含种植体硬组织骨计量学不脱钙塑料包埋技术
介绍一种简易快速的骨髓组织脱钙法
在骨髓脱钙过程 中， 应 注意以下几点 ： ① 未固定 好的标本 易 受 酸性 脱 钙 液 的损 害 ， 因 此组 织 固定 一 定要 充 分 ， 时 间
＞３ ０ ｍ ｉ ｎ ； ②脱 钙 液用量 要充 足 ， 为标本体 积 ３ ０ 倍； ③ 骨髓
的方法『 ｌ ＿ ２ １ 。在实 际临床病理工作 中 ， 上 述两种方法 制片效果
均不佳 ， 常出现切片不完整 ， 刀痕 多 ， 给临床病理诊断 造成极
大 的 困难 。
骨髓组织较小 、 硬碎 、 纤维支架少且富含钙盐。在制片过 程 中容易 出现切片破碎 、 离断及染 色不 良。因此 ， 骨髓 活检组 织制 片 的关 键 问题 在 于脱 钙是 否彻底 及组织 细胞 的结构 及 成分是否保存完整 。 既往文献【 ３ — ５ ］ 报道 ， 部分医院病理科采 用
勤 夏
娟
李林丰
刘 智 罗启翅
梁海桥
在病理技术石蜡切片 中， 常常会 收到骨髓穿刺标本 。 因骨
髓组织 富含脂肪 组织及钙 盐 ， 不 能直接切 片 ， 必 须先脱脂 脱
匀， 对组织 收缩小 ， 并可适度保 护组织免受酸 的侵蚀［ ６ １ 。 而冰醋
酸穿透快 ， 可加速脱 钙 ， 且 较好地保存染 色体结构 ， 减少酸对
的改 良 诊 断病理 学杂志 ， ２ ０ １ １ ，１ ８ （ ２ ） ：１ ５ １ ． 『 ４ １ 崔京 淑． 改 良脱钙 液在 骨髓 穿刺组 织制 片 中的应用 ． 吉林 医
学 ，２ ０ １ ｌ ， ３ ２ （ ２ ２ ） ： ４ ６ ６ ０ ．
骨髓 穿刺组织 脱钙 后切 片 ，组织完整并可 以弥补骨髓组
骨组织形态计量学方法
2.5.4骨组织形态计量学方法2.5.4.1 不脱钙骨骨标本的包埋（1）包埋前单体（甲基丙烯酸甲酯）的洗脱方法①将1500ml的甲基丙烯酸甲酯倒入分液漏斗（2L）中。
②加入5% NaOH溶液500ml，充分摇匀，静置，待溶液分层后，放出下层溶液，弃去。
③重复操作“2”三次，三次的总量与单体量相当（洗脱阻滞剂）。
④加入500ml蒸馏水，充分摇匀，静置，待溶液分层后，放出下层溶液，弃去。
⑤重复操作“2”三次，三次的总量与单体量相当（洗脱NaOH）。
⑥将上述处理过的单体放入无水CaCl2（1000 ml：500g）脱水2次。
⑦滤纸过滤，收集滤液。
⑧-20℃保存备用，第二天取出看有无冰晶漂浮：无，表明无水可备用；有，则需重新脱水。
（2）胫骨上段包埋前的制备过程①暴露骨髓腔将固定液中的胫骨用低速锯锯开，暴露骨髓腔，解剖部位如下：②脱水分别通过70%乙醇2天，95%乙醇2天，100%乙醇1天，100%乙醇1天，四个脱水过程，二甲苯透明1天。
③渗透先后用浸液Ⅰ、浸液Ⅱ、浸液Ⅲ分别浸透2天。
三种浸液的配制方法如下：浸液Ⅰ甲基丙烯酸甲酯90ml，邻苯二甲酸二丁酯10ml，磁力搅拌器上搅拌3小时。
浸液Ⅱ甲基丙烯酸甲酯90ml，邻苯二甲酸二丁酯10ml，过氧化笨甲酰1.0g，磁力搅拌器上搅拌4小时。
浸液Ⅲ甲基丙烯酸甲酯90ml，邻苯二甲酸二丁酯10ml，过氧化苯甲酰2.5g，磁力搅拌器上搅拌6小时。
（3）包埋用新鲜配置的浸液Ⅲ（当日配置）倒入装有浸润好的骨头块容积约为15 ml 的小瓶中，倒入的包埋剂约，盖好瓶盖，并在瓶盖上插一注射器针头，室温过夜。
第二天把包埋瓶置入37-39℃的水育箱中聚合约48小时，直至包埋块形成。
若为胫骨中段骨，则需在包埋前几天预先倒入少量包埋剂于小玻璃瓶中作包埋块底衬，变硬后为1.5cm高为宜。
包埋时将胫骨中段至于瓶中央，在倒入2cm高的包埋剂。
若为胫骨上段，仅需将其锯开面贴瓶底中央包埋，倒入约3.5cm高的包埋剂即可。
用Bouin液固定不脱钙制作胎儿指骨整体切片
硬脂酸和组织脱蜡透明液完全替代二甲苯的病理制片方法,简便、经济,制片效果良好,尤其是避免了二甲苯对人体的危害及对环境的污染,值得推广使用。
参考文献:[1] 刘镜愉.临床医师诊疗全书:现代职业病诊疗手册[M].北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社,1997:142-143.[2] 龚志锦,詹镕洲.病理组织制片和染色技术[M].上海:上海科学技术出版社,1994:18-19.[3] 王伯沄.病理学技术[M].北京:人民卫生出版社,2000:78-79.[4] 胡小安,卢 静,张 润.改良硬脂酸石蜡切片的免疫组化染色效果观察[J].诊断病理学杂志,2004,12:439.[5] 古 伟,张国宾.硬脂酸替代二甲苯后组织脱片的预防[J].诊断病理学杂志,1995,2:240.用Bouin液固定不脱钙制作胎儿指骨整体切片唐泽立1,谢 玲1,林坚涛2关键词:Bouin固定液;氯仿;胎儿;指骨;不脱钙切片中图分类号:R446.8 文献标识码:B文章编号:1001-7399(2009)04-0443-02 组织学观察是骨组织研究的重要手段之一[1],由于骨组织致密、坚硬,并含有骨胶等成分,所以要制作一张高质量的切片(和软组织相比)有一定的困难[2]。
近年来出现的塑料包埋等[3,4]不脱钙骨切片及染色技术尚不够成熟和稳定[2]。
我们在教学过程中用胎儿指骨的整体切片做为观察软骨内成骨和骨组织组成及细胞结构的标本,制作时采用Bouin液做为固定液,用氯仿做为透明剂,不需脱钙制作出切片的组织和细胞的形态结构完整,染色鲜明、色泽深浅适当。
而将皮肤和结缔组织等一起固定包埋制作骨切片的文献极少。
现将我们的经验报道如下。
1 材料与方法1.1 取材与固定 取6～8个月的胎儿指骨[5],放于Bouin 固定液(苦味酸饱和水溶液75m l、10%福尔马林液25m l、冰醋酸5m l)内固定,1天后修整组织,把手指两侧的结缔组织切开修为平面后,置换一次固定液,在固定3～7天时间途中可再换一次固定液。
骨组织形态计量学方法解析
2.5.4骨组织形态计量学方法2.5.4.1 不脱钙骨骨标本的包埋（1）包埋前单体（甲基丙烯酸甲酯）的洗脱方法①将1500ml的甲基丙烯酸甲酯倒入分液漏斗（2L）中。
②加入5% NaOH溶液500ml，充分摇匀，静置，待溶液分层后，放出下层溶液，弃去。
③重复操作“2”三次，三次的总量与单体量相当（洗脱阻滞剂）。
④加入500ml蒸馏水，充分摇匀，静置，待溶液分层后，放出下层溶液，弃去。
⑤重复操作“2”三次，三次的总量与单体量相当（洗脱NaOH）。
⑥将上述处理过的单体放入无水CaCl2（1000 ml：500g）脱水2次。
⑦滤纸过滤，收集滤液。
⑧-20℃保存备用，第二天取出看有无冰晶漂浮：无，表明无水可备用；有，则需重新脱水。
（2）胫骨上段包埋前的制备过程①暴露骨髓腔将固定液中的胫骨用低速锯锯开，暴露骨髓腔，解剖部位如下：②脱水分别通过70%乙醇2天，95%乙醇2天，100%乙醇1天，100%乙醇1天，四个脱水过程，二甲苯透明1天。
③渗透先后用浸液Ⅰ、浸液Ⅱ、浸液Ⅲ分别浸透2天。
三种浸液的配制方法如下：浸液Ⅰ甲基丙烯酸甲酯90ml，邻苯二甲酸二丁酯10ml，磁力搅拌器上搅拌3小时。
浸液Ⅱ甲基丙烯酸甲酯90ml，邻苯二甲酸二丁酯10ml，过氧化笨甲酰1.0g，磁力搅拌器上搅拌4小时。
浸液Ⅲ甲基丙烯酸甲酯90ml，邻苯二甲酸二丁酯10ml，过氧化苯甲酰2.5g，磁力搅拌器上搅拌6小时。
（3）包埋用新鲜配置的浸液Ⅲ（当日配置）倒入装有浸润好的骨头块容积约为15 ml 的小瓶中，倒入的包埋剂约，盖好瓶盖，并在瓶盖上插一注射器针头，室温过夜。
第二天把包埋瓶置入37-39℃的水育箱中聚合约48小时，直至包埋块形成。
若为胫骨中段骨，则需在包埋前几天预先倒入少量包埋剂于小玻璃瓶中作包埋块底衬，变硬后为1.5cm高为宜。
包埋时将胫骨中段至于瓶中央，在倒入2cm高的包埋剂。
若为胫骨上段，仅需将其锯开面贴瓶底中央包埋，倒入约3.5cm高的包埋剂即可。
用于关节软骨组织修复或再生的植入性医疗器械体内评价
用于关节软骨组织修复或再生的植入性医疗器械体内评价1 基本要求本文件使用者应按照GB/T16886.1的要求，在做本文件所述的体内评价前，进行材料和/或器械的细胞毒性和生物相容性试验。
注1：对于特定的产品，本文件中所建议的某些方法可能不完全适用时，可根据技术发展现状，结合国内外相关指南进行个案分析。
注2：动物模型结果并不一定能完全预示人体使用结果，所以应谨慎解释其在人体的适用性。
2 动物模型2.1 概述2.1.1 本章提供了在确定合适的动物模型、关节软骨缺损大小和部位等方面的考虑点，详见表1。
2.1.2 本文件中涉及的动物研究应符合伦理和福利的要求。
表1 软骨组织修复评价的动物模型2.2 关节大小和载荷选择2.2.1 人体透明关节软骨损伤常发生在膝关节，主要在内侧部分（如股骨内髁和胫骨平台）。
因此，宜在动物模型中选择膝关节评价软骨修复/再生。
2.2.2 不同种属的动物在重量、关节解剖和步态方面有显著差异，具有不同的关节力学。
这些因素影响了关节软骨的厚度和分布、关节基质的大分子物质含量、分布和胶原结构等。
上述环节在关节软骨疾病或损伤反应中起着重要作用。
宜仔细考虑适于植入物阶段的动物模型。
2.2.3 应选择合适的动物和关节部位，尤其是关节面和关节软骨厚度应选择适于进行对预期在人体使用的配方、设计、尺寸和配套使用器械等的充分研究和优化，其中：——较大的动物具有更大的关节软骨表面积和厚度，更接近人体情况，更适于关节软骨修复研究；——较大的缺损通常需要某种方式的固定以保护植入物，减少植入物脱位。
植入物的固定方法可能对缺损周围宿主组织和修复有不利影响。
小型动物通常不需要固定，通过小型动物试验结果预测在需要固定的大型动物和人体试验的结果时，需要注意试验中植入物设计的不同之处。
2.2.4 对每种动物而言，关键大小的缺损定义为动物不经干预不能修复的最小尺寸（直径）的缺损。
每种动物的关键缺损的大小通常不同，应在设计植入物大小和固定方法时仔细考虑。
组织脱钙名词解释
组织脱钙名词解释一、组织脱钙的定义组织脱钙就是把硬组织（像骨头、牙齿这些）里面的钙盐去除掉的一个过程。
为啥要这么做呢？这是因为在进行一些病理检查或者组织学研究的时候，钙盐会影响切片制作还有染色等操作。
就好比你要研究一块石头里面的东西，但是石头太硬了，不好操作，就得先把那些让它变硬的东西去掉一些，这样才能更好地深入研究。
二、组织脱钙的常见方法1. 酸脱钙法这是最常用的方法。
比如说用硝酸、盐酸这些酸。
硝酸脱钙速度比较快，但是它对组织的损伤也比较大，就像一个急性子的人做事，虽然快但是可能会有点粗糙。
盐酸脱钙相对温和一些，不过脱钙的时间会长一点。
在使用酸脱钙的时候，要注意控制酸的浓度和脱钙的时间。
如果酸的浓度太高或者脱钙时间太长，就会把组织腐蚀得太厉害，就像把肉煮过头了一样，最后得到的组织就不适合做研究啦。
2. 螯合剂脱钙法像乙二胺四乙酸（EDTA）这种螯合剂就可以用来脱钙。
它的优点是对组织的损伤比较小，能够很好地保持组织的结构和抗原性。
不过呢，它的脱钙速度超级慢，就像乌龟爬行一样，可能需要几周甚至几个月的时间。
但是在一些对组织要求比较高，比如要做免疫组化研究的时候，这种方法就很有用。
三、组织脱钙后的处理脱钙完成后，不能就这么不管了。
得把组织进行充分的水洗，把脱钙液残留的东西都洗干净。
如果不洗干净，残留的酸或者螯合剂可能会对后续的染色等操作产生不良影响。
就像你洗碗，如果洗洁精没冲干净，下次吃饭的时候就会吃到洗洁精的味道，那可不好。
然后就可以按照常规的组织处理方法进行固定、脱水、透明、浸蜡、包埋等操作，这样就能得到适合做切片和染色研究的组织样本了。
骨组织形态计量学方法讲解
2.5.4骨组织形态计量学方法2.5.4.1 不脱钙骨骨标本的包埋（1）包埋前单体（甲基丙烯酸甲酯）的洗脱方法①将1500ml的甲基丙烯酸甲酯倒入分液漏斗（2L）中。
②加入5% NaOH溶液500ml，充分摇匀，静置，待溶液分层后，放出下层溶液，弃去。
③重复操作“2”三次，三次的总量与单体量相当（洗脱阻滞剂）。
④加入500ml蒸馏水，充分摇匀，静置，待溶液分层后，放出下层溶液，弃去。
⑤重复操作“2”三次，三次的总量与单体量相当（洗脱NaOH）。
⑥将上述处理过的单体放入无水CaCl2（1000 ml：500g）脱水2次。
⑦滤纸过滤，收集滤液。
⑧-20℃保存备用，第二天取出看有无冰晶漂浮：无，表明无水可备用；有，则需重新脱水。
（2）胫骨上段包埋前的制备过程①暴露骨髓腔将固定液中的胫骨用低速锯锯开，暴露骨髓腔，解剖部位如下：②脱水分别通过70%乙醇2天，95%乙醇2天，100%乙醇1天，100%乙醇1天，四个脱水过程，二甲苯透明1天。
③渗透先后用浸液Ⅰ、浸液Ⅱ、浸液Ⅲ分别浸透2天。
三种浸液的配制方法如下：浸液Ⅰ甲基丙烯酸甲酯90ml，邻苯二甲酸二丁酯10ml，磁力搅拌器上搅拌3小时。
浸液Ⅱ甲基丙烯酸甲酯90ml，邻苯二甲酸二丁酯10ml，过氧化笨甲酰1.0g，磁力搅拌器上搅拌4小时。
浸液Ⅲ甲基丙烯酸甲酯90ml，邻苯二甲酸二丁酯10ml，过氧化苯甲酰2.5g，磁力搅拌器上搅拌6小时。
（3）包埋用新鲜配置的浸液Ⅲ（当日配置）倒入装有浸润好的骨头块容积约为15 ml 的小瓶中，倒入的包埋剂约，盖好瓶盖，并在瓶盖上插一注射器针头，室温过夜。
第二天把包埋瓶置入37-39℃的水育箱中聚合约48小时，直至包埋块形成。
若为胫骨中段骨，则需在包埋前几天预先倒入少量包埋剂于小玻璃瓶中作包埋块底衬，变硬后为1.5cm高为宜。
包埋时将胫骨中段至于瓶中央，在倒入2cm高的包埋剂。
若为胫骨上段，仅需将其锯开面贴瓶底中央包埋，倒入约3.5cm高的包埋剂即可。
四种防脱片剂在不脱钙骨组织切片中的应用研究
四种防脱片剂在不脱钙骨组织切片中的应用研究王东胜;赵征;吕燕【摘要】Objective: Undecalcification sections are quite different from paraffin sections due to the more organic and inorganic calcium. A good anti-slice escaping agentia is one of the key factors for success. The purpose of this study is to find an ideal anti-slice escaping agentia to reduce tissue damage and improve success rate. Methods: Three anti-slice escaping agentia including APES, chrome alum - gelatin and Poly-L-Lysine were used to pretreat slides, the other group was imported slides coated with SUPERFROST? PLUS.The tissue sections were dyed with Goldners' staining, and the tissue preversation of the undecalcification sectins was studied. Results: The slides were processed respectively by APES, chrome alum- gelatin, Poly-L-Lysine and SUPERFROST? PLUS, microscopy showed that the rate of complete adhesion in chrome alum - gelatin group was 75% which was the highest; the rates in Poly-L-Lysine group and SUPERFROST? PLUS group were the same which was about 30%; and the rate in APES was the lowest which was 15%. Conclusion: Based on the comparison of four anti-slice escaping agentia, we conclud that chrome alum-gelatin is an ideal anti-slice escaping agentia for undecalcification sections.%目的:不脱钙骨组织切片因组织有机及无机钙较多,其与普通石碏切片有较大差别.一种良好的防组织脱片剂是制片成功的关键因素之一,本研究的目的是寻找一种效果良好的防组织脱片剂以减少组织的损失,提高制片成功率.方法:选择目前组织病理制片中常用的三种防组织脱片剂对捞取切片的载玻片进行处理,防组织脱片剂分别为:3-氨丙基-3-乙氧基甲硅烷(APES)、铬明矾-明胶、多聚赖氨酸；另一种直接用已涂好防组织脱片剂(SUPERFROST(R) PLUS)的进口玻片.组织切片经Goldners’三色法染色,比较分别使用上述四种防组织脱片剂的不脱钙骨组织切片组织保存的效果.结果:载玻片经3-氨丙基-3-乙氧基甲硅烷(APES);铬明矾-明胶；多聚赖氨酸；SUPERFROST(R)PLUS等四种防组织脱片剂处理后,镜下观察:防组织脱片效果最好即组织保存最完整的是经铬明矾-明胶处理的玻片,完整贴片率为75％；多聚赖氨酸与SUPERFROST(R) PLUS玻片两种基本相当,完整贴片率为30％；四种中效果最差的防组织脱片剂是3-氨丙基-3-乙氧基甲硅烷(APES),完整贴片率为15％.结论:通过对上述四种防组织脱片剂的应用比较,我们认为铬明矾-明胶作为不脱钙骨组织切片用防脱片剂是最理想的.【期刊名称】《中华老年口腔医学杂志》【年(卷),期】2011(009)006【总页数】3页(P329-331)【关键词】不脱钙切片;防脱片剂;APES;多聚赖氨酸;铬明矾-明胶【作者】王东胜;赵征;吕燕【作者单位】解放军总医院口腔医学研究所北京 100853;解放军总医院口腔医学研究所北京 100853;解放军总医院口腔医学研究所北京 100853【正文语种】中文【中图分类】R783不脱钙骨组织切片，因包埋介质为树脂，不同于石蜡切片通过高温烘烤，石蜡熔化而使切片完全贴合于载玻片上。
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浸泡液 成分 浸泡液 Ⅰ 甲基丙烯酸甲酯
邻苯二甲酸二丁酯 浸泡液 Ⅱ 甲基丙烯酸甲酯
邻苯二甲酸二丁酯 过氧化苯甲酰 浸泡液 Ⅲ 甲基丙烯酸甲酯 邻苯二甲酸二丁酯 过氧化苯甲酰
配制含量 磁力搅拌时间
95 m l 2h
5 ml
95 m l
5 ml 4h
1. 5 g
95 m l
5 ml
4. 5 g
4h
后漏弃下层液体 ,反复 3次 ,再用蒸馏水以同样方法洗 3次 ,去除液体中氢氧化钠 。然后往分液漏斗加无水 氯化钙 ,震荡混合数分钟 ,吸除水份 ,滤纸过滤去除氯 化钙 。上层滤液收集于瓶中 , 在 - 4℃冰箱中保存备 用 。取去除阻聚剂的甲基丙烯酸甲酯 (单体 ) 95 m l,邻 苯二甲酸二丁酯 5 m l,无水过氧化苯甲酰 410 g放入宽 口耐热塑料瓶中 ,放入磁力转子 ,置于热水杯中水浴恒 温加热 ,恒温保持在 50℃,置于磁力搅拌器搅拌 2 h。 注意液体温度不要过高 ,观察液体状态 ,出现气泡应该 采取降温措施 ,可浸于冷水中不断搅拌 ,或加入凉的单 体 。煮过后待液体完全降温 ,贴上标签置于 - 4℃冰箱 中保存备用 。将备好的标本置于底平 、壁薄 、干洁和大 小适宜的玻璃瓶内 ,并标记编号 。加入包埋剂后盖上 胶盖 ,在胶盖 插上 针 头以 便 排气 。继 而连 续 抽真 空 2 h,置于 37℃水浴恒温箱 2 ～3 d,取出包埋组织块即 可做切片 。 1. 4 切片制作 包埋后塑料部分均匀透明 ,可以清楚 地观察到塑料内样本 ,定位简单方便 ,也可通过 X线定 位 。将定位好的标本固定在 Leica SP1600硬组织切片 机的圆形样本紧固装置上进行锯切 ,切成厚度大约为 200～250 μm 左右 ,然后采用碳化硅耐水砂将薄片依 次从 500 目 、800 目 、1 000 目磨至 1 200 目 ,磨片后切 片厚度磨至 70 μm 左右 , 经亚甲基蓝 - 酸性品红染 色 [1 ]后显微镜观察 。
[ 2 ] 李青南. 骨质疏松实验动物研究 - 骨组织形态计量学 [M ]. 四川大学出版社 , 2001: 30.
[ 3 ] 王东胜. 带种植体骨磨片制作方法的改进 [ J ]. 口腔颌面修复 学杂志 , 2006, 7 ( 3) : 169 - 170.
[ 4 ] 吴哲 , 马冬丽 , 洪丽华 , 等. 不脱钙的牙齿骨骼塑料包埋制片 技术及方法探讨 [ J ]. 华西口腔医学杂志 , 2006, 24 ( 6) : 564
318 - 326. [ 6 ] YANG R, DAV IES C M , ARCHER C W , et al. Immunohisto2
chem istry of matrix markers in technovit 9100 new emedded unde2 calcified bone sections[ J ]. Eur Cell Mat, 2003, 6: 57 - 71.
【关键词 】 塑料包埋 组织形态学 种植体 骨整合 骨计量学
种植体植入材料研究通常需要通过制作含金属骨 组织切片 ,观察植入金属与组织的界面的结合情况 。 由于生物体硬组织中含有大量无机钙盐 ,坚硬易碎 ,制 作切片时金属与组织容易脱离 , 导致切片制作失败 。 常规骨组织切片制作一般有脱钙法和不脱钙法 ,由于 脱钙后组织软化及骨组织细微结构改变 ,影响含金属 - 骨组织界面的观察 ,所以含金属硬组织一般采用不 脱钙塑料包埋 。本实验采用甲基丙烯酸甲酯 (MMA ) 进行塑料包埋 ,通过 Leica SP1600 硬组织切片机制作 切片观察 ,探讨采用甲基丙烯酸甲酯对含种植体硬组 织进行塑料包埋的应用方法及优点 。
采用甲基丙烯酸甲酯塑料包埋技术对含金属硬组 织进行包埋 ,包埋液充分渗透进入骨组织 ,聚合塑化后 透明坚硬 ,制作切片过程金属与组织结合良好 ,不易脱 离 。能解决含金属硬组织不脱钙切片的制作 ,此方法 可以广泛应用于硬组织的组织形态学研究和口腔种植 体 - 骨整合界面的研究 。
参考文献
[ 1 ] MAN IATOPOULOS C, RODR IGUEZ A, DEPORTER D A, et al. An imp roved method for p reparing histological sections of metallic im2 p lants[ J ]. Jnt J O ral Maxillotac Imp lants, 1986, 1 (1) : 31 - 37.
表 2 四环素 - 钙黄绿素双色荧光标记平均间距及
其平均矿化速率骨计量学比较
x ±s
新骨位置
近种植体区 远种植体区
间隔时间 ( d) 10 10
双色荧光 标间距 (μm )
9. 4 ±0. 61 5. 8 ±0. 0. 94 ±0. 11 0. 58 ±0. 14
3 讨论
随着包埋材料 、切片机和特殊切割系统的发展 ,制 作不脱钙组织 切 片的 技术 已 经逐 渐 成熟 。DONATH 等 [5 ]首先描述了采用 EXAKT切磨系统 ,制作不脱钙含 金属骨 切 片 的 切 磨 技 术 , 把 乙 二 醇 甲 基 丙 烯 酸 酯 ( GMA)作为包埋介质 ,使异丁烯酸和甲基丙烯酸发生 聚合反应 ,并成功完成塑料包埋 ,但是反应中酶的活性 和蛋白的抗原性都发生了变化 。随着新一代甲基丙烯 酸甲酯 (MMA )的出现 ,包埋反应允许在较低温度进行 聚合 ,聚合温度可以低于 20℃。低温反应 , 能保持了 酶的活性和蛋白质的抗原性 ,使免疫组织化学研究成 为了可能 [6 ] 。MMA 还用于骨髓活检样本包埋 ,包埋后 骨髓组织形态学结构保存完好 ,且免疫细胞化学检测 可靠 ,能够证明药物治疗后骨髓细胞的再生 。
- 465. [ 5 ] DONATH K, BREUNER G. A method for the study of undecalci2
fied bones and teeth with attached soft tissues. The Sage - Schliff ( sawing and grinding) technique [ J ]. J O ral Pathol, 1982, 11:
【摘要 】 目的 探讨含种植体硬组织骨计量学研究采用不脱钙塑料包埋技术的运用技巧与优点 。方法 选 取含钛种植体骨组织块 ,采用甲基丙烯酸甲酯进行塑料包埋 ,包埋后经 Leica SP1600硬组织切片机切锯成 200 μm 厚切片 ,手工磨至 70μm ,染色后进行观察 。结果 制成切片在显微镜下观察钛种植体与骨组织界面 ,可见到界面 及其周围骨组织矿化过程 ,种植体骨结合良好 ,其周围新骨荧光双色标记间距为 ( 914 ±0161)μm。结论 塑料包 埋技术适用于不脱钙硬组织包埋 ,制作含金属硬组织切片 ,可以广泛应用于含金属硬组织的组织形态学研究和口 腔种植体的骨整合界面研究 。
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广东医学 2008年 3月 第 29卷第 3期 Guangdong M ed ica l Journa l Mar. 2008, Vol. 29, No. 3
1. 5 统计学方法 计量数据采用 t检验 。
2 结果
2. 1 含种植体硬组织骨不脱钙塑料包埋结果 含金 属骨组织被塑料坚实均匀包埋 ,塑料为透明状 ,可以直 接透过塑料层清晰观察包埋物 , 切锯定位简单准确 。 制成磨片厚薄均匀 ,约 70 μm,染色效果较好 。切片中 骨组织与金界面清楚 ,磨片过程金属无脱落 。显微镜 下观察骨质的矿化程度 、金属种植体与骨组织机械锁 结 ,骨组织与金属的接触面积等如图 1, 2。 2. 2 四环素 - 钙黄绿素双色荧光标记示踪覌察 近 种植体处可见四环素条带粗大荧光强度较强 ,钙黄绿 素条带与四环素条带间隔较大 。荧光显微镜下可清晰 覌察骨 - 种植体界面的骨质生长过程 ,如图 3所示 ,新 骨先沉积于种植体表面再向外生长 ,说明种植体具有 很好的生物相容性和骨传导性 。通过测量荧光带可以 计算其矿化速率如表 2,两组间差异具有统计学意义 ( P < 0101) ,说明靠近种植体区新骨矿化较快 。
广东医学 2008年 3月 第 29卷第 3期 Guangdong M ed ica l Journa l Mar. 2008, Vol. 29, No. 3
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含种植体硬组织骨计量学不脱钙塑料包埋技术 3
郭泽鸿 容明灯 朱安棣 周磊 △
广东省口腔医院 ,南方医科大学附属口腔医院 (广州 510280)
通过切片观察我们发现种植体具有良好的生物相 容性和骨引导性 ,种植体骨界面形成种植体 - 骨结合 。 通过四环素 - 钙黄绿素双色荧光标记发现 ,近种植体 区荧光条带间隔比远种植体区较宽 ,说明近种植体位 置骨改建比远离种植体区骨改建活跃 ,新骨形成较多 。 从荧光示踪还发现骨组织从种植体表面开始向其周围 生长 ,说明该种植体具有十分良好的骨引导作用 。
3 广 东 省 科 技 三 项 经 费 计 划 项 目 (编 号 : 2006B19901006; 2006B 35801001 ) △通讯作者 。电话 : 020 - 84233801; 传真 : 020 - 84433177; E -
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表 1 浸泡流程
1 材料与方法
1. 1 不脱钙带金属骨块切片制作方法 选取含金属 种植体的新西兰兔胫骨组织 ,动物处死前第 13 和 14 天连续两天皮下注射四环素 ,处死前第 3 和第 4 天皮 下注射钙黄绿素 ,进行双色荧光标记 。根据标本大小 切割成大小为 110 cm ×110 cm ×112 cm 的组织块 ,将 含种植体骨标本置于 10%福尔马林液在 4℃下固定 24 h备用 。也可以先采用甲醛 、甲醇和蒸馏水以 1∶1∶115 (V /V )的比例混合后进行血管灌注固定再采取骨标 本 [1 ] 。本研究采用前者方法 。 1. 2 脱水与浸泡 固定后标本先采用不同浓度梯度 的酒精进行脱水 [2 ] ,再以三氯甲烷进行浸泡 。脱水后 将标本置于浸泡液中浸泡 ,浸泡液需当天新鲜配制 ,浸 泡过程均在 4℃中进行 。浸泡液中甲基丙烯酸甲酯与 邻苯二甲酸二丁酯按表 1方法 [3 ]配制 。依次浸泡标本 各 2 d,每天抽真空 2 h。 1. 3 包埋聚合 配制包埋剂方法 [4 ] 去除成品甲基 丙烯酸甲酯中的阻聚剂 ,将 1 ∶1 成品甲基丙烯酸甲酯 和 5%的氢氧化钠加入分液漏斗 ,充分震荡 ,静止分层