食品原料中真菌毒素的酶联免疫检测技术应用

研究背景、意义和酶联免疫检测技术的应用研究综述
研究内容、预期成果
真菌毒素的性质与分类、酶联免疫检测技术的基本原理
针对食品原料中的天然毒素、农药残留、兽药残留、致病微生物、转基因成 分和激素运用 ELISA 技术进行检测
分析影响 ELISA 的因素；展望 ELISA 技术的发展趋势
2 预期效果 从多个方面叙述 ELISA 技术在食品原料中检测真菌毒素的应用，达到对酶联免疫检测技术应用的扩展。
真菌毒素的检测：黄曲霉毒素 B1 、 M1 以及 T-2毒素，脱氧雪腐镰刀菌烯醇（呕吐毒素 DON），二乙 酰草镰刀菌烯醇（DAS），玉米赤霉烯酮，赫曲霉毒素 A（OA）；农药的检测：主要有除草剂与杀虫剂两大类， 例如杀暝松（FN）、甲氟磷酸异已酶（SOMAN）、草不绿（Alachor）、西维因（Carbaryl）、多菌灵及克菌 丹（Captan）等；其他类的检测：盐酸克伦特罗，河豚毒素，植物毒素如罌粟硷、吗啡、藻类毒素，苯并（a） 芘，抗生素，激素类以及一些营养物质和食品添加剂如麸蛋白（Gliaclin），酱油蛋白（Soy protein）， 花生蛋白（Peanut protein），牛乳清蛋白（Borine Whey Protein）等。随着食品工业的发展，对分析检 测的要求越来越高，从而也使 ELISA 方法将更趋完善。一方面为提高 ELISA 方法的灵敏度和特异性，制备 单克隆抗体的技术的发展，将和 ELISA 法互相结合，从而使食品卫生分析达到 DNA 分子结构水平，促使食 品工业的健康发展。
（二）拟研究的主要内容﹑重点和难点 1. 拟研究的主要内容
全文分为三个部分:
1）引言 （第一章)：阐述本课题研究的背景、目的和意义；对酶联免疫检测技术的应用研究现状进行了综 述；研究的主要问题；预期的研究成果。
2）真菌毒素的相关理论、酶联免疫检测技术的基本原理和在食品检测中的应用 （第二章)：真菌毒素的相关理论、酶联免疫检测技术的基本原理。概述真菌毒素的性质与分类；阐述酶联 免疫检测技术的由来、基本原理、方法分类、与其他方法的比较优势。 （第三章)：酶联免疫检测技术在食品原料检测中的应用。随着 ELISA 技术在食品安全检测中的逐步推广， 针对食品原料中的天然毒素、农药残留、兽药残留、致病微生物、转基因成分和激素运用 ELISA 技术进行检 测。
3）结论与展望 （第四章):分析影响 ELISA 的因素；展望 ELISA 技术的发展趋势。 2. 拟研究的重难点
通过对食品原料中的天然毒素、农药残留、兽药残留、致病微生物、转基因成分和激素运用 ELISA 技术， 阐述 ELISA 技术的优势；分析影响使用 ELISA 的因素。
（三）研究方法和步骤﹑预期效果 1. 研究方法和步骤
二﹑论文提纲 1引言 1.1研究的背景、目的和意义 1.2对酶联免疫检测技术的应用研究现状进行了综述 1.3研究的主要问题、预期的研究成果 2 真菌毒素的相关理论 2.1 真菌毒素的性质 2.2 真菌毒素的分类介绍 3 酶联免疫检测技术的基本原理 3.1 酶联免疫检测技术的由来 3.2 基本原理 3.3 方法分类 3.4 与其他方法的比较优势 4 酶联免疫检测技术在食品原料检测中的应用 4.1 食品原料中有毒有害物质的检测 4.2 食品原料中生理活性物质的检测
美国环境保护机构(USEPA)开发了野外便携式和实验室 ELISA 方法，其主要目标是建立便于野外监测危 险污染物的简便方法。监测的靶分析物包括多氯联苯、苯、甲苯和二甲苯混合物、硝基芳烃化合物、对硫磷、 carbaryl 和其它杀虫剂。美国食品药物管理局(USFDA)主要将 ELISA 集中于食品和饲料中农药残留的检测， 开发了天然霉素(黄曲霉素)的免疫分析，目前正在研究用于检测 phenamaphos 和 carbendazine 等化合物的 检测方法。美国农业食品安全检查部门(USFSIS)资助开发了除草菊酯、有机氯杀虫剂及其它化合物的免疫分
4.3 转基因食品原料的检测
5 结论与展望
5.1 分析影响 ELISA 的因素
5.2 展望 ELISA止时间 主要内容简述
主要工作地点、方式和拟定达到目的
2013-11-3 至 确定论文框架 在图书馆充分利用网络及图书资源阅读相关文献，构建论文框架。
2013-12-2
1）研究的背景 真菌毒素是真菌的二次性代谢产物，与真菌本身的生长发育无关，并不是所有代谢物都有毒， 一种真
菌可能产生多种毒素，多种真菌可能产生同一种毒素。危害较大的有黄曲霉毒素、赭曲霉毒素 A、单端孢霉 烯族毒素、玉米赤霉烯酮、伏马毒素和麦角类生物碱等。 黄曲霉毒素是天然物中致癌性最强的毒素，也是 世界各地的农产品及食品最易受其污染的一种真菌毒素，联合国粮农组织估计全世界谷物供应的 25% 受真 菌毒素污染。 这些真菌毒素会通过被污染的谷物、饲料和由这些饲料喂养的动物所提供的动物性食品进入 我们的食物链，从而对人畜表现出致癌性、遗传毒性、致畸性。作为一级预防的主要措施，就是制定真菌毒 素的限量标准，因此，准确检测真菌毒素含量的技术手段变得极为重要。
2013-12-3 至 2014-2-2
搜集论文所需 通过做实研和收集并分析实验数据。 相关资料
2014-2-3 至 2014-5-3
撰写论文
在前面两个步骤基础上参考相关文献，撰写论文
2014-5-4 至 2014-6-1
论文整理
按照学校的论文格式对论文进行进一步完善总结。
教研室审查意见
教研室主任（签字） 年月日
陇东学院农林科技学院 2014 届毕业论文开题报告
论文题目
食品原料中真菌毒素的酶联免疫检测技术应用
姓名 指导老师
刘德政 韩雍
学号 来源
2010 级食品科学与工程本科 2010311111 班 级
班
导师指定 分类
试验类
一﹑课题研究现状﹑意义﹑拟研究的主要问题﹑重点﹑难点﹑研究方法和步骤﹑预期效果 (一) 课题研究背景和意义﹑研究综述 1.课题研究的背景、目的和意义
酶联免疫检测技术最早是从放射免疫法(Radioimmunoassay,RIA)发展而来的。放射免疫法的优点是特异 性 强 、 灵 敏 度 高 、 精 确 、 简 便 易 行 。 它 包 括 以 标 记 抗 原 (Antigen, Ag) 为 特 点 的 放 射 免 疫 分 析 (Radioimmunoassay,RIA) 和 以 标 记 抗 体 (Antibody, Ab) 为 特 点 的 免 疫 放 射 分 析 (Immunoradiometric assay ,IRMA)。前者以液相竞争结合法居多，既测大分子抗原又测小分子抗原；后者以固相法测大分子抗原 为主。最早建立的农药免疫法中，RIA 占了很大比重，建立了狄氏剂、艾氏剂、2,4-D 和2,4，5-T、对硫磷 和百草枯等农药的放射免疫法。但由于进行 RIA 需使用昂贵的计数器，存在放射性防护和废物处理等问题， 其应用受到较大限制。1982年后发表的农药免疫分析文章，主要是酶免疫分析法。
酶免疫法(Enzyme Immunoassay, EIA)是将抗原、抗体的特异性免疫反应和酶的高效催化作用有机结合 起来的一种免疫分析方法。酶免疫法的检测原理与放射免疫法类似，通过测定结合于固相的酶的活力来测定 被测定物的量。用作标记物的酶有辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)和碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase)。酶标试剂制备容易、稳定、价廉。酶免疫分析的灵敏度接近放射免疫技术，而可借助于简单 的仪器作定量测定，是目前农药监测中应用最广泛的免疫分析技术。 EIA 法包括酶联免疫吸附分析法 (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)、酶免疫试验法(Enzyme-monitored Immunotest ,EMIT)、 竞 争 结 合 酶 免 疫 分 析 法 (Competitive Binding Enzyme Immunosorbent Assay, EIA) 和 疫 酶 分 析 法 (Immunoenzymometric Assay, IEMA)。其中基于竞争吸附的 ELISA 已成为农药监测中的首选方法。
析法，并采用现有的方法来完成其监测任务。 近年来，Immunosystems Inc.已生产出了几种 ELISA 试剂盒，其靶分析物包括杀虫剂、杀菌剂和除草剂。
这种试剂盒配上便携式分光光度计可实现野外定量快速测定，检测灵敏度为0.03～25ppb。随着 ELISA 在农 药监测中的应用范围的不断扩大，一些新方法也不断涌现。Hall 等用 EIA 法检测了水样中的污染物2,4-D, 三嗪，Merolachlor 并将其与气相色谱分析结果进行比较。Roda 等利用 EIA 对环境水样中苯并芘进行了测定。 Hong 利用 ELISA 对土壤和水中三氮杂苯类除草剂进行了测定。Hutchinson 等利用 ELISA 检测土壤中的 EPTC。 Wittmann 用酶免疫分析法检测残留在食品中的三嗪。Weller 通过改变温育时间，提高了 ELISA 检测三氮杂 苯类除草剂的灵敏度。我国的研究者也自行开发了一些 ELISA 法。刘长武应用 ELISA 对梨、苹果中的对硫磷 残留进行了测定。余万俊制备了杀虫脒的特异性抗体，并以此抗体建立了大米中杀虫脒残留的单克隆抗体 ELISA 检测法。阳传和应用 B 淋巴细胞杂交瘤技术，研究出特异性强的 T-2毒素的单克隆抗体，并建立了小 麦 T-2毒素的 ELISA 方法。周永新等进行了蓖麻毒素多克隆抗体的研究。ELISA 的快速发展，主要是由于其 高度的重现性、灵敏度和较短的分析时间所决定的。许多环境化合物的特异性单克隆和多克隆抗体的制备及 应用为 ELISA 的快速发展奠定了基础。
真菌毒素检测技术是真菌毒素污染控制的有效抓手,一直是国际关注和研究热点。我国历来重视真菌毒 素检测技术研究与开发,近10年取得了重要进展,并在污染监测中发挥了重要作用。本文基于近年来研究进展 和应用领域,阐述真菌毒素的酶联免疫检测技术在食品原料中的应用。