Agilent 6460 三重串联四级杆液质联用仪的标准操作规程定性分析
液相色谱串联三重四级杆质谱基础知识
数据处理系统 液相色谱
质谱
一 液质联用
液质联用仪的组成
大气 真空系统
液相色 谱
样品入 口
离子化 （离子源 ）
质量分析 器
检测器
数据系 统
质谱部分
一 液质联用
离子源
最常用的离子源-电喷雾离子源（ESI)
干燥 气 四极预 杆
喷雾针装置
喷雾室
毛细 管
一 液质联用
质量分离器
兽药残留最常用的是三重串联四级杆（QqQ）
我们所做的已知化合物，并且有现成 的方法
整个质谱仪的模式图
电喷雾离子源 Q1 q2 Q1 检测器
二 质谱基本原理
质谱：称量离子质量的工具
12 units 0 m/e
二 质谱基本原理
质谱：称量离子质量的工具
12 units 12 m/e
二 质谱基本原理
质谱：称量离子质量的工具
12 units 12 m/e
选择离子流图（SIM)：选取其中几个 特征离子扫描，对保留时间作图，即 得到选择离子色谱图。
三 质谱基本概念
选择离子流图（SIM)：
SIM通过去除本底和其 他无关离子的干扰， 降低噪声，提高选择 性、分辨率和灵敏度， 可使复杂的TIC简化， 对特定化合物的分析 或化合物的分类十分 有用。
三 质谱基本概念
8
9
10 11 12 13 14 15 16
二 质谱基本原理
质谱：称量离子质量的工具
12 units 14 m/e
8
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安捷伦Agilent 6460 三重串联四级杆液质联用仪的标准操作规程定量分析
Agilent 6460 三重串联四级杆液质联用仪的标准操作规程定量分析——创建定量的批处理和定量方法1.单击菜单项File > New Batch在新的批处理对话框，找到数据文件夹，例如“D:\Masshunter\Demo Data\DrugOfAbuse”，输入批处理文件名例如“qqq”并点击Open 按钮创建一个新的批处理文件：2.软件自动弹出Add Sample 对话框，单击选择Select All 按钮然后单击OK 来添加所有样品：3.单击菜单Method > New > New Method from Acquired MRM Data4.用鼠标选择CMAMCal_L5.d 并点击Open 按钮导入MRM 方法采集信息(此处需要选择最有代表性的谱图，一般选择较高浓度样品数据，这样保留时间，离子比例等比较准确)：5.在左侧Method SetupTasks 选项下自上而下进行，首先点击MRM Compound Setup 检查导入的用于MRM 化合物设置的采集参数是否正确。
6.单击方法设置任务Method Setup Tasks> Retention Time Setup，检查确认导入的参数。
7.单击方法设置任务Method Setup Tasks>ISTD Setup，然后从下拉菜单ISTD CompoundName 为每个目标化合物指定内标化合物(ISTD），ISTD Conc 列输入相应内标化合物的加入浓度。
8.单击方法设置任务Method Setup Tasks >Concentration Setup，9.单击Method 方法菜单选择“Create Levers from Calibration Samples”10.填写各级别校正样品的浓度，11.单击Method 方法菜单选择Copy Calibration Levels To…在复制校正级别对话框，单击选择所有（Select All）对话框，然后单击OK 按钮。
Agilent6460三重串联四级杆液质联用仪的标准操作规程定性分析
Agilent6460三重串联四级杆液质联用仪的标准操作规程定性
分析
Agilent6460三重串联四级杆液质联用仪的标准操作规程
定性分析
1.打开定性分析软件时会自动弹出Open Data File对话框，选中待分析的数据文件，单击Open按钮，即可打开
2.提取色谱图：右键点击数据导航区选择的数据，或者在色谱图显示区域点击右键，在弹出的菜单选择Extract Chromatograms。
提取质谱图：提取某点的质谱图，直接在该点双击左键即可。
3.在TIC图中使用选择范围工具选择某点或一段背景范围，单击鼠标右键，选择Extract Spectrum to Background，该质谱图被自动加入到背景质谱图(Background Spectra)。
4.在MS Spectrum Results内的某张质谱图上右键点击，在弹出的窗口选择Substract Background Spectrum。
则该质谱图会自动扣除掉上面的背景质谱图，
5.要对色谱图进行积分，在方法浏览区选择Chromatogram功能区，根据不同需要进行积分选择，选择Integrate(MS)等。
选择Agile 积分器。
直接右键点击色谱图，在弹出的菜单选择Integrate Chromatogram进行积分。
6.从File菜单选择Print>Analysis Report…从左侧选择要打印的数据文件，可以选择一个或多个打开的数据。
设定好报告选项后，点击OK按钮生成报告。
一超高压液相色谱三重串联四极杆质谱联用仪技术要求
一、超高压液相色谱/三重串联四极杆质谱联用仪技术要求1.应用范围：药品中痕量和超痕量农兽药残留及非法添加剂的筛查和定量分析，环境样品中有机污染物的分析，法医毒理学中毒物的筛查和定量分析等。
2.工作条件：2.1工作电压：220±5%V2.2操作温度：15–30︒C2.3湿度：<85%3.技术参数3.1液相色谱部分3.1.1高压混合二元梯度泵* 3.1.1.1串联双柱塞往复泵设计，可自主溶剂压缩因子设置，自动连续可变冲程驱动（20μL-100μL），保证在不同流速及不同流动相组成下的最佳流速稳定性；（提供连续可变冲程的软件截图并加盖生产厂商公章）3.1.1.2为保证仪器寿命，以及长期使用后的性能，要求溶剂泵传动装置采用金属滚珠螺杆，而非皮带轮设计；* 3.1.1.3流量范围：0.001mL/min–4.0mL/min，递增率0.001mL/min；3.1.1.4压力范围：0–18,500psi或更高；3.1.1.5混合精度：＜0.18%RSD；3.1.1.6混合准确度：＜±0.40%；*3.1.1.7延迟体积最小可达20µL；*3.1.1.8耐受pH范围：1-12；3.1.2自动进样器：* 3.1.2.1样品容量：≥130位2mL样品瓶；3.1.2.2压力范围：0–18,500psi或更高；3.1.2.3进样范围：0.1–20μL；3.1.2.4进样精度：<0.20%RSD；*3.1.2.5交叉污染度：<0.0015%（以氯己定为测试对象，而非咖啡因）；3.1.2.6控制：自动洗针程序，柱前自动衍生程序，取样及进样速率；3.1.3柱温箱3.1.3.1柱温范围：室温上5︒C–80︒C；3.1.3.2温度稳定性：±0.05℃3.1.3.3温度准确度：±0.5℃；3.1.3.4柱容量：同时放置2根以上30cm色谱柱。
3.2三重串联四极杆质谱仪部分*3.2.1离子源：独立的ESI源。
液质联用仪原理及操作注意事项安捷伦6410
•流动相以及样品必须过膜 （有机滤膜、水系膜）
•反相常用流动相为甲醇、 乙腈、水以及缓冲盐溶液。
流
•流动相应超声脱气 10~20min,否则压力易 波动（装有在线脱气机， 影响会小一些）
•流动相每两天至少更换
•注意：LC中常采用无机缓冲
盐，LC/MS中则应该使用挥 发性的缓冲盐，如甲酸铵、 乙酸铵；或挥发性酸碱甲酸、 乙酸、氨水等调节pH
2.清洗电喷雾雾化室 将仪器设置为standby,待离子源温度冷却后，用50%异
丙醇-水溶液浸湿无尘布，擦拭弧形电极和喷雾挡盖以 及周围。（切禁直接对着毛细管末端冲洗，压力会增 大，造成涡轮泵负载急剧增加，容易损坏涡轮泵）
四、质谱系统的日常维护及故障排除
3.打开气镇阀 必须每周逆时针拧开气镇阀到底，维持20-30min，把油 气分离器内多余的泵油放回泵内，然后顺时拧紧，关闭 气镇阀。关机前务必确认气镇阀处于关闭状态，否则泵 油可能因此回流到质谱的真空腔内，损坏仪器
二、定量方法的开发
逻辑顺序：
MS2 Scan
1.全扫描scan,确认 得到化合物离子质量 数
MS2 SIM
2.选择离子模式，优 化毛细管出口电压 (fragmentor),保证 母离子的传输效率
Product Ion Scan
3.子离子扫描，使用 优化好的 fragmentor,选择定 量离子，优化碰撞能 量，优化子离子的响 应
3
和键合相的坍塌。（特殊柱子除外，如T3柱， 因具有三相键合相，所以高耐水性，用于分
析丙酸、EDTA、三聚氰胺等）
三、液质操作系统的注意事项
紫外检测器 UV
检
测
质谱检测器 MS
器
的
选
Agilent 6460 三重串联四级杆液质联用仪的标准操作规程
Agilent 6460 三重串联四级杆液质联用仪的标准操作规程Ⅰ目的：制定Agilent 6460 三重串联四级杆液质联用仪使用操作规程，确保操作人员能正确规范地操作液质联用。
Ⅱ范围：适用于Agilent 6460 三重串联四级杆液质联用仪的使用。
Ⅲ规程：1.使用条件：使用安捷伦6460质谱仪时，要求使用220V（+5% ~ -10%，50 ~ 60Hz）单相交流电。
注意！因为任何原因造成的断电，请关闭仪器面板左下角的开关，等待供电恢复10分钟以上再开启电源，否则有可能烧毁电路板。
2.气体供应：仪器运行时需提供纯度>99%的氮气作为喷雾与干燥气，输出压力为0.6 ~ 0.7 MPa。
气体一般由液氮罐供应，在仪器开机时，可以将罐体上部的两个绿色阀门开到最大后，向回转半圈。
注意！在仪器开机（即使处于休眠）时如果长时间停止气体供应，会造成真空腔体内部污染。
实验开始前，如果发现液氮罐液体存量不足，请及时联系管理员。
另外，仪器需要高纯氮气作为碰撞气，输出压力为0.1 ~ 0.2 MPa。
注意！过高的碰撞气分压有可能损坏仪器内部的电磁阀。
3.仪器开机：仪器从断电状态开机时，确认电源已经连接而且气振阀处于关闭后，打开仪器左侧板上的总电源，随后将前面板左下方的电源按键按下，真空泵即开始工作。
大约2~3分钟后，仪器内置的系统启动完毕，可以开启Masshunter软件与仪器通讯。
等待四极杆温度达到100℃，高真空达到4 x10-5 Torr之后，即可进行调谐或开始实验。
注意！在仪器开始抽真空时，请不要打开前级泵上的气振阀，否则可能因为回油污染真空腔体内部。
4.仪器调谐：仪器距离上次调谐超过一个月，或者重新开机预热后，建议调谐质谱仪以达到最佳使用状态。
确认调谐液存量，以及管线已经连接到喷雾针之后，选择Masshunter的Tune界面，选择适当的极性，点击Autotune。
系统会自动完成调谐并给出调谐报告。
5.状态确认：质谱仪正常工作时，前级真空1.5 ~ 3Torr；高真空2.5x10-5 ~ 4x10-5Torr（6410），1.5x10-5 ~ 2.5x10-5 Torr（6460）。
安捷伦超高效液相色谱-三重四级杆质谱仪器讲解
液质联用仪本实验室使用的液质联用仪是安捷伦公司6400系列的一款产品，包括超高效液相色谱1290和质谱主机G6460，以及与其配套的计算机和打印机，他们之间通过网络协议通讯，并通过网络交换机连接在一起。
本仪器于2014年年初安装使用，价值两百多万元。
物质只要能溶于液体，均可以被检测。
本实验室主要用于农产品样品的农药残留定性检测，超高效液相色谱1290是整个系统的分离和进样装置，样品在色谱柱中经初步分离，通过接口进入质谱。
质谱以离子源、质量分析器和检测器为核心。
离子源是将分析物中的中性化合物离子化，并将产生的离子在电场的作用下进入离子传输毛细管。
离子传输毛细管是离子的导入通道，它将离子源产生的离子传输进入质谱，同时，隔绝了外部的常压与质谱内部的高真空。
离子通过毛细管后，进入离子光学组件，它包括skimmer1，八极杆以及lens1和lens2，进一步除去了溶剂以及中性分子，也是一个高效的离子传输组件，并聚焦随机运动的离子进入三重四极杆质量分析器。
G6460的质量分析器是三重四级杆，是由三组四极杆空间串联而成，一个质谱就是一个四级杆，所以三重四级杆质谱是空间串联的多级质谱分析，也叫做QQQ质谱。
第一个四级杆根据设定的质合比范围扫描和选择所需的离子。
第二个四级杆，也称碰撞池，用于聚集和传送离子。
在选择离子飞行的途中，引入碰撞气体氮气，第三个四级杆用于分析在碰撞池中产生的碎片离子。
实际上，碰撞池采用了六极杆的设计，拥有更好的聚焦及传输功能，四级杆就被淘汰了，但还沿用三重四级杆的名称。
G6460质谱的检测器包括高能打拿极和电子倍增器，此外，质谱需要在真空环境下工作，它的真空系统由前级真空泵和分子涡轮泵组成，前级真空一般在 1.8-2.5Torr之间，高真空在1.9-2.3*10-5Torr之间。
原理：它以液相色谱作为分离系统，质谱为检测系统。
样品在质谱部分和流动相分离，被离子化后，经质谱的质量分析器将离子碎片按质量数分开，经检测器得到质谱图。
三重四极杆液质联用仪检定规程
三重四极杆液质联用仪检定规程1. 引言三重四极杆液质联用仪（Triple Quadrupole Liquid Chromatography Mass Spectrometry，TQ-LC/MS）是一种常用的分析仪器，广泛应用于生物医药、环境监测、食品安全等领域。
为了确保该设备的准确性和可靠性，需要进行定期的检定和校准。
本文将介绍三重四极杆液质联用仪的检定规程。
2. 检定准备2.1 检定设备•标准品：选择适当浓度和组成的标准品，以确保检定结果的准确性。
•校正气体：使用纯度高且稳定的校正气体，如氮气或空气。
•标准工作液：根据实验要求配置合适浓度和组成的标准工作液。
2.2 检定条件•温度：设置合适的柱温和离子源温度，以保证实验条件的稳定性。
•流速：选择适当的流速，使得样品能够在一定时间内通过柱子，并获得良好的色谱分离。
•柱子：选择合适的柱子，根据样品的性质和分析要求进行选择。
2.3 样品处理•样品制备：根据实验要求，选择适当的样品制备方法，如提取、纯化等。
•样品浓度：根据实验要求，调整样品的浓度，使其适用于检定。
3. 检定步骤3.1 系统性能检定1.质谱仪参数设置：–设置离子源参数，如离子化方式、碰撞能量等。
–设置质谱参数，如扫描范围、分辨率等。
2.运行空白样品：–注入纯净溶剂作为空白样品。
–运行质谱仪并记录数据。
3.运行标准物质：–注入标准工作液，并运行质谱仪进行测定。
–记录数据并计算出相应的峰面积或峰高值。
3.2 定量检定1.标准曲线绘制：–使用一系列已知浓度的标准物质制备一组标准溶液。
–分别注射每个标准溶液，并记录相应的峰面积或峰高值。
–绘制标准曲线，以峰面积或峰高值为纵坐标，浓度为横坐标。
2.样品检定：–根据实验要求，选择合适的样品处理方法。
–注射样品并运行质谱仪进行测定。
–根据标准曲线计算出样品中目标物质的浓度。
3.3 精密度和准确度检定1.精密度检定：–选择一组具有不同浓度的样品。
–分别注射每个样品并运行质谱仪进行测定。
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Agilent6460三重串联四级杆液质联用仪的标准操作规程
定性分析
1.打开定性分析软件时会自动弹出Open Data File对话框，选中待分析的数据文件，单击Open按钮，即可打开
2.提取色谱图：右键点击数据导航区选择的数据，或者在色谱图显示区域点击右键，在弹出的菜单选择Extract Chromatograms。
提取质谱图：提取某点的质谱图，直接在该点双击左键即可。
3.在TIC图中使用选择范围工具选择某点或一段背景范围，单击鼠标右键，选择Extract Spectrum to Background，该质谱图被自动加入到背景质谱图(Background Spectra)。
4.在MS Spectrum Results内的某张质谱图上右键点击，在弹出的窗口选择Substract Background Spectrum。
则该质谱图会自动扣除掉上面的背景质谱图，
5.要对色谱图进行积分，在方法浏览区选择Chromatogram功能区，根据不同需要进行积分选择，选择Integrate(MS)等。
选择Agile积分器。
直接右键点击色谱图，在弹出的菜单选择Integrate Chromatogram进行积分。
6.从File菜单选择Print>Analysis Report…从左侧选择要打印的数据文件，可以选择一个或多个打开的数据。
设定好报告选项后，点击OK按钮生成报告。