化学发光标准曲线拟合
化学发光动力学曲线-解释说明
化学发光动力学曲线-概述说明以及解释1.引言1.1 概述化学发光动力学曲线是用来研究化学反应中发光强度随时间变化的曲线。
这种曲线是通过测量反应体系中发光强度的变化来获得的，可以提供有关化学反应速率、反应机制以及反应动力学信息的重要数据。
化学发光动力学曲线的研究涉及到许多不同领域，包括化学、物理和生物学等。
通过对发光动力学曲线的分析，我们可以深入了解化学反应的细节，揭示反应的速率控制步骤和反应机制。
这对于理解生物体内发生的生化过程、药物研发以及环境污染等方面有着重要的意义。
本文将介绍化学发光动力学曲线的构成要素、分析方法以及其在不同领域中的应用。
此外，我们还将总结化学发光动力学曲线在研究中的重要性，并展望未来研究的发展方向。
通过对化学发光动力学曲线的研究，我们可以更好地理解和掌握化学反应的本质，并为实际应用中的问题提供解决方案。
希望本文能够为读者对化学发光动力学曲线的理解提供有益的启示，并促进相关领域的研究和发展。
1.2 文章结构文章结构部分的内容可以这样编写:2. 正文2.1 什么是化学发光动力学曲线2.2 动力学曲线的构成要素2.3 化学发光动力学曲线的应用文章的正文部分是对化学发光动力学曲线进行详细解释和探讨的部分。
其中，2.1节将介绍化学发光动力学曲线的定义和特点。
动力学曲线是指储存着反应速率随时间变化关系的曲线。
在化学发光动力学曲线中，反应速率随着时间的推移会呈现出特定的变化模式，这些模式对于我们研究和理解化学反应过程具有重要的意义。
在本节中，将从基本概念和实验方法等方面对化学发光动力学曲线进行全面介绍。
2.2节将重点阐述构成化学发光动力学曲线的要素。
化学发光动力学曲线的构成要素一般包括曲线的斜率、最大发光强度、半衰期等。
这些要素可以反映出反应速率的变化规律以及反应过程中的重要特性。
具体而言，本节将逐一讨论这些要素的定义、计算方法和物理意义，并通过实例加以说明。
2.3节将介绍化学发光动力学曲线的应用。
化学发光免疫分析
糖尿病
Albumin C-peptide Insulin
唐氏筛查
PAPP-A free βHCG HCG＋β AFP
心肌标志
骨标志
肝纤维
CK-MB
ß-Crosslaps
LN
Digoxin
25-(OH) Vit. D
HA
Digitoxin
Intact PTH
PIIINP
Myoglobin
Intact PTH
试剂有效期长 有效期可长达1年以上，放射免疫分析由
于放射性同位素的衰变，一般有效期只有一 个月，而酶免的底物贮存性差，都无法与化 学发光相比，有效期长可以降低使用成本， 利于推广应用。
梦想——之以恒、真正为实现纳米科技事业的梦想而奋斗！
3 化学发光免疫分析的优越性
➢ 中国免疫诊断现状
中国
国际（欧美为主）
种类
方法
检测原理
酶联免疫
酶与样本反应，依据颜色变化程度确定结果
免疫 化学发光
诊断
将抗原抗体同样本结合，由磁珠捕捉反应物，加入 发光促进剂加大反应发光速度与强度，进而诊断
根据镧系元素螯合物发光特点，用时间分辨技术测 时间分辨荧光
量荧光，检测波长和时间两个参数进行信号分辨
分子 诊断
PCR 基因芯片
DNA高温变成单链，低温互补配对链合成
激发态ν
的中间体。这种激发态中间体，当其回到稳定的基态时，可同时发射出
光子。利用发光信号测量仪器即可测量光量子产额，该光量子产额与样
品中的待测物质的量成正比。由此可以建立标准曲线并计算样品中待测
能量
h.ν
物质的含量。
基态ν0 梦想——之以恒、真正为实现纳米科技事业的梦想而奋斗！
化学发光
化学发光
化学发光（chemiluminescence）是指伴随化学反 应过程所产生的光的发射现象。某些物质(发光剂) 在化学反应时，吸收了反应过程中所产生的化学能， 使反应的产物分子或反应的中间态分子中的电子跃 迁到激发态，当电子从激发态回复到基态时，以发
㈡ 碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析
该分析系统以碱性磷酸酶 标记抗体(或抗原)，
在与反应体系中的待测标本和固相载体发生
免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶
标记抗体复合物，这时加入AMPPD发光剂，
碱性磷酸酶使AMPPD脱去磷酸根基团而发光。
碱性磷酸酶标记化学发光免疫分析示意图
电化学发光免疫分析 电化学发光免疫分析
射光子的形式释放出能量，这一现象称为化学发光。
一些化学反应能释放足够 的能量把参加反应的物质激 发到能发射光的电子激发态， 若被激发的是一个反应产物 分子，则这种反应过程叫直 接化学发光。反应过程可简单地描述如下： A十B C* C* C ＋ h· γ 其中γ为光子，C*表示C处于单线激发态。
若激发能传递到另一个未参加化学反应 的分子D上，使D分子激发到电子激发态， D分子从激发态回到基态时发光，这种过 程叫间接化学发光。反应过程可表示如下： A十 B C* C *十 D C 十 D* D* D十 h· γ
思考题
1．什么是化学发光免疫分析？ 2．什么叫化学发光剂？ 3．酶促反应的发光剂有哪些？ 4．什么是化学发光酶免疫分析？ 5. 化学发光免疫分析和放免、酶免相比具 有哪些优势？
小 结
• 发光是指分子或原子中的电子吸收能量后，由 基态跃迁到激发态，然后再返回到基态，并释 放光子的过程。 • 化学发光是吸收了化学反应过程中所产生的化 学能使分子激发而发光。 • 化学发光免疫分析是将化学发光与免疫反应相 结合，用于检测微量抗原或抗体的标记免疫分 析技术，分为直接化学发光免疫分析，化学发 光酶免疫分析和电化学发光免疫分析。
雌二醇化学发光检测标准
雌二醇化学发光检测标准
3. 检测方法：采用化学发光技术进行雌二醇的检测，通过测量发光信号的强度来确定样品 中雌二醇的浓度。检测方法应具备高灵敏度、高选择性和良好的线性范围。
4. 标准曲线和质控：建立标准曲线，通过不同浓度的标准品来确定雌二醇的浓度。同时， 进行质控样品的检测，以确保检测结果的准确性和可靠性。
5. 结果解释和报告：根据标准曲线和样品的检测结果，计算出雌二醇的浓度，并进行结果 解释和报告。结果应明确标示测量单位、检测方法和参考范围等信息。
雌二醇化学发光一种重要的性激素，其浓度的检测对于生物医学研究和临床诊断 具有重要意义。化学发光检测是一种常用的雌二醇检测方法，其标准通常由相关的监管机构 或行业组织制定。以下是一般性的雌二醇化学发光检测标准的一些要点：
1. 试剂和设备：使用经过验证的化学发光试剂盒和相关的检测设备，确保检测结果的准确 性和可靠性。试剂盒应符合相关法规和标准的要求，并具备良好的稳定性和重复性。
微粒子化学发光分析仪检测TESTO的性能验证
微粒子化学发光分析仪检测TESTO的性能验证肖辉建;王秋菊;车思思;王艺娜;王思敏;李向庭;庄岳鹏【摘要】目的:验证贝克曼ACCESS2微粒子化学发光仪检测睾酮(TESTa)的性能,同时探讨适用于贝克曼ACCESS2微粒子化学发光分析系统性能的验证方案.方法:以TESTO检测为例,参考美国临床实验室标准化委员会(NationalCommittee for Clinical Laboratory,NCCLS)文件,制定一套实验方法验证方案,对方法的精密度、正确度、分析测量范围、生物参考区间、携带污染率进行验证.结果:重复性精密度高低水平各为5.06％和2.13％,中间精密度高低水平各为7.59％和6.75％;正确度的偏倚为2.94％～8.80％;分析测量范围为0.22～10.4 ng/ml;参考范围为男性2.19～7.52 ng/ml,女性0.08～0.59 ng/ml;携带污染率为0.42％.结论:贝克曼ACCESS2微粒子化学发光分析仪精密度好、正确度高、分析测量范围广、厂家提供的参考区间可转移至临床实验室使用、携带污染率低;各项验证指标均符合厂家提供的要求,验证全部通过,且验证方案简便、有效.【期刊名称】《医疗卫生装备》【年(卷),期】2016(037)003【总页数】3页(P90-92)【关键词】微粒子化学发光分析仪;ESTO;性能验证【作者】肖辉建;王秋菊;车思思;王艺娜;王思敏;李向庭;庄岳鹏【作者单位】362000福建泉州,解放军180医院检验科;362000福建泉州,解放军180医院检验科;362000福建泉州,解放军180医院检验科;362000福建泉州,解放军180医院检验科;362000福建泉州,解放军180医院检验科;362000福建泉州,解放军180医院检验科;362000福建泉州,解放军180医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R318.6;TH776贝克曼ACCESS2微粒子化学发光检测系统目前在国内医院检验科使用很广泛，但对其性能进行评价的研究相对缺少，也没有对应的验证方案提出。
Axceed 260 磁微粒化学发光免疫分析仪标准操作(2)
Axceed 260磁微粒化学发光免疫分析仪标准操作流程一、仪器开机，登录软件：打开仪器左侧主电源开关——开启电脑，登录桌面的Axceed 260 软件快捷键——填写用户名Admin，密码0000——进入应用程序。
二、检查底物瓶是否正常装载（底物管路浸入到底物瓶内），以及底物瓶内液体量是否足量。
不足则添加或更换底物瓶。
更换底物需核对底物批次是否相同，若不相同则需根据开展项目的质控变异情况，选择重新定标。
三、检查洗液桶，根据实验需求量配置洗液，洗液配比：1瓶浓缩洗液，添加19L纯水，混匀后备用。
四、系统复位：软件操作依次点击实用工具——维护——系统复位——执行。
五、开机清洗：在1号样品架的1号管中添加75%的医用酒精（3/4的管体积），在试剂盘的1号位外圈放置装有75%酒精的试剂瓶，实用工具模块——维护——开机清洗，点击执行。
整个过程将进行清洗流程，用时约20分钟。
六、底物准备：实用工具模块——维护——底物准备，选择底物C（系统默认），点击执行。
底物测试：实用工具模块——维护——底物测试，选择底物C（系统默认），点击执行，底物测试结果应符合要求（两个测试结果接近）。
底物本底发光值若超过10000，则提示底物存在污染的情况，需再次执行4.5和4.6。
七、根据实验需求量，添加反应杯耗材：启动（功能选项模块）-->添加耗材-->添加-->结束添加。
注意反应杯底托要卡入装载台位置，确保摆放平稳。
八、试剂上机：揭开试剂盘盖，从试剂盒中取出试剂，拧开试剂瓶盖后，检查并处理瓶内气泡，然后装载入试剂盘中。
依次盖上试剂盘盖，亚克力外罩后，软件操作依次点击试剂管理——试剂盘信息——选择条码扫描——填写扫码位置范围后确认，仪器会自动扫码识别并记录试剂位置。
九、试剂定标注册：取出试剂盒内二维码卡，软件依次点击定标管理——定标品——扫码添加，在弹出的对话框中，使用手持扫码枪扫描二维码的定标品信息，然后在软件界面中设置定标品摆放位置后确认。
化学发光项目-SOP
一、人绒毛膜促性腺激素β亚单位测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/01二、黄体生成素测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/02三、卵泡刺激素测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/03四、雌二醇测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/04五、非结合雌三醇测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/05六、催乳素测定标准操作规程SYXRCYYLAB-MY SOP-02/06一、人绒毛膜促性腺激素β亚单位测定标准操作规程第 1页共 5 页1 检验申请单独检验项目申请：人绒毛膜促性腺激素β亚单位测定（缩写βhCG）；组合项目申请：肿瘤标志物检查组合。
临床医生根据需要提出检验申请。
2 标本采集与处理2.1标本采集2.1.1常规静脉采血约2 ml，不抗凝，置普通试管中。
或采用含分离胶的真空采血管。
也可用肝素或EDTA作抗凝剂采集血浆标本。
2.1.2检验申请单和血标本试管标上统一且唯一的标识符。
2.1.3急诊标本采集后，在检验申请单上填写标本采集时间。
2.1.4标本采集后与检验申请单一起及时运送至检验科。
专人负责标本的接收并记录抗体结合，而兔抗βhCG-ALP结合物与血清hCG不同的抗原位点起反应，最后形成微粒子-羊抗鼠IgG-鼠McAb-βhCG-兔抗体-ALP夹心型免疫复合物。
经磁性分离，洗涤洗去未结合的物质，加入化学发光底物Lumi-Phos*530，测量反应产生的光，光子的量与标本中hCG的浓度成比例，由多点校准曲线求得标本中hCG的浓度。
4 试剂及其他用品4.1试剂：Accessβ-hCG测定试剂包，由美国BECKMAN COULTER公司出品，试剂盒产品号33500。
未打开的试剂包保存于2～8℃在有效期内稳定，不可冻存。
开启的试剂包载入系统中可使用28d。
4.2试剂盒组分6.3质控品测定：在每一批标本中测定质控血清一次。
安图A2000化学发光仪作业指导书
安图A2000化学发光仪作业指导书编写者：王文君审核者：批准者：生效日期：2015年10月1日目录一、目的：规范单纯疱疹病毒1型IgM抗体测定的标准操作程序，确保单纯疱疹病毒1型IgM抗体测定的结果准确有效。
二、适用范围：在AutoLumo A2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的单纯疱疹病毒1型IgM抗体。
三、临床意义单纯疱疹病毒（Herpes simplex virus,HSV）属于疱疹病毒科α亚科，人是其唯一的自然宿主。
单纯疱疹病毒的感染在世界范围内广泛存在，婴儿、儿童和成人均可感染，40岁左右时，约有90%的人感染单纯疱疹病毒[1]。
单纯疱疹病毒(HSV)有两个血清型即单纯疱疹病毒l型(HSV-1)和单纯疱疹病毒2型(HSV-2)，两型病毒核苷酸序列有50%同源性。
HSV-l主要是通过呼吸道、皮肤和粘膜密切接触传播，十岁以前的儿童最易受到感染，有症状的感染主要是引起疱疹性口腔炎、疱疹性角膜炎、疱疹性脑炎等[2]。
HSV-2主要通过性传播，可引起生殖器疱疹，85%以上的生殖器疱疹是由HSV-2引起，HSV-1一般不引起生殖器的复发性感染，99%以上的复发性生殖器疱疹由HSV-2引起[3]。
孕妇在怀孕的前三到六个月原发感染，会造成胎儿先天性感染，或者流产、死胎，但是这种几率非常低。
在怀孕的后三个月原发感染造成新生儿感染的几率很高，约30~50%，因为此时孕妇体内的IgG抗体量仍旧不足，新生儿来自母体的保护性抗体更少[4,5]。
病毒分离培养和PCR法是诊断HSV感染的最直接的方法，但相比之下IgM和IgG 抗体的检测是目前普及的主要方法。
IgM抗体一般在感染1周后出现，4~8周逐渐消失，是近期感染的指标，IgG抗体一般在感染2周后出现，可持续存在很多年，是既往感染的指标[6,7]四、方法原理采用捕获法原理进行检测。
用抗人IgM抗体包被磁微粒，辣根过氧化物酶标记HSV-1抗原制备酶结合物，通过免疫反应形成二抗-抗体-酶标抗原的复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与HSV-1 IgM抗体的含量成正比。
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4个参数的意义
A −A 0 +A y= 1 0 p x 1+ x 0
• • • • •
曲线形状：S型递增或递减。 A1：x趋近于无穷大或无穷小时，y的最大值； A0：x趋近于无穷大或无穷小时，y的最小值； X0：曲线拐点； P：与拐点处曲线斜率相关
求初值
第一步：做Logit-Ln线性回归，求A1, A0, x和p的初值。 第一步 此时x不能为0值，若输入的x有0值，则将其设为一小值（例 如：0.00001）。 首选将原方程变形为如下线性形式：
y − A0 ln A − y = p ln x0 − p ln x 1
将A1的初值设为输入的y值的最大值乘1.1，A0的初值设为输 入的y值的最小值乘0.5。通过简单的直线拟合即可求出p和x0 的初值。
2最小 目标函数：R
第二步： 第二步：泰勒级数展开
∂y ∂y ∂y ∂y y = y0 + ( ∆A1 + ∆A0 + ∆x 0 + ∆p ) ∂A1 ∂A0 ∂x 0 ∂p
数
P 2 y= +P 1 + exp[− (P3 + P4 Ln( x ))] 1
标准品 A B C D E F 质一 质二 R2
浓度 （ng/ml 光子数 ) 0 503.75 2.5 3939.15 7.5 22369.8 25 84480.1 100 224738.9 300 283573.2 1.8576 3531.067 163.192 258665.1 4 0.9999
∂y = ∂A1
1 x 1+ x 0
1 x 1+ x 0
p
p
A1 − A0 x ∂y p = p 2 x ∂x0 x0 x 0 1 + x0
p
p
∂y = 1− ∂A2
x x A1 − A0 ∂y = − ln x x p 2 ∂p 0 0 x 1 + x0
递减高斯牛顿法
• 第三步：为保证迭代收敛，在计算相关系数时，引入一系 第三步： 数a，初值设为2，将a与参数的变量矩阵相乘，计算相关 系数。a=a/2，循环10次，每次a的值减半。取循环中得到 的相关系数最大的变量矩阵[△A1, △A2, △x, △p]。 • 第四步：默认总的迭代次数为1000次，或者当相关系数不 第四步： 再减小时，则迭代停止数】 由于低浓度点的临床意义更重要，在计算各点偏差的平 方和时，低浓度点给与较大的权重因子，而高浓度点赋予较小的 权重因子。另外，浓度为0的点，不参与运算。 【初值】 以R2为目标函数迭代的结果作为初值。 【搜索方法】 变步长遍历搜索。
将曲线回归转化为多元线性回归，采用最小二 乘拟合计算变量△A1, △A0, △x, △p，通过迭代运算， 逐步修正四参数的值。 每一次迭代可计算出参数变量值，新的参数值 为原参数值与变量值的叠加。
求偏微分方程
• 对Logistic方程四个参数求偏微分，得到y对给定系数的 增量（△A1, △A0, △x, △p）的泰勒级数展开式。
化学发光标准曲线拟合方法
2011.2.10 生物医学仪器研发部
拟合方式
• • • • • • 线性 E指数 对数Ln 多项式（2~6次） Log-Logist 4参数拟合
4参数拟合
A −A 0 +A y= 1 0 p x 1+ x 0
A1、A0、x0、p为待拟合的参数； x对应标准品浓度，y对应标准品发 光值，用RLU表示。 P1、P2、P3、P4为待拟合参