微生物室志贺菌沙门菌诊断血清质控记录表
微生物限度检查记录 版
表：微生物限度检查记录（通用）三、大肠埃希菌检查胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、麦康凯液体培养基（配制批号：）麦康凯琼脂培养基（配制批号：）微生物限度检查记录（30～35℃，3～5天）20℃～25℃，5～7天）沙氏葡萄糖琼脂培养基（配制批号：）三、控制菌检查（30-35℃）表：胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、麦康凯液体培养基（配制批号：）麦康凯琼脂培养基（配制批号：）（30℃～35℃）胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、RV沙门增菌液体培养基（配制批号：），木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（配制批号：）、三糖铁琼脂（配制批号：）五、耐胆盐革兰阴性菌检查胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、肠道菌增菌液体培养基（配制批号：），紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基（配制批号：）表：（含药材原粉的片剂）胰酪大豆胨液体培养基（配制批号： ）、麦康凯液体培养基（配制批号： ）麦康凯琼脂培养基（配制批号： ）（30℃～35℃）胰酪大豆胨液体培养基（配制批号： ）、RV 沙门增菌液体培养基（配制批号： ），木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（配制批号： ）、三糖铁琼脂（配制批号： ）五、耐胆盐革兰阴性菌检查胰酪大豆胨液体培养基（配制批号： ）、肠道菌增菌液体培养基（配制批号： ），紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基（配制批号： ）表：微生物限度检查记录（蛇胆川贝液）三、大肠埃希菌检查胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、RV沙门增菌液体培养基（配制批号：），木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（配制批号：）、三糖铁琼脂（配制批号：）表：微生物限度检查记录（30～35℃，3～5天）20℃～25℃，5～7天）沙氏葡萄糖琼脂培养基（配制批号：）胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、麦康凯液体培养基（配制批号：）麦康凯琼脂培养基（配制批号：）表：微生物限度检查记录（内包材）三、大肠埃希菌检查胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）、麦康凯液体培养基（配制批号：）麦康凯琼脂培养基（配制批号：）。
大肠、沙门、志贺菌的培养与鉴定
结果报告
1.若分离培养未见可疑菌落，或不符合 鉴定依据者，报告：为分离到**细菌。 2.经分离鉴定后符合鉴定依据者，报告： 分离出**细菌。 3.经进一步做全面生化反应和血清学鉴 定报告：分离出**细菌的**血清型
掌握大肠埃希菌沙门菌属和志贺菌属的菌落形态染色特性培养特性及常见鉴定实验
大肠、沙门和志贺菌的培养与 鉴定
临床病原生物学教研室
目的要求
1.掌握大肠埃பைடு நூலகம்菌、沙门菌属和志贺菌 属的菌落形态、染色特性、培养特性及 常见鉴定实验。 2.掌握沙门菌属和志贺菌属细菌的血清 学鉴定方法。
器材与试剂
1.菌种：大肠埃希菌、福氏志贺菌和肠炎沙门 菌。 2. 2.培养基：KIA、MIU、葡萄糖蛋白胨水、柠檬 KIA MIU 酸盐、硝酸盐培养基、血平板、MAC平板。 3.试剂：氧化酶试剂，甲基红试剂，诊断血清 等。 4.其他：载玻片、生理盐水、革兰染液等。
步骤与方法
1. 染色观察：G-杆菌。 2.菌落观察（1）大肠埃希菌：a.血平板： 灰白色，圆形、湿润，有的可出现溶血 环。b.麦康凯或SS平板平板：红色菌落 （2）沙门菌属：a.血平板:灰白色，圆形、 湿润 b.麦康凯或SS平板:无色、透明，有 的菌属在SS平板上可形成黑色菌落.
步骤与方法
3.生化反应：（1）氧化酶试验 （2）KIA、MIU、甲基红、吲哚、硝酸盐 还原和柠檬酸盐实验。 4.血清学试验 5.动物实验
沙门氏菌操作记录(质控)
XXX中心
沙门氏菌鉴定原始记录
报告单号：共页第页样品名称: 样品数量：
生产厂家：样品性状及包装：
样品来源：检测地点：
采或送样单位：采或送样人：
检验依据：编号或批号：
收样日期：检验日期：
检验项目：分离鉴定致病菌
一、危险性评估：
二、样品前处理
共页第页
血清学凝集试验：
菌种处理：
终末消毒：
四、使用设备、标准菌株和主要试剂：
1、使用设备
恒温培养箱：
恒温培养箱：
显微镜：
高压蒸汽灭菌器：
生物安全柜：
2、标准菌种来源、菌号及代数
沙门氏菌标准菌株：
3、主要试剂、批号及配制记录
SC增菌液：
TTB增菌液：
BS琼脂平板：
科玛嘉沙门氏显色培养基：
三糖铁琼脂：
沙门氏菌诊断血清：
生化鉴定管：
五、检验结果
检毕时间年月日检测者：复核者：
XXX中心
沙门氏菌鉴定原始记录
报告单号：共页第页样品名称: 样品数量：
样品性状及包装：检测地点:
收样日期：检验日期：
检验依据： GB4789.4-2010
检验项目：分离鉴定沙门氏菌
一、样品前处理
用0.45um滤膜过滤500ml水样，将滤膜无菌手续剪碎，分别取适量滤膜进行如下操作。
共页第页
血清学凝集试验：
盐水对照：
沙门氏菌A-F多价O血清：
O4:
O5:
H多价2：
Hf：
三、检验结果
检毕时间年月日检测者：复核者：。
沙门氏菌原始记录表
第 页，共 页沙门氏菌检验原始记录表检测员： 校核人： 审核人：年 月 日 年 月 日 年 月 日样品编号检测类别环境条件温度： ℃ 湿度： ％检测标准 医疗水污染物排放标准 医疗机构污水和污泥中沙门氏菌的检验方法 GB18466-2005 附录B设备名称设备编号增菌□ 污水 移取200mL 污水，用灭菌滤膜抽滤，用100mL 二倍浓度SF 增菌液将滤膜上的杂质洗脱到灭菌三角烧瓶中，摇匀。
37℃下培养12~24h□ 污泥 称取20g 污泥，加200mL 灭菌水，制成1:10混悬液，移取100mL 混悬液，加入到装有100mL 二倍浓度SF 增菌液的已灭菌三角烧瓶中，摇匀。
37℃下培养24h检验项目现象初判断分离 培养SS 培养基平板 37℃培养， h （24~48h ）BS 培养基平板 37℃培养， h （24~48h ）生化试验表1 在TSI 试验培养基内的反应结果TSI 培养基 37℃培养， h （18~24h ）初步判断斜面 底层 产气 硫化氢注：K ：产碱，A ：产酸；+：阳性，—阴性：初步判断：可疑沙门氏菌或非沙门氏菌。
表2 生化反应初步鉴定表葡萄糖甘露醇 麦芽糖乳糖 蔗糖 靛基质 硫化氢 动力 尿素酶注：＋阳性；－阴性；＋/－阳性或阴性表3 补做试验（选做）侧金盏花醇水杨素 氰化钾结果判断注：＋：阳性，－：阴性；结果判断：沙门氏菌或非沙门氏菌。
血清学鉴定盐水 ，多价抗O 型抗血清（ A-F ） 。
结果 mL 样品中 沙门氏菌 备注。
微生物限度检验记录表
霉菌、酵母菌数
(玫瑰红钠琼脂培养基
23～28℃培养72小时)
备注
原液
10-1
10-2
10-3
10-4
原液
10-1
10-2
10-3
1
2
3
平均值
菌落数
（个/ml）
二、控制菌检查
阴性对照液：稀释液
阳性对照液：供试液+阳性菌落
大肠埃希菌检查
1 2 3 4 5
BL.增菌MUG-靛基质试液曙红亚甲蓝或Macc平板染色镜检IMVic
文件编号
使用编号
微生物限度检验记录
样品名称
生产批号
样品来源
检验日期
检验依据
沉降菌落数
无菌室：左_______中_______右_______
净化台：左_______中_______右_______空白对照_______
供试品/液
制备方法
一、细菌数、霉菌和酵母菌数检查
项目
基
结论：□检出□未检出
结果分析
结论
□(均)符合规定□(均)不符合规定
检验：审核：复核：日期：
阴性对照：
阳性对照：
供试品：
注：当第2步发现有菌落生长且形态与金黄色葡萄球菌疑似时需挑选2～3个菌落，分别接种于营养琼脂培养基斜面上，培养18～24小时，再进行第3步骤进一步鉴定。
结论：□检出□未检出
铜绿假单胞菌检查
1 2 3 4 5
BL增菌溴化十六烷基三甲铵平板革兰氏染色镜检氧化酶试验绿脓菌素试验
培养时间：24h24h———
阴性对照：
阳性对照：
供试品：
注：当第2步发现有菌落生长且形态与铜绿假单胞菌疑似时需挑选2～3个菌落，分别接种于营养琼脂培养基斜面上，培养18～24小时，再进行第3步骤进一步鉴定。
沙门氏菌检测原始记录
德州市德城区疾病预防控制中心
检测原始记录之一
共页第页检品编号物态/颜色
检测项目沙门氏菌检验检测依据GB 4789.4-2010 食品微生物学检验沙门氏菌检验
设备名称隔水式电热恒温培养箱设备编号
1 检验方法：
1.1 前增菌：加225mL BPW增菌液均质混匀，℃培养小时，日时至日时。
1.2 增菌：轻轻摇动培养物，取1mL接种于10 mL TTB内，℃培养小时，日时至日时。
同时另取1mL接种于10mL SC内，℃培养小时，日时至日时。
1.3 分离：分别用接种环取增菌液1环划线接种BS琼脂平板一个，℃培养小时，日时至日时。
同时另取增菌液1环划线接种沙门氏菌显色培养基平板一个，℃培养小时，日时至日时。
观察菌落生长状况：可疑菌落生长。
1.4 初步生化：若有可疑菌落生长，挑取各选择性平板上2个以上典型或可疑菌落，接种三糖铁琼脂，赖氨酸脱羧酶试验培养基和营养琼脂平板，于℃培养小时，日时至日时，也可同时接种蛋白胨水（供作靛基质试验）、尿素琼脂（pH7.2）、氰化钾（KCN），于℃培养小时，日时至日时，必要时进行系统生化鉴定及血清学凝集。
初步生化结果：
葡萄糖乳糖蔗糖H2S 产气动力靛基质pH7.2尿素氰化钾赖氨酸脱羧酶
1.5系统生化鉴定：API 20E 生化条：
1.6 血清学凝集：
2 检验结果：根据GB 4789.4-2010食品微生物学检验沙门氏菌检验，在中沙门氏菌。
检测起止时间：年月日时至年月日时
检测人：审核人：
检测原始记录、检测报告存根、检测申请及受理单等合并归档保存。
DCQJY/JLBG 127。
09、10致病菌检验记录
致病菌检查记录表编号： R-QC-01009-00品名：批号：规格：数量：检验单号：始检日期：检验依据：GB/T4789.4、5一、沙门氏菌检查增菌液菌落形态平板四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB42℃，18-24h)亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC36±1℃，18-24h)DHL平板上36±1℃18-24h疑似菌落□有□无疑似菌落□有□无BS平板上36±1℃40-48h疑似菌落□有□无疑似菌落□有□无接种三糖铁琼脂斜面底层产气硫化氢结论□阳□阴□阳□阴□阳□阴□阳□阴靛基质试验□阳□阴尿素试验□阳□阴氰化钾试验□阳□阴赖氨酸脱羧酶试验□阳□阴实验结果结论：二、志贺氏菌检查增菌液菌落形态平板HE琼脂平板上36±1℃18-24hEMB琼脂平板上36±1℃18-24hGN增菌液(36℃，6-8h)疑似菌落□有□无疑似菌落□有□无接种三糖铁琼脂斜面产酸底层产碱产气硫化氢葡萄糖半固体管产酸产气□是□否□是□否□是□否□阳□阴□是□否□是□否葡萄糖铵试验□阳□阴尿素试验□阳□阴氰化钾试验□阳□阴赖氨酸脱羧酶试验□阳□阴西蒙氏柠檬酸盐试验□阳□阴水杨苷和七叶苷分解□阳□阴血清学分型试验结果：生化分群试验结果：乳糖甘露醇棉子糖甘油靛基质□阳□阴□阳□阴□阳□阴□阳□阴□阳□阴结论：复核者：检验者：致病菌检查记录表编号： R-QC-01010-00品名：批号：规格：数量：检验单号：始检日期：检验依据：GB/T4789.10、11三、金黄色葡萄球菌检查接种菌落数稀释Baird-Parker平板36±1℃24h0.3ml 0.4ml 0.5ml1：10 1：100接种血平板，36±1℃24h培养染色镜检□阳□阴血浆凝固酶试验□阳□阴实验结果：结论：四、溶血性链球菌检查接种菌落数稀释Baird-Parker平板36±1℃24h1 2 31：10混悬液血平板上分纯，36±1℃24h培养染色镜检□阳□阴溶血情况□阳□阴链激酶试验□阳□阴杆菌肽敏感试验36±1℃18-24h培养□阳□阴实验结果：结论：复核者：检验者：。
沙门氏菌检测原始记录
菌落形态
分离培养
BS琼脂
培养条件
HE琼脂
培养条件
生化试验
培养条件
现象
初步判定
三糖铁琼脂
赖氨酸脱羧酶试验培养基
营养琼脂平板
生化反应初步阴性对照
多价菌体抗原（O）
多价鞭毛抗原（H）
检验结果
□25g(mL)样品中未检出沙门氏菌
□25g(mL)样品中检出沙门氏菌
备注
样品编号
样品名称
检验依据
GB4789.4-2010沙门氏菌检验
检验环境
温度： ℃ 湿度： %RH
检验日期
检验地点
□无菌室1 □无菌室2 □阳性对照室 □微生物限度室
仪器设备名称及编号
电子天平:有计量合格标识，并在检定/校准有效期内.
恒温培养箱:有计量合格标识，并在检定/校准有效期内.
电热恒温水浴锅：有计量合格标识，并在检定/校准有效期内.
样品制备
□固体和半固体样品：称取25g样品225mLBPW中，均质1min-2min
□液体样品：吸取25ml样品至盛有225mLBPW的无菌锥形瓶中,振荡混匀
前增菌
将上述样品混匀液于36℃培养8h-18h
增菌
轻轻摇动培养过的样品混合物，移取 1 mL，转种于 10 mL TTB 内，于 ℃培养h。同时，另取 1 mL，转种于 10 mL SC 内，于 ℃培养 h；
K：产碱，A：产酸；＋：阳性，－：阴性；＋（－）：多数阳性，少数阴性；＋/－：阳性或阴性。
微生物检验实验室沙门菌属标准操作规程
微生物检验实验室沙门菌属标准操作规程1.概述沙门菌属是一大群寄生于人和动物肠道中的形态、培养特性、生化反应和抗原构造相似的革兰阴性杆菌，其血清型别繁多、抗原复杂的肠道病原菌，分为6个亚属、2200种以上的血清型。
伤寒沙门菌属亚属I，多价O抗血清D群，是临床上最为重要的沙门菌。
2.标本类型粪便、血液等额标本。
3.鉴定3.1 形态与染色：革兰阴性杆菌，菌体细长，大小为（0.7~1.5um）×（2~5um）。
有周鞭毛，无芽胞，无荚膜。
3.2 培养特性：在麦康凯琼脂平板上形成无色、透明的菌落；SS琼脂平板上呈无色、透明，但大部分菌落中央呈黑色（产H2S）；在XLD琼脂平板上也产生中央黑色的菌落（产H2S）；HE琼脂平板上菌落呈蓝绿色。
CHROMagar显色培养基上呈紫色菌落。
半固体琼脂中均匀混浊生长，无穿刺线。
3.3 生化反应：氧化酶试验阴性，TSI为K/A；发酵葡萄糖，不发酵乳糖；IMViC-+--或-+-+，H2S试验阳性或阴性，动力、赖氨酸脱羧酶和硝酸盐还原试验阳性，鸟氨酸脱羧酶、尿素酶试验阴性，氰化钾（KCN）培养基不生长。
3.4 鉴别要点：3.4.1 本菌特征：鉴别平板上无色透胆或半透明的菌落，TSI为K/A，H2S阳性或阴性，有动力，IMViC-+--或-+-+，尿素酶试验阴性。
符合上述特性者，可通过血清凝集试验）作出诊断。
3.4.2 与志贺菌属的鉴别：少数伤寒沙门菌在TSI上H2S阴性，动力不明显，易与志贺菌属混淆，可用血清凝集反应相鉴别。
3.5 操作步骤3.5.1 观察菌落特征，挑取可疑菌落，做TSI试验。
参见细菌鉴定标准操作构规程。
3.5.2 血清学鉴定参见沙门菌血清学检测标准操作规程。
3.5.3 鉴定从SS琼脂平板上挑取可疑菌落，用微生物鉴定仪或传统生化法进行细菌鉴定。
4. 药敏参见药物敏感性试验标准操作规程及CLSI M100-S20最新版本文件。
5. 质量控制参见质量管理程序。
沙门菌检验记录
品名: 批号: 检验日期:四、沙门菌检查按ZLSOP 微生物限度检查操作规程检查供试液制备和增菌培养取 g供试品处理后接种至 ml的胰酪大豆胨液体培养基（配制批号：）中，混匀，℃培养24小时，培养箱编号: wxzl 。
选择和分离培养取上述培养物0.1ml接种至10mlRV沙门增菌液体培养基（配制批号：）中，℃培养24小时，培养箱型号: 培养箱编号: wxzl 。
取少量RV沙门菌增菌液体培养物划线接种于木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基（配制批号：）平板上，℃培养48小时，培养箱编号: wxzl 。
阳性对照实验按供试液的沙门菌检查，乙型副伤寒沙门菌的加菌量不大于100cfu（菌种来源：乙型副伤寒沙门菌菌种编号：）。
阴性对照实验以稀释剂代替供试液，按沙门菌检查法检查，结果如下表：注：＋代表木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基平板上有菌落生长, —代表木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基平板上无菌落生长。
若沙门菌在木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基平板上生长良好，菌落为淡红色或无色、透明或半透明、中心有或无黑色。
用接种针挑选疑似菌落于三糖铁琼脂培养基高层斜面上进行斜面和高层穿刺接种，培养24小时，或采用其他适宜方法进一步鉴定。
结果判断若木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基平板上有疑似菌落生长，且三糖铁琼脂培养基的斜面为红色、底层为黄色，或斜面黄色、底层黄色或黑色，应进一步进行适宜的鉴定试验，确证是否为沙门菌。
如果平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，或三糖铁琼脂培养基的斜面未见红色、底层未见黄色，或斜面黄色、底层未见黄色或黑色，判供试品未检出沙门菌。
结论：检验人: 日期复核人: 日期:第页。