支原体染色试剂盒
支原体 PCR 检测试剂盒使用说明书
支原体 PCR 检测试剂盒使用说明书Product Name: Mycoplasma PCR Detection KitIntended Use:The Mycoplasma PCR Detection Kit is intended for the qualitative detection of Mycoplasma spp. in cell cultures and other biological samples by PCR amplification.Kit Components:- PCR amplification reaction mix and enzyme mix- Positive control DNA template- Negative control DNA template- PCR tubes and caps- User manualStorage:The kit should be stored at -20°C. Thaw the kit components at room temperature before use.Sample Preparation:1. Collect the cell culture sample or other biological sample.2. Extract the DNA from the sample using a DNA extraction kit of your choice.3. Dilute the DNA extract as necessary in molecular grade water or buffer to achieve the optimal concentration for PCR amplification (typically between 10-100 ng/µL).PCR Amplification:1. Prepare the PCR reaction mix (in a sterile tube or plate) by adding the PCR amplification reaction mix, enzyme mix, andtemplate DNA to the appropriate volumes as specified in the table below.Component Volume per Reaction (20 µL)PCR amplification reaction mix 10 µLEnzyme mix 1 µLTemplate DNA 1-5 µLMolecular grade water/buffer To 20 µL2. Close the PCR tubes with the caps provided and mix the contents well by vortexing or pipetting.3. Place the tubes in a thermal cycler and perform PCR amplification according to the following conditions:Initial denaturation: 95°C for 5 minutesDenaturation: 95°C for 30 secondsAnnealing: 55°C for 30 secondsExtension: 72°C for 1 minuteFinal extension: 72°C for 5 minutesHold at 4°C4. Analyze the PCR products by gel electrophoresis or other methods as appropriate.Interpretation of Results:- Positive Result: A distinct band is observed in the gel at the expected size for Mycoplasma spp. This indicates the presence of Mycoplasma DNA in the sample.- Negative Result: No band or only faint bands are observed in thegel. This indicates the absence of Mycoplasma DNA in the sample. - Invalid Result: No bands or smear are observed in the gel or the band size is incorrect. Repeat the experiment with fresh controls and follow the instructions carefully.Limitations:1. This assay is designed for research use only and is not intended for diagnostic purposes.2. False negative results may occur due to low level or degraded Mycoplasma DNA in the sample, PCR inhibitors, or other factors.3. The presence of PCR inhibitors in the DNA extraction and amplification process may affect the sensitivity and reproducibility of the assay.4. The kit components must not be used beyond the expiry date.5. The Mycoplasma PCR Detection Kit may only be used by trained personnel.。
支原体 试剂盒 原理
支原体试剂盒原理
支原体试剂盒是一种用于检测支原体感染的诊断工具。
其基本原理是利用特定的抗原与支原体感染产生的抗体结合，从而实现对支原体的检测。
具体而言，支原体试剂盒中通常包含有特异性的抗体或抗原。
当患者样本中存在支原体时，该抗原与试剂盒中的抗体结合，形成免疫复合物。
这些免疫复合物可以通过染色、荧光或放射性示踪剂等方式来标记。
在进行试剂盒检测时，可将患者样本与试剂盒中的试剂混合，使其中的抗原与抗体结合。
随后，通过特定的读取设备（如酶标仪、荧光分析仪等）对免疫反应后的样本进行测定，测定结果将会显示出是否存在支原体感染。
根据浓度的不同，结果可能会显示出阳性、阴性或弱阳性等。
此外，支原体试剂盒中也可能包含有质控物质，用于确保试剂盒的准确性和可靠性。
一般情况下，试剂盒的说明书中会详细描述样本的采集、操作步骤、结果解读等信息，以帮助医护人员进行正确的使用。
总之，支原体试剂盒利用特异性抗原与抗体之间的结合反应，通过检测免疫复合物的形成或生物学指标的变化来判断是否存在支原体感染。
这种诊断工具具有操作简便、结果快速的特点，因此在临床诊断中得到了广泛应用。
支原体试检测剂盒使用说明书(中文版)
支原体检测试剂盒使用说明书1.试剂：支原体检测试剂盒由武汉源深生物科技有限公司提供。
2.实验方法:巢式PCR的方法检测支原体污染：A.待检细胞汇合率在90％以上时取100 µL细胞上清液到离心管内B.95o C孵育5分钟C.短暂高速离心15秒钟左右D.试剂盒里的组份：引物混合物(Primer Mix) 20 µL阳性对照DNA (Positive Control DNA) 15 µL阴性对照(Internal Control DNA) 20 µL巢式PCR一共需要做2轮PCR，本检测方法不受其他来源（如所培养细胞）DNA的影响，不但提高了检测的灵敏度，同时也提高了特异性。
(1)第一轮PCR:PCR 混合物：向0.2 mL PCR薄壁管中依次加入以下组分，盖紧管盖，轻弹管壁混匀，稍加离心。
E.热循环程序：将准备好的PCR管放入PCR仪，运行如下程序。
PCR 混合物：向0.2 mL PCR薄壁管中依次加入以下组分，盖紧管盖，轻弹管壁混匀，稍加离心。
F. 热循环程序：将准备好的PCR 管放入PCR 仪，运行如下程序。
试验结果：2％ 琼脂糖凝胶电泳，TBE 缓冲液，PCR 产物及Marker 均点样10µL ，于50V 下电泳1hr ，EB 染色15min ，紫外灯下观察。
电泳结果见下图：图中泳道M 为DNA Marker ，1和2为待检测细胞系的第一轮PCR 产物 (1st )，3和4为待检测细胞系的第二轮PCR 产物 (2nd ), 其中1、3为阳性对照管PCR 产物，2、4为阴性对照PCR 产物。
阳性对照管在200bp 左右，和300-400 bp 处各有一条带，证明本次实验准确可靠 (不同的支原体Mycoplasma, such as M. fermentans, M. hyorhinis, M. arginini, M. orale, M. hominis, M. arthritidis, M. hyopneumoniae and Acholeplasma laidlawii 的保守区的片段长度不一，大概在200-400 bp 之间)。
肺炎支原体测试试剂盒使用
肺炎支原体测试试剂盒使用肺炎支原体是一种引起肺炎的病原体，可以导致呼吸道感染和肺部疾病。
肺炎支原体测试试剂盒是一种用于检测肺炎支原体感染的工具，它通过检测病原体的核酸来确认感染。
本文将介绍肺炎支原体测试试剂盒的使用方法和注意事项。
使用方法1.准备工作：将试剂盒从冰箱中取出后，将其适应室温放置30分钟，确保试剂盒内的试剂恢复到室温。
2.样本采集：使用专业的采样套装，采集患者的呼吸道样本。
一般可以选择咽拭子或者痰液样本作为采集物。
注意采集样本时要注意卫生，避免污染。
3.样本处理：将采集到的样本转移到试剂盒提供的管子中。
根据使用说明书的要求，将样本与提供的稀释液混合，充分混匀。
4.核酸提取：根据试剂盒提供的方法，进行核酸提取。
将样本与试剂混合，经过一系列处理步骤，将病原体的核酸提取出来。
5.PCR扩增：将提取的核酸加入PCR反应管中，根据试剂盒提供的PCR扩增方案进行扩增。
PCR扩增是将少量的核酸扩增成大量可检测的数量，以便进行后续的分析。
6.结果分析：将PCR扩增产物放入试剂盒提供的分析设备中，根据设备的提示进行操作。
设备会根据PCR扩增的结果判断样本中是否存在肺炎支原体，通常会给出阳性或阴性结论。
注意事项1.操作规范：使用试剂盒前，务必阅读说明书并按照要求操作。
严格遵循操作规范，确保结果的准确性。
2.样本采集：采集样本时，注意避免污染和交叉感染。
使用采样套装中的工具，并按照说明进行操作。
3.试剂保存：试剂盒中的试剂应妥善保存，避免暴露于阳光直射或高温环境。
注意试剂的保质期，过期的试剂可能会影响测试结果。
4.设备操作：在使用设备进行分析时，注意正确操作，遵循设备操作说明。
保持设备的清洁和维护，以确保结果的准确性。
5.结果解读：根据设备给出的结果，判断样本是否携带肺炎支原体。
阳性结果表示样本中存在肺炎支原体感染，阴性结果表示未检测到感染。
结论肺炎支原体测试试剂盒是一种有效的工具，用于检测肺炎支原体感染。
探针法支原体检测试剂盒说明书
《探针法支原体检测试剂盒》（含内参）说明书（版本20230112）【本说明书会不定期更新，每次收到新的产品时，请到本公司网站重新下载最新版本！】货号QM016包装规格50次/盒储存条件该产品在常温或随冰袋运输，收到产品后，请立即放-20 ℃冰箱低温避光保存。
该条件下，至少5年内有效。
产品用途《探针法支原体检测试剂盒》（qPCR Mycoplasma Detection Kit with Probe）采用支原体特异性引物和支原体特异性荧光探针（报告基因为FAM），用于对样品的支原体基因组DNA进行荧光定量PCR扩增检测。
试剂盒内同时含有内参对照质粒mycoIC2和相应的引物和荧光探针（报告基因为VIC），用于监控支原体DNA 提取和qPCR扩增的效率。
本试剂盒可用于检测一切可能含支原体的样品，比如：（1）体外细胞培养的上清；（2）血清；（3）各种体液，如唾液、尿液、鼻腔分泌物等；（4）别的液体样品。
本产品仅供研究使用。
产品简介哺乳动物细胞的培养，支原体（Mycoplasma）污染是个世界性的问题。
支原体污染几乎可以改变细胞的所有参数，导致实验结果的不准确、甚至完全错误（支原体污染对细胞的详细危害，请参考本公司的网站：）。
从2013年开始，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及细胞培养都要进行支原体检测。
相信会有越来越多的高水平期刊将做出同样的支原体检测要求。
培养法是相对可靠的支原体检测技术，但是该方法非常耗时的，需要数周，不适合作为细胞培养液中支原体污染的快速检测。
此外，通过固体培养法无法检测污染细胞的一种最常见的支原体，即猪鼻支原体（M.Hyorhinis）。
这是因为猪鼻支原体无法在支原体固体培养基上形成可见的菌落。
而猪鼻支原体约占所有支原体污染的20-50%。
有的实验室使用荧光染色法检测支原体，但是该方法灵敏度太低，当检测成阳性时，细胞经常已经严重污染。
培养法和荧光染色法虽然是我国药典收录的支原体检测方法，但是因为其各自都有明显的缺点，不适合作为支原体快速检测的方法。
LONZA支原体检测试剂盒是一种用于检测支原体感染的试剂盒
LONZA支原体检测试剂盒是一种用于检测支原体感染的试剂盒LONZA支原体检测试剂盒是一种用于检测支原体感染的试剂盒。
支原体是一类细菌，可引起多种疾病，如肺炎、支气管炎等呼吸道感染。
由于支原体的症状与其他病原体引起的疾病相似，因此准确快速地检测支原体感染对诊断和治疗至关重要。
LONZA支原体检测试剂盒采用一种特殊的分子生物学方法，可以通过检测支原体特异性的基因序列来确定是否存在支原体感染。
该试剂盒包含了一系列的试剂和探针，可以与支原体的DNA序列特异性结合，形成特定的标记信号。
使用LONZA支原体检测试剂盒非常简单。
首先，从患者的呼吸道样本中提取DNA。
样本可以是咽喉刷子、鼻咽拭子或痰液等。
接下来，将提取的DNA加入到试剂盒中，与试剂盒内的特定试剂和探针发生反应。
此时，如果样本中存在支原体的DNA序列，试剂盒内的试剂和探针就会与其结合并发出特定的信号。
最后，使用特殊的仪器对发出的信号进行分析。
根据信号的强度和特征，可以确定是否存在支原体感染。
该试剂盒的敏感度和特异性非常高，能够准确地检测出支原体感染，避免了其他常见的呼吸道疾病的误诊。
该产品的使用具有多个优点。
首先，它可以在短时间内提供准确的结果，从而帮助医生快速确定诊断并制定相应的治疗方案。
其次，试剂盒的操作简单易行，不需要复杂的仪器和特殊的技术。
再次，该试剂盒的成本相对较低，适用于各种医疗机构和实验室的使用。
总之，LONZA支原体检测试剂盒是一种快速、准确、简便的检测方法，可用于支原体感染的诊断和监测。
它为医生提供了重要的辅助工具，有助于及时处理支原体感染并避免疾病的蔓延。
支原体染色试剂盒
支原体染色检测试剂盒简介：支原体染色检测试剂盒(Mycoplasma Stain Assay Kit)是一种经典的利用DNA 荧光染色法检测支原体污染的试剂盒，其原理是当细胞发生凋亡时，染色质会固缩，Hoechst 染色后在荧光显微镜下观察，正常细胞的细胞核呈正常的蓝色，而凋亡细胞的细胞核会呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染，颜色有些发白。
Hoechst Staining Kit 经常用于培养的贴壁或悬浮细胞以及组织切片的细胞凋亡检测。
该试剂盒检测细胞含量范围一般为0.1～1×106之间。
组成：操作步骤(仅供参考)：(一)贴壁细胞1、取洁净盖玻片在70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用无菌的PBS 或生理盐水洗涤3次，再用细胞培养液洗涤1次。
将盖玻片置于6孔板或其他培养皿内，接种细胞培养过夜，使融合率约为50%～80%。
2、加入干预条件使细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入Hoechst 固定液固定。
3、去除固定液，用PBS 或生理盐水洗2次，吸尽液体。
4、加入Hoechst 染色液孵育。
也宜用摇床，或手动晃动数次。
5、弃染色液，PBS 或生理盐水洗2次。
6、滴一滴抗荧封片剂于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，让细胞接触封片剂，避免气泡。
(二)悬浮细胞1、离心收集细胞样品于1.5ml 离心管内并弃液，加入Hoechst 固定液，缓缓悬起细胞，固定10min 或更长时间(亦可4℃过夜)。
2、低速离心去除固定液，用PBS 或生理盐水洗2次，每次3min 。
洗涤时手动晃动数次。
3、低速离心离心后吸去大部分液体保留约50μl 液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞分布均匀。
编号 名称 DA0140 100T Storage 试剂(A): Hoechst 固定液 50ml RT 试剂(B): Hoechst 染色液 50ml -20℃ 避光 试剂(C): 荧光封片剂 5ml 4℃ 避光 使用说明书 1份4、稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。
支原体检测说明书
SaveIt系列产品——支原体检测试剂盒说明书一、产品简介支原体（mycoplasma）：又称霉形体，为目前发现的最小的最简单的原核生物。
支原体的侵染会引起细胞功能和基因表达的严重改变，并造成持续危害。
由于支原体污染会严重影响实验结果的可靠性、重复性和一致性，对支原体的常规检测非常重要。
针对细胞、培养基以及动物血清的支原体检测，我们推出了Myco-PCR-TEST快速支原体检测试剂盒。
本试剂盒基于PCR检测原理，根据支原体高度保守的16和23SrRNA区域设计的特异性引物，经过简单快速的PCR，从而迅速准确判断支原体污染是否被清除。
汉恒生物（）推出的SaveIt TM抗支原体试剂能够在不影响细胞状态的前提下能够有效的清除支原体污染，从而使一些珍贵的细胞受到支原体污染之后能够得到挽救。
二、产品包装产品规格见标签三、使用说明使用Trizol 法抽提待检测细胞的RNA，反转录为CDNA 后，加入支原体检测引物，进行PCR 检测细胞支原体污染情况。
四、操作步骤4.1样品处理1、A：培养贴壁细胞：不须胰酶消化，可直接用Trizol进行消化、裂解，Trizol体积按10cm2/ml 比例加入。
B：悬浮细胞可直接收集、裂解，每1ml Trizol可裂解5×106动物、植物或酵母细胞，或107细菌细胞。
2、细胞加Trizol后，室温放置5min，使其充分裂解。
注：此时可放入-70℃长期保持。
3、12,000rpm 离心5min，弃沉淀。
4、按200ul氯仿/ml Trizol加入氯仿，振荡混匀后室温放置15min。
注：禁用漩涡振荡器，以免基因组DNA断裂。
5、4℃ 12,000g离心15min。
6、吸取上层水相，至另一离心管中。
注：千万不要吸取中间界面；若同时提取DNA和蛋白质，则保留下层酚相存于4℃冰箱,若只提RNA，则弃下层酚相。
7、按0.5ml 异丙醇/ml Trizol 加入异丙醇混匀，室温放置5-10min 。
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支原体染色检测试剂盒
简介：
支原体染色检测试剂盒(Mycoplasma Stain Assay Kit)是一种经典的利用DNA 荧光染色法检测支原体污染的试剂盒，其原理是当细胞发生凋亡时，染色质会固缩，Hoechst 染色后在荧光显微镜下观察，正常细胞的细胞核呈正常的蓝色，而凋亡细胞的细胞核会呈致密浓染，或呈碎块状致密浓染，颜色有些发白。
Leagene Hoechst Staining Kit 经常用于培养的贴壁或悬浮细胞以及组织切片的细胞凋亡检测。
该试剂盒检测细胞含量范围一般为0.1～1×106之间。
组成：
自备材料：
1、 可观察蓝光的荧光显微镜或激光共聚焦显微镜
2、 PBS 或生理盐水
3、 载玻片、盖玻片
4、 预冷固定液：预冷的70%乙醇或4%多聚甲醛
操作步骤(仅供参考)：
(一)贴壁细胞
1、取洁净盖玻片在乙醇中浸泡，无菌超净台内吹干或用无菌的PBS 或生理盐水洗涤3次，再用细胞培养液洗涤。
将盖玻片置于6孔板或其他培养皿内，接种细胞培养过夜，使融合率约为50%～80%。
2、加入干预条件使细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入Hoechst 固定液，固定10分钟或更长时间(可4℃过夜)。
3、去除固定液，用PBS 或生理盐水洗，每次3min ，吸尽液体。
洗涤时宜用摇床，或手动晃动。
4、加入Hoechst 染色液，孵育。
也宜用摇床，或手动晃动数次。
5、弃染色液，PBS 或生理盐水洗2次，每次3min ，吸尽液体。
洗涤时宜用摇床，或手 编号 名称 DA0140 100T Storage 试剂(A): Hoechst 固定液 50ml RT 试剂(B): Hoechst 染色液 50ml -20℃ 避光 试剂(C): 荧光封片剂 5ml 4℃ 避光 使用说明书 1份
动晃动。
6、滴一滴抗荧封片剂于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，让细胞接触封片剂，避免气泡。
7、荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。
(二)悬浮细胞
1、离心收集细胞样品于离心管内并弃液，加入Hoechst固定液，缓缓悬起细胞，固定(亦可4℃过夜)。
2、低速离心去除固定液，用PBS或生理盐水，每次3min。
洗涤时手动晃动数次。
3、低速离心离心后吸去大部分液体保留液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞分布均匀。
4、稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。
5、均匀滴上Hoechst 染色液，孵育。
用吸水纸从边缘吸去液体，微晾干。
6、弃染色液，用PBS或生理盐水洗2次，每次3min，吸尽液体。
洗涤时宜用摇床手动。
7、滴一滴抗荧光封片剂于载玻片上，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。
8、荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。
(三)组织切片
1、常规包埋切片。
用PBS或生理盐水洗2次，每次3min。
洗涤时手动晃动数次。
2、均匀滴上Hoechst染色液，孵育。
3、弃染色液，PBS或生理盐水洗2次，每次3min，吸尽液体。
洗涤时宜用摇床或手动。
4、将切片置于载玻片上，滴一滴抗荧光封片剂，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。
5、荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。
注意事项：
1、荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽快检测。
使用抗荧封片剂时也应避光操作。
2、在为了获得细胞沉淀的离心的过程中，对于特殊细胞，如果细胞沉淀不充分，可以适当
提高离心力或延长离心时间。
3、Hoechst染色液对人体有一定刺激性，请注意适当防护。
4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
亦可4℃保存, 1个月有效。