免疫组织化学SABC法

⑴ lgG (anti-Mouse)
⑵ lgG (anti-Rabbit)

Straptived- HRP 复合物（SABC） A液（avidin） ：亲和素 B液（biotin） ：生物素-HRP

显色剂： 浓缩DAB H 2O 2 Buffer
实验步骤:
(1) 结肠癌石蜡切片脱蜡下行酒精入水； (2) PBS浸洗，×3次；
免疫组织化学SABC染色法
原理：
ABC法是利用卵白素与生物素特有的高度
亲和力这一生物学性质，先将生物素与辣根过
氧化物酶(HRP)结合，形成生物素化HRP，然后
与卵白素按一定比例混合，形成ABC复合物。
用生物素化二抗与第一抗体结合，再与ABC复 合物联结形成抗原—抗体—生物素化二抗— ABC。最后用底物显色剂显色。
(3) 3%过氧化氢溶液，10min；
(4) PBS浸洗，×3次； (5) 使用封闭剂：每张切片滴加非免疫动物（羊）血 清(与二抗同源)室温 10min；倾去血清，不洗！ (6) 每张切片滴加小鼠抗人CEA单抗（1:100）， 37℃ ，30min，或4℃过夜； (7) PBS浸洗，3次；
(8) 每张切片滴加第二抗体(1:100)，37℃，
20min； (9) PBS冲洗，×3次； (10)每张切片加100lSABC溶液(1:100)，37℃， 20min； (11)PBS冲洗，×3次； (12)新鲜配制的底物 DAB溶液，3～5min； (13)自来水冲洗，脱水，透明，中性树胶封固。
注意事项
1 2 3 4 5 6 必须设阴性对照（不加第一抗体）； 所有反应在湿盒中进行； 在染色过程中勿使切片干燥 ； 洗完切片后应尽量吸取清洗液； 掌握微量加样器的正确使用方法； DAB为致癌剂，使用时加倍小心。
实验常用试剂

0.01M PBS (pH=7.2～7.4) 0.3%H2O2-甲醇 或3% H2O2
原液H2O2 用甲醇1:100稀释——0.3%
原液H2O2 用双蒸水1:10稀释——3%


百度文库
封闭剂：10%羊血清 （PBS配）
试剂盒

生物素化的二抗(Biotinated-Secondary Ab)
结果判断标准
一些原则必须掌握： 阳性细胞定位是否明确，是胞膜、胞浆还是胞 核阳性 间质清晰，无背景着色。 阳性细胞要在5%以上，才能定为阳性。 参考评价： <5% - ， 5%-25% + ， 25%-50% ++， >50% +++ ～++++
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雌激素受体β在乳腺癌的表达