MTT简介及试剂盒说明
MTT原理方法及操作步骤
MTT原理方法及操作步骤MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物）是一种常用的细胞增殖测定试剂，用于定量测定细胞的存活情况。
MTT的工作原理：MTT原理是基于还原型特种金属试剂Florida Cyanide。
MTT可进入细胞内部，被活细胞内的膜连蛋白酶还原为水溶性紫色化合物，甲基化噻唑胺盐（formazan）。
甲基化噻唑胺盐可溶于有机溶剂如DMSO或乙醇。
MTT的量越多，被还原为甲基化噻唑胺盐越多，即细胞活性越高。
MTT的操作步骤：1.预处理细胞将需要检测细胞的培养基倒入培养皿中，将获得的细胞悬液加入培养基中，根据实验要求进行设定浓度和培养时间。
2.处理试剂根据常规的MTT工作浓度（通常为0.5 mg/ml），将MTT试剂精确称取并溶解在无菌的溶剂（例如PBS）中。
3.细胞处理将培养中的细胞培养液抽取约100μl至新的96孔板孔中，并注意控制每个孔中细胞数相同时的培养基体积。
4.加入MTT试剂将所制备的MTT溶液以100μl的体积的溶液加入到培养细胞上，并尽量在操作中迅速搅拌均匀，以使MTT均匀分布。
5.细胞孔板孔的处理将MTT试剂添加到孔中后，覆盖板密封（如用保鲜膜密封）。
然后将培养皿放入暗处，37°C培养孔中的细胞进行inculbation与MTT碳酸酯酶的反应。
通常培养12至24小时，可以根据具体实验情况延长培养时间。
6.细胞孔中溶解甲基化噻唑胺盐将培养平皿中的培养液取出约50μl，悬浮溶解掉的甲基化噻唑胺盐，再加入200μlDMSO混合均匀。
7.测定吸光度将孔中的溶液分别转移到透明壁的96孔板，并使用微孔板阅读装置（Multiskan Spectrum）在570 nm波长下测定吸光度。
DMSO溶液作为空白参照，用作光强的基准。
8.数据分析根据检测吸光度得到的数据，计算出每个孔的平均值，并根据实验要求，进行数据图表分析。
总结：MTT法是一种可靠、灵敏、简单、可重复性好的细胞增殖测定方法。
辅酶 II NADP含量检测试剂盒MTT 显色法)说明书__ 可见分光光度法UPLC-MS-4370
辅酶II NADP(H)含量检测试剂盒（MTT 显色法）说明书货号：UPLC-MS-4370规格：50T/24S可见分光光度法产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
试剂名称规格保存条件酸性提取液液体15mL×1瓶2-8℃保存碱性提取液液体15mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体20mL×1瓶2-8℃保存试剂二粉剂×1支-20℃保存试剂三液体12mL×1瓶2-8℃保存试剂四A 粉剂×1支-20℃保存试剂四B 液体5mL×1瓶2-8℃保存试剂五液体40mL×1瓶2-8℃保存试剂六液体70mL×1瓶2-8℃保存NADP 标准品粉剂×1支-20℃保存NADPH 标准品粉剂×1支-20℃保存溶液的配制：1、试剂二：临用前加入6mL 蒸馏水充分混匀，溶解后2-8℃保存4周。
2、试剂四：临用前将试剂四A 溶解到试剂四B 中，溶解后分装保存，避免反复冻融，-20℃保存4周。
3、NADP 标准品：临用前加入1.27mL蒸馏水，即5µmol/mL ，-20℃可以保存2周。
4、NADPH 标准品：临用前加入1.2mL 蒸馏水，即5µmol/mL ，-20℃可以保存2周。
产品说明：辅酶ⅡNADP(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，NADP +和NADPH 含量测定可以计算NADP （NADPH +NADP +)含量和NADPH/NADP +比值，其变化与磷酸戊糖途径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。
NADPH/NADP +比值不仅是细胞氧化还原态的主要标志之一，而且在PPP 途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重要调控作用。
分别用酸性和碱性提取液提取样品中NADP +和NADPH 。
NADPH 通过PMS 的递氢作用，使氧化型噻唑蓝（MTT ）还原为甲瓒，570nm 下检测吸光值，从而测定NADPH 含量。
MTT原理及实验方法
MTT原理及实验方法MTT（细胞代谢试剂）是一种用于测量和研究细胞分裂和代谢活性的化学试剂。
该试剂的工作原理基于细胞的代谢能力，其将细胞内的黄色水溶性四甲基偶氮唑盐（MTT盐）氧化为紫色的可溶性形式，从而通过测量溶解形式的MTT的光密度来反映细胞代谢活性水平。
以下将详细介绍MTT原理及实验方法。
MTT试剂的原理：1.MTT溶解：MTT试剂在组织培养试验中被混合到细胞培养物中。
MTT盐会被细胞内的还原酶还原成紫色的可溶性形式（MTT甲醇溶液）。
2.MTT测定：MTT溶液可以通过酶法分解成无色的N-甲基四唑（NMTT）形式，在MTT试剂中的抗氧化剂溶液（如二甲基亚砷酸钠）将MTT还原成紫色可溶性形式。
MTT还原后的紫色可溶性形式可以通过测量其吸光度来间接反映细胞的代谢活性水平。
MTT实验方法：1.细胞培养：选择需要研究的细胞系，将细胞培养在含有适当培养基和温度、湿度、氧气浓度适宜的培养箱中，培养至细胞数量和生长状态适宜的阶段。
2.细胞处理：将细胞均匀分布到培养皿中，并根据具体实验目的进行适当的处理，如添加药物、感染病毒等。
3.MTT处理：将MTT试剂溶解于无菌磷缓冲盐溶液（PBS）中，并将其加入到培养皿中，使其与细胞充分接触。
4.培养皿反应：将培养皿置于37摄氏度的培养箱中，使MTT试剂与细胞反应，在一定的时间内进行颜色的转换。
5.溶解MTT产物：培养皿中的介质和化合物被抽去，用洗涤缓冲溶液洗涤细胞两次，然后加入甲醇或异丙醇等溶剂来溶解产物。
6.吸光度测量：将培养皿中的溶液转移到96孔板（一般用96孔板可实现高通量），并使用微孔板读数器在570纳米波长下读取吸光度。
此时，高吸光度表示细胞代谢活性较高，低吸光度则表示较低。
MTT实验的注意事项：2.实验时间的选择：根据细胞系的不同，具体实验时间的选择可能不同。
一般来说，选择较长的实验时间可以更好地反映细胞的代谢活性水平。
3.细胞处理剂量：根据具体实验目的，选择适当的处理剂量和培养时间。
MTT法检测细胞活性的操作方法
MTT法检测细胞活性的操作方法一、MTT是什么MTT是一种粉末状化学试剂，全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide，汉语化学名为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。
是一种黄颜色的染料。
二、MTT法用来做什么简单地说：是一种检测细胞存活和生长的方法。
MTT主要有两个用途1．药物（也包括其他处理方式如放射线照射）对体外培养的细胞毒性的测定；2．细胞增殖及细胞活性测定。
三、为何MTT可以用来做上述工作检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
根据测得的吸光度值（OD值），来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强（如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小）。
四、实验所需材料1．MTT 溶液的配制通常MTT 配成的终浓度为5mg/ml,须用PBS 或生理盐水做溶剂。
市面上一般MTT的包装为100mg,250mg或1g。
1.1对于100mg这样的小包装，厂家都是将MTT放入小管中的，个人建议不要再用天平称量分装，而应该一次性将其全配制成溶液，如100mg用20mlPBS来溶解。
具体做法：预先在50ml离心管（没有的话，可用培养瓶替代）加入20ml PBS，从中先吸取500-1000ul PBS装入含MTT的小管中，吹打若干次后将其移入50ml离心管，然后再混匀。
可以重复几次，以使小管中的MTT不残留于管内。
将MTT 完全混匀后，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，分装避光(避光袋或是黑纸、锡箔纸包住)可长期保存于-20度。
按细胞培养板每孔需加10ul计算，一般每96孔板约需1ml，所以分装时可考虑每管分装1ml。
MTT配制、原理、操作步骤、结果分析、注意事项
MTT配制、原理、操作步骤、结果分析、注意事项四、实验所需材料1．MTT 溶液的配制通常MTT 配成的终浓度为5mg/ml,须用PBS或生理盐水做溶剂。
市面上一般MTT的包装为100mg,250mg或1g1.1 对于100mg这样的小包装，厂家都是将MTT放入小管中的，个人建议不要再用天平称量分装，而应该一次性将其全配制成溶液，如100mg用20mlPBS来溶解。
具休做法：预先在50ml离心管（没有的话，可用培养瓶替代）加入20ml PBS，从中先吸取500-1000ul PBS装入含MTT的小管中，吹打若干次后将其移入50ml离心管，然后再混匀。
可以重复几次，以使小管中的MTT不残留于管内。
将MTT 完全混匀后，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，分装避光(避光袋或是黑纸、锡箔纸包住)可长期保存于-20度。
按细胞培养板每孔需加10ul计算，一般每96孔板约需1ml，所以分装时可考虑每管分装1ml。
1.2 对于大包装，可按上述方法称取一部分溶解，也有人将粉剂分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加。
注意事项：l 在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
l 配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感l MTT一般最好现用现配，过滤后4度避光保存两周内（个人曾做过4度避光保存4周的MTT溶液，效果仍然不错）有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。
当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用。
l MTT有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.2．MTT甲瓒溶解液2.1 二甲基亚砜DMSO，可以直接溶解，无需配制，使用方便，溶解速度快，但对人体毒性较大，且需去除原培养液，在去除培养液的过程中，可能会把结晶去掉，导致结果不稳定。
2.2 三联溶解液：SDS10g，异丁醇5ml，10M HCl 0.1ml 用双蒸水溶解配成100ml溶液（文献方法：周建军等，评价抗癌物质活性的改良MTT方法，中国医药工业杂志，1993，24（10）：455-457），该溶解液不需去除原培养基，但溶解较慢。
MTT原理、步骤、结果分析方法及注意事项
MTT原理、步骤、结果分析方法及注意事项MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide, MTT噻唑蓝为基础。
MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的formazan结晶，formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原）。
还原生成的formazan结晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸钠（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶标仪测定490 nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。
也可以用DMSO来溶解。
MTT粉末和溶液保存时都需要避光，用铝箔纸包好就可以。
实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。
MTT步骤如下：1：接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000－10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul.2:培养细胞：同一般培养条件，培养3－5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。
3：呈色：培养3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS <ph=7.4>配)20ul.继续孵育4小时，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。
每孔加150ul DMSO，振荡10分钟，使结晶物充分融解。
4：比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
注意事项：（1）选择适当得细胞接种浓度。
（2）避免血清干扰：一般选小于10％的胎牛血清的培养液进行试验。
在呈色后尽量吸尽孔内残余培养液。
（3）设空白对照：与试验平行不加细胞只加培养液的空白对照。
MTT简介及试剂盒说明
产品简介：1. MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的实验方法。
由于细胞活力与细胞数呈正相关，因此常常用来检测细胞的增殖情况。
MTT可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物formazan。
在特定溶剂存在的情况下，可以被完全溶解。
然后通过酶标仪可以测定570nm波长附近的吸光度。
细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。
2. 本试剂盒采用了独特的Formazan溶解液配方，无需去除原有的培养液，可以直接加入Formazan溶解液溶解formazan。
从而避免了由于去除培养液时formazan被部分去除而引起的误差。
3. 本试剂盒背景低，灵敏度高，线性范围宽，使用方便提高了可靠性。
4. 本产品为500 次（5个96孔细胞培养板）操作。
产品内容：MTT染色液5mlFormazan溶解液55ml说明书1份保存条件：MTT染色液需-20℃避光保存；Formazan溶解液可以室温保存。
注意事项：1. 由于使用96孔板进行检测，如果你的细胞要养48 h或更长，建议不要吝啬96-孔板的四周边孔，这32个边孔不能使用，建议加入灭菌PBS以饱和中间64个孔的水分。
因为细胞培养过程中，边孔的水分蒸发很快，培养液及里面的药物会出现浓缩现象，细胞的状况就复杂了2. MTT溶剂在低温情况下会凝固，使用前请室温放置或20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
3. MTT一般最好4ºC避光保存两周内有效，保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解，尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。
4. Formazan溶解液结冻或产生沉淀时可以37℃水浴孵育以促进溶解，并且必须在全部溶解并混匀后使用。
5. 孵育时，须避光6. MTT有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感。
MTT简介及试剂盒说明
MTT简介及试剂盒说明产品简介：1. MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的实验方法。
由于细胞活力与细胞数呈正相关，因此常常用来检测细胞的增殖情况。
MTT可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物formazan。
在特定溶剂存在的情况下，可以被完全溶解。
然后通过酶标仪可以测定570nm波长附近的吸光度。
细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。
2. 本试剂盒采用了独特的Formazan溶解液配方，无需去除原有的培养液，可以直接加入Formazan溶解液溶解formazan。
从而避免了由于去除培养液时formazan被部分去除而引起的误差。
3. 本试剂盒背景低，灵敏度高，线性范围宽，使用方便提高了可靠性。
4. 本产品为500 次（5个96孔细胞培养板）操作。
产品内容：MTT染色液5mlFormazan溶解液55ml说明书1份保存条件：MTT染色液需-20℃避光保存；Formazan溶解液可以室温保存。
注意事项：1. 由于使用96孔板进行检测，如果你的细胞要养48 h或更长，建议不要吝啬96-孔板的四周边孔，这32个边孔不能使用，建议加入灭菌PBS以饱和中间64个孔的水分。
因为细胞培养过程中，边孔的水分蒸发很快，培养液及里面的药物会出现浓缩现象，细胞的状况就复杂了2. MTT溶剂在低温情况下会凝固，使用前请室温放置或20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
3. MTT一般最好4oC避光保存两周内有效，保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解，尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。
4. Formazan溶解液结冻或产生沉淀时可以37℃水浴孵育以促进溶解，并且必须在全部溶解并混匀后使用。
5. 孵育时，须避光6. MTT有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感。
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产品简介：
1. MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被广泛应用于细
胞增殖和细胞毒性的实验方法。
由于细胞活力与细胞数呈正相关，因此常常用来检测细胞的增殖情况。
MTT可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物formazan。
在特定溶剂存在的情况下，可以被完全溶解。
然后通过酶标仪可以测定570nm波长附近的吸光度。
细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。
2. 本试剂盒采用了独特的Formazan溶解液配方，无需去除原有的培养液，可以直接加入Formazan溶解
液溶解formazan。
从而避免了由于去除培养液时formazan被部分去除而引起的误差。
3. 本试剂盒背景低，灵敏度高，线性范围宽，使用方便提高了可靠性。
4. 本产品为500 次（5个96孔细胞培养板）操作。
产品内容：
MTT染色液5ml
Formazan溶解液55ml
说明书1份
保存条件：
MTT染色液需-20℃避光保存；Formazan溶解液可以室温保存。
注意事项：
1. 由于使用96孔板进行检测，如果你的细胞要养48 h或更长，建议不要吝啬96-孔板的四周边孔，这32
个边孔不能使用，建议加入灭菌PBS以饱和中间64个孔的水分。
因为细胞培养过程中，边孔的水分蒸发很快，培养液及里面的药物会出现浓缩现象，细胞的状况就复杂了
2. MTT溶剂在低温情况下会凝固，使用前请室温放置或20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。
3. MTT一般最好4ºC避光保存两周内有效，保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，
用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解，尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。
4. Formazan溶解液结冻或产生沉淀时可以37℃水浴孵育以促进溶解，并且必须在全部溶解并混匀后使
用。
5. 孵育时，须避光
6. MTT有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌，MTT对菌
很敏感。
使用说明：
1.收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔，（边
缘孔用无菌PBS填充）。
2.5%CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板，具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的
大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。
加入浓度梯度的药物，原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，每孔0-10ul，设3-5个复孔.建议设5个。
3.5%CO2，37℃孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。
4.每孔加入10微升MTT染色液，继续培养4h。
若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小
心用PBS冲2-3遍后，再加入含MTT的培养液。
5.每孔加入100微升Formanzan溶解液，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。
在酶联免疫检测
仪570nm测定吸光度。
如无570nm滤光片，可以使用560-600nm的滤光片。
6.同时设置调零孔（培养基、MTT染色液、Formanzan溶解液），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介
质、培养液、MTT染色液、Formanzan溶解液）
MTT法
什么是MTT法?
又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。
其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。
二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。
在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
它的特点是灵敏度高、经济。
MTT法- 缺点：
由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水，需被溶解后才能检测。
这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲瓒的有机溶剂对实验者也有损害。
MTT法- MTT 溶液的配制方法
通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。
因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml 的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃避光保存即可。
在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。
MTT法- 注意事项
MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。
在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。
MTT一般最好现用现配，过滤后4ºC避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml 保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。
我一般都把MTT粉分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加，没必要一下子配那么多,尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。
MTT有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.配成的MTT 需要无菌，MTT对菌很敏感；往96孔板加时不避光也没有关系，毕竟时间较短，或者你不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉.
配制MTT时用用PBS溶解,也有人用生理盐水配，60℃水浴助溶。
PBS配方：
Nacl 8g
Kcl 0.2g
Na2HPO4 1.44g
KH2PO4 0.24g
调pH 7.4
定容1L
MTT法- MTT法实验步骤
贴壁细胞：
1、收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度至1000-10000孔，（边缘孔用无菌PBS填充）。
2.、5%CO2，37℃孵育，至细胞单层铺满孔底（96孔平底板）,加入浓度梯度的药物,原则上，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，但我们常在前一天下午铺板，次日上午加药.一般5-7个梯度,每孔100ul,设3-5个复孔.建议设5个，否则难以反应真实情况
3.、5%CO2，37℃孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。
4、每孔加入20ulMTT溶液（5mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4h。
若药物与MTT能够反应，可先离心后弃去培养液，小心用PBS冲2-3遍后，再加入含MTT的培养液。
5、终止培养，小心吸去孔内培养液。
6、每孔加入150ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。
在酶联免疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值。
7、同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜）
悬浮细胞：
1、收集对数期细胞，调节细胞悬液浓(储存液100 1640）。
μg/ml，需预试寻找最佳稀释度，1:10-1:20)；③需检测物10ul；④细胞悬液50ul（即5×104cell/孔），共100ul加入到96孔板（边缘孔用无菌水填充）。
每板设对照（加100μ度
1×106/ml，按次序将①补足的1640（无血清）培养基40ul ；②加Actinomycin D（有毒性）10ul用培养液稀释l
2、置37℃，5%CO2孵育16-48小时，倒置显微镜下观察。
3、每孔加入10 ul MTT溶液（5 mg/ml，即0.5%MTT），继续培养4 h。
（悬浮细胞推荐使用WST-1，培养4 h后可跳过步骤4），直接酶联免疫检测仪
OD570nm（630nm校准）测量各孔的吸光值）
4、离心（1000转x10min），小心吸掉上清，每孔加入100 ul二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10 min，使结晶物充分溶解。
在酶联免疫检测仪OD570nm （630nm校准）测量各孔的吸光值。
5、同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜），每组设定3复孔。