超氧阴离子自由基检测试剂盒(磺胺比色法)
超氧阴离子清除能力检测试剂盒说明书__微量法UPLC-MS-5054
2超氧阴离子清除能力检测试剂盒说明书货号：UPLC-MS-5054规格：100T/96S微量法产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体110mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体 1.3mL×1支2-8℃保存试剂二粉剂×2瓶2-8℃保存试剂三液体6mL×1瓶2-8℃保存试剂四液体6mL×1瓶2-8℃保存试剂五液体6mL×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用前每瓶加5.34mL 蒸馏水充分溶解。
2-8℃保存4周。
产品说明：生物体内超氧阴离子等活性氧具有免疫和信号传导的作用，但积累过多时会对细胞膜及生物大分子产生破坏作用，导致机体细胞和组织代谢异常，从而引起多种疾病。
AP-TEMED 系统产生超氧阴离子，与盐酸羟胺反应生成NO 2－，NO －与对氨基苯磺酰胺和α-萘胺的作用生成红色的偶氮化合物，在530nm 处有特征吸收峰，样品对超氧阴离子的清除能力与530nm 的吸光值呈负相关。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、恒温培养箱/水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器，冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、组织样本：按照组织质量（g ）︰提取液体积(mL)为1︰5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g ，4℃，离心10min ，取上清，置于冰上待测。
2、液体样本：直接检测。
若有浑浊则离心后取上清待测。
3、细胞样本：收集细胞到离心管内，弃上清，按照每500万细胞加入1mL 提取液，超声波破碎细胞（功率200w ，超声3s ，间隔10s ，重复30次），然后10000g ，4℃，离心10min ，取上清，置冰上待测。
2022年同济大学生物技术专业《微生物学》期末试卷A(有答案)
2022年同济大学生物技术专业《微生物学》期末试卷A(有答案）一、填空题1、细菌表面常有毛状附属物，其中用于运动的称为______，帮助细菌附着到物质表面的称为______，在不同菌株间传递遗传物质的称为______。
2、温和噬菌体的存在形式有三种，即______、______和______。
3、呼吸链在传递氢或电子的过程中，通过与______反应相偶联，产生了生物的通用能源______，其形成机制可根据英国学者______的______ 学说来解释。
4、实验室常用的培养细菌的天然培养基为______，培养酵母菌的天然培养基为______，培养放线菌的组合（合成）培养基为______等，培养真菌的组合培养基为______等。
5、细胞骨架是由______、______和______三种蛋白质纤维构成的细胞支架，具有支持、运输和运动等功能。
6、在微生物促进人类医疗保健事业发展过程中，曾发生过“六大战役”，即______，______，______，______，______，______。
7、1971年，McCord和Fridovich提出了一个关于厌氧菌氧毒害机制的______学说。
其根据是厌氧菌缺乏______酶，一般也缺乏______酶，因此易受______等的毒害。
8、微生物间和微生物与它种生物间的主要关系有五种，即______、______、______、______、______。
9、某些核糖体蛋白mRNA的部分二级结构和rRNA的部分二级结构相似，当rRNA短缺时，多余的核糖体蛋白质与本身的mRNA结合，从而阻断本身的翻译，同时也阻断同一多顺反子的mRNA下游其他核糖体蛋白质编码区的翻译，使______的合成和______的合成几乎同时停止。
10、在免疫学反应中，抗原抗体反应的一般规律是______、______、______、______、______。
二、判断题11、核糖核蛋白体是核酸和蛋白质合成的场所。
植物总抗氧化能力(TAC)比色法(ABTS)定量检测试剂盒
植物总抗氧化能力（TAC）比色法（ABTS）定量检测试剂盒产品说明书（中文版）主要用途植物总抗氧化能力（TAC）比色法（ABTS）定量检测试剂盒是一种旨在通过过硫酸钾的参与，使染料ABTS 氧化，在抗氧化剂的存在下，通过分光光度仪，观察其峰值下降的变化，来定量检测对应于标准水溶性生育酚Trolox的总抗氧化能力，即抑制氧化等值浓度的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
适用于各种体液包括血浆、血清、尿液、脑脊液、唾液、精液等各种体液的总抗氧化能力检测。
产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定。
技术背景超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2-）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡，甚而导致诸如冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。
在生物系统内，通过抗氧化酶例如超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶等，大分子，例如白蛋白、铜蓝蛋白（ceruloplasmin；CER）、铁蛋白（ferritin）和抗氧化因子，例如生育醇、类胡萝卜素、抗坏血酸、还原性谷胱甘肽和尿酸胆红素（bilirubin）等，产生抗氧化能力，即捕获自由基的能力，达到消除或降低ROS的损害。
抗超氧阴离子自由基及生产超氧阴离子自由基测试盒
抗超氧阴离子自由基及生产超氧阴离子自由基测试盒说明书修订日期：2015.07.13 Cat number：KGT012Store at4℃for6monthsFor Research Use Only（科研专用）一、测定原理模拟机体中黄嘌呤与黄嘌呤氧化酶反应系统，产生超氧阴离子自由基O2—，加入电子传递物质及gress 氏显色剂，使反应体系呈现紫红色，可用分光光度计测其吸光度，当被测样本中含有O2。
抑制剂时，则比色时测定管的吸光度低于对照管的吸光度，而如果被测样本中含有产生O2。
物质时，则比色时测定管的吸光度高于对照管的吸光度，通过以维生素C做标准，可计算出被检物品对O2。
的影响能力。
二、试剂盒组份组份KGT01250assaysBuffer A 5.0mLBuffer B 5.0mLBuffer C 5.0mLBuffer D350μLBuffer D稀释液 5.0mL试剂E1支试剂F1支Vc标准品4支注意事项1．Buffer A室温较低时会有部分结晶析出，溶解后加蒸馏水稀释10倍至1×Buffer A50ml。
2．Buffer D用前用Buffer D稀释液按1︰14稀释至1×Buffer D（不可冷冻，4℃可保存2个月）。
3．试剂E配制：将试剂加入蒸馏水37.5mL中溶解后备用，4℃避光保存。
4．试剂F配制：将试剂加入蒸馏水37.5mL中溶解后备用，4℃避光保存。
5．显色剂配制：试剂E︰试剂F︰冰乙酸＝3︰3︰2的体积比配制，4℃避光保存（冰乙酸自备）。
6．Vc标准贮备液配制：将一支Vc标准品加蒸馏水定容至5ml（Vc标准配制后当天内使用）Vc标准品工作液（0.15mg/ml）配制：取1ml贮备液加4ml蒸馏水，5倍稀释现配现用。
Vc标准品配制后见光极易分解，配制的0.15mg/ml Vc标准品工作液需30分钟内检测。
三、操作步骤试剂测定管对照管标准管1×Buffer A （mL ） 1.01.0 1.0蒸馏水（mL ）0.050.15mg/ml Vc 标准品（mL ）0.05样品（ml ）0.05Buffer B （mL ）0.10.10.1Buffer C （mL ）0.10.10.11×Buffer D （mL ）0.10.10.1用涡旋混匀器充分混匀，置37水浴40分钟显色剂（ml ）2.02.02.010min 后倒入1cm 光径比色杯中，蒸馏水调零，波长550nm 处比色。
超氧阴离子清除实验
·O2ˉ自由基清除实验(1) 实验原理黄嘌呤氧化酶黄嘌呤＋H2O+O2尿酸＋H2O2+·O2¯即黄嘌呤氧化酶在有氧条件下催化黄嘌呤转化为尿酸，同时产生超氧阴离子自由基(·O2¯)。
·O2¯与NBT结合后呈蓝色，样品清除能力越大，与NBT结合的·O2¯越少，溶液的颜色越浅。
(2)试剂Xanthine(黄嘌呤): (C5H4N4O2 ), MW=152.1, 6.084mg/100mL(0.4mmol/l)实际配制：1.216mg/10mL，与NBT等体积混合使用Xanthine oxidase(黄嘌呤氧化酶)贮液: 1 unit/mL , (溶解酶的溶液要高压灭菌！防止蛋白酶对酶的降解！)0.05 unit/mL，每次取200uL稀释到4mL(PBS溶解)NBT: (Nitro blue tetrazolium chloride氯化硝基四氮唑蓝), MW=817.65,黄色19.6236mg/100mL(0.24mmol/l)实际配制3.925mg/10mL，与Xanthine等体积混合使用PBS(0.01mol/L,pH=8.0): NaCl 8g, KCl 0.2g, Na2HPO4(无水) 1.44g, KH2PO4 0.24g,800mL水，用NaOH(1M)调pH到8.0，定容到1000mL。
实际配制500mL。
高压灭菌，室温保存。
PBS(0.01mol/L,pH=7.4): 配制同上Ascorbic acid: MW=176.12 母液为1mg/mL 先两倍逐级稀释5个浓度实际配制见记录本！HCl(1M): MW=36.5 310ul/10ml.(36% HCl密度1.18g/ml)实际配制：800uL浓盐酸+9mL水，于塑料管中4℃保存。
NaOH(1M): MW=40 0.4g/10mL, 存于冰箱(3) 测定方法超氧阴离子自由基清除能力的测定参照Bae等人的方法略加改进。
sod检测试剂盒原理
sod检测试剂盒原理SOD检测试剂盒原理主要涉及到超氧化物歧化酶（SOD）的检测。
SOD是一种重要的抗氧化酶，负责清除体内产生的超氧自由基（O2-）。
在正常情况下，超氧自由基的产生和清除保持平衡，但当机体处于应激状态下，超氧自由基的产生量增加，而SOD的活性降低，则会导致氧化应激的增加和自由基损伤的发生。
因此，检测SOD的活性水平对评估机体的抗氧化能力和氧化应激状态具有重要意义。
SOD检测试剂盒主要通过一系列的反应和测定来评估SOD的活性水平。
下面将详细介绍SOD检测试剂盒的原理。
1.建立标准曲线：首先，准备一系列浓度不同的SOD标准溶液，称量一定量的SOD酶加入到不同的试管中。
然后，加入一定量的染色剂（如NBT溶液）和一定量的底物（如VES溶液），使其反应一定的时间。
最后，使用其中一种固定方法测量反应产物的光密度，并记录下来，得到不同浓度下的光密度值。
2.准备试样：获取待测样品，如血清、细胞提取液等，将其转移到试管中。
3.反应：将试管中的样品（或标准溶液）加入其中一种缓冲溶液和染色剂、底物等试剂，使其反应一定的时间。
4.终止反应：加入适量的终止液，使反应停止。
5.测量光密度：使用特定的方法或仪器测量反应产物的光密度，并记录下来。
6.数据处理：根据标准曲线，将测得的各样品（或标准溶液）的光密度值换算成SOD的活性。
根据不同的SOD检测试剂盒，可能需要进行一定的计算和校正。
SOD检测试剂盒的原理基本上是通过测定反应产物的光密度来间接评估样品中SOD的活性水平。
反应过程中，底物和染色剂会与SOD反应生成有色产物（如蓝色、紫色），其浓度与样品中的SOD活性呈正相关。
测得的光密度值经过换算和校正后，即可得到目标样品中SOD的活性水平。
需要说明的是，不同的SOD检测试剂盒可能具有不同的具体原理和操作步骤，但总体上都是通过测量特定反应产物的光密度来评估SOD的活性。
同时，SOD检测试剂盒还可能结合其他酶活性的检测，如过氧化氢酶（CAT）的活性等，以全面评估抗氧化酶系统的功能和机体的抗氧化能力。
DHE-ROS活性氧的检测
产品号 BB-4101 BB-4102 BB-4201 BB-4202 BB-4203 BB-4204 BB-4131 BB-4133 BB-4122
产品 细胞周期检测试剂盒 JC-1 线粒体膜电位试剂盒 Caspase 3 活性检测试剂盒 Caspase 8 活性检测试剂盒 Caspase 9 活性检测试剂盒 Caspase 10 活性检测试剂盒 细胞凋亡形态学检测试剂盒 Rhodamine 123 染色试剂盒 AO/EB 双染试剂盒
荧光显微镜检测： 1、 对贴壁生长细胞或活组织，可直接在荧光显微镜下观察；对悬浮生长细胞，取 25-50 μl 细胞悬液滴到一张显微载玻片上，再盖上一张盖玻片。 2、 荧光显微镜下，用蓝光或绿光激发，观察和拍摄细胞红色发射图像，ROS 阳性细
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咨询邮箱：bestbio@
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咨询邮箱：bestbio@
电话：021-33921235
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
产品说明书
产品特点： ● 使用方便：可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式
细胞仪检测； ● 背景低，灵敏度高； ● 线性范围宽，使用方便。
电话：021-33921235
本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！
产品说明书
胞在整个核区被染成红色；用紫外光激发时，胞浆中未氧化的二氢乙啶可发出 蓝色荧光。
流式细胞仪分析： 1、 对贴壁生长细胞，用胰酶消化制备成单细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。 用 0.5~1 ml 冰冷 PBS 重悬细胞（5~10 万）。 2、 采用 480~535 nm 波长激发，测定 590 nm~610 nm 以上的发射，细胞应可分成两个 亚群：ROS 阴性细胞仅有很低的荧光强度，ROS 阳性细胞有较强的红色荧光。
超氧阴离子自由基清除能力测试试剂盒分光光度计法
超氧阴离子自由基清除能力测试试剂盒（A002-96T分光光度计法）一、测定原理该方法利用NADH-PMS-NBT为超氧阴离子(O2·-)生成系统，超氧阴离子清除剂能减少NBT的蓝色。
通过检测560nm处吸光值可判断体系中还原物质的还原能力。
二、试剂组成试剂一：液体40mL×1瓶；试剂二：液体1mL一瓶；试剂三：液体1mL一瓶；试剂四：粉剂一支；试剂五：1mg/mL没食子酸标准品，1mL。
三、储存条件及有效期试剂盒-20℃可保存6个月。
四、试剂的配制试剂一工作液：用时加双蒸水360mL，也就是10倍稀释，得到400mL试剂一工作液；试剂二工作液：用赠送的棕色瓶配制。
试剂二工作液由试剂二加上100mL试剂一工作液配得，现配现用，注意避光；试剂三工作液：试剂三工作液由试剂三加上100mL试剂一工作液配得，现配现用；试剂四工作液：粉剂一支。
用50mL双蒸水溶解，摇匀后，取10mL，加入90mL试剂一，配成试剂四工作液，现配现用，用赠送的棕色瓶盛装。
注意避光，配好的试剂请于2小时内用完。
试剂五：1mg/mL没食子酸标准品，100μL，-20℃保存。
五、操作步骤测定吸光值。
1空白管很重要，建议做3个以上平行；2如样品颜色较浅可不做对照管六、计算公式注： 1 如未做对照孔，可以将其视作为0；2 阳性对照求值时将其视作测定孔进行计算即可。
七、注意事项1. 如样品中色素物质不是分析对象，建议先通过SEP C18柱进行脱色处理，处理后样品可不做对照孔；2. 如不确定样品的超氧阴离子自由基清除能力，可先做不同浓度的稀释液进行摸索，并选择适宜浓度进行测定，高浓度下，浓度与清除率间并不线性相关。
3. 试剂四切记避光保存，特别是配制后，且应尽快用完。
建议在做好一切其它准备工作后再配制试剂四应用液。
试剂四正常颜色为黄色，强光照射下，5-10分钟内会变为绿色，随后变为蓝色，变色后试剂不可再用！4. 试剂二、三应用液和样品混匀后再加入试剂四，次序颠倒会导致不显色。
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超氧阴离子自由基检测试剂盒(磺胺比色法)
简介：
超氧阴离子自由基作为生物体代谢过程中产生的一种自由基，可攻击生物大分子，如脂质、蛋白质、核酸和聚不饱和脂肪酸等，使其交链或者断裂，引起细胞结构和功能的破坏，与机体衰老和病变有很密切的关系，清除超氧阴离子自由基的研究已经得到了广泛的关注。
Leagene 超氧阴离子自由基检测试剂盒(磺胺比色法)又称超氧阴离子清除能力检测试剂盒，其检测原理是利用羟胺氧化的方法可以检测生物体系中超氧阴离子自由基(O 2-)，即超氧阴离子自由基(O 2-)与羟胺反应生成NO 2-，在一定范围内颜色深浅与超氧阴离子自由基(O 2-)成正比，根据NO 2-反应的标准曲线将A 530换算成NO 2-浓度，再依据上述关系式即可计算出O 2-浓度。
该试剂盒主要用于测定植物组织中的超氧阴离子自由基含量或超氧阴离子清除能力。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
自备材料：
1、 蒸馏水
2、 实验材料：植物组织(大豆、绿豆、玉米等叶片)、血液、组织样本等
3、 研钵或匀浆器
4、 离心管或试管
5、 低温离心机
6、 恒温箱或水浴锅
7、 比色杯
8、 分光光度计
操作步骤(仅供参考)：
编号 名称
TO1123 50T Storage
试剂(A): NO 2-标准(1mM) 1ml RT 试剂(B): O 2- Lysis buffer 125ml RT 试剂(C): 羟胺溶液
30ml RT 试剂(D): 氨基苯磺酸显色液 30ml 4℃ 避光 试剂(E): 萘胺显色液 30ml
4℃ 避光 使用说明书
1份
1、准备样品：
①植物样品：取正常或逆境下的新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取预冷的O2-Lysis buffer后冰浴条件下匀浆或研磨，4℃离心，上清液即为超氧阴离子自由基提取液，4℃保存备用。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，4℃保存，用于超氧阴离子自由基的检测。
③高活性样品：如果样品中含有较高浓度的超氧阴离子自由基，可以使用O2- Lysis buffer 进行恰当的稀释。
2、配制系列NO2-标准溶液：取出NO2-标准(1mM)恢复至室温后，以NO2-标准(1mM)
按下表继续稀释：
加入物(ml) 1 2 3 4 5 6
NO2-标准(1mM)0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 蒸馏水0.99 0.98 0.97 0.96 0.95 0.94 NO2-含量(μM) 10 20 30 40 50 60
3、O2-加样：按照下表设置空白管、标准管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意
避免产生气泡。
如果样品中的超氧阴离子自由基浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管。
加入物(ml) 空白管标准管测定管
蒸馏水1——
系列NO2-标准(1-6号管) — 1 —
待测样品——0.25
O2- Lysis buffer ——0.25
羟胺溶液——0.5
混匀，25℃水浴孵育。
氨基苯磺酸显色液0.5 0.5 0.5
萘胺显色液0.5 0.5 0.5
混匀，30℃水浴孵育。
4、O2-测定：以空白调零，分光光度计(1cm光径比色杯)检测标准管、测定管530nm处吸光度(A标准、A测定)。
计算：
以系列NO2-标准(1-6号管)含量(μM)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，制作标准曲线，根据测定管的吸光度进而计算NO2-含量。
根据如下公式计算具体样品中超氧阴离子
自由基(O2-)的含量：
植物组织样品O2-(μM/g)=2×n×V T/(W×V S)
血清、尿液等样品O2-(μM/ml)=2×n×N/V S
注意事项：
1、实验材料应尽量新鲜，如取材后不立即使用，应存于4℃。
2、如果样品中含有较多的叶绿素，会干扰测定结果，可在加入羟胺溶液25℃水浴孵育
20min后用等体积乙醚萃取叶绿素，再行显色反应。
3、如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定，但应考虑酶标仪的最大检测体
积。
4、所测样本的浓度过高，应用O2- Lysis buffer稀释样品后重新测定。
有效期：6个月有效。
相关：
编号名称
DF0135 多聚甲醛溶液(4% PFA)
PS0013 RIPA裂解液(强)
TO1013 丙二醛(MDA)检测试剂盒(TBA比色法)。