细菌防腐剂挑战性实验
用微生物挑战性试验评价化妆品防腐剂效果_林惠芬
( 3) 防腐效果差( P) , 即三次加菌后, 在每次加 菌后的第 7 天或 14 天时, 存活菌量 > 1000 个/ g 或 mL 样品( 不通过测试) 。 2 结果
受试样品一次加菌和 3 次加菌后, 在检测时间内 细菌和霉菌的抗腐能力见表 1～4。根据两种方法评 判标准, 将 8 种防腐体系的防腐效果评判列于表 5。 从结果看, 两种加菌方法对防腐体系的评判结果基本 一致, 三次加菌还可对有效的防腐体系作出程度之区 别: 防腐优良( W: Well pr eser vative) 和防腐尚可( M : M ar ginal preserv at ive) 。此外, 在一次加菌后 1～2 周 内能将样品中含菌量降低至加入菌量的 0. 1% , 可通 过 3 次加菌实验, 如防腐体系 5 和 8 对细菌的防腐 力; 但若大于 0. 1% , 即使在以后的测试时间内有逐 渐下降至 0 的趋势, 可能亦很难通过 3 次加菌实验, 如防腐体系 7 对细菌的防腐力。
关键词 微生物挑战性试验 化妆品防 腐 评价
防腐剂是化妆品工业中非常重要的部分[ 1, 2] 。随
着化妆品种类和剂型的繁多, 及高科技生物原料应用 的增加, 许多化妆品公司都在积极研究防腐剂问题 ( 包括其品种和使用浓度) , 并不断建立新的防腐体 系。在评价防腐剂的实际效果中, 应用最为广泛和经 典 的 研 究 手 段 是 微 生 物 挑 战 性 试 验 ( m icrobial challeng e t est ing ) [ 3～6] 。这种测试方法是根据化妆品 生产和消费者使用中可能存在的污染( 一次污染和二 次污染) , 人为地将一定量的微生物( 细菌和霉菌) 加 入到产品中, 然后间隔一定时间分析该产品中防腐剂 对微生物的作用, 按检测期间加菌产品的含菌量来评 判防腐剂的防腐效果与否或大小, 这种方法在评价防 腐剂防腐效果上有很高的参考价值。
(完整word版)微生物挑战性实验方法
微生物挑战性实验方法1.0目的新产品防腐效果的测试2.0 范围公司新产品3.0参考：4 材料与方法4. 1化妆品中常用的防腐体系[ 6]营养琼脂培养基、改良马丁琼脂培养基、营养肉汤培养基、0.9%氯化钠溶液、平皿、接种环、培养箱等4. 2微生物挑战性实验4. 2. 1受试用微生物测试用细菌和霉菌均由浙江省食品和药品检验所提供。
细菌包括: 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、巨大芽胞杆菌、绿脓杆菌。
霉菌包括: 黑曲霉、黄曲霉、变色曲霉、桔青霉、拟青霉、腊叶芽枝霉、球毛壳霉、绿色木霉。
实验前，将各菌种接种于合适的培养基中, 于37℃( 细菌) 或28℃( 霉菌) 下培养。
细菌培养在2天后, 霉菌培养在3-5 天后，挑选适量菌落于灭菌的生理盐水中，制成一定浓度的混合细菌( 1×108个/ ml) 或混合霉菌悬液( 1×107个/ ml) , 置于4℃贮放备用。
4. 2. 2一次加菌的28 天微生物挑战试验此方法参照美国药典( 第2 1 版) 上微生物挑战性试验检测防腐剂效果的方法。
称取各受试样品30g, 加入混合细菌或混合霉菌悬液, 每克受检膏霜最终含菌量分别为5×106个细菌和3 ×105个霉菌。
然后充分混匀, 置于28℃下。
在接菌的0、7、14、2 1 和28天取样分析: 准确称取3g样品, 加到含有玻璃小珠的灭菌锥形瓶内, 加入27ml灭菌生理盐水, 充分震荡混匀, 此悬液为1∶10稀释液；然后再用灭菌生理盐水按10倍依次稀释。
按平板倾注法计数受试品中含菌量, 细菌培养是37 ℃下24h～48h，霉菌培养为28℃下3～5 天。
此实验用以评判防腐剂的有效与否。
评判标准为: 当每克样品中一次接菌( 1×106细菌和1×105霉菌) 后, 在第14天存活菌量减少至不高于起始浓度的0. 1%, 以后逐渐减少, 在28 天为0 。
符合标准为防腐剂有效( 通过测试) , 不符合为防腐剂无效(不通过测试)。
化妆品微生物挑战试验
化妆品微生物挑战试验刘树葆臧跃扬桂菊（天津化妆品科学技术研究皖有强公司）摘要：本文参照美国化妆品、盥洗用品和香精协会（ＣＴＦＡ）推荐的防腐体系效能评价方法，研究了不同产品在相同防腐条件下，微生物挑战试验结果的差异性。
关键词：防腐体系，微生物挑战试验，膏霜，乳液，水剂。
目前，化妆品琳琅满目，产品配方复杂多样，通常包含多种成分，尤其许多化妆品中的营养成分非常适合微生物的生长，而微生物存在于我们生活着的世界的每一个角落，从而为化妆品的生产和保存带来困难。
微生物污染将导致产品在气味、颜色、粘度、性能上都会发生改变。
因此化妆品微生物污染对产品质量、正常使用以及使用者健康来说是一个极大的冒险“’。
为防止微生物污染，就对产品的防腐提出了挑战，所以必须建立很好的防腐体系，以保证产品的安全、稳定性“’，为消费者提供安全和高品质的产品。
评价化妆品质量的～个重要指标就是微生物是否达到化妆品卫生规范的要求，本实验参照美国化妆品、盥洗用品和香精协会（ＣＴＦＡ）推荐的防腐体系效能评价方法。
’，对相同防腐体系不同功能的膏霜、乳液及水剂产品进行微生物挑战试验，以指导配方师合理添加防腐剂。
１．实验方法ｉ．Ｉ．ＣＴＦＡ推荐的防腐单次挑战试验ＣＴＦＡ推荐的经典的为期２８天的防腐单次挑战实验，是将防腐剂混入配方基质中，然后～次性接入若干种类、～定数量的微生物进行挑战，将样品存放于适当的温度下，定期抽样检测其中残存的微生物，并根据微生物的数量变化情况评价样品的抗菌效果。
１．２试验仪器恒温培养箱：霉菌培养箱：显微镜：灭菌平皿：直径为９ｃｍ；ｐＨ计；高压灭菌锅；酒精灯：锥形烧瓶；量筒：灭菌刻度吸管：ｌＯｍｌ、２ｍｌ、ｉｍｌ；试管。
Ｉ．３．培养基和试剂生理盐水：ＳＣＤＬＰ液体培养基：卵磷脂、吐温８０一营养培养基：乳糖胆盐培养基：蛋白胨水：靛基质试剂：十六烷三甲基溴化铵培养基；绿脓菌素测定用培养基：硝酸盐蛋白胨水培养基：普通琼脂斜面培养基：血琼脂培养基；甘露醇发酵培养基：血浆：孟加拉红培养基。
用微生物挑战性试验考察化妆品防腐剂效果
摘要：为了考察 2010 年化妆品风险监测抽验样品的防腐效果，参考 《中国药典》（2010 年版附录） 对 3 种
化妆品进行菌落计数方法学验证，选取回收率达到 70%以上的 3 种化妆品进行微生物挑战性试验。通过对 3
类化妆品进行挑战性试验研究，结果表明，选择的 3 种化妆品均能通过挑战性试验。通过此次考察，可以
祛斑类 金黄色葡萄球菌 1.5×106
lg6.18 1.4×105 lg5.15
＜10 ＜lg1
＜10 ＜lg1 ＜10 ＜lg1
铜绿假单胞菌 1.6×106
lg6.20 1.4×102 lg2.15
10
lg1
＜10 ＜lg1 ＜10 ＜lg1
大肠埃希菌
2.3×106
lg6.36 1.6×106 lg6.20
2 结果与讨论
2.1 结果 受试的 3 种类型的化妆品在检测时间内细菌和真
菌的防腐能力见表 1。从表 1 结果看，选取的 3 种类 型的化妆品，14 天细菌菌数下降不少于 2.0 lg，14 天～ 28 天细菌菌数未增加；与初始值比，14 天和 28 天真 菌数均未增加，受试的 3 种类型的化妆品均能够通过 挑战性试验。为了考察化妆品的防腐效力，本次试验 所选取的 3 种类型的产品都是经过微生物验证过的， 将 3 种类型的产品按照 《中国药典》 微生物限度检查 方法 （常规法） 进行验证，结果 3 种产品经过验证 后，各验证菌的回收率均能达到 70%，且该 3 种样 品按照化妆品卫生规范 （2007 年版） 方法进行检验 为无菌产品。因此，选择这 3 种样品作为供试品代表 进行研究，通过本次试验初步对 2010 年化妆品风险 监测抽验样品的防腐效果进行了考察，为消费者选择 健康的化妆品提供可靠依据。 2.2 讨论
防腐剂的防腐效力检测
防腐剂的防腐效力检测本研究结合美国药典（USP）、欧洲药典（EP）及中国药典（2010，防腐效力检测的指导原则）等对某防腐剂的防腐效力进行检测，从实验用菌种、实验方法等方面考察，建立某防腐剂的防腐效力的检测方法并评价相应防腐剂的防腐效力。
防腐剂一般是化学物质，经常会受环境因素的影响降解或失活。
为确保防腐剂效力的有效性，有必要对含防腐剂最终产品的防腐效力进行科学有效的评价。
防腐效力检测实验程序一、USP、EP防腐剂防腐效力检测实验方法介绍USP、EP对防腐效力检测均有具体规定，虽然内容特别是判定标准有所不同，但所用的实验方法和原理是一致的：取一定量挑战性微生物（challenge microorganisms），接种至一定量的被测样品中，在规定温度下培养接种试样。
在28 d的培养期内，于规定时间点取样，通过平皿菌落计数法（plate-count method）或其它方法测定接种样品中剩余的存活菌浓度，通过对比菌浓度下降值，判定样品是否符合规定。
二、检测用的微生物USP、EP及中国药典推荐用的挑战微生物挑战性微生物USP EP 中国药典白色念珠菌Candida albican ATCC 10231 ATCC10231 ,NCPF 3179, IP48.72CMCC(F)98001黑曲霉Aspergillus niger ATCC 16404 ATCC16404 , IMI149007, IP1431.83CMCC(F)98003大肠埃希菌Escherichia coli ATCC 8739 ATCC8739 ,NCIMB 8545,CIP53.126CMCC(B)44102铜绿假单胞杆菌Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 ATCC9027,NCIMB 8626,CIP82.118CMCC(B)10104金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus ATCC 6538 ATCC6538,NCIMB 9518,NCTC10788 CIP4.83CMCC(B)26003试验所用菌株传代次数不得超过5代。
微生物挑战性实验方法
微生物挑战性实验方法1.0目的新产品防腐效果的测试2.0 范围公司新产品3.0参考：4 材料与方法4. 1化妆品中常用的防腐体系[ 6]营养琼脂培养基、改良马丁琼脂培养基、营养肉汤培养基、0.9%氯化钠溶液、平皿、接种环、培养箱等4. 2微生物挑战性实验4. 2. 1受试用微生物测试用细菌和霉菌均由浙江省食品和药品检验所提供。
细菌包括: 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、巨大芽胞杆菌、绿脓杆菌。
霉菌包括: 黑曲霉、黄曲霉、变色曲霉、桔青霉、拟青霉、腊叶芽枝霉、球毛壳霉、绿色木霉。
实验前，将各菌种接种于合适的培养基中, 于37℃( 细菌) 或28℃( 霉菌) 下培养。
细菌培养在2天后, 霉菌培养在3-5 天后，挑选适量菌落于灭菌的生理盐水中，制成一定浓度的混合细菌( 1×108个/ ml) 或混合霉菌悬液( 1×107个/ ml) , 置于4℃贮放备用。
4. 2. 2一次加菌的28 天微生物挑战试验此方法参照美国药典( 第2 1 版) 上微生物挑战性试验检测防腐剂效果的方法。
称取各受试样品30g, 加入混合细菌或混合霉菌悬液, 每克受检膏霜最终含菌量分别为5×106个细菌和3 ×105个霉菌。
然后充分混匀, 置于28℃下。
在接菌的0、7、14、2 1 和28天取样分析: 准确称取3g样品, 加到含有玻璃小珠的灭菌锥形瓶内, 加入27ml灭菌生理盐水, 充分震荡混匀, 此悬液为1∶10稀释液；然后再用灭菌生理盐水按10倍依次稀释。
按平板倾注法计数受试品中含菌量, 细菌培养是37 ℃下24h～48h，霉菌培养为28℃下3～5 天。
此实验用以评判防腐剂的有效与否。
评判标准为: 当每克样品中一次接菌( 1×106细菌和1×105霉菌) 后, 在第14天存活菌量减少至不高于起始浓度的0. 1%, 以后逐渐减少, 在28 天为0 。
符合标准为防腐剂有效( 通过测试) , 不符合为防腐剂无效(不通过测试)。
完整版)防腐挑战实验
完整版)防腐挑战实验本部分介绍了防腐挑战实验的调研结果。
实验样品要求新鲜，没有被微生物污染，每个样本为300g。
实验菌株的选择有一定差异，国内参照美国化妆品、香精和洗涤剂协会（CTFA）推荐的菌种，因其较具代表性。
培养基使用牛肉膏蛋白胨培养基和琼脂培养基。
试验用菌液的配置包括标准悬液的配制和细菌菌悬液的配制。
其中，标准悬液的配制是将1%硫酸9.9ml和1%氯化钡0.1ml混合后配制成的悬液浓度为3×108cfu/ml，此悬液再做3倍稀释。
细菌菌悬液的配制是将菌株接种到各个培养基斜面上，36摄氏度恒温培养48小时。
将已培养好的活性菌种，用灭菌生理盐水清洗到灭菌锥形瓶中，充分振荡摇匀。
用移液枪从锥形瓶中吸取菌液作稀释，浊度和标准悬液的浊度（3×108cfu/ml）相同为止；此时的稀释菌液再做3倍稀释，即为所需的1×108cfu/ml的菌悬液，做细菌总数确定细菌数。
关于霉菌菌悬液的配制，文章未给出具体内容。
文章还列出了某些国家、组织、企业用于化妆品微生物挑战试验的测试菌株，包括美国、英国、德国等。
CTFA化妆品微生物挑战试验的菌株选择包括革兰氏阳性菌、表皮葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌、阴沟肠杆菌等，数量和菌株种类也有要求。
总体来说，文章介绍了防腐挑战实验的样品要求、菌株选择、培养基使用和试验用菌液的配置等方面的内容。
准。
为进行微生物防腐挑战性试验，首先需要对样品进行稀释。
取1ml已稀释的样品液，加入9ml灭菌生理盐水中，依次稀释为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7等稀释度。
然后，从中选取三个适当的稀释度的样液，吸取1ml加入已灭菌的平皿中，进行菌落计数，并进行两个平行实验。
在进行培养时，细菌应该放在32.5±2.5℃的培养箱中，霉菌应该放在22.5±2.5℃的培养箱中，混合菌则应该放在28℃的培养箱中进行培养。
在进行菌落计数时，需要按照标准方法进行。
防腐挑战性实验方法
防腐挑战性实验规程一、目的本方法及标准摘自欧盟标准BP2002 XVIC EFFICAIY OF ANTIMICROBIAL PRESERVATION,测定化妆品抵抗微生物的能力。
二、材料及工具1.待检样品600g（实际操作中常用300g以节约样品）；2.电子秤1台、不锈钢勺子、200ml烧杯、10ml试管、150ml三角烧瓶、酒精灯1盏、1ml移液枪（100～1000μL）、1ml移液枪枪尖、灭菌培养皿、0.85%灭菌生理盐水；3.适量普通营养琼脂培养基、虎红培养基；4.金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠艾希氏菌、黑曲霉、白色念珠霉菌的菌种各1支，其菌种传代次数<5代。
三、步骤1.标准悬液的配制1%硫酸9.9ml与1%氯化钡0.1ml，混合后配制成的悬液浓度为3×108cfu/ml，此悬液再做3倍稀释。
2.细菌菌悬液的配制将已培养好的活性菌种，用灭菌生理盐水清洗到灭菌锥形瓶中，充分振荡摇匀。
用移液枪从锥形瓶中吸取菌液作稀释，浊度和标准悬液的浊度（3×108cfu/ml）相同为止；此时的稀释菌液再做3倍稀释，即为所需的1×108cfu/ml的菌悬液，做细菌总数确定细菌数。
3.霉菌菌悬液的配制将已培养好的活性菌种，用灭菌的生理盐水清洗到灭菌锥形瓶中，充分振荡摇匀；用移液枪从锥形瓶中吸取菌液作依次的10倍稀释，每次的稀释用血球计数板计数，必须5个中格的霉菌总数在190～210，落在此范围内的菌悬液为我们所需的1×108cfu/ml的霉菌菌悬液，做霉菌总数确定霉菌数。
4.分别称取待测样品100g，倒入5个烧杯中，分别标记大、金、绿、黑、白及日期。
5.分别在5个烧杯中，对应加入1ml浓度为1×107～1×108cfu/ml的细菌菌悬液及霉菌菌悬液，用干净的无菌勺子搅拌均匀后盖上保鲜膜，细菌在32.5±2.5℃的培养箱中培养，霉菌在22.5±2.5℃的培养箱中培养。
化妆品防腐性能挑战性试验及评价标准
化妆品防腐性能挑战性试验及评价标准化妆品防腐挑战性试验及评价标准投产前对产品防腐体系的可靠性做效能测试是十分必要的，目前，国内外配方设计时普遍采用防腐挑战性试验评价防腐剂的有效性。
防腐挑战性试验更接近实际应用，该方法能够模拟化妆品生产和使用过程中受到高强度的微生物污染的潜在可能性和自然界中微生物生长的最适宜条件，从而避免由微生物污染造成的损失和为消费者健康提供可靠的保证。
1.CTFA推荐的一次加菌防腐挑战性试验及评价标准CTFA的方法初始的霉菌和细菌的接种量分别为10000cfu/g(ml)和1000000cfu/g(ml)(CFU为菌落单位)，要求在第7天时霉菌降低90%，细菌降低99.9%，并且在28天内菌数持续下降。
美国在CTFA评价方法的基础上提出更为严格的标准，即，若单菌接种的三个平行试验中任何一种微生物数量的平均值，在第七天时下降到100 cfu/g(ml)以下，28天全部为0，则视为效果优良通过挑战试验;若第七天时下降到1000 cfu/g(ml)以下，则视为勉强通过;若单菌接种的任何一种微生物，任何一个平行样达不到上述标准，也达不到CTFA的要求，防腐体系则评定为无效。
2.国内参照CTFA加菌防腐挑战性试验及评价标准初始接种细菌量1000000 cfu/g(mL)(1)第28天时，样品中含细菌或霉菌,1000cfu/g(mL)该样品不能通过微生物攻击的挑战试验，表明样品的防腐体系不能有效地志到抑制微生物的作用，产品在生产、贮藏和使用中很容易受到微生物的污染。
(2)第28天时，样品中含细菌或霉菌在100 cfu/g-1000 cfu/g(mL)，该样品有条件地通过挑战试验，即当产品中蛋白质或其他动植物材料成分不是特别高，同时生产的卫生环境符合要求，包装物不易发生二次污染时，该防霉体系可以使用，否则不能。
(3)第28天时，样品中含细菌或霉菌在10 cfu/g-100 cfu/g(mL)，表明该样品的防腐体系对微生物有较强的抑杀效果，通过挑战试验，产品在生产、贮藏和使用时不容易受到微生物污染。
细菌防腐剂挑战性实验
摘要：对建立化妆品防腐体系的各种要素进行了分析，就国内外有代表性的微生物挑战试验的评价方法进行了比较，提出了符合实践情况并适用于我国化妆品行业的化妆品防腐体系的效能测试方法的评价标准，还为化妆品防腐体系筛选过程的快速判定提供了经验依据。
关键词：化妆品；防腐剂；防腐体系；微生物挑战试验大多数化妆品富含微生物生长所需的养分，环境中的微生物一俟进入，即可迅速繁殖，破坏产品的感官品质，损害消费者的健康。
因此，一个良好的防腐体系，对于化妆品产品来说是必不可少的。
1 化妆品的防腐体系化妆品的防腐体系实际上是由若干种防腐剂（和助剂）按一定比例构建而成。
防腐体系的基本要素是防腐剂，但其效能大小又与其用量和使用对象的剂型（液态、粉状、乳状、膏霜状等）特性、组成（是否含碳水化合物、蛋白质、动植物抽提物等）、pH值、可能污染的微生物种类和数量等密切相关。
1.1化妆品防腐剂早期使用的防腐剂有：尼泊金脂类、苯甲醇、烷基二甲基苄基铵氯化物、对氯间二甲酚、苯氧基乙醇、布罗波尔（Bronopol，2-溴-2-硝基丙烷-1，3-丙二醇）、道维希尔200（Dowicil-200,六亚甲基四胺衍生物）、杰马-115(Germall-115，咪唑烷基脲)、脱氢醋酸、甲醛、山梨酸等。
这些防腐剂至今很多仍在使用。
近期推广商品化的化妆品防腐剂见表1。
至于复配而成的防腐剂商品更是数不胜数。
防腐剂对微生物的最低抑制浓度（cmc）是判断一种防腐剂效果的首先考虑的基本指标，MIC值越小，表明其效力越高。
表2是某些化妆品防腐剂对主要测试微生物的MIC。
表1一些化妆品防腐剂商品及化学成分商品名称化学成分Enxylk400 甲基二溴戊二腈和苯氧乙醇Biopure100 咪唑烷基脲Nipaguard DMDMH 二甲基二羟基乙内酰脲Nipaguard TCC N-（4-氯苯基-N-3，4-二氯苯基）脲Nipacide PX (PCMX) 对氯间二甲苯酚GERMALLⅡ双咪唑烷基脲GERMALL PLUS 双咪唑烷基脲和碘丙炔基氨基甲酸丁酯（IPBC）ALLANTOIN 乙醛双酰脲SUTTOCIDE A 羟甲基甘氨酸钠华科-98、凯松CG、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮和5-氯-2-2甲基-4-异JX-515、YN-H3 噻唑啉-3-酮GLYDANT 二甲基二羟基乙内酰脲GLYDANT PLUS DMDM和IPBCIRGASAN DP300（玉洁新DP-300）、2，4，4’-三氯-2’-羟基二苯醚Oletron1.2化妆品的防腐体系的构建1.2.1防腐剂的复配一种万能的防腐剂是不存在的。
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摘要：对建立化妆品防腐体系的各种要素进行了分析，就国内外有代表性的微生物挑战试验的评价方法进行了比较，提出了符合实践情况并适用于我国化妆品行业的化妆品防腐体系的效能测试方法的评价标准，还为化妆品防腐体系筛选过程的快速判定提供了经验依据。
关键词：化妆品；防腐剂；防腐体系；微生物挑战试验大多数化妆品富含微生物生长所需的养分，环境中的微生物一俟进入，即可迅速繁殖，破坏产品的感官品质，损害消费者的健康。
因此，一个良好的防腐体系，对于化妆品产品来说是必不可少的。
1 化妆品的防腐体系化妆品的防腐体系实际上是由若干种防腐剂（和助剂）按一定比例构建而成。
防腐体系的基本要素是防腐剂，但其效能大小又与其用量和使用对象的剂型（液态、粉状、乳状、膏霜状等）特性、组成（是否含碳水化合物、蛋白质、动植物抽提物等）、pH值、可能污染的微生物种类和数量等密切相关。
1.1化妆品防腐剂早期使用的防腐剂有：尼泊金脂类、苯甲醇、烷基二甲基苄基铵氯化物、对氯间二甲酚、苯氧基乙醇、布罗波尔（Bronopol，2-溴-2-硝基丙烷-1，3-丙二醇）、道维希尔200（Dowicil-200,六亚甲基四胺衍生物）、杰马-115(Germall-115，咪唑烷基脲)、脱氢醋酸、甲醛、山梨酸等。
这些防腐剂至今很多仍在使用。
近期推广商品化的化妆品防腐剂见表1。
至于复配而成的防腐剂商品更是数不胜数。
防腐剂对微生物的最低抑制浓度（cmc）是判断一种防腐剂效果的首先考虑的基本指标，MIC值越小，表明其效力越高。
表2是某些化妆品防腐剂对主要测试微生物的MIC。
表1一些化妆品防腐剂商品及化学成分商品名称化学成分Enxylk400 甲基二溴戊二腈和苯氧乙醇Biopure100 咪唑烷基脲Nipaguard DMDMH 二甲基二羟基乙内酰脲Nipaguard TCC N-（4-氯苯基-N-3，4-二氯苯基）脲Nipacide PX (PCMX) 对氯间二甲苯酚GERMALLⅡ双咪唑烷基脲GERMALL PLUS 双咪唑烷基脲和碘丙炔基氨基甲酸丁酯（IPBC）ALLANTOIN 乙醛双酰脲SUTTOCIDE A 羟甲基甘氨酸钠华科-98、凯松CG、2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮和5-氯-2-2甲基-4-异JX-515、YN-H3 噻唑啉-3-酮GLYDANT 二甲基二羟基乙内酰脲GLYDANT PLUS DMDM和IPBCIRGASAN DP300（玉洁新DP-300）、2，4，4’-三氯-2’-羟基二苯醚Oletron1.2化妆品的防腐体系的构建1.2.1防腐剂的复配一种万能的防腐剂是不存在的。
多种防腐剂的相互配合，优缺点的互补，至少有如下优势：①拓宽抗菌谱；某种防腐剂对一些微生物效果好而对另一些微生物效果差，而另一种防腐剂刚好相反。
两者合用，就能达到广谱抗菌的防治目的。
②提高药效：两种杀菌作用机制不同的防腐剂共用，其效果往往不是简单的叠加作用，而是相乘作用，这种所谓增效作用，通常在降低使用量的情况下，仍保持足够的杀菌效力。
③抗二次污染：有些防腐剂对霉腐微生物的杀灭效果较好，但残效期有限，而另一类防腐剂的杀灭效果不大，但抑制作用显著，两者混用，既能保证贮存和货架质量，又可防止使用过程中的重要污染。
④提高安全性：单一使用防腐剂，有时要达到防腐效果，用量需超过规定的防治目的，又可保证产品的安全性。
⑤预防抗药性的产生：如果某种微生物对一种防腐剂容易产生抗药性的话，它对两种以上的防腐剂都同时产生抗药性的机会自然就困难得多。
1.2.2化妆品防腐体系构建需考虑的其它因素并不是说，简单地把几种抗菌效果较好的防腐剂混配起来就能获得一个好的防腐体系了，各类化妆品的组分复杂，理化性能差异很大，防腐剂的效能能否充分发挥出来，还受到其中多方面因素的干扰和制约。
1.2.2.1防腐剂使用量化妆品防腐剂用量必须以安全性作为前提，我国和有关国家的组织允许使用的化妆品防腐剂都有一定的规定。
然而，要使防腐体系的效力能发挥出来，还须保证足够的使用量，在使用量选定时，可先参考防腐剂的MIC值和商品的说明书指导，但更重要的是必须通过具体产品的使用试验才能作出最终决定，因此，MIC值很小的杀菌剂，在产品中应用时表现得很糟糕的现象是经常发生的。
1.2.2.2产品的pH值大多数的防腐剂都容易在酸性和中性的环境中发挥其效能，在碱性环境中效力显著减低，甚至失效，而季铵盐类防腐剂却在pH值大于7时才有效。
环境中的pH 值主要是通过两方面的作用影响防腐剂效能的。
①pH值变化引起微生物的细胞膜结构的变化，从而改变其通透性，进而影响防腐剂分子的存在形式（例如离子形式或分子形式），而许多有机类的防腐剂通过常以分子形式才容易通过微生物细胞膜的脂质层。
1.2.2.3溶解性能这是一个较为复杂的因素。
微生物的生长繁殖必需在有水的环境中进行。
因此，在多相系统中、水相中须溶解有足够的防腐剂。
然而，只是强调防腐剂的水溶性显然是片面的，好的防腐剂还需要具有一定的脂溶性（或者说有一个恰当的油水分配系数），这样才有利于通过蛋白质（亲水）和脂质（亲油）构成的微生物细胞膜，进入细胞内，发挥其“毒害”细胞的作用。
1.2.2.4化学相容性一般来说，防腐剂和化妆品中的活性物质和助剂之间是有可能发生相互作用，也就是说，组分之间也具有一定的不相容性。
在筛选化妆品的防腐体系的时候，以下的一些情况是值得注意的：①化妆品中的某些组成材料如碳水化合物、滑石粉、金属氧化物、纤维素等会吸附防腐剂，降低其效力。
②产品中含有淀粉类物质，可影响尼泊金酯类的抑菌效果。
③高浓度的蛋白质一方面可能通过对微生物形成保护层，降低防腐剂的抗菌活性，另一方面又能促进微生物的增长。
④金属离子如Mg2+、Ca2+、Zn2+，对防腐剂的活性有很大的影响，一般情况下，过量的金属离子在香料、润滑剂、天然或敏感的化合物中易形成难溶物或发生催化氧化反应。
⑤防腐剂可和化妆品的某些组分形成氢键或螯合物，通过“束缚”或“消耗”的方式，降低防腐体系的效能。
⑥少量表面活性剂增加防腐剂对细胞膜的通透性，有增效作用，但是量大时会形成胶束，吸引水相中的防腐剂，降低了防腐剂在水相中的含量，影响了其杀菌效能。
⑦某些防腐剂和表面活性剂如硫酸盐、碳酸盐、含氮表面活性剂作用、和色素荧光染料作用、和包装材料作用、在影响防腐剂效力的表面张力，产品的发泡性，组分的溶解性，色素的显色性，香料的气味，活性因子的生物活性等多方面的影响或潜在影响等都应该在考虑之列。
1.2.2.5产品中微生物的初始污染量对防腐剂效能的发挥也有直接的影响当产品或原料污染严重时，微生物分泌的代谢产物与防腐剂作用，防腐剂杀死大量的菌体都会“消耗”一部分防腐剂；更重要的是，许多微生物在大量繁殖时，能分泌一种类似蛋白质物质，把菌体包裹起来，起到“抵御”外来化学物理因素的损害；有报道甚至指出，当微生物已经大量繁殖后，某些杀菌剂还可作为营养物被微生物利用。
由此可见，即使是同一防腐剂，在不同组成、不同剂型的化妆品中发挥出的防腐效能都可能很不一样。
一个防腐体系对一种特定的产品效果优良，而对另一种产品却很不理想是常有的事情，因此，在投产前对产防腐体系的可靠性做效能测试是十分必要的。
2化妆品防腐体系效能的评价2.1评价方法近年来，以微生物挑战试验作为测试和评价化妆品的防腐效能已经逐步被国内外化妆品生产企业接受和推行，这是基于微生物挑战试验能够模拟化妆品生产和使用过程中受到高强度的微生物污染的潜在可能性和自然界中微生物生长的最适条件，使简测试结果更接近“残酷的现实”，能经受“严峻的考验”，从而为保证产品避免由微生物污染造成的损失和保障消费者的健康提供可靠的保证。
虽然，目前世界各国及其有关组织对化妆品微生物挑战试验还未有一个统一的方法，但其基本设计则是相同的，这就是，在待测样本中人为地接种若干种类、一定数量的微生物，在适当的温度下存放，定期分离样本的微生物，并根据微生物的数量变化情况评价样本的抗菌效能。
不过，在微生物挑战试验的具体操作步骤里，不同国家和组织采用的测试菌种、接种方式、分离时间等还是有差异的，评价方法自然也有所不同，下面是几个典型的例子。
CTFA的方法初始的霉菌和细菌的接种量分别为104cfu/g（mL）和106cfu/g（mL），要求在第7天时霉菌降低90%，细菌降低99.9%，并且在28天内菌数持续下降。
美国在CTFA评价方法的基础上提出更为严格的标准，即，若单菌接种的三个平行试验中任何一种微生物数量的平均值，在第七天时下降到100 cfu/g（mL）以下，28天全部为0，则视为效果优良；通过挑战试验若第七天时下降到1000 cfu/g（mL）以下，则视为勉强通过：若单菌接种的任何一种微生物，任何一个平行样达不到上述标准，也达不到CTFA的要求，防腐体系则评定为无效。
S&M KOKO试验方法，每星期在25g同一样品中接种0.1mL 108 cfu/g~109 cfu/g（mL）的混合菌液，连续6星期，若每星期接种前的菌数下降至10 cfu/g（mL）以下，则视为合格。
本实验室参照CTFA的方法，根据目前国内生产企业的现状，特别是通过大量的实际测试数据分析和跟踪调查，提出了以下供化妆品企业参考的评价标准：[初始接种量细菌106 cfu/g~103 cfu/g（mL）]：①第28天时，样品中含细菌或霉菌＞103cfu/g（mL）该样品不能通过微生物攻击的挑战试验，表明样品的防腐体系不能有效地志到抑制微生物的作用，产品在生产、贮藏和使用中很容易受到微生物的污染。
②第28天时，样品中含细菌或霉菌在102 cfu/g~103 cfu/g（mL），该样品有条件地通过挑战试验，即当产品中蛋白质或其他动植物材料成分不是特别高，同时生产的卫生环境符合要求，包装物不易发生二次污染时，该防霉体系可以使用，否则不能。
③第28天时，样品中含细菌或霉菌在10 cfu/g~102 cfu/g（mL），表明该样品的防腐体系对微生物有较强的抑杀效果，通过挑战试验，产品在生产、贮藏和使用时不容易受到微生物污染。
④从第7天起，样品中的细菌或霉菌＜10 cfu/g（mL），说明该样品的防腐体系对微生物有特强的抑杀作用，通过挑战试验，产品在生产、贮藏和使用时很不容易被微生物污染。
2.2化妆品防腐体系快速评价方法探讨常规的微生物挑战试验方法的试用周期都在28天以上，这对于确定一个产品的防腐体系是必须的。
但很多生产企业在产品的防腐体系的筛选时，稍嫌摸索试验周期太长，不利于尽快淘汰无效的防腐体系而选择有希望的防腐体系作进一步试验，以缩短研究周期。
通过检测数据，可看到：①当测试进行到第7天时，若细菌和霉菌数均能降低到103级以下时，第28天时的结果和评价一般都能通过挑战试验；②当测试进行到第14天时，细菌和霉菌数在104级以上时，第28天时的评价基本都不能通过挑战试验。