桑黄菌液体培养工艺的研究

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桑黄液体培养基的筛选及培养条件优化

ｉｉａｎ，ＬｕｏＴｉｎｇ（ＡｎｈｕｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｅｆｅｉ２３００３６，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ）／／Ｊｏｕｍ￣ｏｆＮｏｒｔｈｅａｓｔＦｏｒｅｓｔｒｙＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．一
张沙沙陈莉丁克坚骆婷
（安徽农业大学，合肥，２３００３６）
摘要为获得更多的胞外多糖．采用单因子分析和正交试验相结合的方法。对４个桑黄茵株的液体培养条件进行了优化筛选。结果表明：桑黄４个菌株对营养的需求基本一致，在设置的碳源、氮源和微量元素中，最佳培养基组分为：玉米粉、麸皮、０．２％磷酸二氢钾、０．０５％硫酸镁、０．２％碳酸钙、０．０５％复合维生素Ｂ和０．１％维生素Ｅ，其中１号、２号菌株液体培养最佳碳氮源质量分数组合为３％玉米粉和２％麸皮；３号、４号菌株为２％玉米粉和２％麸皮。在温度为２８℃ ，初始ｐＨ值６．５０，摇床转速１５０ｒ／ｍｉｎ时４个菌株的胞外多糖产量均最高。关键词桑黄菌；胞外多糖；营养；培养条件
２０１３．４１（６）．－７６—７９
ＡｎｅｘｐｅｉｍｅｒｎｔｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｌｉｑｕｉｄｃｕｌｔｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆｆｏｕｒｉｓｏｌａｔｅｓｏｆＰｈｅｌｌｉｎｕａｉｇｎｉａｒｉｕｓｔｏｉｍ— ｐｒｏｖｅｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｅｘｏｃｅｌｌｕｌａｒｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｂｙｔｈｅｍｅｔｈｏｄｓｏｆｓｉｎｇｌｅｆａｃｔｏｒａｎｄｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｅｘｐｅｉｍｅｒｎｔ．Ｔｈｅｎｅｅｄｓｏｆｆｏｕｒｉｓｏｌａｔｅｓａｒｅｂａｓｉｃａｌｌｙｔｈｅｓａｍｅ．Ｔｈｅｍｏｓｔｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｍｕｌａｏｆｌｉｑｕｉｄｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍｉｓａｓｆｏｌｌｏｗｓ：ＣＯＩＴＩｍｅａ１．ｗｈｅａｔｂｒａｎ，０．２％ｏｆｐｏｔａｓｓｉｕｍｄｉｈｙｄｒｏｇｅｎｐｈｏｓｐｈａｔｅ．０．０５％ｏｆｍａｇｎｅｓｉｕｍｓｕｌｆａｔｅ，０．２％ｏｆＣａｌｃｉｕｍＣａｒｂｏｎａｔｅ，０．０５％ｏｆｃｏｍｐｏｕｎｄｖｉｔａｍｉｎＢａｎｄ０．１％ｏｆｖｉｔａｍｉｎｅＥ．ＴｈｅｂｅｓｔｃａｒｂｏｎｎｉｔｒｏｇｅｎｓｏｕｒｃｅｃｏｎｔｅｎｔｓｆｏｒＰ．ｉｇｎｉａｒｉｕｓＮ０．１ａｎｄＮＯ．２ａｒｅ３％ｏｆｃｏｒｎｍｅｎｌａｎｄ２％ｏｆｗｈｅａｔｂｒａｎ．ＦｏｒＰ．ｉｇｎｉａｒｉｕｓＮ０．３ａｎｄＮＯ．４．ｔｈｅｃａｒｂｏｎｎｉｔｒｏｇｅｎｓｏｕｒｃｅｃｏｎｔｅｎｔｓａｒｅ２％ｏｆｃｏｒｎｍｅａｌａｎｄ２％ｏｆｗｈｅａｔｂｒａｎ．Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｙｉｅｌｄｓｏｆｔｈｅｆｏｔｉｔｉｓｏｌａｔｅｓｗｅｒｅｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｕｎｄｅｒ２８ｏＣ．６．５０ｏｆｐＨａｎｄ１５０ｒ／ｍｉｎｏｆｒｏｔａｔｉｏｎｓｐｅｅｄ．ＫｅｙｗｏｒｄｓＰｈｅｌｌｉｎｕｓｉｇｎｉａｒｉｕｓ：Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；Ｎｕｔｉｔｆｉｏｎ；Ｃｕｈｕｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎ

桑黄真菌学、化学成分、生物活性及其发酵工艺调控研究进展

桑黄真菌学、化学成分、生物活性及其发酵工艺调控研究进展目录一、内容概述 (2)二、桑黄真菌学概述 (3)1. 桑黄真菌的基本特征 (4)2. 桑黄真菌的分布与生态环境 (6)三、化学成分研究 (6)1. 活性多糖类化合物 (8)2. 酚类化合物及其他有机成分 (9)3. 蛋白质及氨基酸类成分 (10)4. 其他化学成分分析 (11)四、生物活性研究 (12)1. 抗氧化活性分析 (13)2. 抗炎及抗肿瘤作用研究 (15)3. 免疫调节及抗疲劳作用探讨 (16)4. 其他生物活性分析 (18)五、发酵工艺调控研究 (19)1. 发酵过程优化与培养基改良研究 (20)2. 发酵过程中的微生物代谢调控研究 (21)3. 发酵产物提取与纯化技术研究进展 (22)六、研究进展与展望 (23)1. 当前研究的进展总结与成果展示 (25)2. 未来研究方向与重点问题探讨分析以及发展展望 (26)一、内容概述本文档主要围绕“桑黄真菌学、化学成分、生物活性及其发酵工艺调控研究进展”展开详细的内容概述。

文章结构大致分为四个主要部分。

桑黄真菌学，这一部分主要介绍桑黄真菌的基本信息，包括其分类学特征、生物学特性、生态分布以及其在自然界的角色等。

还将探讨桑黄真菌的研究历史、现状以及未来的发展趋势。

化学成分，这部分将详细介绍桑黄真菌中发现的各类化学成分，包括多糖、蛋白质、酚类化合物、生物碱等。

这些化学成分的结构特点、理化性质以及提取分离方法等都将有所涉及，以揭示桑黄真菌的化学物质组成及其独特性。

生物活性，该部分将重点讨论桑黄真菌所表现出的各种生物活性，包括其抗氧化、抗肿瘤、抗炎、免疫调节等生物功能。

还将探讨桑黄真菌在医疗保健、制药等领域的应用及其潜在价值。

发酵工艺调控研究，这部分将介绍如何通过调控发酵工艺来提高桑黄真菌的生长效率、代谢产物产量以及产品质量。

包括培养基优化、发酵条件控制、基因工程技术在桑黄真菌发酵中的应用等都将有所涉及，以揭示如何通过技术手段优化桑黄真菌的发酵过程。

桑黄菌的研究进展

桑黄（ｈｆｎｓＰｅｉｕｌ
）于担子菌亚门，菌纲，孔菌属层多
科，称桑臣、耳、孙眼、又桑胡桑黄菇，一种珍贵的药用真菌。是子实体中等至较大，质，，柄，生；半球形或马蹄形木硬无侧扁（－２ｍ３２ｍ，１－０ｍ）浅肝褐色至暗灰色或黑色，２１ｃｘ－１ｃ厚．１ｃ，５初期有细绒毛，光滑，皮壳，同心环棱，时常龟裂；缘后无有老边
（％一２）半乳糖（％一０、萄糖（０９％）成。该３１％、２１％）葡８％－５组
多糖还存在少量由天冬氨酸、氨酸、氨酸、氨酸组成的谷甘丙蛋白质。李艳辉用石油醚提取Ｐｉｎａｉｓ体发酵培养菌丝．ｉｕ液ｇｒ体，析得到二丁基羟基甲苯、榈酸、，２十八碳二烯酸甲分棕９１－酯、十碳烷、十六碳烷５种化学物质。ＰｒＨ等从Ｐ二二ａｋＩ．．．
１ｔｕｉｅｓ的培养液中分离出Ｂ分泌酶（ＡＥ）制物一ｉｉｉｎＢＣ１抑ｈｓｄｎｐ
（子式Ｃ３，定为６（，— 一分０）鉴Ｈ０一３２羟基）４羟－－［酮。４－一２Ｐ喃￣
钝而下侧无菌管，肉桂色至浅咖啡色；肉呈深咖啡色，深菌木质，坚硬；管与菌肉近同色，层，层次不明显，年的较菌多但老

桑黄发酵罐放大培养的初步研究

桑黄发酵罐放大培养的初步研究
秦俊哲，张慧洋
（西科技大学生命科学与工程学院，陕西西安７０２）陕１０１
摘要：比研究了桑黄摇瓶和发酵罐培养不同阶段的各项生理指标．果表明：瓶培养在对结摇
１接种量、８℃ 、６／ｎ的条件下，０２１０ｒｍｉ菌丝量１８ｈ达到最大，原糖及氨基态氮分别在６还
１０ｈ和７２２ｈ达到最高峰，最适ｐ为５５发酵罐培养在５Ｌ装液量、０接种量、０／ｎＨ．；１２０ｒｍｉ
氮：甲醛滴定法（／２４． —９．ＧＢＴ１１３２８）
Ｖ２２．Ｂ各０ｍｇ
（）３仪器设备．ＨＹＧＩａ迂转式恒温调速摇瓶柜、Ｉ一００ —ＩＢＯＦ６１Ｓ型发酵罐、５Ｐ７６Ｃ紫外可见分光光度
计、ＳＣＯＬ－ＳＬ型立式压力蒸汽灭菌器等．
１２方法．
№ ．５Ｖｏ．１２８
陕西科技大学学报
ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＳＡＡＮＸＩＵＮＩＨＶＥＲＳＴＹＣＥＮＣＥ＆ＴＥＩＯＦＳＩＣＨＮＯＬＯＧＹ
０ｃ．１ｔ２００
・
４１・
文章编号：００５１（０００ — ０１０１０ — ８１２１）５０４ — ３
（）１菌种的活化．将母种接种到ＰＤＡ综合培养基上于２８℃培养１．０ｄ

桑黄菌的研究与开发

１．２生态习性
２化学成分
在我国大部分地区都有分布，生于杨、、、柳桦
桃、等阔叶树的枯立木、木及树干上，桑立多年生，能引起心材海绵状白色腐朽。中以生于桑树上的其桑黄效果最好，自古就有 “ 果得到附着在桑树上如的黄色疙瘩（桑黄）死人也可以复活 ” ，的说法。由于桑黄菌属于腐生菌，对人工培养的条件要求不高：其最适温度在２６℃，Ｈ值在５ — ．之间［ｐ．６５５。
维普资讯
８２６ｏ７ｏ０ｏ．ｌ．．ｏｖ。Ｎ３２
食品ｌ究与开发拜
食开品发
桑黄菌的研究与开发
胡文彬马海乐，存山，周
（．１江苏大学生物与环境工程学院，江苏镇江２２１；．１０３２江苏省农产品生物加工与分离工程技术研究中心，江苏镇江２２１）１０３
研究表明，桑黄含有多糖、黑色索、过氧化酶］、麦角甾醇、芳樟醇、三萜酸、脂肪酸类、芳香酸、原儿茶醛、丁香酸、啡酸、皮索、花亭、豆素Ｉ９咖柚樱香Ｓ］－等成分。３药理作用３１．增强机体的免疫力韩国科学家ＫｍＧｙｍｉｌ等发现桑黄中的蛋白多糖通过增强ｐｏｉｉａｅＣ（白激酶Ｃ）和ＰＫｒｔｎｋｎｓ蛋ｅＴ（白酪氨酸激酶）的活性来激活机体的Ｂ淋巴细蛋胞；此后Ｋｍ等又发现桑黄的酸性多糖可以通过ｉ［］调节增加ｎｒｉ氧化亚氮）和ｔｏｎｃｓｉｃｘｅ（ｔｏｄｉｕｒｅｒｉｍｏｓｆｔ —【（瘤坏死因子一【ａｏｏ肿ｃｒｏ）来增强ｐｒｏｅｌｅｔａｉｎｍｃｐａｅ（ａｒｈｇｓ腹膜巨噬细胞）ｏ的活性；ａ［等的研Ｐｒｋ。］究表明桑黄的酸性多糖还可以促使鼠类表面功能性的树状突细胞成熟。由此我们可以看出桑黄能明显地增强机体的免疫力，达到预防和治疗疾病的目的。３．２抗肿瘤作用自日从本科学家Ｉｋｗ发现桑黄具有很强的ｋａａｅ肿瘤抑制率以来，其抗肿瘤方面的研究就一直是桑黄的研究重点，倍受人们的关注。ａ［等科学家就Ｈｎ’ ］桑黄多糖在免疫化疗中的应用，进行了初步的实验，研究表明：桑黄多糖可以明显地延长植入了Ｂ６１ｅｎｍ（１ＦＯ１Ｆ０ｌｏａＢ６ｌ黑素瘤）ｍａ的小鼠的存活时间，减小Ｂ６Ｉｅｎｍ的扩散频率，１ＦＯｌｏａｍａ还可以有效地抑制Ｎ！Ｈ３肿瘤细胞的生长，究还发现桑黄Ｃ－２研多糖与ａｒｍｅ（ｄｉｙｉ阿霉素）ａｎ联合治疗的效果更好，并且对其他细胞无毒副作用。Ｓｏ￣等的研究发现ｈｎ “

实验3 液体菌种制作

制作的特点
1、成本低； 2、菌丝体生长快速； 3、生产周期短； 4、工厂化生产、无季节性。
五、液体菌种制作的用途
1、生产液体菌种； 2、制备药物或提取生化制品； 3、制作食品或畜禽饲料。
六、液体菌种制作的主要设备
1、摇床往复式摇床：振荡方式为来回震荡旋转式摇床：振荡方式为旋转 2、发酵罐
实验三液体菌种的制作
一、实验目的
1、液体培养基的制备方法 2、液体菌种接种方法
二、实验材料与设备
1、菌种侧耳 2、马铃薯 200克；葡萄糖 20克；自来水 1000毫升；自然PH 。 3、广口三角瓶、振荡培养箱
三、液体菌种制作的原理
食用菌液体菌种制作是采用液体培养基通入无菌空气并加以搅拌，增加培养基中溶氧含量，提供食用菌菌体呼吸代谢所需要的氧气，并控制适宜的外界条件，获得大量的菌丝体或代谢产物。
七、液体菌种接种方法：
1、用75%的酒精棉球对手指和广口三角瓶外壁消毒。 2、点燃酒精灯。 3、打开三角瓶封口膜，用移液管取5~10mL的液体菌种迅速移接到三角瓶中，迅速封口。 4、贴标签写明菌种编号，接种日期，姓名，随后置于振荡培养箱中于25℃避光振荡培养，7~10d可以长满瓶。 5、结果记录

桑树桑黄液体发酵培养基优化初报

１材料与方法
１１供试菌株桑树桑黄菌种来自于陕西省微生物研究所．微生物资源中心第三研究室。１２培养基＿１．母种培养基．１２采用ＰＡ综合培养基。Ｄ
２结果与分析
２１碳源的筛选试验结果．
蔗糖、糖、芽糖、溶性淀粉、米粉取代，乳麦可玉进行碳源试验；
将氮源测定基础培养基中的蛋白胨分别以酵母膏、麸皮、
（Ｈ）０、豆粉、素代替进行氮源试验。Ｎ４Ｓ黄尿
摘
要研究不同培养基对桑树桑黄液体培养中菌丝生长的
行优化。１３试验方法．
影响。通过液体发酵培养，利用Ｌ（４正交试验初步筛选出并９３）了桑树桑黄液体发酵的优化培养基：米粉１，皮ｌ，玉０ｇ麸０ｇ葡萄糖２，白胨５ｇ酵母膏５ｇ磷酸二氢钾１，酸镁０５ｇ０ｇ蛋，，硫ｇ．，维生素Ｂｌ０ｎｇ加水ｌ０Ｊａ，１０ｍＩ０。
等。
表２不同碳源培养基桑树桑黄发酵菌丝体干重
１．碳源测定基础培养基蛋白胨０５，ＨＰ４．％，．２２．％Ｋ２Ｏ１０
结果见表２。从表２可以看出，
ＭｇＯＯ５，Ｂ１Ｓ．％Ｖ０ｍｇ１０，Ｈ自然。０／０ｍＬｐ

桑黄栽培技术

桑黄栽培技术一、概述药用真菌是一类作为药物用以治疗疾病的真菌。

现约有20余种，大多以子实体、菌核等入药。

药用菌中含有多种生理活性物质，例如多糖、多肽、生物碱、酶、核酸、氨基酸、维生素以及植物激素等，对人的心血管、肝脏、神经、消化系统的多种疾病有较好的预防和治疗作用。

培养方式主要有人工栽培法、液体发酵法和固体发酵法。

其中液体发酵法劳动强度小，占地少，产物易纯化提取，对设备和技术要求较高，适宜工厂和研究机构生产高附加值产品。

但要注意保证菌丝的生长环境，主要有碳源、氮源、无机盐、PH、温度、溶氧、搅拌以及发酵周期。

药用真菌普遍具有多种生理活性，例如免疫调节活性、抗肿瘤活性抗病毒活性、降血压、抗氧化抗衰老、降血脂、抗血栓以及保肝作用。

二、桑黄的生物学特性桑黄属于担子菌门（Basidiomycotas），层菌纲（Hymenomycetes），非褶菌目（Aphyllophorales），锈革孔菌科（Hymenochaetaceae），针层孔菌属(Phellinus)，是一种多年生的药用真菌。

1.民间对桑黄的认识桑黄有着“森林黄金”之美称。

古代有“如果得到附生于桑树上的黄色疙瘩，死人也可复活”的传说，民间把它作为一种治疗肝病、癌症的良药。

最早在《本草纲目》中记载其能治血崩、血淋、脱肛泻血、带下、经闭等症。

其子实体入药，味微苦，能利五脏、软坚、排毒、止血、活血等，《神农本草经》将桑黄描述为“久服轻身，不老延年”，还有解毒、提高消化系统机能的作用。

2.桑黄子实体的形态特征从形态上看子实体中等至较大，无柄，菌盖扁半球形或马蹄形，木质，浅肝褐色至暗灰色或黑色，老时常龟裂，无皮壳，初期有细微绒毛，颜色黄褐色或咖啡色，以后光滑，有同心环棱，管孔多层，与菌肉同色，刚毛基部膨大，顶端较尖，子实层中通常有大量的锥形刚毛存在。

主要有三种：裂蹄木层孔菌、鲍氏层孔菌、火木层孔菌。

3.桑黄菌丝的形态特征主要介绍三种针层孔菌属真菌，包括：淡黄木层孔菌、裂蹄木层孔菌、火木层孔菌。

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信阳师范学院大学生科研项目
申请书
项目类别（在相应序号上划○）
1.人文社会科学研究项目
②自然科学研究项目
所属学科：微生物学
课题名称：桑黄菌液体培养工艺的研究
申请者：郑芳
所学专业：生物科学
系（院）名称：生命科学学院
申请日期：2009.10.09
信阳师范学院制
论证报告
一、本课题研究本课题的实际意义和理论意义
1.1 本项目研究的意义：
桑黄属担子菌纲、多孔菌目、多孔菌科、层孔菌属,是珍贵的药用真菌, 用于治疗血崩、血淋、脱肛泻血、带下、闭经、脾虚泄泻等。

桑黄是目前国际公认的生物抗癌领域中药效非常好的药用真菌。

由于天然的桑黄菌数量非常稀少, 加上国内各产地的掠夺性开采, 已难以成为稳定的工业产品来源。

因此, 寻求人工培育的方法, 研究以大量易得的菌丝体形式代替子实体入药已成为当务之急, 这对于保护天然资源、解决资源匮乏、满足市场需要、提高经济效益, 均具有十分重要的意义。

本文探讨了桑黄菌液体发酵的最适培养基, 为进一步研究液体发酵工艺及提取桑黄有效成分做准备。

1.2同类研究工作国内外研究现状与存在的问题：
自1948年美国Humfeld H等成功地对蘑菇进行深层发酵和1958年Szuees J等以发酵罐对羊肚菌的深层培养以来，液体深层发酵技术在食药用菌制种、综合利用等方面的应用日趋广泛。

我国已进行深层发酵并工业化生产应用的食药用菌有冬虫夏草、云芝、竹荪等。

但桑黄菌液体深层培养正处于研究起步阶段，桑黄菌菌丝生长最适培养基质和培养条件尚未研究清楚，单位体积培养基质收获的菌丝量非常少。

因此，开展液体深层培养条件下对桑黄菌的营养需求特性和液体培养工艺条件进行全面深入系统的研究，以便为其发酵生产提供科学依据。

真菌多糖是非细胞毒物质，作为药物的最大优点是安全、无毒副作用，是一类理想的非特异性免疫增强剂。

其抗肿瘤作用的显著特点不是直接作用于癌细胞，而是通过参与机体免疫反应，调节机体的免疫力而使肿瘤受到抑制，起到免疫疗法的作用。

鉴于真菌多糖显著的抗癌活性及其独特的免疫增强作用，上世纪90年代在南京举行的国际食用菌研讨会上，桑黄菌已被列为当前国内外最为热门的抗癌防癌食药用菌研究之一。

但至今在国内市场上尚未见到桑黄菌多糖产品。

因此，抓住机遇，加快桑黄菌发酵多糖的开发，具有重大的社会效益和经济效益。

获取桑黄菌多糖有两条途径:一是从共生与树木根集的子囊果中提取;二是通过深层培养，从深层发酵获得的菌丝体中提取。

目前，国内正在加紧桑黄菌液体培养菌丝体技术的研究，但尚未取得技术上的突破。

概括起来，主要存在以下问题与不足:（1)缺少对液体培养桑黄菌菌丝体营养需求以及培养条件的系统的全面的研究。

对其液体培养生长特性与规律的了解不深入。

（2)液体发酵菌丝体干重低(约 lg/l0L发酵液)，工业化大规模生产尚未实现。

（3)忽略了液体培养条件下胞外多糖的研究与开发利用。

因此，开展桑黄菌液体深层培养及其活性多糖的研究，具有非常重要的现实意义和学术价值。

二、本课题的研究内容、特色和创新之处，预计突破哪些难题
2.1本项目的研究内容:
本课题拟在下列几个方面展开研究
(1)桑黄菌液体发酵最适宜营养基质的筛选研究。

(2)桑黄菌液体发酵最适宜发酵条件的研究。

(3)桑黄菌液体发酵工艺研究。

(4)桑黄菌发酵多糖的提取工艺研究。

(5)桑黄菌发酵多糖组分的分离纯化。

2.2本课题的特色
在液体培养过程中,菌丝细胞能在反应器中(锥形瓶)适温度、最适酸碱度,最适碳、氮比等条件下生长,呼吸作用所产生的代谢废气又能及时排放,因此新陈代谢旺盛,菌丝生长迅速,在短时间内就可以获得大量菌丝体,从菌丝体中提取生物活性强，免疫力强，对肿瘤细胞抑制力强的块菌多糖，避开了利用块菌菌株共生树木形成子囊果的漫长生长周期。

而此具有生产时间短,效率高,成本低等优点。

因此,液体发酵已作为药用真菌生产发展的一个新方向,具有很强的生命力。

2.3课题创新之处
自然界中形成的桑黄子实体非常稀少,特别是形成可用子实体需要多年,这是因为受生理生态的特殊性和复杂性及外部条件的制约,而且人工栽培难度较大.因此对桑黄菌的开发利用将转向液体发酵这一方
向。

目前日本和韩国对桑黄菌研究较多,美国和西欧对其也略有研究,国内对桑黄的相关报道较少,特别是液体培养方面。

因此采用液体培养获得菌丝体是一个较新的途径。

时至今在国内市场上尚未见到桑黄菌菌丝体多糖产品。

因此，抓住机遇，加快桑黄菌多糖的开发，具有重大的社会效益和经济效益。

2.4预计突破的难题
通过单因素实验,对桑黄菌的培养基碳源﹑氮源及培养条件进行初步探究,从而得到桑黄菌的培养基碳源﹑氮源及培养条件的最佳方案,为提高桑黄菌的培养率奠定基础,以便扩大桑黄菌的人工培养,从而实现其在生产生活中的重要应用价值。

三、本课题的研究方法、步骤、可行性论证，研究工作总体安排及进度和预期成果
3.1本课题的研究方法、步骤、可行性论证
(1)利用SAS软件优化桑黄菌发酵培养基，筛选出最适宜桑黄菌液体深层发酵所需的碳源和氮源物质。

（2）利用测量生物量的方法优化桑黄菌液体培养最适PH,最适宜的温度，和转速等条件。

（3）胞外多糖提取纯化与分析：发酵液→离心→浓缩→醇析→洗涤→得粗多糖→复溶→去除蛋白→得精制多糖→过DEAE-52层析柱和SephadexG-100层析柱→收集液浓缩→真空冷冻干燥→得多糖纯品。

（4）采用FPLC法测定块菌胞外多糖纯度和块菌多糖分子量，红外光谱分析鉴定块菌多糖。

（5）对实验结果进行总结和成果鉴定。

3.2研究工作总体安排及进度
（1）2009年10月-2010年12月, 主要完成桑黄菌液体培养基质的筛选
（2）2010年1月-2010年2月, 主要完成桑黄菌液体培养条件的研究。

（3）2010年3月-2010年6月，主要完成桑黄菌液体发酵工艺及多糖的提取工艺研究。

（4）2010年7月-2011年9月，主要完成实验结果的总结和成果鉴定。

项目结项。

3.3研究的预期目标
(1)学术期刊上发表具有较高学术价值的论文。

(2)研究开发1-2种桑黄菌菌丝体保健品。

四、研究工作的资料、设备等准备情况
实施本项目研究已具备的条件有：已收集桑黄菌菌株，并且已掌握桑黄菌液体培养的技术，收集了大量的国内外真菌多糖提取及免疫性实验的资料，这些条件为完成本课题奠定了较好的资源基础。

实验室已具有的现代化研究仪器设备有：50L全自动发酵罐、美国贝克曼公司P/ACE毛细管电泳系统、日本岛津生产的LC-10AVP高效液相色谱仪和GC-14B高效气相色谱仪等。

完成此课题所需的仪器设备齐全。

本课题组对桑黄菌已进行了许多预备实验研究。

项目指导老师张海宾毕业后一直从事微生物教学和科研工作多年，主持过河南省科技攻关项目，获得了省级奖，发表论文20多篇，掌握微生物深层发酵及培养试验技术。

其它成员通过两年专业知识的学习，掌握了实验所必须得技能，因此本课题组有足够能力实施本计划。