实验4 pH值对唾液淀粉酶活性的
实验四酶的特性实验
说明：本实验由四个小实验组成，其中第一个实验（酶的专一性）必做，其他三个小实验选做（至少做一个）写实验报告时，可以只写需要做的实验内容！实验四酶的特性实验一、实验目的酶是生物催化剂，生物体内化学反应基本上都是在酶的催化下进行的。
通过本实验了解酶催化的特异性、温度对酶活力的影响、PH对酶活力的影响、激活剂和抑制剂对酶活力的影响，对于进一步掌握代谢反应及其调控机理具有十分重要的意义。
二、实验内容本实验由酶的专一性实验、温度对酶活力的影响、PH对酶活力的影响、激活剂和抑制剂对酶活力的影响4个小实验组成。
（一）酶的专一性1、实验原理本实验以唾液淀粉酶对淀粉和蔗糖的作用为例，来说明酶的专一性。
淀粉和蔗糖无还原性，唾液淀粉酶水解淀粉生成有还原性二糖的麦芽糖，但不能催化蔗糖的水解。
用班氏试剂检查糖的还原性。
班氏试剂为碱性硫酸铜，能氧化具还原性的糖，生成砖红色沉淀氧化亚铜。
2、材料、仪器与试剂(1)材料：新鲜配制的唾液及其稀释液(2)仪器：恒温水浴；沸水浴；试管及试管架；(3)试剂：2%蔗糖溶液；溶于0.3% NaCl的0.5%淀粉溶液；班氏试剂。
3、实验操作（1）稀释唾液的制备①唾液的获取用一次性杯取一定量的饮用水，漱口以清洁口腔，然后在嘴中含10-20ml饮用水，轻漱2min左右时间，即可获得唾液的原液，内含唾液淀粉酶。
②不同稀释度唾液的制备（用大试管）本实验需制备1：1、1：5、1：20、1：50、1：200等五个不同浓度的稀释唾液。
举例说明：1:5指的是稀释了5倍的唾液，制备方法为1份原液+4份蒸馏水。
1：20指的是稀释了20倍的唾液，制备方法为1份1：5的稀释液+3分蒸馏水。
（2）唾液淀粉酶最佳稀释度的确定（严格按表1添加顺序做实验，用小试管做实验）表1 唾液淀粉酶稀释度的确定（2）淀粉酶的专一性表2 淀粉酶专一性实验（二）温度对酶活力的影响1、实验原理酶的催化作用受温度的影响。
在最适温度下，酶的反应速度最高。
酶学实验实验报告唾液
一、实验目的1. 了解唾液淀粉酶的生物学特性及其在消化过程中的作用。
2. 掌握酶活性测定的基本原理和方法。
3. 通过实验观察和分析唾液淀粉酶活性受温度、pH值等因素的影响。
二、实验原理唾液淀粉酶是一种消化酶，主要存在于唾液中，负责将食物中的淀粉分解为麦芽糖，为后续消化提供能量。
酶活性是指酶催化反应的能力，受多种因素的影响，如温度、pH值、底物浓度等。
本实验通过测定不同条件下唾液淀粉酶对淀粉的分解速率，观察酶活性变化。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 新鲜唾液- 淀粉溶液- 碘液- pH试纸- 温度计- 烧杯- 试管- 移液器2. 实验仪器：- 恒温水浴箱- 酶标仪- 移液器四、实验步骤1. 唾液淀粉酶活性测定：（1）取两只试管，分别加入2mL淀粉溶液。
（2）用移液器取1mL唾液，加入第一只试管中，混匀。
（3）将第一只试管放入37℃恒温水浴箱中，观察淀粉分解情况。
（4）每隔5分钟，用移液器取1mL反应液，加入碘液中，观察颜色变化。
（5）记录淀粉分解所需时间。
2. 温度对唾液淀粉酶活性的影响：（1）设置不同温度（如25℃、37℃、50℃、65℃）的水浴箱。
（2）重复步骤1，观察不同温度下淀粉分解所需时间。
3. pH值对唾液淀粉酶活性的影响：（1）用pH试纸测定唾液的pH值。
（2）调整唾液的pH值至不同水平（如4、5、6、7、8、9）。
（3）重复步骤1，观察不同pH值下淀粉分解所需时间。
五、实验结果与分析1. 唾液淀粉酶活性测定：在37℃恒温水浴箱中，淀粉分解所需时间为10分钟。
2. 温度对唾液淀粉酶活性的影响：随着温度升高，淀粉分解所需时间逐渐缩短，说明唾液淀粉酶活性随温度升高而增强。
在50℃时，淀粉分解所需时间最短，说明50℃为唾液淀粉酶的最适温度。
3. pH值对唾液淀粉酶活性的影响：随着pH值升高，淀粉分解所需时间逐渐缩短，说明唾液淀粉酶活性随pH值升高而增强。
在pH值为7时，淀粉分解所需时间最短，说明pH值为7为唾液淀粉酶的最适pH值。
ph对酶活性的影响实验颜色变化
ph对酶活性的影响实验颜色变化实验目的1.观察不同底物、温度、pH、激活剂与抑制剂对淀粉酶活性的影响。
2.观察淀粉在水解过程中遇碘后溶液颜色的变化。
原理淀粉在唾液淀粉酶的作用下被逐步水解成不同大小分子的糊精、麦芽糖、葡萄糖，水解的中间产物遇碘呈现不同的颜色：淀粉溶液遇到碘呈蓝色，糊精遇到碘按照分子大小分别呈紫色、暗褐色或红色，麦芽糖、葡萄糖遇到碘不变色，呈碘液的淡黄色。
根据水解液和碘反应的颜色，可以判断淀粉酶水解淀粉是否已完全，因此可以通过这个方法定性观察不同底物、温度、pH及激活剂与抑制剂对唾液淀粉酶活性的影响。
实验材料与器材新鲜唾液稀释液、2%蔗糖溶液、本尼迪克特（Benedict）试剂、0.5%淀粉、0.5%淀粉溶液（含0.3%Na Cl）、1％氯化钠溶液、0.1％硫酸铜溶液、碘液、0.2 mo l/L磷酸氢二钠溶液、0.1 mo l/L柠檬酸溶液实验者唾液；电磁炉，恒温水浴锅，冰盒，试管，试管架、锥形瓶，滴管，pH 试纸、移液器等。
本实验的操作流程1.取3支试管，各加2mL含0.3％氯化钠的0.5％淀粉溶液。
2.另取3支试管，各加1mL淀粉酶液。
3.将此6支试管分为3组，每组中盛淀粉溶液与淀粉酶液的试管各1支。
4.三组试管分别置入0℃、37℃与100℃的水浴中。
5.等5min后，将各组中的淀粉溶液倒入淀粉酶液中，继续维持原温度条件5min后，0℃、37℃水浴管立即滴加2滴碘液，100℃的水浴管冷却后滴加2滴碘液，观察溶液颜色的变化。
结果：因为唾液淀粉酶最适p h为6.8，所以最后滴加碘液后三个分别为：蓝色，不变色，蓝色。
因为第二个中，在最适p h环境下，淀粉被酶分解为了葡萄糖，遇碘液不变色。
温度,pH对酶活性的影响
实验题目：温度、pH对酶活性的影响一、实验目的通过检验不同的温度、pH下唾液淀粉酶的活性，了解温度、pH对酶活性的影响。
二、实验原理唾液淀粉酶可将淀粉((C6H10O5)n)逐步水解成各种不同大小分子的糊精（中间产物）和麦芽糖。
由于在不同的温度和pH下唾液淀粉酶的活性高低不同，淀粉被水解的程度不同，因此可由酶反应混合物遇碘而呈现的颜色来判断酶的活性。
三、实验器材与试剂器材：试管、试管架、移液器、锥形瓶（50、100ml）、量筒、恒温水浴锅、玻璃漏斗、滤纸试剂：0.3%氯化钠的0.2%淀粉溶液、碘化钾-碘溶液、稀释100倍的新鲜唾液、0.2M 磷酸氢二钠溶液、0.1M 柠檬酸溶液四、实验步骤实验（一）温度对酶的活性影响表一温度对酶的活性影响实验步骤试管1 试管2 试管3步骤1 各加2ml的0.2%淀粉溶液步骤2 37℃恒温水浴锅保温5min 冰水冷却5min步骤3 各加入稀释100倍的新鲜唾液1ml步骤4 摇匀，放置20min各加碘化钾-碘溶液2滴，混匀，显色，比较各试管溶液的颜色。
判断淀粉步骤5被唾液淀粉酶水解的程度，并说明唾液淀粉酶活性的影响。
实验（二）pH对酶的活性影响（1）取干净的50毫升锥形瓶3个编号，按下表中的比例，用移液枪添加0.2M磷酸氢二钠溶液和0.1M柠檬酸溶液，制备pH为5.0、6.8、8.0三种缓冲溶液。
（8人为一组）pH=5.0, 5.15ml0.2M磷酸氢二钠溶液和4.85ml0.1M柠檬酸溶液pH=6.8, 7.72ml 0.2M磷酸氢二钠溶液和2.28ml0.1M柠檬酸溶液pH=8.0, 9,72ml0.2M磷酸氢二钠溶液和0.28ml0.1M柠檬酸溶液表二pH对酶的活性影响实验步骤试管1 试管2 试管3步骤1 各加入1.5ml不同pH缓冲液步骤2 各加入0.2%淀粉溶液1ml，摇匀步骤3 依次加入稀释100倍的唾液2ml，摇匀放入37℃恒温水浴中保温2分钟，然后将各试管迅速取出，并立即加入碘化步骤4钾-碘溶液2滴，摇匀，比较三管溶液的颜色。
唾液淀粉酶实验报告
唾液淀粉酶实验报告唾液淀粉酶实验报告引言：唾液淀粉酶是一种消化酶，能够将淀粉分解成较小的分子，为消化系统提供能量。
本实验旨在探究唾液淀粉酶的活性及其受到的影响因素。
实验材料与方法：实验材料：1. 淀粉溶液2. 唾液样本3. 碘液4. 试管5. 恒温水浴6. 酒精灯7. 显微镜8. 盖玻片实验方法：1. 取一定量的淀粉溶液倒入试管中。
2. 加入一滴碘液，观察试管中溶液颜色的变化，记录下颜色。
3. 将一定量的唾液样本加入另一个试管中。
4. 将两个试管放入恒温水浴中，保持温度恒定。
5. 同时开始计时，每隔一分钟，分别取出两个试管中的溶液滴在盖玻片上。
6. 用显微镜观察滴在盖玻片上的溶液，记录下观察结果。
7. 重复以上步骤，分别在不同温度和不同pH值条件下进行实验。
实验结果及讨论：在初始状态下，淀粉溶液的颜色为深蓝色，加入碘液后，颜色变为紫黑色。
这是因为碘液与淀粉反应生成了淀粉碘复合物，导致颜色变化。
在观察唾液淀粉酶活性的实验中，我们发现随着时间的推移，滴在盖玻片上的溶液逐渐变浅，最终变为无色。
这说明唾液淀粉酶能够将淀粉分解成较小的分子，从而使溶液中的淀粉含量减少。
在不同温度下的实验中，我们发现唾液淀粉酶的活性受到温度的影响。
当温度较低时，唾液淀粉酶的活性较低，反应速率较慢；而当温度较高时，唾液淀粉酶的活性较高，反应速率较快。
这是因为温度能够影响酶的构象和分子振动，从而影响酶的活性。
在不同pH值条件下的实验中，我们发现唾液淀粉酶的活性也受到pH值的影响。
在中性条件下，唾液淀粉酶的活性最高；而在酸性或碱性条件下，唾液淀粉酶的活性较低。
这是因为酶的活性受到pH值的影响，过高或过低的pH值会破坏酶的构象，从而降低酶的活性。
结论：通过本实验，我们得出了以下结论：1. 唾液淀粉酶能够将淀粉分解成较小的分子。
2. 唾液淀粉酶的活性受到温度的影响，温度越高，活性越高。
3. 唾液淀粉酶的活性受到pH值的影响，中性条件下活性最高。
【引用】关于温度和pH对酶活性影响的探究实验
【引用】关于温度和pH对酶活性影响的探究实验探究温度对酶活性影响实验步骤：1、取6支洁净的试管，编上1、1′、2、2′、3、3′号，向1、2、3号试管分别注入1mL新鲜的唾液淀粉酶，向1′、2′、3′号试管加入1mL可溶性淀粉溶液；2、将1和1′号试管放置在100度左右的热水、2和2′号试管放置于37度左右的的温水、3和3′号试管放置于冰块中，维持各自温度5分钟；3、分别将同温度下的淀粉溶液注入淀粉酶溶液中（既是1′号试管注入到１号试管中）摇匀后，维持各自的温度5分钟；4、在3支试管中各滴入1滴碘液，摇匀；5、观察并记录颜色变化。
预期实验现象：1号试管加碘后出现蓝色（原因：高温破坏酶的活性，淀粉酶无法分解淀粉）；2号试管加碘后不出现蓝色（原因：37℃为唾液淀粉酶最适合温度，此时酶的活性最高，淀粉被水解）；3号试管加碘后出现蓝色（原因：低温抑制酶的活性，淀粉水解受阻）实验结论：酶活性的发挥需要最适宜的温度，温度过高或过低都影响酶的活性。
唾液淀粉酶的最适温度为37℃。
探究pH对酶活性影响（1）实验步骤：1、取3支洁净的试管，编上1、2、3号，向1、2、3号试管分别注入 1mL新鲜的肝脏研磨液；2、分别向三只试管分别加入2mL的蒸馏水、质量分数5%的盐酸和质量分数5%的氢氧化钠，摇匀后静置5min;3、分别向三只试管加入1mL的过氧化氢溶液，观察并记录实现现象；4、2-3min后，将3支带火星卫生香分别伸进试管液面上方，观察观察并记录实现现象预期实验现象：1号试管试管产生大量气泡，卫生香复燃，2、3号产生气泡少或无气泡产生，卫生香不复燃。
实验结论：酶活性的发挥需要最适宜的pH，温度过高或过低都影响酶的活性。
过氧化氢酶在中性的活性最。
探究pH对酶活性影响（2）实验步骤：1、取5支洁净的试管，编上1、2、3、4、5号，向1、2、3、4、5号试管分别注入 1mL新鲜的肝脏研磨液；2、用盐酸或氢氧化钠溶液调整出不同pH，分别为6.0、6.5、7.0、7.5、8;3、取2ml配置好的不同pH溶液分别加入5支试管中（既是1号试管加入2mlpH6.0的溶液，依次类推），摇匀后静置5min;4、分别向试管中加入1mL的过氧化氢溶液，观察现象并记录。
pH对酶活性的影响 - 实验四温度、pH对酶活性的影响
（1）酶作为生物催化剂具有哪些特性？
（2）进行酶的实验必须注意控制哪些条件？为什么？
酶对温度的稳定性与其存在形式有关。实践证明大多数酶在干燥的固体状态下比较稳定，能在室温下保存数月以至一年。溶液中的酶，一般不如固体的酶稳定，而且容易被微生物污染，通常很难长期保存而不丧失其活性，在高温的情况下，更不稳定。
【操作方法】
脲酶能催化尿素水解生成氨和二氧化碳，氨可与奈斯勒试剂作用生成橙红色化合物。由颜色深浅，可断定反应进行的程度。
向第9干燥的试管中加入稀释200倍的唾液2ml,摇匀后放入37℃恒温水浴中保温.每隔1min由第9号试管中取出一滴混合液,置于白瓷板上,加1滴碘化钾-碘溶液,检验淀粉的水解程度,待结果呈检黄色时,取出试管,记录保温时间。注意，掌握第9号试管的水解程度是本实验成败的关键之一。
以1min的间隔，依次向第1至第8号试管中加入稀释200倍的唾液2ml，摇匀，并以1min的间隔依次将8号支试管放入37℃恒温水浴中保温。然后，按照第9号试管的保温时间，依次将各管迅速取出，并立即加入碘化钾-碘溶液2滴，充分摇匀。观察各管呈现的颜色，判断在不同pH值下淀粉被水解的程度，可以看出pH对唾液淀粉酶活性的影响，并确定其最适pH。
奈斯勒试剂是含有大量汞盐的强碱性溶液，所以，它是具有腐蚀性的剧毒试剂。实验时必须严格遵守操作规程，谨防中毒。此外，作酶学实验时所用的玻璃仪器等一切器皿必须洁净，以除去能抑制酶活性的杂性。因此，用奈斯勒试剂作完实验后，将它所沾污的试管等一切器皿充分洗涤干净。
二、器材
（1）试管和试管架
（2）吸量管（1、2ml）
应当指出酶的最适pH受底物性质和缓冲溶液性质的影响。例如，唾液淀粉酶的最适pH约为6.8，但在磷酸缓冲液中，其最适pH为6.4-6.6，在醋酸缓冲液中则为5.6。
pH对酶活性的影响 - 实验四温度、pH对酶活性的影响
以1min的间隔，依次向第1至第8号试管中加入稀释200倍的唾液2ml，摇匀，并以1min的间隔依次将8号支试管放入37℃恒温水浴中保温。然后，按照第9号试管的保温时间，依次将各管迅速取出，并立即加入碘化钾-碘溶液2滴，充分摇匀。观察各管呈现的颜色，判断在不同pH值下淀粉被水解的程度，可以看出pH对唾液淀粉酶活性的影响，并确定其最适pH。
（3）烧杯（500、100ml）
（4）锥形瓶（100ml）
（5）玻璃漏斗
（6）水浴锅
（7）铁三脚架
（8）煤气灯
（9）恒温水浴
（10）滤纸
【思考题】
1．什么是酶的最适温度？有体实践意义？
2．奈斯勒试剂的成分是什么？为什么可用它来检查脲酶的活性？使用中应注意什么？
3．酶在干燥的状态下与水溶液中，它的活性受温度的影响是否相同？这个性质对酶的保存有体意义？
4．酶反应的最适温度是酶的特征物理常数吗？它与哪些因素有关？
ⅡpH对酶活性的影响
【目的和要求】
1．了解pH对酶活性的影响。
2极为显著。通常各种酶只有在一定的pH范围内才表现它的活性。一种酶表现其活性最高时的pH值，称为该酶的最适pH。低于或高于最适pH时，酶的活性降低。不同酶的最适pH值不同，例如，胃蛋白酶的最适pH为1.5-2.5，胰蛋白酶的最适pH为8等。
【试剂和器材】
一、试剂
（1）0.3%氯化钠的0.5%淀粉溶液[新鲜配制、需加热至无浊状]
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实验5 温度对酶促反应的影响
实验目的： 1. 通过实验观察温度对酶促反应的影响。 2. 提高分析问题和动手能力。 实验原理：同实验4。
根据颜色反应，可以了解淀粉被水解的程度。 在不同温度，唾液淀粉酶活性不同，淀粉水 解程度也不一样。进而了解温度对酶促反应 的影响。
实验器材： 【器材】： 10mm×100mm试管、试管架、恒温水浴箱、沸 水浴、记号笔、一次性杯子 【试剂】： 1．1%淀粉溶液：同实验4 2．稀释唾液：同实验3 3．碘溶液 取碘化钾4g溶于少量蒸馏水中，再取 碘2g，完全溶解后加蒸馏水至300ml，贮于棕色 瓶中。
3,5-二硝Βιβλιοθήκη 水杨酸/mlλ=550nm的吸光值（A）
水浴加热5min，迅速取出冷却，在向每管加入21ml的蒸馏水于550nm处测 吸光度；
实验内容与方法：
取三支试管按下表操作：
表
加入物ml 1% 淀粉溶液 PH6.8缓冲液
温度对酶促反应的影响
1
3 1 2 3
3 1
3 1
摇匀后分别于37、沸水、冰浴5分钟
稀唾液 1
1 1
摇匀后分别于37、沸水、冰浴10分钟
取出后，分别向各管加入稀碘液1滴，观察3管中颜色的区别，说明温度对酶促反应的影响。
实验6 唾液淀粉酶的活性测定
实验目的： 1. 学习酶活力，酶活力单位，比活力的测定， 加深对概念的理解； 2. 学会用3,5-二硝基水杨酸测定还原糖的含量
实验原理：
• 在最适条件下，每分钟催化单位量的底物转化为产物所 需的酶量定义为一个活力单位。 • 酶的比活力：用每mg蛋白质酶活力单位数表示，表示 酶的纯度。每隔一段时间测定一次水解的横渡一浓度为 纵坐标，时间为横坐标作图，在图上找出开始部分线形 好的部分求出斜率。进而求出酶的活力与比活力。 • 3,5----二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色 的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量和反应液的 颜色强度呈现比例关系，利用比色法可测知样品的含糖 量。该方法是半微量测糖法，操作简便，快速，杂质干 扰较小。
实验4 pH值对唾液淀粉酶活性的影响
实验目的：
• 1. 通过实验观察pH对酶促反应的影响。 • 2. 提高分析问题和动手能力。
实验原理
• 淀粉在淀粉酶催化下水解，其最终产物是麦芽糖和 葡萄糖。在水解反应过程中淀粉的分子量逐渐变小， 形成若干分子量不等的过渡性产物，称为糊精。向 反应系统中加入碘液可检查淀粉的水解程度，淀粉 遇碘呈蓝色，麦芽糖对碘不显色。糊精中分子量较 大者呈蓝紫色，随糊精的继续水解，对碘呈橙红色。 • 根据颜色反应，可以了解淀粉被水解的程度。在不 同酸碱度下，唾液淀粉酶活性不同，淀粉水解程度 也不一样。进而了解pH对酶促反应的影响。
实验器材：
【器材】： 10mm×100mm试管、试管架、恒温水浴箱、记号笔、一次性杯子 【试剂】： 1．1%淀粉溶液：配制方法：取可溶性淀粉1克，加5毫升蒸馏水，调成糊状，再加蒸馏水约80 毫升，加热，使其溶解，最后用蒸馏水稀释至100毫升，冰箱保存。 2．稀释唾液：同实验3 3．缓冲溶液： 4．碘溶液 取碘化钾2g溶于少量蒸馏水中，再取碘1.27g，完全溶解后加蒸馏水至200ml，贮于 棕色瓶中。使用前用水稀释5倍。
实验器材：
【器材】： 10mm×100mm试管、试管架、恒温水浴箱、沸水浴、记号笔、一 次性杯子 【试剂】： 1．3,5-二硝基水杨酸试剂（又称DNS试剂）： 甲液：溶解 6.9g结晶酚于15.2ml10％氢氧化钠中，并稀释至69 ml， 在此溶液中加入6.9g亚硫酸氢钠； 乙液：称取 255g酒石酸钾钠，加到300 ml10％氢氧化钠中，再加 入880 ml1％ 3,5-二硝基水杨酸溶液。 将甲液与乙液相混合即得黄色试剂，贮于棕色试剂瓶中，在室温 下放置 7－10天以后使用。 2．0.1％葡萄糖标准液：准确称取100mg分析纯的葡萄糖（预先在 105℃干燥至恒重），用少量蒸馏水溶解后定容至100 ml，冰箱保 存备用。
实验步骤
取三支试管按下表操作：
加入物(ml)
1
2
3
1%淀粉溶液
PＨ5.7缓冲液 PH6.8缓冲液 PH8.0缓冲液
3
1 0 0
3
0 1 0
3
0 0 1
摇匀后37℃恒温水浴中保温5分钟
稀唾液 2 2 2
• 将上面各管摇匀后放入37℃恒温水浴中保
温。放置10分钟后取出，分别向各管加入
稀碘液1滴，观察3管中颜色的区别，说明
实验内容与方法：
• 1、葡萄糖标准曲线的制定 • 取8支试管编号，按下表操作：
0 试剂处理 试管编号 葡萄糖标准液/ml — 1 0.2 2 0.4 3 0.6 4 0.8 5 1.0 6 1.2 7 1.4
蒸馏水/ml
2.0 2
1.8 2
1.6 2
1.4 2
1.2 2
1.0 2
0.8 2
0.6 2