2015级硕士实验课 补体依赖细胞毒试验11p
补体依赖的细胞毒实验原理(一)
补体依赖的细胞毒实验原理(一)补体依赖的细胞毒实验1. 介绍补体依赖的细胞毒实验（complement-dependent cytotoxicity assay，CDC）是一种常用的实验技术，用于评估抗体对细胞的毒杀效应。
该实验可用于研究抗体依赖的细胞毒杀机制、药物研发以及免疫治疗等领域。
2. 实验原理补体系统补体是机体免疫系统的重要组成部分，由多种蛋白质组成。
在免疫应答中，当抗原被抗体结合后，激活的补体系统可以诱导细胞溶解、炎症反应以及免疫调节等生物学效应。
补体的有效结合和活化是补体依赖的细胞毒实验的基础。
实验流程1.准备目标细胞：这里使用靶细胞，如癌细胞，可以通过培养得到。
2.添加待测抗体：将待测抗体添加至与靶细胞共同培养的细胞培养基中，使其与靶细胞形成复合物。
3.洗涤：以洗涤液洗去未结合的抗体。
4.添加补体：添加激活的补体，使其与复合物结合。
5.孵育：在适当的条件下（如体外孵育培养），让复合物和补体相互作用。
6.毒杀效应评估：观察细胞活力、溶解程度或细胞的其他形态学变化，评估抗体的毒杀效应。
3. 应用领域免疫治疗补体依赖的细胞毒实验可用于评估抗体依赖性细胞毒杀（antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC）效应，帮助筛选和优化免疫治疗药物，如单克隆抗体。
抗体研究该实验可以评估不同抗体的效应，分析抗原-抗体相互作用、抗体亚类、特异性和亲和力等对细胞毒杀的影响，促进抗体研究和开发。
免疫学研究研究补体依赖细胞毒杀机制有助于深入理解免疫应答过程中的细胞间相互作用、信号传导、炎症过程等免疫学基础问题。
4. 结论补体依赖的细胞毒实验是一种权威且可靠的实验方法，可用于评估抗体对细胞的毒杀效应。
通过该实验，可以深入研究抗体的毒杀机制，从而为免疫治疗和抗体研究提供重要参考。
参考文献： [1] Pandey JP, et al. Complement-dependent cytotoxicity (CDC) assays for anti-HLA antibodies. Methods Mol Biol. 2013;1034:59-67. [2] Chiu ML, et al. Assay development for the detection of antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) activity of anti-influenza neuraminidase antibodies. J Vis Exp. 2014;(88):e51241.。
北京市2015生物高考答案与解析
2015年北京高考生物试题及答案解析选择题1 乙肝疫苗的有效成分是乙肝病毒的一种抗原。
接种该疫苗后，人体会产生相应抗体。
该抗体A. 由T淋巴细胞产生B. 可与多种抗原结合C. 可裂解乙肝病毒D. 可被蛋白酶水解【答案】D。
【难度】★【考点】组成生物体的化学成分、动物生命活动的调节【解析】抗体是由效应B细胞合成分泌的，A错误。
抗体具有特异性，因此只能与一种或一类抗原特异性结合，B错误。
能够裂解靶细胞的是效应T细胞，病毒没有细胞结构，抗体可与之结合形成细胞沉淀，被吞噬细胞吞噬水解，C错误。
抗体的化学本质是蛋白质，可被蛋白酶水解，D正确。
2 下列对各种生物大分子合成场所的叙述，正确的是A. 酵母菌在高尔基体中合成膜蛋白B. 肌细胞在细胞核中合成mRNAC. T2噬菌体在细菌细胞核内合成DNAD. 叶肉细胞在叶绿体外膜上合成淀粉【答案】B。
【难度】★★【考点】真核细胞与原核细胞区别、细胞器的结构和功能【解析】蛋白质的合成场所是核糖体，A错误。
肌细胞为真核细胞，存在细胞核，转录合成mRNA的场所为细胞核，B正确。
T2噬菌体为病毒，在细菌中合成DNA，但细菌为原核生物，无细胞核，C错误。
光合作用场所为叶绿体，光反应场所为类囊体薄膜，合成ATP、[H]，暗反应场所为叶绿体基质，合成有机物（如淀粉），D错误。
3流式细胞仪可根据细胞中DNA含量的不同对细胞分别计数。
研究者用某抗癌药物处理体外培养的癌细胞，24小时后用流式细胞仪检测，结果如图对检测结果的分析不正确的是A.b峰中细胞的DNA含量是a峰中的2倍B.a峰和b峰之间的细胞正进行DNA复制C.处于分裂期的细胞均被计数在a峰中D.此抗癌药物抑制了癌细胞DNA的复制【答案】C。
【难度】★★【考点】细胞周期【解析】a峰中的细胞内DNA相对含量为40，b峰中的DNA相对含量为80，所以a峰中的细胞为还未进行DNA复制的细胞，b峰中的细胞为已完成DNA复制的细胞。
实验组与对照组相比，a峰中的细胞数量几乎没有变化，b峰中的细胞明显减少，可见此药物抑制了DNA的复制过程。
乌司他丁对脓毒症小鼠生存率及免疫功能的影响
第二军医大学硕士学位论文乌司他丁对脓毒症小鼠生存率及免疫功能的影响姓名：皇娜申请学位级别：硕士专业：麻醉学指导教师：邓小明2011-04 乌司他丁对脓毒症小鼠生存率及免疫功能的影响摘要【目的】本研究拟观察乌司他丁（UTI）对脓毒症小鼠生存率、体内炎性因子及淋巴细胞的影响，探讨乌司他丁对脓毒症的可能作用机制。
【方法】8～10 周C57BL/6 雄性小鼠随机分成四组：假手术Sham组，盲肠结扎穿孔CLP组，CLPUTI10 万U/kg术后30min 腹腔内给药UTI ip组和CLPUTI10 万U/kg术后30min 尾静脉给药UTI iv组。
在CLP 模型创建成功后，每组10 只小鼠首先进行7d 生存状况观察研究，描绘7d 生存率曲线。
在生存率研究的基础上，重新随机选取每组10 只小鼠，在CLP 术后24h 取材，检测外周血促炎细胞因子TNF-α 、IL-6和抗炎细胞因子IL-10 水平；外周血、胸腺和脾脏淋巴细胞计数；胸腺和脾脏淋巴细胞凋亡情况；胸腺和脾脏重量变化；HE 染色光镜下胸腺和脾脏病理变化。
数据采用Prism5.01 GraphPad Software，USA软件包进行统计学处理。
【结果】UTI 治疗组7d 生存率明显高于CLP 组（Plt0.05）UTI 治疗组促炎细胞因子TNF- 。
α和IL-6 与CLP 组相比显著降低（Plt0.05），而抗炎细胞因子IL-10 与CLP 组相比显著增加（Plt0.05）；UTI 组外周血、胸腺和脾脏淋巴细胞计数显著高于CLP 组（Plt0.05）；UTI 组脓毒症小鼠胸腺和脾脏淋巴细胞凋亡显著低于CLP 组（Plt0.05）。
UTI 组胸腺重量比CLP 组显著增加（Plt0.05），显微镜下，UTI 组仍能保持胸腺小叶结构，CLP 组胸腺小叶结构则消失，而皮质和髓质淋巴细胞明显减少。
UTI 组和CLP组脾脏重量无统计学差异Pgt0.05，UTI 组红髓和白髓结构尚能保持，可见脾小结存在，而CLP 组脾脏红髓和白髓结构紊乱，脾小结明显缩小或消失。
医学免疫学实验：补体介导的细胞毒试验
补体介导的细胞毒试验一、实验目的学习并掌握补体介导的细胞毒试验的实验原理及实验步骤。
二、实验原理带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。
染料（例如：伊红-Y、台盼蓝）可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死细胞或濒死细胞，而活细胞不着色。
此即补体依赖性细胞毒试验，利用细胞毒试验可以检查细胞膜抗原，亦可鉴定抗体的特异性。
本实验中，Thy-1 抗原是小鼠胸腺T 细胞特异的表面抗原，在体外利用抗小鼠Thy-1 的单克隆抗体通过补体的协同作用，可杀伤95％以上的胸腺细胞。
三、实验材料1.解剖器械(眼科剪、眼科镊)、平皿、80～100 目不锈钢网2. 试管、lml 吸量管、尖吸管3. 载玻片、盖玻片4. C57BL／6J 小鼠5. 1640溶液6. 抗小鼠Thy-1 的单克隆抗体（最适稀释度，本室制备）7. 补体(豚鼠新鲜血清并经小鼠胸腺细胞吸收，预先测定效价并稀释为最佳稀释度)8. 1％伊红-Y 染液四、实验步骤1. 小鼠胸腺细胞悬液的制备：将4～6 周龄小鼠采用颈椎脱臼法处死，取出胸腺放入已加入约4ml 冷1640溶液的平皿中，在100 目的不锈钢网上研磨后，过筛，放入试管，离心1000rpm，5 分钟，用1640溶液洗两次。
将沉淀的细胞重悬于1640溶液中，配成1×10^7／ml 细胞悬液。
2. 取试管3 支，标明顺序，依据下表依次加入1×107／ml 胸腺细胞悬液、抗小鼠Thy-1 的单克隆抗体(最适稀释度)及1640溶液，放入37℃温箱30 分钟。
3.取出后每管加入1％伊红-Y 染液1 滴，混匀，室温放置2 分钟。
4.重新混匀后分别在一张载玻片上滴片，加盖玻片镜检。
先在低倍镜下观察，再用高倍镜观察，比较3 管中细胞死活情况。
五、实验结果死细胞呈红色，无光泽且肿胀变大；活细胞不着色、有光泽且形态正常。
人外周血NK细胞3种纯化方法的比较
人外周血N K细胞3种纯化方法的比较张彩 田志刚 王郡甫 刘金生 张建华 许晓群 孙江内 N K细胞是机体抵抗肿瘤生长和病毒感染的重要的免疫监视细胞。
近年来,关于N K细胞本质及其功能和机制的研究已成为免疫学研究的热点内容之一。
但国内N K细胞的研究大多是检测N K细胞毒活性和N K细胞数量,很少直接观察N K细胞的特征及其功能特点,N K细胞分离纯化,是进行N K细胞基础与临床研究的基础和基本手段。
我们分别采用Percoll不连续密度梯度离心法、单抗铺皿法(Panning)及补体依赖的细胞毒法对人外周血N K细胞进行了初步分离纯化,现将结果报告如下。
材料与方法外周血非粘附单个核细胞的制备:用淋巴细胞分离液常规分离单个核细胞,经塑料粘附和尼龙毛柱去除B细胞和单核巨噬细胞,即为以T细胞和N K细胞为主的细胞群。
Percoll不连续密度梯度离心法分离人NK细胞〔1,2〕:先用10×PBS将Percoll原液渗透压调至285mOs/kg H2O(1mOs/kg H2O=1mmol/L),用p H 712的PBS将Percoll配成3715%～50%6个梯度或4215%～6617%7个梯度,每梯度相差215%。
将上述Percoll液按密度由高至低依此缓缓加于20ml分血管,将尼龙毛非粘附细胞轻轻铺于上层。
1800～2000r/min离心30～40min,吸取各梯度细胞计数,并用流式细胞仪鉴定CD3、CD56细胞表型。
单抗铺皿(P anning)法:无菌平皿用羊抗小鼠Ig G011mg/ml包被8h以上或过夜,用PBS/NCS 洗3次后,加入用CD3、CD4、CD8单抗标记的细胞悬液,室温或4℃平放40min,轻悬,使细胞重新分布,再放置40min。
分别收集非粘附细胞和粘附细胞,流式细胞仪检测CD56+N K细胞所占比例。
补体依赖的细胞毒(CCDC)法:CD3、CD4、CD8单抗标记的细胞悬液用PBS洗3次,加新鲜正常兔基金项目:国家自然科学基金资助项目(39870729)作者单位:山东省医学科学院基础医学研究所山东肿瘤生物治疗研究中心通信作者:田志刚,250062(E2mail:TZG@)血清(1∶2稀释)100μl,37℃孵育1h,用淋巴细胞分离液分离活细胞,流式细胞仪检测CD56+N K细胞所占比例。
adcc的名词解释
adcc的名词解释ADCC（cellular-dependent cytotoxicity）是一种细胞依赖性细胞毒性反应，属于免疫学中的一种重要反应。
在解释ADCC这个名词之前，我们需要先了解免疫反应以及细胞毒杀作用的基本概念。
免疫系统是我们身体内一套复杂而精密的保护机制，它能够识别和抵御身体内外的病原体，维持身体的健康状态。
当外界的病原体侵入我们的体内时，免疫系统会被激活，包括先天性免疫系统和获得性免疫系统。
先天性免疫系统主要由组织中的各种细胞和体液组成，其起初的作用是通过非特异性的防御机制来抵御病原体。
而获得性免疫系统是针对特定病原体的应答，它主要由淋巴细胞（B细胞和T细胞）组成，并具有记忆性，能对再次遇到同样的病原体作出更快更有效的应答。
细胞毒杀作用是免疫系统中的一种重要反应，它特指以细胞为媒介来摧毁异常和感染的细胞的能力。
细胞毒杀作用的过程通常分为两个步骤：识别和杀伤。
在识别阶段，特定类型的免疫细胞会通过表面上的受体识别异常或感染的细胞。
例如，在抗体依赖的细胞毒杀作用中，抗体分子会与异常细胞或感染细胞的表面抗原结合，从而标记这些细胞。
在杀伤阶段，其他类型的免疫细胞，比如自然杀伤细胞（NK细胞）或与抗体结合的细胞（比如巨噬细胞），通过直接接触或释放细胞毒素来摧毁被标记的细胞。
ADCC是一种抗体依赖的细胞毒杀作用，其中的"cellular-dependent"指的是ADCC是通过细胞之间的直接接触来实现的。
在ADCC中，抗体分子与靶细胞（通常是肿瘤细胞或感染的细胞）表面上的抗原结合，从而形成一个桥梁。
接着，天然杀伤细胞（NK细胞）会通过其表面上的Fcγ受体与抗体的Fc区域结合，从而激活NK细胞。
激活的NK细胞会释放细胞毒素，如穿孔素和溶酶体酶，直接攻击和杀伤被标记的靶细胞，最终导致其死亡。
ADCC在免疫系统中发挥着重要的作用，尤其在抗肿瘤免疫治疗中显示出良好的效果。
许多肿瘤细胞表面上具有抗原分子，这些抗原分子可以被体内产生的特异性抗体识别并结合。
补体实验报告
补体实验报告补体实验报告引言：补体是一种重要的免疫系统组分，它在机体抵御感染和清除病原体中起着关键作用。
为了深入了解补体的功能和机制，我们进行了一系列的补体实验。
本报告将对这些实验的设计、结果和意义进行详细阐述。
实验一：补体激活能力测试在本实验中，我们使用了补体激活能力测试来评估不同物质对补体活性的影响。
首先，我们准备了一系列溶液，包括正常人血清、不同浓度的抗原物质和不同浓度的抗体。
然后，我们将这些溶液与已知激活补体的物质进行反应，并使用特定的试剂盒检测补体活性。
实验结果显示，高浓度的抗原物质和抗体均能显著激活补体，而低浓度的抗原物质和抗体对补体的激活能力较弱。
这一实验结果表明，补体的激活受到物质浓度的影响。
实验二：补体降解能力测试为了进一步了解补体的功能，我们进行了补体降解能力测试。
在这个实验中，我们选择了一种已知能够激活补体的物质，并将其与不同浓度的补体混合。
随后，我们观察了补体在不同时间点的降解情况。
结果显示，补体在与激活物质接触后迅速降解，并在一定时间内完全消失。
这表明补体在抵御感染和清除病原体的过程中起到了重要的作用。
实验三：补体与细胞间的相互作用为了研究补体与细胞之间的相互作用，我们进行了一系列的细胞实验。
首先，我们选择了一种具有特定受体的细胞系，并将其与已知能够激活补体的物质接触。
随后，我们使用荧光显微镜观察细胞表面的补体结合情况。
结果显示，激活补体的物质能够与细胞表面的受体结合，形成补体-细胞复合物。
这一实验结果揭示了补体与细胞之间的相互作用机制，为进一步研究补体的功能提供了重要线索。
实验四：补体在炎症反应中的作用为了探究补体在炎症反应中的作用，我们进行了一系列的动物实验。
首先，我们选择了一种炎症模型动物，并注射了激活补体的物质。
随后，我们观察了动物体内炎症反应的程度和补体的活性变化。
实验结果显示，激活补体的物质能够显著增强动物体内的炎症反应，并导致补体的活性明显上升。
这一实验结果揭示了补体在炎症反应中的重要作用，为炎症相关疾病的治疗提供了新的思路。
补体依赖的细胞毒实验原理
补体依赖的细胞毒实验原理
补体依赖的细胞毒实验（CDC assay）是一种用于评估抗体对细胞的溶解作用的实验方法。
其原理基于以下步骤：
1. 样品准备：首先需要准备测试物质，包括待测抗体、目标细胞和补体。
目标细胞可以是病原体（如细菌、病毒等）或恶性肿瘤细胞。
2. 加入抗体：将待测抗体加入含有目标细胞的培养基中，使抗体与细胞发生特异性结合。
3. 加入补体：补体是一类血清蛋白质，它们可以通过活化补体途径或替代途径与抗体-抗原结合物相互作用，形成膜攻击复合物，导致细胞溶解。
4. 孵育：将培养基中的抗体、目标细胞和补体混合均匀后，置于恰当的培养条件下孵育一段时间。
5. 细胞溶解检测：通过染色或其他方法（如测定乳酸脱氢酶活性）检测细胞的溶解情况。
如果抗体与目标细胞特异结合，并且补体受到激活，那么补体依赖的细胞溶解会发生，检测方法将显示细胞溶解的程度。
通过上述原理，补体依赖的细胞毒实验可以用来评估抗体的溶解作用和免疫效力，对于研究和发展抗体治疗、疫苗研发等具有重要意义。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
激活补体对胸腺和脾的T细胞进行杀伤。
实 验 原 理 示 意 图
MAC
T Cell
T细胞+抗Thy-1抗体 + 补体
细胞溶解现象
实验分组
四人一组，1只小鼠/组。
两人做脾，两人做胸腺。
物品分配
器材名称 加样器 吸头 载玻片/盖玻片 显微镜 小试管 滴管 平皿 刻度吸管(5ml) 剪刀、镊子 (直,弯) 纱布块 量/组 1把 12个 4套 1台 6支 2支 1对 1支 1套
4. 按下图加样：>> 5. 混匀后放置37℃水浴，孵育40分钟。 6. 取出后每管加入 50ul 台酚兰染液，混匀后立即取出染色的
细胞悬液 20ul 滴到玻片上，用盖玻片盖上，在显微镜下观 察。
7. 观察结果：计数 200 个细胞中死细胞数 ( 死细胞形态为肿胀
变大，失去折光性，呈兰色)。
加样方法
2块
试剂名称 PBS 抗Thy-1血清 台酚兰 补体 小鼠
量/组 10ml 0.3ml 1瓶 0.5ml 1只
操作步骤
1. 将3ml PBS加入平皿中。 2. 小鼠脱颈处死，取脾和胸腺 (分别位于左侧腹部和胸骨柄处 ) 3. 取胸腺和脾脏分别放到平皿中，用直头镊子固定组织，用
弯头镊子轻压组织，将其捣碎，再将3-4层纱布覆盖到组织 上，然后用滴管隔着纱布将细胞悬液吸出。
台酚兰染色时间不要太长，因为台酚兰本身具有一
定的毒性作用，可致细胞死亡。
补体要新鲜采集，三只以上的豚鼠的血清混合。
补体依赖性细胞毒实验的应用
细胞性抗原的测定 单克隆抗体的筛选和鉴定 组织相容性抗原的检查与分型
PPT模板下载：/moban/
企业文化宣传PPT模板
试管
靶细胞
阳性管(ml) 阴性管(ml)
100 100
抗Thy-1血清
PBS 补体
100
— 100
—
100 100
结 果 判 定
Ag+Ab+C Ag+C
阳性管
阳性管
阴性管
细胞毒百分率(%)= (1-
阳性管活细胞数
阴性管活细胞数
)×100%
注意事项
靶细胞浓度要适中，过高或过低均会影响试验结果 。
1 2 3 4
单击此处添加标题
单击此处添加标题
单击此处添加标题
单击此处添加标题
PPT模板下载：/moban/
谢谢 观看
2015级硕士 免疫学实验课
补体依赖细胞毒试验
实 验 原 理
Hale Waihona Puke 细胞性抗原与特异性抗体(IgG1,2,3或IgM)的结合可
激活补体活化的经典途径，引起细胞膜损伤，膜通
透性改变而吸收染料，使细胞着色，胀大而死亡，
失去正常的折光性。根据死细胞的多少判断细胞毒
性的强弱。
本次实验采用抗 Thy-1 血清 (Thy-1 是 T 细胞的一种表 面标志 ) 与小鼠的胸腺和脾的 T 细胞相互作用，通过