赖氨酸特异性去甲基化酶1在胶质瘤组织的表达及其意义论文
论述MGMT在脑胶质瘤中的表达及其意义
论述MGMT在脑胶质瘤中的表达及其意义脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的原发性恶性肿瘤，占颅内肿瘤的40%以上，年发病率约为十万分之五。
目前临床常规治疗是以手术切除为主，术后联合放疗和化疗等综合治疗。
术后化疗可以部分杀灭或抑制残存的肿瘤细胞，是胶质瘤综合治疗措施中的重要步骤之一，而影响化疗效果的重要因素之一就是肿瘤细胞对化疗药物的敏感性及耐药性如何。
相关研究表明，决定DNA修复酶-O6-甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O6-methylguanine-DNA methyltransferase, MGMT) 表达量的主要因素就是MGMT基因启动子的甲基化状态，而MGMT在胶质瘤组织中的表达与肿瘤细胞的耐药性相关，有可能影响到患者的化疗效果及预后。
本研究通过测定胶质瘤组织中MGMT的表达水平，拟预先评估患者对烷化剂等化疗药物的耐药性，对于指导临床个性化化疗，提高疗效等方面有着重要意义。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 纳入标准收集昆明医学院第三附属医院神经外科2009年1月至2011年10月手术切除的63例经病理学诊断为胶质瘤的肿瘤标本组织。
所有患者术前未行放化疗及患有其他肿瘤。
1.1.2 病例特点患者年龄14岁～75岁，平均41.2岁，其中男性33例，女性30例；按照WHO关于中枢神经系统肿瘤分类法，将63例脑胶质瘤分为4组：Ⅰ级组7 例，Ⅱ级组20例，Ⅲ级组19例，Ⅳ级组17例。
各组别患者年龄及性别构成无统计学差异。
1.1.3 标本处理所有肿瘤组织标本均尽快送至病理科，经中性福尔马林液固定16h～24h，然后石蜡包埋，4€%em厚度连续切片2张。
一张切片行HE染色，作为组织学分级，一张切片行免疫组织化学染色。
1.2 方法1.2.1 主要试剂浓缩型鼠抗人MGMT单克隆抗体、通用型SP广谱试剂盒、DAB显色剂均购自北京中山金桥生物公司。
按照试剂盒说明书提供的实验方法进行。
1.2.2 免疫组织化学染色石蜡切片经二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，3%过氧化氢甲醇溶液，室温下孵育20分钟，以阻断内源性过氧化物酶活性，蒸馏水冲洗后，在室温下抗原修复；滴加鼠抗人MGMT单克隆抗体，孵育60min(37℃)；生物素标记的第二抗体，室温孵育10min；链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液，室温孵育10min；DAB 显色；显微镜下观察显色情况，显色适度后自来水冲洗中止反应，然后脱水、透明、封固，光镜下观察并摄片。
组蛋白赖氨酸特异性脱甲基酶1(LSD1)在肿瘤治疗中的应用进展
［ 中图分类号 ］ Ｒ ４ ７ ３ ． ７ ３
文章编码 ： １ ０ ０ １ —８ １ ３ １ （ ２ ０ １ ４ ） ０ ６—０ ４ ０ ５—０ ３
［ 文献标识 码］ Ａ
学科分类代码 ： ３ ２ ０ ７ １
Ｈｉ ． ｓ ｔ ｏ ｎ ｅ Ｌｙ ｓ ｉ ｎｅ Ｓ ｐ ｅ ｃ ｉ ｉｃ ｆ Ｄｅ ｍｅ ｔ ｈ ｙ ｌ ａ ｓ ｅ １
Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ Ｏ ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｈ ｉ ｓ ｏ ｔ ｎ ｅ ｄ ｅ ｍ ｅ ｔ ｈ ｙ ｌ ａ ｓ ｅ Ｌ Ｓ Ｄ １ ｉ ｆ ｎ ｄ ｉ ｎ ｇ ｓ ｒ ｅ ｖ ｅ ａ ｌ ｄ ｅ ｔ ｈ ａ ｔ ｈ ｉ ｓ ｏｎ ｔ ｅ ｌ ｙ ｓ ｉ ｎ ｅ ｍ ｅ ｈｙ ｔ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｏ ｔ ｈ ｅ ｒ ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｃ ａ ｌ ｍ ｄｉ ｅ ｉ ｆ ｃ ａ － ｔ ｉ ｏ ｎ ｓ ｓ ｕ ｃ ｈ ａ ｓ ａ ｃ ｅ ｙ ｔ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ， ｕ ｂ ｉ ｑ ｕ ｉ ｔ ｉ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｎｄ ａ ８ ０ ｏ ｎ ， ｉ ｓ ａ ｐ ｒ ｏ ｃ ｅ ｓ ｓ ｏ ｆ ｄ ｙ ｎ ａ ｍｉ ｃ ａ ｄ ｊ ｕ ｓ ｔ ｍ ｅ ｎ ｔ ． Ｌ Ｓ Ｄ１ ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ｏ ｆ ｇ ｅ ｎ ｅ ｔ ｒ ａ ｎ ｓ ｃ ｒ ｉ ｐ ｉ ｔ ｏ ｎ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ａ ｔ ｏ ｒ ｓ ａ｛ Ｌ Ｓ Ｄ１ ） Ｌ ｓ Ｄ １又 名 Ｋ Ｉ Ａ Ａ ０ ６ ０ １ 、 Ｋ Ｄ Ｍ１ 、 Ａ Ｏ Ｆ ２ 、 Ｂ ＨＣ １ １ ０ 、 ｐ ｌ １ ０ ｂ和 Ｎ ， ｌ Ａ ０， 从 酵母 到人 类均 十分保守 。它是 由 Ｙ ａ ｎ ｇ Ｓ ｈ ｉ 等在 哈
赖氨酸特异性去甲基化酶1在肿瘤领域的研究进展
赖氨酸特异性去甲基化酶1在肿瘤领域的研究进展赖氨酸特异性去甲基化酶1在肿瘤领域的研究进展丁杰;张忠民;廖国庆;晏仲舒【期刊名称】《医学与哲学》【年(卷),期】2015(000)002【摘要】赖氨酸特异性去甲基化酶1（LSD1）是第⼀个被发现的赖氨酸特异性脱甲基酶，其可以特异地去除组蛋⽩H3第4位赖氨酸（H3K4）和组蛋⽩H3第9位赖氨酸（H3K9）的⼆甲基和⼀甲基修饰，调控靶基因的表达。
LSD1在肿瘤的发⽣、增殖、侵袭转移过程中均发挥了重要作⽤，有望成为肿瘤治疗的新的分⼦靶标。
本⽂就LSD1在肿瘤领域的研究进展作⼀综述。
%Lysine‐specific demethylase 1 (LSD1) ,the first discovered histone demethylase ,can specifically catalyze the demethylation of mono‐and dimethylated histone H3 lysine 4 (H3K4) and H3 lysine 9 (H3K9) ,and regulate the expression of its target genes .LSD1 play important roles in proliferation ,migration and invasion of various cancer cells , and it promises to be new molecular targets in cancer therapy .Thus ,the authors address the related issues along with research progress of LSD1 associated with carcinoma .【总页数】4页(57-60)【关键词】赖氨酸特异性去甲基化酶1;肿瘤;表观遗传【作者】丁杰;张忠民;廖国庆;晏仲舒【作者单位】贵州省⼈民医院胃肠外科贵州贵阳550002;贵州省⼈民医院胃肠外科贵州贵阳550002;中南⼤学湘雅医院胃肠外科湖南长沙410008;中南⼤。
检测血浆中p16及CDO1基因甲基化在胶质瘤诊断中的价值
检测血浆中p16及CDO1基因甲基化在胶质瘤诊断中的价值李显雄;徐培坤;李式浩;胡光东;邓鹏程;杨成子【摘要】采用甲基化特异PCR(MSP)法分别检测49例胶质瘤患者组织及其对应的术前血浆,10例颅脑外伤患者挫伤的脑组织及其对应的术前血浆和16例健康体检者血浆中p16及半胱氨酸双加氧酶1(CDO1)基因的甲基化状态,以探讨血浆中检测p16及CDO1基因甲基化在胶质瘤临床诊断中的价值.胶质瘤组织中p16及CDO1基因甲基化率分别为53.1%(26/49)、42.9%(21/49),对应的血浆甲基化率为39.0%(19/49)、34.7%(17/49).在肿瘤组织和血浆中p16及CDO1至少一个[p16和(或)CDO1]基因甲基化的频率为75.5%(37/49)和67.3%(33/49).血浆中p16及CDO1基因(甲基化)联合检测胶质瘤的灵敏度为67.3%,较单基因检测的灵敏度明显提高.单因素分析显示术前患者血浆中p16和(或)CDO1基因的甲基化与年龄、性别、肿瘤分级无关.对一些肿瘤特异基因的甲基化状态进行联合检测可提高胶质瘤在血清学诊断水平上的灵敏度,为胶质瘤的筛查及早期诊断提供新的临床诊断思路.%Methylation-specific polymerase chain reaction was used to detect the methylation statuses of gene p16 and gene CDO1 from 49 patients with glioma tissues and their corresponding preoperative plasma, 10 patients with craniocerebral brain tissues their corresponding preoperative plasma, as well as 16 samples of plasma from healthy subjects, respectively, in order to investigate the value of the methylation detection of gene p16 and gene CDO1 from plasma in the clinical diagnosis of glioma.For glioma tissues, the methylation rates of gene p16 and gene CDO1 were 53.1% (26/49) and 42.9% (21/49), respectively, while the methylation rates of the corresponding plasma were 39.0% (19/49) and34.7% (17/49), respectively.As for tumor tissues and plasma, the frequencies for methylation of gene p16 and/or gene CDO1 were 75.5% (37/49) and 67.3% (33/49).The joint detection of the methylation of gene p16 and gene CDO1 in the plasma for the sensitivity of glioma was 67.3%, an obvious improvement compared with single gene detection.In addition, a univariate analysis showed that the methylation of gene p16 and gene CDO1 from the preoperative plasma had no significant correlation with the patient'age, sex or tumor grade.Therefore, we draw a conclusion that a joint detection of the methylation status of some specific tumor genes can improve the sensitivity of glioma at the serological diagnosis level, which may provide new clinical thoughts for screening and early diagnosis of glioma.【期刊名称】《安徽医科大学学报》【年(卷),期】2017(052)004【总页数】4页(P593-596)【关键词】DNA甲基化;胶质瘤;早期诊断;p16基因;CDO1基因【作者】李显雄;徐培坤;李式浩;胡光东;邓鹏程;杨成子【作者单位】安徽医科大学第一附属医院神经外科,合肥 230022;安徽医科大学第一附属医院神经外科,合肥 230022;安徽医科大学第一附属医院神经外科,合肥230022;安徽医科大学第四附属医院神经外科,合肥 230013;安徽医科大学第一附属医院神经外科,合肥 230022;安徽医科大学第一附属医院神经外科,合肥 230022【正文语种】中文【中图分类】R739.41神经胶质瘤是由神经外胚叶衍化而来的胶质细胞发生的一类原发性颅内恶性肿瘤的总称[1]。
探讨免疫组化检测脑胶质瘤IDH1及应用
探讨免疫组化检测脑胶质瘤IDH1及应用王玉环【摘要】目的胶质瘤中异柠檬酸脱氢酶1(Isocitrate dehydrogenase 1,IDH1)不同检测方法的比较,并探讨IDH1突变对胶质瘤临床诊断的意义.方法搜集胶质瘤患者手术切除送检标本,采用ventana Bench Mark ULTRA全自动免疫组化染色法和手工免疫组化SP染色法检测胶质瘤IDH1的表达.结果全自动免疫组化染色法染色强度强、着色均匀、阳性定位准确、背景清晰,IDH1表达阴性6例,阳性7例;手工免疫组化SP染色染色强度较弱、着色欠均匀、阳性定位不准确、背景不清晰,IDH1表达阴性6例,阳性7例.手工染色与全自动免疫组化染色结果一致.结论在IDH1免疫组化检测中,全自动免疫组化仪染色结果较手工免疫组化染色阳性表达定位准确、着色均匀、背景清晰、无非特异染色,操作简单、运行时间短,并且准确率高.此外IDH1突变阳性的肿瘤细胞并没有随着肿瘤级别的进展而增加,不呈正相关的关系.【期刊名称】《中国卫生标准管理》【年(卷),期】2018(009)015【总页数】3页(P125-127)【关键词】脑胶质瘤;IDH1;突变;免疫组化;WHO分级;临床意义【作者】王玉环【作者单位】厦门大学附属第一医院病理科,福建厦门 361001【正文语种】中文【中图分类】R365源自神经上皮的肿瘤统称为脑胶质瘤，占颅脑肿瘤的40%～50%[1]，是最常见的颅内恶性肿瘤，年发病率为3～8人/10万人口[2]。
脑胶质瘤在临床上具有发病率高、复发率高、死亡率高、治愈率低的特点[3]。
目前，脑胶质瘤的治疗手段以手术切除为主，术后辅助以放疗、化疗等手段，预后不佳[4]。
IDH1是三羧酸循环中重要的关键限速酶[5]，催化异柠檬酸氧化脱羧生成二氧化碳及α-酮戊二酸（α-KG），可为细胞新陈代谢提供能量和生物合成前体物质[6]。
近年来，Parsons等[7]学者研究发现IDH1的异常表达与胶质瘤的发生密切相关，并且在胶质瘤的诊断、治疗、预后有重要意义。
赖氨酸特异性去甲基化酶1参与的信号通路在肿瘤领域的研究进展
胺氧化酶结构域（ａｍｉｎｅｏｘｉｄａｓｅｌｉｋｅ，ＡＯＬ）。Ｔｏｗｅｒ结构域由 两个 α螺旋组成，位于 ＡＯＬ两叶之间，把 ＡＯＬ一分为二，分 别为 ＦＡＤ结合域和底物结合域，形成催化活性中心，统称为 ＬＳＤ１的活性区域。Ｔｏｗｅｒ结构域对 ＬＳＤ１与其它蛋白相互作 用发挥重要作用，对于维持 ＬＳＤ１的生物活性具有重要意义。 ＬＳＤ１非共价结合辅酶 ＦＡＤ，可特异性去除组蛋白 Ｈ３第 ４位 赖氨酸（Ｈ３Ｋ４）和组蛋白 Ｈ３第 ９位赖氨酸（Ｈ３Ｋ９）的一甲 基、二甲基修饰，从而影响基因的表达。
Ｗｎｔ信号通路可分为经典通路和非经典通路。经典信号 通路也称为 Ｗｎｔ／βｃａｔｅｎｉｎ信号通路，由 Ｗｎｔ蛋白与相应的膜 受体 Ｆｒｚ（ｆｒｉｚｚｌｅｄ）及低 密度 脂 蛋 白 相 关 受 体 蛋 白 ５／６（ｌｏｗ ｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ５／６，ＬＲＰ５／６）组 成 的二聚体受体结合启动，激活细胞内的 Ｄｓｈ蛋白，活化的 Ｄｓｈ 蛋白使 ＧＳＫ３β磷酸化而失活，导致 ＡＰＣＡｘｉｎＧＳＫ３β介导的 βｃａｔｅｎｉｎ降解过程受到抑制，使 βｃａｔｅｎｉｎ在细胞质中积累， 然后转移至细胞核内，与 Ｔ细胞转录因子（Ｔｃｅｌｌｆａｃｔｏｒ，ＴＣＦ） 结合形成复合体后，调控下游靶基因的表达，从而调控细胞增 生与凋亡。非经典 Ｗｎｔ信号通路包括 Ｗｎｔ／Ｃａ２＋通路和 Ｗｎｔ／ ＪＮＫ通路。 ２．２ Ｎｏｔｃｈ信号通路的组成与作用机制
作者单位：１５５００００贵州医科大学；２５５０００２贵州省人民 医院胃肠外科；３５５０００２贵州省人民医院口腔科
通信作者：丁杰，Ｅｍａｉｌ：ｄｉｎｇｊｉｅｂｏｙ＠１２６．ｃｏｍ 基金项目：国家自然科学基金（８１３０２１６９）；贵州省社会发 展攻关项目（黔科合 ＬＨ字［２０１４］７０１２）；贵州省优秀青年科 技人才培养对象（ＧＺＳＹＱＣＣ［２０１７］５６０２）；贵州省高层次留学 人才创新创业项目（留学人才择优资助合同（２０１８）０４号）
组蛋白赖氨酸去甲基化与基因调控
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却未发现有 LSD1同源物存在 。
2 组蛋白赖氨酸去甲基化酶的生物学作用
Hale Waihona Puke 图 1 LSD1的结构域及其同源系 [3 ]
最近 , Tsukada 等 [ 4 ] 通过酵母的培养与纯化 , 发现 Jm jC蛋白家族具有去甲基化酶活性 。Jm jC结 构域属于金属酶中的 cup in 超家族 , 通过基因分 析 , 从原核生物到真核生物 , 有 100 多个含 Jm jC 结 构 域 的 蛋 白 。目 前 发 现 Jm jC 蛋 白 JHDM1、 JHDM2、JMJD2 3个亚家族中的许多成员都具有组 蛋白赖氨酸去甲基化酶活性 。Jm jC 蛋白去甲基化 酶活性依赖于 Jm jC结构域的完整 , 功能上是高度 保守的 , 如 Jm jC 结构域的一个点突变 ( H305A ) 就完全失去其酶活性 [ 4 ] 。但仅有 Jm jC 结构也不能 完成一个去甲基化催化过程 , 还需要有另外不同的 结构域共同作用才能发挥去甲基化的催化反应 。如 JHDM2 亚 家 族 在 人 和 鼠 发 现 有 JHDM2A、 JHDM2B、JHDM2C 3 个成员 , 分子结构中除 Jm jC 外 , 还有 1个锌指区 。这 2个结构域均与组蛋白赖 氨酸去甲基酶活性有关 (图 2) 。
【Key words】 histone lysine; demethylase; LSD1; Jm jC p rotein; gene regulation
组蛋白 N 端的氨基酸残基可通过多种共价修 饰调控基因表达 [ 1 ] 。目前发现组蛋白 H3、H4 有 6 个赖氨酸位点甲基化与基因表达有密切关系 。组蛋 白赖氨酸甲基化一直被认为是一种不可逆的过程 。 最近发现 , LSD1和 Jm jC蛋白家族能够特异性脱去 组蛋白赖氨酸上的甲基基团 , 在基因表达调控中起 重要作用 。
组蛋白赖氨酸去甲基化酶1的抑制剂筛选
组蛋白赖氨酸去甲基化酶1的抑制剂筛选 郑一超，赵文，徐瑞敏，吕文蕾，马金莲，杨珂，杨昂，马永成，刘宏民* (郑州大学药学院，郑州大学新药研究开发中心，河南郑州 450001)摘要：目的建立组蛋白赖氨酸去甲基化酶1（LSD1）抑制剂的高通量筛选模型，合成并筛选出全新小分子LSD1抑制剂。
方法通过荧光定量检测LSD1去甲基化过程中的副产物过氧化氢，建立并优化LSD1高通量筛选模型；定量检测合成的小分子化合物对LSD1的抑制率。
结果和结论已成功构建了LSD1的高通量筛选模型，并筛选出了7个全新的小分子LSD1抑制剂。
关键词：LSD1；高通量筛选；抑制剂Screening for lysine specific demethylase 1(LSD1) inhibitorsZHENG Yi-chao, ZHAO Wen, XU Rui-min, LV Wen-lei, MA Jin-lian, YANG Ke,YANG Ang, MA Yong-cheng, LIU Hong-min*(School of Pharmaceutical Sciences, New Drug Research & Development Center, Zhengzhou University, No.100, Science Avenue, Zhengzhou 450001, Henan, China) ABSTRACT: Objective This study is designed to e stablish a high through-put screening model for LSD1 inhibitor, synthesize and screen compounds with potential LSD1 inhibiting effect. Methods HRP coupled Amplex Red method was used to quantify hydrogen peroxide, a by-product of H3K4me2 demethylated by LSD1, in order to evaluate the inhibition rate of the compounds. Results and Conclusions We have established a LSD1 inhibitor screening model. 7 new compounds with LSD1 inhibitory effect have been obtained.Key words: LSD1; high through-put screening; inhibitor组蛋白赖氨酸去甲基化酶1（Lysine Specific Demethylase 1，LSD1）是2004年由哈佛大学医学院施洋教授发现的第一个组蛋白去甲基化酶[1]，正式确认了组*作者简介：郑一超，男，博士研究生研究方向：新药筛选E-mail:************************；通讯作者：刘宏民，男，教授，博士生导师研究方向：新药设计合成及糖化学Tel:（0371）67781739E-mail:*************.cn。
肿瘤干细胞中的Hippo_信号通路研究进展
生物技术进展 2024 年 第 14 卷 第 2 期 211 ~ 220Current Biotechnology ISSN 2095‑2341进展评述Reviews肿瘤干细胞中的Hippo 信号通路研究进展赵维坚 ， 徐弘庭 ， 肖向茜 *， 盛望 *北京工业大学环境与生命学部，北京 100124摘 要：如何抑制肿瘤细胞的增殖和干性基因的表达已经成为近年来科学家在癌症治疗领域关注的重点之一。
肿瘤干细胞(cancer stem cell ，CSC)是肿瘤中一类具有自我更新能力的细胞类群，被认为是肿瘤发生过程中的驱动因素之一。
Hippo 信号通路在生物进化过程中高度保守，且对细胞增殖、组织发育和器官大小具有重要作用。
简述了Hippo 信号通路及其在肿瘤干细胞中的作用机制，并对肿瘤的治疗提出了展望，以期为肿瘤干细胞的发展和未来治疗提供参考。
关键词：Hippo 信号通路；肿瘤干细胞；靶向治疗DOI ：10.19586/j.20952341.2023.0149中图分类号：Q291， R730.2 文献标志码：AResearch Progress on Hippo Signaling Pathway in Cancer Stem CellZHAO Weijian ， XU Hongting ， XIAO Xiangqian *， SHENG Wang *Faculty of Environment and Life ， Beijing University of Technology ， Beijing 100124， ChinaAbstract ： In recent years ， how to inhibit the proliferation of tumor cells and the expression of stem genes has become one of the focus‐es of scientists in cancer treatment. Cancer stem cell （CSC ） is a kind of cell group with self -renewal ability in tumors ， and is consid‐ered as one of the driving factors in the process of tumorigenesis. The Hippo signaling pathway is a highly conserved signaling pathway in biological evolution that plays an important role in cell proliferation ， tissue development ， and organ size. In this article ， Hippo sig‐naling pathway and its mechanism in cancer stem cell were briefly reviewed ， and the prospect of tumor treatment was proposed ，in order to provide reference for the development and future treatment of tumor stem cells.Key words ： Hippo signaling pathway ； cancer stem cell ； targeted therapy癌症一直是全世界人口死亡的主要原因之一，大约三分之一的癌症患者在确诊后5年内死亡［1］。
LysM结构域1基因甲基化在胶质母细胞瘤中的临床意义
·535·胶质瘤是中枢神经系统中最具侵袭性和致死性的肿瘤，以高复发率和高死亡率为显著特征［1］。
尽管许多学者付出了巨大努力，但在胶质瘤治疗方面几乎没有取得进展［2］。
胶质母细胞瘤是恶性程度最高的颅内恶性肿瘤，属于Ⅳ级恶性胶质瘤，是仅· 论著 ·LysM结构域1基因甲基化在胶质母细胞瘤中的临床意义吕洪涛1，李俊1，孙锡同2 （大连医科大学附属第一医院 1. 神经外科；2. 急诊科，辽宁 大连 116011） 摘要 目的 研究复发胶质母细胞瘤与无复发胶质母细胞瘤组织的甲基化差异基因，并探讨其与患者无复发生存期 （RFS ） 的关系。
方法 从癌症基因组图谱 （TCGA ） 数据库中下载胶质母细胞瘤患者的相关数据，筛选差异甲基化基因。
采用Kaplan -Meier 生存曲线分析基因表达水平与患者RFS 的关系，采用单因素、多因素Cox 回归分析鉴定胶质母细胞瘤独立预后标志物，采用MTT 法检测细胞增殖水平。
结果 通过比较复发组和无复发组，筛选出23个差异甲基化的CpG 位点，这些CpG 位点对应20个基因。
进一步分析发现，复发组和无复发组中仅LysM 结构域1 （LYSMD1） 基因的表达水平存在统计学差异 （P = 0.024 9）。
Kaplan -Meier 生存曲线结果显示，LYSMD1高表达患者的RFS 较LYSMD1低表达患者明显延长 （P = 0.031 3）。
单因素、多因素Cox 回归分析结果提示，LYSMD1 （多因素分析，HR = 0.583，95%CI ：0.384~0.886，P = 0.012） 为胶质母细胞瘤患者RFS 的独立预后因素，LYSMD1低表达提示胶质母细胞瘤患者具有高复发风险。
转染LYSMD1 cDNA 至胶质瘤细胞后，与阴性质粒转染组相比，细胞增殖活性减弱 （P < 0.05）。
结论 复发胶质母细胞瘤中LYSMD1基因甲基化水平升高，表达水平下调。
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【摘要】
目的探讨赖氨酸特异性去甲基化酶１（ＬＳＤｌ）在胶质瘤及非肿瘤脑组织中的表达并
分析其临床意义。方法选取河北大学附属医院２０１４年１月至２０１５年７月收治的５０例新鲜胶质 瘤标本和１０例非肿瘤脑组织标本。采用反转录一聚合酶链反应（ＲＴ．ＰＣＲ）法检测ＬＳＤｌ ｍＲＮＡ的表 达水平，采用免疫组织化学法检测ＬＳＤＩ蛋白的表达水平。结果ＬＳＤｌ ｍＲＮＡ相对表达量在脑组 织中为２．３２×１０。±２．２３
ｌａｓｅｌ（１５Ｄ１）ｉｎ ｈｕｍａｎ ｇｌｉｏｍａｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ （ＲＴ—ＰＣＲ）ｗａｓ ａＤｐｌｉｅｄ
ｔｏ
Ｆｉｆｒｙ ｇｌｉｏｍａ ｔｉｓｓｕｅｓ ａｎｄ ｔｅｎ ｎｏｎ—ｔｕｍｏｒ ｂｒａｉｎ ｔｉｓｓｕｅｓ ｗｅｒｅ ｃ０１．
１ｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ Ｔｈｅ Ａｍｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｈｅｂｅｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．Ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ—ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｄｅｔｅｃｔ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＬＳＤｌ．Ｗｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
检测胶质瘤及脑组织中ＬＳＤｌ蛋白的表达，探讨ＬｓＤｌ
万方数据
・２０９２・
主堡塞堕处整苤查！！！！生！旦箜！！鲞筮！翅垦！也』垦翌！！垡：！！Ｐ！！坐！竺；Ｑ！！：！！！：！！：№：！
（ＷＨＯ １１）１２例，少突神经胶质细胞瘤（ＷＨＯⅡ）５
例，间变型胶质细胞瘤（ＷＨＯｌｌＩ）８例，问变型少突胶 质细胞瘤（ＷＨＯ ｍ）９例，间变型少枝星形细胞瘤
Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：Ｌｉ Ｃｈｕｎｈｕｉ，Ｅｎｔａｉｌ：ｌｉｃｈｕｎｈｕｉ０３１２＠ｓｉｎａ．ｃｏｒｎ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ ｏｆ ｌｙｓｉｎｅ—ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｄｅｍｅｔｈｙ－
Ｓｕｒｇ，２００９，２６（１）：７－８． ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｉ．ｉｓｓｎ．１００ｌ－９０３０．２００９．０１．００２．
Ｓｅｏｕｍａｎｎｅ Ａ，Ｃｈｅｎ Ｘ．Ｔｈｅ ｆｏｒ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｂｏｔｈ ｌｙｓｉｎｅ—ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｄｅｍｅｔｈｙｌａｓｅ ｌ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ
ｏｆ坞Ｄ１
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ｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ
Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＬＳＤｌ ｍＲＮＡ ｉｎ ｎｏｎ—ｔｕｍｏｒ
ｂｒａｉｎ ｗａｓ ２．３２×１０～３±２．２３×１０—３．ｉｎ ｇｌｉｏｍａ ｇｒａｄｅ ２ ｗａｓ ６．８６×１０—３±２．７２×１０—３，ｉｎ ｇｌｉｏｍａ ｇｒａｄｅ ３ Ｗａｓ ４．５８×１０—２±６．８２×１０一’．ｉｎ ｇｌｉｏｍａ ｇｒａｄｅ ４ ｗａｓ ５．８６×１０一。±１．３１×１０—２：ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｍａｒｋｅｒ ｉｎｄｅｘ ｏｆ ＬＳＤｌ ｐｒｏｔｅｉｎ ｉｎ ｂｒａｉｎ
ｈｕｍａｎ
ｇｌｉｏｍａｓ
Ｄｉ
Ｈｕｉ，此，ｌｇ
Ｃｈｕａｎ，鼽ｉ物ｎｆａｎｇ，Ｔｉａｎ Ｃｈｕｎｈｕｉ，Ｙｕａｎ Ｙｕ，Ｓｕｎ Ｑｉａ，曙，Ｄｕ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇｅｒｙ，Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｈｅｂｅｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂａｏｄｉｎｇ
Ｌｅｉ，Ｌｉ Ｃｈｕｎｈｕｉ ０７１０００，Ｃｈｉｎａ
Ｆｕｎｄ ｐｒｏｇｒａｍ：Ｋｅｙ Ｐｒｏｊｅｃｔ ｏｆ Ｍｅｄｉｅａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ Ｈｅｂｅｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ（２０１６０３７９）；Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｔａｌｅｎｔｓ Ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｂａｓｉｃ Ｒｅｓｅａｒｅｈ Ｐｒｏｉｅｃｔｓ ｏｆ Ｈｅｂｅｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ（３６１００７）
参考文献
ｌ １Ｊ
ｓｈｉ
常规脱蜡、水化、漂洗，一抗孵育过夜，使用磷酸盐缓冲
液浸洗５次后加入二抗室温孵育３０ ｍｉｎ，使用磷酸盐
缓冲液浸洗５次，脱水干燥后封片。采用双盲法双人 阅片，使用阳性标记指数［Ｌｉ（％）＝阳性细胞数／总细 胞数Ｘ １００％］评定染色结果。 ５．统计学方法：应用ＳＰＳＳ １７．０统计软件分析。 计量资料采用均数±标准差（元±ｓ）表示。不同样本问 比较采用单因素方差分析，以Ｐ＜０．０５为差异有统计
２．主要试剂：ｍＲＮＡ反转录试剂盒及ＳＹＢＲ＠
Ｇｒｅｅｎ
ＰＣＲ试剂盒购于ＴａＫａＲａ公司；兔抗人ＬＳＤｌ抗
体购自美国Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ公司；山羊超敏免疫组织化
学检测试剂盒购自北京中杉金桥生物科技公司。
３．ＲＴ—ＰＣＲ：取５０ ｍｇ组织标本，采用Ｔｒｉｚｏｌ一步法 提取组织总ＲＮＡ ＮａｎｏＤｒｏｐ２０００定量，根据ＴａＫａＲａ公
１０ Ｓ，５９℃３０
Ｓ，５０个循环，每组设３个复
孔，本实验独立重复３次。 ４．免疫组织化学染色法：留取部分组织样本置于 液氮中保存备用，将剩余组织使用福马林固定后石蜡
包埋。将石蜡标本连续切割成厚５ Ｉｘｍ的石蜡切片，
本研究结果显示，在胶质瘤中ＬＳＤｌ ｍＲＮＡ及蛋 白的表达明显高于非肿瘤脑组织，并且随着胶质瘤病 理级别的增高，ＬＳＤｌ的表达呈上升趋势。这提示 ＬＳＤｌ在胶质瘤中扮演着促癌基因的角色。ＬＳＤｌ在胶 质瘤中的表达量随病理级别的增高而增高。本研究结 果提示ＬＳＤｌ基因可能作为一种促癌因子，在胶质瘤 的发生发展中扮演着重要角色。
件，以ＧＡＰＤＨ作为内参校正，脑组织中ＬＳＤｌ
ＤＯＩ：ｉ０．１００２／ｉｊｃ．２５３４９． 殷晓煜，彭建新．表观遗传学在恶性胶质瘤领域的研究现状与展 望［Ｊ］．中华实验外科杂志，２００９，２６（Ｉ）：７－８．
Ｙｉｎ ＸＹ，Ｐｅｎｇ ｏｆｍａｌｉｇｎａｎｔ
的相对表达量为２．３２×１０。３±２．２３×１０～，Ⅱ级胶质
瘤中为（４８．２６±６．９１）％。结论ＬＳＤｌ在胶质瘤中高表达，并且其表达量随胶质瘤级别的增高而 增高。
【关键词】胶质瘤；赖氨酸特异性去甲基化酶１；表达
基金项目：河北省医学科学研究重点课题计划项目（２０１６０３７９）；河北省临床医学优秀人才培养 和基础课题研究项目（３６１００７）
Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｓ ｏｆ ｌｙｓｉｎｅ—ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｄｅｍｅｔｈｙｌａｓｅ １ ｉｎ
学意义。 结
１．ＬＳＤｌ
Ｙ，ｈ Ｆ，Ｍａｔｓｏｎ
Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｈｉｓｔｏｎｅ ｄｅｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ
ｎｕｃｌｅａｒ ａｍｉｎｅ ｏｘｉｄａｓｅ ｈｏｍｏｌｏｇ ９５３．
ＬＳＤｌ［Ｊ］．Ｃｅｌｌ，２００４，１１９（７）：９４１．
果
ＤＯＩ：１０．１０１６／ｊ．ｃｅｌｌ．２００４．１２．０１２． ［２］Ｈａｙａｍｉ Ｓ，Ｋｅｌｌｙ ＪＤ，Ｃｈｏ ＨＳ，ｅｔ ａ１．Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
之间差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。 ２．ＬＳＤｌ蛋白的表达：ＬＳＤｌ蛋白在脑组织中阳性 标记指数为（７．５０±４．３３）％，Ⅱ级胶质瘤中阳性标记 指数为（１６．２１±４．８２）％，Ⅲ级胶质瘤中阳性标记指
（ＷＨＯｌｌＩ）１４例。（２）对照组：外伤减压切除的脑组 织１０例，男６例，女４例，年龄２５～６３岁，平均４２．５
ｕｔｅｓ ｔｏ
ｏｆ ＬＳＤｌ
ｃｏｎｔｒｉｂ．
ＶａｆｌＯＵＳ
ｈｕｍａｎ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ
ｔｈｒｏｕｇｈ ｃｈｒｏｍａｔｉｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ
ｃａｎｃｅｒｓｌＪｊ．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ，２０１１，１２８（３）：５７４—５８６．
ｍＲＮＡ的表达：使用ＬＣ４８０自带分析软
ｍＲＮＡ ［３］
主坐塞堕处型苤蠢垫！！生！旦筮箜鲞筮！塑鱼！也』垦翌！！垡：！！Ｐ！！些竺！！！鱼：！！！：！！：堕！：竺
・２０９１・
・牢申经夕卜科・
赖氨酸特异性去甲基化酶１在胶质瘤
组织的表达及其意义
邸辉方川 史彦芳 田春辉袁宇 孙强 杜磊
李春晖
作者单位：０７１０００保定，河北大学附属医院神经外科 通信作者：李春晖，Ｅｍａｉｌ：ｌｉｃｈｕｎｈｕｉ０３１２＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
司反转录试剂盒操作说明获取反转录液。ＬＳＤｌ上游
引物：５’．ＧＡＡＡＣＴＧＧＡＡＴＡＧＣＡＧＡＧＡＣ．３’，下游引物： ５’．ＧＧＴＧＧＡＣＡＡＡＧＣＡＣＡＧＴＡＴＣＡ．３’。以甘油醛．３．
近年来，表观遗传学已逐渐成为肿瘤研究的热点 之一”Ｊ。在表观遗传改变中，组蛋白甲基化与去甲基 化平衡影响着基因的表达水平及肿瘤细胞的活性。 ＬＳＤｌ通过氨氧化还原反应完成去甲基化作用对组蛋 白进行修饰，在肿瘤细胞分化、基因的激活与抑制以及 细胞周期等方面扮演着重要角色－４ Ｊ。ＬＳＤｌ可以特异 性去除Ｈ３组蛋白尾部第４位赖氨酸或尾部第９位赖 氨酸上的甲基，调控相应基因的表达。ＬＳＤｌ还可作用 于非组蛋白底物，进而调控靶蛋白的活性，如ｐ５３和
瘤中的相对表达量为６．８６×１０～－４－２．７２×１０～，Ⅲ级 胶质瘤中的相对表达量为４．５８×１０。２±６．８２×１０～． Ⅳ级胶质瘤中的相对表达量为５．８６×１０。２±１．３１×
１０～。ＬＳＤｌ 【４ Ｊ
ＪＸ．Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｓ ｒｅｓｅａｒｃｈ
Ｊ Ｅｘｐ
ｓｔａｔｕｓ
ａｎｄ ｐｒｏｓｐｅｃｔ ｉｎ ｔｈｅ ｆｉｅｌｄ
脑组织中ＬＳＤｌ ｍＲＮＡ的表达，采用免疫组织化学法
在各级胶质瘤中表达的变化及其意义。
资料与方法
１．一般资料：（１）病例组：收集２０１４年１月至 ２０１５年７月河北大学附属医院神经外科手术切除，术 后病理检查证实的原发性胶质细胞瘤患者５０例，其中 男２８例，女２２例，年龄２０～６ｌ岁，平均４０岁。按 ２００７年世界卫生组织（ＷＨＯ）神经系统肿瘤分级，饲 肥星形细胞瘤（ＷＨＯ ＩＩ）２例，纤维型胶质细胞瘤