外周血单个核细胞采集出现乳糜血处理方法
凝血因子检测工作中两种处理乳糜血方法的评价
两种 方 法 处理 前 后 结 果 比较 （ Ｐ＞０ ． ０ ５ ） ， 差 异 无 统 计 学意 义 ； ２ ０例 高 度 乳 糜 标 本 经 两 种 方 法 处 理 后 凝 血 酶 原 时 间 （ Ｐ Ｔ） 结 果 与 初
始 结 果 比较 有 统 计 学意 义（ Ｐ＜Ｏ ． ０ １ ） ， 纤 维 蛋 白原 （ Ｆ Ｉ Ｂ ） 处 理 前 检 测 不 出， 两种 方法处理后 均能检 测 出结果， 且 都 与 患 者 病 情 相
・
检 验技 术与方 法 ・
凝血 因子检 测 工作 中两种处 理 乳糜 血方 法 的评价
张 健 ， 厉 淑青。 （ １ ． 解 放 军第二 六四 医院检验 科 ， 山西 太原 ０ ３ ０ ０ ０ １ ； ２ ． 浙 江 省 东 阳 市巍 山 医 院 防保 科 ， 浙江 东阳 ３ ２ ２ １ ０ ９ ）
摘 要 ： 目 的 评 价 低 温 高速 离・ Ｌ ， ／ 法 和 无 水 乙醚 处 理 法 消 除 高脂 肪 乳 糜 对 凝 血 功 能 测 定 结 果 的影 响 。方 法 使 用 Ｓ Ｙ Ｓ ＭＥ Ｘ Ｃ Ａ 一 ７ ０ ０ ０血 液 凝 固 分析 仪 检 测 １ ６ 例 非 乳糜 标 本 及 ２ Ｏ例 高 度 乳 糜 标 本 经 两 种 方 法 处 理 前 后 的 结 果 。结 果 １ ６例 非 乳 糜 标 本 经
血意外抗体鉴定的历史 记录非 常重要［ ９ ］ 。Ｍｕ ｒ （ ＭＮ Ｓ １ ０ ） 血 型
［ ６ ］ 刘达庄 ， 朱 自严 ， Ｂ ｙ ｒ ｎ ｅ Ｐ， ｅ ｔ ａ １ ． 低 频 率 抗 体 抗一 Ｍｕ ｒ 引起 的溶 血 性 输血反应［ Ｊ ］ ． 中国输 血杂 志 ， ２ ０ ０ ０ ， １ ２ （ １ ） ： ８ － １ ０ ． ［ ７ ］ 刘达庄． 稀有 血型 工作在 中国的发 展状 况 ［ Ｊ ］ ．中 国 输 血 杂 志 ，
【警惕】辛明哲医师：血液标本变色,可能是乳糜血在作怪!
在上个月的手术患者中，我们遇到了这样一位个案，抽血检查时，他的血液标本呈现浑浊，上层为乳白色油状物，这是什么情况呢？遇到这种情况该怎么办？是否能够继续手术？让我们来看一看代谢手术专家辛明哲医师是怎么说的。
简单来说，乳糜血就是“泛着浮油的血”或称为“脂血”，血液呈乳白色或浑浊状，这种情况出现表示血液中含有大量的乳糜微粒（CM）。
“乳糜微粒”的主要生理功能是转运外源性的三酰甘油。
它是小肠肠壁细胞合成的富含三酰甘油的巨大脂蛋白，一般在高脂肪饮食后产生，半衰期10分钟左右，最终运转至肝脏。
正常人空腹12个小时候，血液中几乎无乳糜颗粒。
那么什么情况下会形成乳糜血呢？我们吃的脂肪经过在小肠消化、吸收后，变成细小的乳糜微粒进入血液，乳糜微粒多到一定程度时，血清就由清澈透明的淡黄色液体变成乳白色的粘稠液体，这时，我们医学上就叫它为乳糜血。
面对乳糜血，我们应该怎么做？对于在检查中发现已经有乳糜血症状的患者来说，需要从饮食、运动等多方面来调节。
在饮食方面：控制饮食总热量、控制油脂摄取量避免高油食物、避免摄取过多的淀粉类实物、减少甜食等的摄取、多吃蔬菜水果、戒酒等都是有效控制乳糜血的方法。
在运动方面：通过运动使整个机体耗氧、耗能增加。
脂肪作为体内的主要供能物质，其分解也会随之增加。
如果真的发现有乳糜血的症状，最好的方法是咨询专业的营养医师，因为我们自己认知的健康饮食也不一定是真正的健康。
此外，我们也需要加强相关的健康知识科普，不要等到发现时才感叹为时已晚，防患未然才是最根本的解决方法。
目前，我们的个案正在医生的建议下进行调养，当血液状态恢复正常后就可以顺利手术啦！。
人外周血单个核细胞的采集、分离和保存标准
人外周血单个核细胞的采集、分离和保存标准全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：人外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells, PBMCs）的采集、分离和保存是在医学研究和临床诊断中非常重要的步骤。
PBMCs是一类具有免疫功能的细胞，包括淋巴细胞、单核细胞和浆细胞，能够在机体的免疫应答中发挥重要作用。
为了保证试验结果的准确性和可靠性，对PBMCs的采集、分离和保存必须按照相应的标准进行操作。
一、采集1. 选择合适的采集方法：一般常用的采集方法包括静脉抽血和手指取血等，静脉抽血常用于采集较多血液量的情况，手指取血则适用于采集少量血液的情况。
2. 确保采集操作标准化：在采集PBMCs的过程中，应该遵守严格的消毒和无菌操作规程，以防止细菌和病毒的污染。
3. 采集完整的血液样本：为了确保PBMCs的纯度和稳定性，应该尽量避免气泡和血细胞破损导致的RNA降解等情况。
二、分离1. 使用适当的分离方法：一般常用的PBMCs分离方法包括密度梯度离心和磁珠分选等，密度梯度离心适用于分离较大量的PBMCs，磁珠分选则适用于分离特定类型的细胞。
2. 选择合适的分离液：密度梯度离心中一般使用的分离液包括Ficoll和Percoll等，磁珠分选中则需要选择特定的磁珠标记物。
3. 保证分离效率和纯度：在PBMCs的分离过程中，应该确保细胞的分离效率和纯度，避免细胞的损失和杂质的混入。
三、保存1. 选择合适的保存条件：PBMCs的保存条件包括温度、储存液和容器等要素，应该选择适合PBMCs存活的条件进行保存。
2. 快速冻存PBMCs：为了避免细胞的降解和失活，应该在采集和分离PBMCs后尽快将其冻存。
3. 定期监测保存效果：在存储PBMCs的过程中，应该定期监测PBMCs的存活率和纯度，以确保PBMCs的质量和稳定性。
对于人外周血单个核细胞的采集、分离和保存，在操作的过程中应该严格按照相应的标准进行，以确保PBMCs的质量和稳定性，为后续的研究和临床应用提供可靠的基础。
人外周血单核细胞分离液使用说明
人外周血单核细胞分离液使用说明产品内容：试剂Ａ200mL试剂D200mL样本稀释液（赠品）200mL清洗液（赠品）200mL保存：18℃-25℃保存，有效期两年。
人外周血单核细胞分离液易感染细菌，需无菌条件下操作。
无菌条件下操作，启封后常温保存。
如4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。
操作步骤：全过程样本、试剂及实验环境均需在20±2℃的条件下进行。
首先取抗凝血按体积比1:1的比例加全血及组织稀释液混匀，根据稀释后的样本量大小，分以下两种情况：情况A:稀释后血液样本小于5mL时，实验方法如下：1.取一支15ml离心管，依次小心加入试剂A、试剂D（体积比为3:2，试剂总量与稀释后的血液样本量相等。
如稀释后的血液样本为5ml，则先后加入试剂A3ml、试剂D2ml），制成梯度界面，各液面分层一定要清晰。
2.用吸管小心吸取稀释后的血液样本加于分离液液面上，400-550g，离心20-30min（注：根据血液样本量确定离心条件，血液样本量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果）。
3.离心后，此时离心管中由上至下分为五层。
第一层为稀释液层。
第二层为透明试剂D液层。
第三层为环状乳白色单核细胞层。
第四层为透明试剂A液层。
第五层为红细胞层。
4.用吸管小心吸取第二层试剂D层和第三层乳白色细胞层到另一15ml离心管中，往所得离心管中加入10ml清洗液，混匀细胞。
5.250g，离心10min。
6.弃上清。
7.用吸管以5ml清洗液重悬所得细胞。
8.250g，离心10min。
9.重复6、7、8，弃上清后以0.5ml后续实验所需相应液体重悬细胞。
10.差异贴壁法纯化细胞（1）用单核细胞无血清培养基或单核细胞完全培养基以1.5-3×106个/ml的密度重悬细胞，将细胞铺于一次性细胞板或细胞瓶中，放于37℃二氧化碳培养箱中进行贴壁培养。
（2）2-4小时内贴壁的为巨噬细胞前体（俗称为单核细胞）。
外周血单个核细胞的分离
外周血单个核细胞的分离
概述
外周血单个核细胞是一种白细胞。
通过分离单个核细胞，可以进行多种分子生物学实验和临床应用。
本文将介绍两种分离外周血单个核细胞的方法。
方法
密度梯度离心
1.将外周血收集到 EDTA 管中。
2.将 3 毫升 Ficoll-Paque™ PLUS 加入到 15 毫升离心管中。
3.轻轻加入同等体积的外周血到离心管，保持液面平整。
4.以 400g 的速度离心 40 分钟。
在离心温度达到室温前离心室门不得
打开。
5.用温和的力度将上清液吸出到新的离心管中，并在 1200g 的速度下
洗涤 2-3 次。
6.已经分离的单个核细胞可以在非抗凝血样上重悬。
此过程中加入生长
培养基以维持细胞质稳定。
磁性负选择法
1.将外周血收集到 EDTA 管中。
2.加入红细胞淋巴细胞分离液，根据厂家指南染色。
3.加入磁性微珠混合液，使单个核细胞与微珠组合。
4.放入磁场中过滤掉未与微珠组合的细胞及其他血细胞。
5.经过多次洗涤和离心，单个核细胞可以在非抗凝血样上重悬。
此过程
中加入生长培养基以维持细胞质稳定。
密度梯度离心法和磁性负选择法是分离外周血单个核细胞的两种有效方法。
这些方法对于多种分子生物学实验和临床应用都非常有用。
外周血单个核细胞的分离
实验二十四外周血单个核细胞的分离(Separation of mononuclear cell in peripheral blood)免疫细胞是一组不均一的细胞群体，它包括T、B淋巴细胞、NK细胞、单核细胞/巨噬细胞以及粒细胞等，这些细胞的生物学特性，如细胞的大小、密度、表面电荷、黏附能力以及细胞表面的分子标志等均存在差异，借助这些差异可区分不同的细胞类别。
外周血单个核细胞(PBMC)的分离主要有两种方法，即聚蔗糖-泛影葡胺(Ficoll-Hypaque)分离法和聚乙烯吡咯烷酮硅胶(Percoll)分离法。
此处只介绍聚蔗糖-泛影葡胺分离法。
【实验原理】血液中单个核细胞的分离常采用密度梯度离心法。
市售淋巴细胞分离液是由聚蔗糖(Ficoll)和泛影葡胺(Hypaque) 按一定比例混合制成，20℃密度为1.077±0.001，单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞，其密度为1.050～1.077，而粒细胞和红细胞的密度为1.080～1.110。
将待分离的细胞悬液小心铺于淋巴细胞分离液上，经离心后单个核细胞悬浮于分离液上层界面，而红细胞与粒细胞沉于管底。
【主要试剂和器材】1.聚蔗糖-泛影葡胺分层液密度为1.077±0.001。
2.5g/L台盼蓝。
3.250U/ml肝素溶液用Hank,s液配制。
4.Hank,s液。
5.注射器、刻度离心管、吸管、滴管、血细胞计数板、载玻片、盖玻片。
6.水平离心机、显微镜。
【操作方法】1.抽取静脉血2ml，注入含有0.2ml肝素溶液的无菌试管中摇匀，作白细胞计数和分类计数。
再加入等量Hank,s液混匀。
2.取2ml分层液置于离心管中，将稀释血液沿管壁缓缓叠加于分层液上，形成清晰界面。
稀释血液与分层液的容积比例以2∶1～3∶1为宜。
3.置水平离心机中，2000r/min离心20min。
4.离心后从离心管的底部到液面分为四层，依次为红细胞和粒细胞层、分层液层、单个核细胞层、血浆层(含血小板和破碎细胞)。
人外周血单核细胞分离技术
人外周血单核细胞分离1. 抗凝血的预离心分别取正常人新鲜抗凝全血A: 20 mL于50 mL离心管中，以2 000 r /min离心20 min，吸弃上层血浆，获得下层沉淀细胞约10～12.5 mL。
2. 沉淀细胞的稀释与离心分离在所获取沉淀A 中的细胞中加入Hank′s液( 不含Ca2+、Mg2+, pH 7.2 ～7.6) 体积比仍未1:1，混匀，制成细胞悬液。
B: 无菌抗凝血与Hank′s液或PBS以1:1体积在试管中混匀。
另取一离心管，加入LTS1077淋巴细胞分层液，然后用毛细吸管距分层液上1cm处将细胞悬液小心而缓慢地加于其上面，使稀释血液重叠于分层液上。
此时稀释后的细胞悬液分离液淋巴细胞体积为：1:1。
与用水平离心机以2000 r /min 离心20min，离心结束后，取出离心管，可见管中液体已经分层。
管内可见分为4层：最上层是血浆，含部分血小板：第二层为薄薄的白膜层，主要台单个核细胞，还混杂有少量血小板；第三层为分离液层；第四层为粒细胞及红细胞，红细胞沉于管底，而粒细胞则紧贴在压积红细胞上呈一层很薄的白膜3. 单个核细胞的提取、洗涤与悬浮、贴壁吸去最上层的血浆，收集血浆层和淋巴细胞分离液交界面的单个核细胞，尽量全部吸出PBMC。
加3~4倍以上体积Hanks或PBS液于所得的单个核细胞中，用毛细吸管轻轻吹判均匀，避免产小气泡，液柱高度不超过离心管的2／3。
混匀后离心1500r/min离心10min，低速离心有利于去除细胞悬液中留存的血小板，去上清液。
注意：还可以先用吸管把雾状层上面的液体吸走，注意不要碰到雾状层，然后在把要的部分慢慢吸出来。
第二种方法，比较简单一些。
再用同样洗涤液洗涤细胞2次，1500r/min离心10min，洗去残留的淋巴细胞分离液。
再以RPMI-1640 培养基离心洗涤1次，吸尽上清，以充分去除血小板等杂质。
按每毫升血液标本加0.2 mL含20%小牛血清的Hank′s液( 或含10%胎牛血清及25 mmol /L hepas的RPMI-1640液3～4 mL) 重新混悬细胞37℃、5% CO2孵育箱中培养2 ～3 h后去除上清，得到贴壁的单核细胞。
外周血干细胞采集技术及护理
外周血干细胞采集技术及护理(一)采集术前准备及护理（1）向供者做必要的解释使之有心理准备；要求供者注意营养摄入，应用高蛋白、高热量、高维生素饮食，于采集前晚和当日晨改用低脂餐；沐浴清洁皮肤并更衣，上衣袖应宽松。
（2）应用重组人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)可以有效地达到骨髓或外周血造血干细胞的扩增。
注意观察应用G-CSF的副作用，常见有低热(一般38℃以下)骨骼肌肉疼痛、乏力、食欲不振、头痛等，轻者不必做处理，严重的给予对症治疗。
（二）技术配合及护理( 1 ) 外周血干细胞采集技术可根据供者的情况在床边进行。
( 2 ) 主要设备为血液成分分离机、专用导管，另备抗凝剂、生理盐水、血压计、听诊器、急救器材和药品。
治疗盘内盛皮肤消毒物品、无菌棉球和纱布、止血带、胶布。
( 3 ) 供者清洁静脉穿刺部位皮肤，排空二便，通常采用平卧，测量血压、脉搏及呼吸。
( 4 ) 选择两处静脉穿刺部位(分别为采血和回输血通道)以肘部粗而直的大静脉最适宜。
下肢静脉、颈静脉亦可作为回输通道。
( 5 ) 经皮肤消毒，用16号穿刺针头依次进行两处静脉穿刺，首先穿刺的一侧连接回输导管，次之连接采血导管。
妥善固定针头，局部覆盖无菌纱布。
( 6 ) 医生操纵血液成分分离机，将供者身高、体重、红细胞比积等数据输入机器电脑，自动调节采集分离血液成分的速度，匀速加入抗凝剂。
（7）供者采血侧上臂间断使用止血带或血压计袖带打气加压，同时手握海绵芯子，反复一松一紧直到采集完毕。
( 8 ) 遵医嘱补钙。
( 9 ) 随时观察血压、脉搏、呼吸及其有无不适感，注意不良反应和合并并发症。
（10）采集完毕，静脉穿刺局部以无菌棉球按压5min以上，用无菌纱布保护。
供者静卧，继续观察。
（11）外周血干细胞一次采集量一般200～300ml，由检验人员进行细胞计数（12）采集后嘱患者多饮水，以促进抗凝剂代谢。
【不良反应与并发症及其处理原则】（一）空气栓塞其原因为采血管连接不严密或回输管空气未完全排除。
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外周血单个核细胞采集出现乳糜血处理方法
摘要】目的:探讨进行外周单个核细胞采集的患者采集过程中出现乳糜血后所采用的方法及体会。
方法:收集我科从2012年4月至2015年4月之间的800例进行外周单个核细胞采集的患者中20例患者在采集过程中出现乳糜血后对其进行的处理，经过相应处理20例患者所采集的成品细胞质量未受影响。
结论：在采集外周单个核细胞出现乳糜血后，给予相应处理，效果良好，值得在临床中推广应用。
【关键词】外周血;单个核细胞;乳糜血;处理方法
【中图分类号】R36 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）34-0069-01
DC-CIK细胞治疗是目前应用于恶性血液系统疾病及肿瘤疾病治疗中，广泛、安全的治疗方法。
需采集外周血中单个核细胞在GMP实验室进行体外诱导、培养、扩散后再为患者回输治疗。
我科从2012年4月至2015年4月之间的800例患者中20例患者在采集过程中出现乳糜血对其进行的处理，经过相应处理20例患者所采集的成品细胞质量未受影响，现将采集处理方法报告如下。
1.临床资料
本组20例患者，在第一次溢出（80状态）结束，89状态（或87状态）出现IDB（界面探测值基线）值为40-50共7例，50-60共5例，60-70共8例。
2.处理方法
界面探测器是一个光学传感器，用于监测通过CRP（富成分血浆）管路光的通透量。
当CRP管路内的细胞浓度增加时，光的通透量减少。
因此，微电脑可以监测CRP管路内的细胞成分。
界面探测值基线(IDB)以富成分血浆管路中清洁血浆的浊度设定。
如患者在进行外周单个核细胞采集之前输入过脂肪乳、使用过高脂肪饮食，或者是患者自身原因（血脂过高）。
在采集过程中第一次溢出后立即进行IDB值设定，会出现IDB值过高（≥40）。
2.1随着患者的血液循环，在采集过程中每次溢出后均需进行IDB值设定。
在每次进行IDB值设定时会发现IDB值会逐渐下降。
直至降至正常或接近正常（20-30）。
2.2提高设定的全血终点量值，全血量每增加500ml时设定一次IDB值。
3.总结
以上处理方法有效地提高了乳糜血患者外周单个核细胞采集成品细胞质量。
进行外周单个核细胞采集过程中，操作人员应注意观察富成分血浆管路颜色,准确记录IDB值，IDB值如有异常及时给予处理，以保证患者成品细胞质量。
【参考文献】
[1]李婧，外周单个核细胞采集中的护理配合体会[J]．天津护理,2010,6 18（3）:137．
[2]王艳，孙玉红外周单个核细胞采集的护理配合体会[J]．中国实用医药，2013，2 8（4）:208。