5 mL，接种于 50 mL 葡萄糖肉浸液肉汤；或直接划线接种于血平板，如检样污染严重，可同时按上述量接种匹克氏肉汤，经 36±1℃培养 24 h，挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落，在血平板上分纯，然后观察溶血情况及革兰氏染色，并进行链激酶试验及杆菌肽敏感试验。
6．3 形态与染色本菌呈球形或卵圆形，直径 0.5～1 μm，链状排列，链长短不一，短者4～8个细胞组成，长者 20～30 个，链的长短常与细菌的种类及生长环境有关；液体培养中易呈长链；在固体培养基中常呈短链，不形成芽孢，无鞭毛，不能运动。
溶血性链球菌检验
【GB/T 4789.11—1994】食品卫生微生物学检验溶血性链球菌检验1 主题内容与适用范围本标准规定了食品中溶血性链球菌的检验方法。
本标准适用于食品和食物中毒样品中溶血性链球菌的检验。
2 引用标准GB 4789.28 食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3 设备和材料3.1 温箱：36±1℃。
3.2 水浴：36±1℃。
3.3 显微镜。
3.4 离心机。
3.5 试管架。
3.6 灭菌平皿。
3.7 灭菌小试管。
3.8 载玻片。
3.9 灭菌吸管：1mL、10mL。
3.10 灭菌镊子。
3.11 均质器。
3.12 酒精灯。
3.13 接种环。
4 培养基和试剂4.1 葡萄糖肉浸液肉汤：按GB 4789.28中4.1规定，在肉浸液肉汤内加入1%葡萄糖。
4.2 肉浸液肉汤：按GB 4789.28中4.1规定。
4.3 匹克氏肉汤：按GB 4789.28中4.62规定。
4.4 血琼脂平板：按GB 4789.28中4.6规定。
4.5 人血浆。
4.6 0.25%氯化钙。
4.7 灭菌生理盐水。
4.8 杆菌肽药敏纸片(含0.04单位)。
5 检验程序（图略）6 操作步骤6.1 样品处理称取25g固体检样；称取25mL液体检样，加入225mL灭菌生理盐水，研成匀浆制成混悬液。
6.2 一般培养将上述混悬液吸取5mL，接种于50mL葡萄糖肉浸液肉汤；或直接划线接种于血平板，如检样污染严重，可同时按上述量接种匹克氏肉汤，经36±1℃培养24h，接种血平板，置36±1℃培养24h，挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落，在血平板上分纯，然后观察溶血情况及革兰氏染色，并进行链激酶试验及杆菌肽敏感试验。
6.3 形态与染色本菌呈球形或卵圆形，直径0.5～1μm，链状排列，链长短不一，短者4～8个细胞组成，长者20～30个，链的长短常与细菌的种类及生长环境有关；液体培养中易呈长链；在固体培养基中常呈短链，不形成芽孢，无鞭毛，不能运动。
溶血性链球菌的试验方法
5操作步骤
取样液5 mL加入到50 mL葡萄糖肉汤，35℃±2℃培养24 h。
将培养物划线接种血琼脂平板，35℃±2℃培养24 h观察菌落特征。溶血性链球菌在血平板上为灰白色，半透明或不透明，针尖状突起，表面光滑，边缘整齐，周围有无色透明溶血圈。
挑取典型菌落作涂片革兰氏染色镜检，应为革兰氏阳性，呈链状排列的球菌。镜检符合上述情况，应进行下列试验：
4.2 器具
烧杯（250ml）、量筒（100ml）、三角烧瓶（250ml）、试管、硅胶塞、白金耳、酒精灯、培养皿（φ90mm）、刻度吸管（1ml,5ml，20ml）
4.3 培养基、菌种：
葡萄糖肉汤、血琼脂平板、草酸钾血浆、草酸钾、氯化钙、血平板、染色液（革兰氏染色用）
4.4 器具灭菌：
与样液接触的所有器具（刻度吸管、培养皿等）应按下述方法灭菌：包好后置手提式压力蒸汽消毒器内121℃20分钟高压灭菌，或置于电热恒温鼓风干燥箱内160℃2小时干热灭菌。
9.5．净化工作台操作规程
10．相关记录
11.1. 生物性能检测记录。
编制：
日期：
审核：
日期：
批准：
日期：
溶血性链球菌的测定方法
页次
生效日期
2020/01/02
察一次(一般10 min内可凝固)，待血浆凝固后继续观察并记录溶化时间。如2 h内不溶化，继续放置24 h观察，如凝块全部溶化为阳性，24 h仍不溶化为阴性。
杆菌肽敏感试验：将被检菌菌液涂于血平板上，用灭菌镊子取每片含0.04单位杆菌肽的纸片放在平板表面上，同时以已知阳性菌株作对照，在35℃±2℃下放置18～24 h，有抑菌带者为阳性。
6结果报告
镜检革兰氏阳性链状排列球菌，血平板上呈现溶血圈，链激酶和杆菌肽试验阳性，可报告被检样品检出溶血性链球菌
溶血性链球菌检验
2、食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺炎或畜禽局 部化脓时，其奶和肉尸某些部位污染；
3、熟食制品因包装不善而使食品受到污染。
溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的化脓性炎症、呼 吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以及新生儿败血症、细 菌性心内膜炎、猩红热和风湿热、肾小球肾炎等变态反应。
①急性肾小球肾炎（acute glomerulonephritis）
在咽炎或脓皮病后均可发生，多见于儿童和青少年。 发病机理：Ⅲ型超敏反应；
Ⅱ型超敏反应；
②风湿热（rheumatism，or rheumatosis）
主要在咽炎后有可能发生，临床表现以关节炎、心肌炎为 主。
发病机理：尚未完全清楚，但本病不是链球菌直接侵袭所 致。
(3)血平板上分纯
观察溶血性链球菌在血平板上的菌落特征，灰白色、 半透明或不透明、表面光滑、圆形突起的细小菌落， 以及在菌落周围有2～4mm界限分明、无色透明的溶 血环。
(4) 杆菌肽敏感试验
杆菌肽是一种抗生素，挑取乙型溶血性链球菌液， 涂布于血平板上，用无菌镊子夹取的杆菌肽纸片， 放在上述平板上，置 36±1℃培养18～24小时，如 有抑菌带出现即为阳性。同时用已知阳性菌株作对 照。
根据抗原结构不同分类
根据多糖抗原不同分18群（其中致病菌株多 属于A群）。
各群之间，又按蛋白质抗原不同，分若干 型。如A群—— 分M、T、R…等约100个型
B群——分 4型 C群——分13型
在18个血清型群中,主要致病的血清群
A群：主要对人类致病，如猩红热、丹毒、扁桃腺炎以 及 各种炎症和败血症。对动物致病性不强，但在公共卫生上有 重要性；
溶血性链球菌的检验
细菌培养与鉴定
1
将样本接种于选择性培养基上进行培养，如血 平板、巧克力平板等。
2
根据菌落形态、革兰染色、氧化酶试验等指标 对细菌进行初步鉴定。
3
采用生化试验、血清学试验等方法对细菌进行 进一步鉴定。
血清学试验与结果分析
采用抗链球菌激酶(ASO)等血清学试验检测患者血清中的 抗体水平。
根据抗体滴度及临床诊断标准，对溶血性链球菌感染进行 诊断和分型。
评估疾病风险
通过对溶血性链球菌的检验，可评估疾病的风险程度， 从而为预防和控制疾病提供依据。
指导公共卫生措施
通过对溶血性链球菌的检验，可指导公共卫生措施的实 施，如开展宣传教育、加强消毒隔离等，以预防和控制 疾病的传播。
05
溶血性链球菌检验的未来发展趋势
检测技术的改进与创新
分子生物学技术
随着分子生物学技术的不断发展，基于PCR、基因测序等技术的检测方法将更加灵敏、特 异，有助于更准确地诊断溶血性链球菌感染。
2023
溶血性链球菌的检验
目录
• 溶血性链球菌简介 • 溶血性链球菌的检验方法 • 溶血性链球菌的检验流程 • 溶血性链球菌检验的临床意义 • 溶血性链球菌检验的未来发展趋势
01
溶血性链球菌简介
溶血性链球菌的特性
1 2
革兰氏阳性
溶血性链球菌是一种革兰氏阳性的细菌，这意 味着它具有细胞壁，并且可以被某些抗生素所 杀死。
制定统一的检测方法标准和操作流程，提高不同实验室之间的可比性和结果的准 确性。
规范化
规范实验室操作流程，确保检测结果的可靠性。建立规范的质控体系，对实验室 的检测结果进行严格的质量控制。
检测结果的多参数综合分析与应用
多参数综合分析
常见致病菌检验—溶血性链球菌检验
三、微生物检验
（二）检验操作要点 6、生化鉴定： （2）杆菌肽敏感试验
将分纯的乙型溶血性链球菌接种血平板，在划 线处贴附杆菌肽纸片，37℃18h，出现抑菌带 为阳性，据此可推测为乙型溶血性链球菌。
三、微生物检验
（二）检验操作要点 7、报告： 根据培养后的形态，菌落特征及生化试验可报 告：有乙型溶血性链球菌生长。
2）链激酶（streptokinase；SK）
3） 链道酶（streptodornase；SD）
2. 所致疾病
淋巴管炎， 化脓性感染 蜂窝组织炎，
扁桃体炎等
毒素性疾病 猩红热
超敏反应性疾病 风湿热 急性肾小球肾炎
痈
链球菌感染
金黄色葡萄球菌感染
Ⅱ型超敏反应
溶血性链球菌
肾小球基底膜 共同抗原 急性肾小球肾炎
（2）外毒素类 1）致热外毒素
• 红疹毒素，猩红热毒素 • A群链球菌溶原菌菌株产生 • 引起猩红热
2） 链球菌溶血素
• SLO：对O2敏感。测定SLO抗体含量，可作为链球菌新近感染指 标之一或风湿热及其活动性的辅助诊断
• SLS：对O2稳定，β溶血环
（3）侵袭性酶 1） 透明质酸酶
• 扩散因子 • 分解细胞间质的透明质酸→组织中扩散
1、食品加工或销售人员口腔、鼻腔、手、面部有化 脓性炎症时造成食品的污染；
二、 生物学特性
2、食品在加工前就已带菌、奶牛患化脓性乳腺 炎或畜禽局部化脓时，其奶和肉尸某些部位污染； 3、熟食制品因包装不善而使食品受到污染。 溶血性链球菌常可引起皮肤、皮下组织的化脓性 炎症、呼吸道感染、流行性咽炎的爆发性流行以 及新生儿败血症、细菌性心内膜炎、猩红热和风 湿热、肾小球肾炎等变态反应。
病原学特性