苏云金芽孢杆菌发酵培养基的筛选
苏云金芽孢杆菌筛选及其对蚊科幼虫的杀虫活性
苏云金芽孢杆菌筛选及其对蚊科幼虫的杀虫活性苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）是一种常见的土壤细菌，被广泛用作生物杀虫剂。
它通过产生特殊的杀虫晶体蛋白（Cry蛋白），对某些昆虫的幼虫具有高度的杀虫活性，对环境和人类安全无害。
本文主要探究苏云金芽孢杆菌的筛选方法，并研究其对蚊科幼虫的杀虫活性。
苏云金芽孢杆菌的筛选可以通过以下步骤进行：采集土壤样品，将其接种到富含营养的培养基中，如T3培养基。
将培养基孵育在适宜的温度下，并进行连续传代培养，以保持苏云金芽孢杆菌的纯度和活力。
接下来，用半定量法检测培养基中的苏云金芽孢杆菌数量。
可以使用琼脂糖平板法，将一定体积的培养基平铺在琼脂糖平板上，然后在适宜温度下培养。
苏云金芽孢杆菌形成的典型菌落呈灰白色，巨大菌落的培养液显示菌落明显，以及青霉菌类在菌落表面的出现等都是筛选的重要指标。
然后，根据苏云金芽孢杆菌对蚊科幼虫的杀虫活性，进行活性筛选。
将苏云金芽孢杆菌转接到含有蚊科幼虫的培养基中，进行培养。
观察苏云金芽孢杆菌对蚊科幼虫的杀虫效果，并进行杀虫活性测试。
可以通过观察幼虫的死亡情况、体表异常和生长抑制等指标来评估杀虫活性。
选取具有较高杀虫活性的苏云金芽孢杆菌进行进一步研究。
可以通过形态学观察、鉴定晶体蛋白类型和测定晶体蛋白的产量等方法，对选择出的苏云金芽孢杆菌进行深入研究。
苏云金芽孢杆菌对蚊科幼虫的杀虫活性主要依赖于其产生的Cry蛋白。
Cry蛋白在蚊科幼虫的肠道内起到杀虫作用。
当幼虫摄入含有Cry蛋白的培养基时，Cry蛋白与幼虫肠道内的特定受体结合，使幼虫肠道发生溶解和结构破坏，最终导致幼虫死亡。
Cry蛋白具有高度的选择性，对昆虫的杀伤作用明显，而对其他生物几乎无毒性。
研究表明，苏云金芽孢杆菌对蚊科幼虫具有较高的杀虫活性。
对白纹伊蚊幼虫的研究发现，苏云金芽孢杆菌具有很好的杀虫效果。
实验结果显示，苏云金芽孢杆菌处理组的幼虫死亡率明显高于对照组，而且处理组的幼虫体长、体重显著低于对照组，说明苏云金芽孢杆菌不仅能有效杀死蚊科幼虫，还能抑制其生长发育。
苏云金芽孢杆菌筛选及其对蚊科幼虫的杀虫活性
苏云金芽孢杆菌筛选及其对蚊科幼虫的杀虫活性苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis var. israelensis，简称Bti）是一种广泛应用于生物农药领域的细菌，被广泛应用于蚊虫控制。
本文主要介绍苏云金芽孢杆菌的筛选方法及其对蚊科幼虫的杀虫活性。
苏云金芽孢杆菌主要通过筛选分离或遗传改造获得。
筛选分离方法主要包括土壤样品采集、产孢核查、杀虫活性测定等步骤。
采集土壤样品，可以从湖泊、河流、池塘、沼泽等水源附近的土壤中采集，因为这些地方通常是蚊子孳生的地方。
然后，将土壤样品接种在含有适宜营养物质的培养基中，促使苏云金芽孢杆菌的生长。
接下来，通过形态学观察和生物学特性鉴定来确认是否获得了苏云金芽孢杆菌。
使用家蚊幼虫等蚊科昆虫幼虫进行杀虫活性测定，以评价苏云金芽孢杆菌的杀虫效果。
苏云金芽孢杆菌的杀虫活性主要通过其产生的杀虫晶体蛋白（Cry蛋白）实现。
这些Cry蛋白可以与蚊科幼虫的消化酶相互作用，破坏其肠道细胞膜，引起幼虫发生中毒死亡。
苏云金芽孢杆菌对蚊科幼虫的杀虫作用主要表现在以下几个方面：1. 快速杀虫：苏云金芽孢杆菌能迅速产生大量的Cry蛋白，只需几小时就可以导致蚊科幼虫死亡。
2. 高度选择性：苏云金芽孢杆菌的Cry蛋白对蚊科幼虫具有强烈的杀虫活性，但对其他昆虫和动物没有明显杀伤作用。
3. 持久的杀虫效果：苏云金芽孢杆菌在水中具有较长的存活期，可以持续释放Cry蛋白，从而更好地控制蚊科幼虫的数量。
4. 不易产生抗药性：由于苏云金芽孢杆菌的杀虫机制是通过破坏肠道细胞膜导致幼虫死亡，而不是通过直接杀死昆虫的神经系统，因此不易产生抗药性。
苏云金芽孢杆菌是一种有效且安全的生物农药，可用于控制蚊科幼虫的数量。
它具有快速杀虫、高度选择性、持久的杀虫效果和不易产生抗药性等优点，对蚊虫的控制起到了积极的作用。
在蚊虫防控中，苏云金芽孢杆菌的应用前景广阔，但也需要在实际应用中不断完善其筛选方法和杀虫活性评估体系，提高其在蚊虫控制中的应用效果。
烟梗废料固态发酵生产苏云金芽孢杆菌的适宜条件筛选
烟梗废料固态发酵生产苏云金芽孢杆菌的适宜条件筛选杜雷;赵高岭;席宇;臧晓静;朱大恒【摘要】Using waste tobacco stem as raw material, the medium compositions and conditions of solid state fermentation for Bacillus thuringiensis HD-1 growth were optimized by orthogonal design and single factor experiments. The results showed that the optimal medium composition was: tobacco stem 88.13%,dusty yeast 1.17%,peptone1.17%,ground soybean cake 5.88%,corn flour2.93%,KH2PO40.18%,MgSO4·7H2O 0.24%, FeSO4 0.12% and MnSO4 0.18%. The best culture conditions were: inoculation concentration 6%,initial water content 65%,initial pH of the medium 7.5,under which sporulation stabilized at 9.5xl0-10CFU/g. It was feasible to produce Bacillus thuringiensis by solid state fermentation using waste tobacco stem as the main medium.%以烟草废料烟梗为培养基主要原料,采用正交和单因素试验方法,对苏云金芽孢杆菌HD-1菌株(Bacillus thuringiensis HD-1)的固态发酵培养基及培养条件进行了优化.结果表明,烟梗固态发酵培养基的最佳组合为:烟梗88.13％,酵母粉1.17％,蛋白胨1.17％,豆饼粉5.88％,玉米粉2.93％,KH2PO40.18％,MgSO4·7H2O0.24％,FeSO4 0.12％和MnSO4 0.18％；最佳培养条件为:接种量6％,初始含水率65％,初始pH7.5.在这种发酵条件下的产孢量可稳定在9.5×1010CFU/g.因此,利用烟梗废料固态发酵生产苏云金芽孢杆菌是可行的.【期刊名称】《烟草科技》【年(卷),期】2011(000)012【总页数】4页(P69-72)【关键词】苏云金芽孢杆菌;固态发酵;正交设计;烟梗;产孢量【作者】杜雷;赵高岭;席宇;臧晓静;朱大恒【作者单位】郑州大学生物工程系,450001;郑州大学生物工程系,450001;郑州大学生物工程系,450001;郑州大学生物工程系,450001;郑州大学生物工程系,450001【正文语种】中文【中图分类】TS49苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis，Bt）是目前世界上应用最为广泛的杀虫微生物，其发酵方法主要有液体深层发酵和固体浅盘发酵［1］。
苏云金芽孢杆菌LLB19发酵培养基的优化
第２期杨梅等：苏云金芽孢杆菌ＬＬＢｌ９发酵培养基的优化运用Ｂｏｘ—Ｂｅｈｎｋｅｎ的中心组合设计原理，以最陡爬坡实验得到的中心点对Ｐｌａｃｋｅｔｔ—Ｂｕｒｍａｎ实验确定的３个显著性影响因子各取３水平．设计了３因素３水平共１５个实验点进行响应面分析．１．５芽孢量测定用石碳酸复红对待测菌液进行染色，芽孢未被染色，在显微镜下观察，血球计数板进行计数．２结果与分析２．１单因子实验２．１．１碳源单因子实验分别以玉米淀粉、葡萄糖、玉米粉、蔗糖、乳糖为碳源，对苏云金芽孢杆菌ＬＬＢｌ９进行发酵培养，结果表明５种碳源都能促进该菌的生长并产生芽孢．其中以玉米淀粉为碳源的培养基芽孢产量最多，结果见图１．从培养基原料的来源、价格和对芽孢产量的影响等方面考虑，确定以玉米粉、玉米淀粉作为发酵培养基的碳源．２．１．２氮源单因子实验以玉米淀粉作为碳源，分别以黄豆饼粉、酵母粉、硫酸铵、蛋白胨、黄豆粉作为初始氮源，进行单因子实验．在培养过程中苏云金芽孢杆菌ＬＬＢｌ９生长良好，各种培养基组合都有芽孢产生，但在芽孢产量上有所差别，结果如图２所示．可见酵母粉对芽孢的产量影响最大，本实验确定以酵母粉、黄豆饼粉作为培养基的氮源．２．２Ｐｌａｃｋｅｔｔ—Ｂｕｒｍａｎ设计法筛选培养基巾影响发酵液芽孢产量的重要因子通过碳源和氮源单因子实验，结合其他召ｚ发酵实验过程中发酵培养基的组成以及碳氮源比例，确定初始发酵培养基为：玉米粉１０．０ｇ／Ｌ，玉米淀粉１５．０ｇ／Ｌ，黄豆饼粉２０．０ｇ／Ｌ，酵母粉３．０ｇ／Ｌ，Ｋ２ＨＰ０４０．３ｇ／Ｌ，ＭｇＳＯ。
·７Ｈ２００．２ｇ／Ｌ，ＣａＣＯ。
０．４ｇ／Ｌ，ＺｎＳＯ。
０．２ｇ／Ｌ．将初始发酵培养基巾的８个组分作为影响因素进行全面考察，选择８因子２水平的实图１不同碳源对苏云金芽孢杆菌芽孢产量的影响图２不同氮源对苏云金芽孢杆菌芽孢产量的影响验设计，以ｘ。
、咒、ｘ。
、Ｘ。
、ｘ，、ｘ。
、ｘ。
、ｘ。
分别代表玉米粉、玉米淀粉、黄豆饼粉、酵母粉、Ｋ：ＨＰＯ。
苏云金芽孢杆菌培养基优化及间歇发酵
苏云金芽孢杆菌培养基优化及间歇发酵
关雄;陈锦权
【期刊名称】《生物工程学报》
【年(卷),期】1998(014)001
【摘要】对苏云金芽孢杆菌的培养基配方进行室内摇瓶优化筛选，首先用摇瓶培养筛选到Ⅱ号培养基，在此配方的基础上，将培养基组分划分为氨源、碳源及无机盐三因素，采用三因素二水平正交旋转组合设计的方法进行培养基优化组合研究，建立其芽孢产量依氨源、碳源、无机盐的呼应方面方程。
借助此方程获得响应最佳点即培养基各组分的最佳配比。
实验结果表明，该方法也苏云金芽孢杆菌培养基优化中十分简便、实用、快速的途径。
此外，对其间歇发酵
【总页数】6页(P75-80)
【作者】关雄;陈锦权
【作者单位】福建农业大学;福建农业大学
【正文语种】中文
【中图分类】TQ45
【相关文献】
1.苏云金芽孢杆菌A322菌株发酵培养基和发酵条件的优化 [J], 张路路;朱朝华;郭刚
2.苏云金芽孢杆菌固态发酵培养基的优化 [J], 孙翠霞;弓爱君;姚伟芳;邱丽娜;曹艳秋
3.苏云金芽孢杆菌BtR05菌株发酵培养基的优化 [J], 王贻莲;赵晓燕;李红梅;魏艳
丽;李纪顺;杨合同
4.苏云金芽孢杆菌LLB19发酵培养基的优化 [J], 杨梅;张峰;苏新华
5.响应面分析法优化苏云金芽孢杆菌BRC-ZQL3菌株发酵培养基 [J], 张群林;张志国;余洁;林群新;吴小凤;关雄
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
新疆苏云金杆菌35高效菌株液体深层发酵培养基的筛选
新疆 石 河子 ８ ２０ ） ３ ０ ３
摘 要 ：以对棉 铃 虫 高毒 力 的 苏云金 芽孢杆 菌 ３ 为研 究 菌株 ， 用 正交试 验 法及 生物 测 定验证 ５作 采 法 ， 该 茵株 发 酵培 养基进 行 了优 化 实验 。获得 了优 化 培养 基 （ 籽 饼 ３ ２ ／ Ｌ、 米粉 １ ４ｇ 对 棉 ． ５ｇ ｄ 玉 ． ／
ｄ 麸 皮 １ ２ｇ ｄ ＫＨ： Ｏ ０ １ ／ Ｌ、 ｅ Ｏ ０ ０ ４ ／ Ｌ 。该 培养 基 与对 照 培养 基 相 比 ， 酵 Ｌ、 ． ／ Ｌ、 Ｐ ． １ｇ ｄ Ｆ Ｓ ． ０ ９ｇ ｄ ） 发
液含 茵数 高达 ４ ． ×１ 。ｆ／ ，比对 照 培养 基提 高 了 ６ ． ； 酵 液 毒 力 高 达 ６ ． ， Ｏ ８ ０ｃｕ ｍＬ ３７ 发 ６ １ 比对 照
ｏ ｔ ｏ ｏ ａ ｄ ｓｇ ｈ ｓ ｂ ｅ ｄ ｖ ｌ ｐ ｄ ｔ ｄ ｔ ｒ ｉ ｅ ｔ ｅ ｏ ｔ ｕ ｒｈ ｇ ｎ ｌ ｅ ｉｎ ａ ｅ ｎ ｅ ｅ ｏ ｅ ｏ ｅ ｅ ｍ ｎ ｈ ｐ ｉ ｍ ｆ ｒ ｎ ａ ｉ ｎ ｍｅ ｉ ｍ ｍ ｅ ｍｅ ｔ ｔ ｏ ｄｕ ｃ ｍｐ ｓｔ ｎ ａ ｄ ｔ ｅ ｃ ｌ ｒ ｏ ｄ ｔｏ ｙ ｓ ａ ｉ ｇ ｆａ ｋ ． Ｔｈ ｏ ｍｕ ａ ｆ ｍｅ ｉ ｍ ４ ｈ ｗｓ ｏ ｏ ｉｉ ｎ ｈ ｕ ｔ ｅ ｃ ｎ ｉｉ ｎ ｂ ｈ ｋ ｎ ｌ ｓ ｓ ｏ ｕ ｅ ｆ ｒ ｌ ｓ ｏ ｄ ｕ Ｍ ｓ ｏ ｈ ｇ ｅ ｒ ｄ ｃ ｉ ｎ ｔ ａ ｒｇ ｎ ｌ ｅ ｍｅ ｔ ｔ ｎ ｍｅ ｉ ｍ． Ｔｈ ｒ ｄ ｃ ｉ ｎ ｏ ｐ ｒ ｎ ａ ｔ ｒａ ｗａ ｉ ｈ ｒ ｐ ｏ ｕ ｔｏ ｈ ｎ ｏ ｉ ｉ ａ ｒ ｎ ａ ｉ ｄ ｕ ｆ ｏ ｅ ｐ ｏ ｕ ｔ ｆ ｓ ｏ ｅ ａ ｄ ｂ ｃ ｅ ｉ ｓ ｏ
苏云金芽孢杆菌筛选及其对蚊科幼虫的杀虫活性
苏云金芽孢杆菌筛选及其对蚊科幼虫的杀虫活性苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis var. israelensis，简称Bti）是一种广泛应用于生物防治的杀虫菌株，特别适用于蚊科成虫和幼虫的控制。
本文将介绍苏云金芽孢杆菌的筛选方法以及其对蚊科幼虫的杀虫活性。
苏云金芽孢杆菌的筛选通常是通过多步骤的实验流程进行的。
首先，需要收集环境中具有杀虫活性的苏云金芽孢杆菌菌株，可以是土壤、水体和其他环境样品。
然后，将这些样品分别进行细菌培养，通过高温杀菌等方法选择出富含苏云金芽孢杆菌的培养物。
接下来，将这些培养物进行纯化和鉴定，选择纯度高且效果好的苏云金芽孢杆菌菌株。
对于蚊科幼虫的杀虫活性测试，常采用生物学和生化学方法。
生物学方法包括黏贴法、培养沉降法、萤光健康法等。
这些方法通过将苏云金芽孢杆菌菌株与幼虫接触，观察幼虫的死亡情况以及菌株对幼虫的毒力大小。
生化学方法则是通过分析苏云金芽孢杆菌对蚊科幼虫的毒杀机制，了解其杀虫活性的作用途径和影响因素。
研究表明，苏云金芽孢杆菌对蚊科幼虫具有较高的杀虫活性。
其主要作用机制是通过产生一种称为晶体蛋白（Cry）的毒素来杀死幼虫。
这种毒素进入幼虫消化系统后，被分泌的蛋白酶降解，释放出毒素结晶体，然后结晶体溶解并结合到幼虫肠道上皮细胞的受体上，导致细胞破裂和死亡。
苏云金芽孢杆菌对蚊科幼虫的杀虫活性受多种因素的影响，如菌株的纯度、菌液的浓度、幼虫的种类、菌株与幼虫的接触时间等。
一般来说，苏云金芽孢杆菌的杀虫活性较高，对蚊科幼虫的毒力大，可以达到较好的防治效果。
总体而言，苏云金芽孢杆菌的筛选方法较为简单，其对蚊科幼虫的杀虫活性较高。
将苏云金芽孢杆菌应用于蚊虫的综合防控中，有助于减少农药的使用，保护生态环境，提高防控效果。
苏云金杆菌摇瓶发酵培养基
福 建农 林大 学 学报 （ 然 科学 版） 自 Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆＦｕ ｉｎ Ａｇ ｉｕｔ ｒ ｎ ｏ ｅ ｔｙ Ｕ ｎｖ ｒｉｙ （ ｔ ｒ ｌ ｉｎ ｅＥｄ ｔ ｎ） ｏ ｒ ａ ｏ ｊ ｒｃ ｌ ｅａ ｄ Ｆ ｒｓｒ ｉｅｓｔ Ｎａ ｕ ａ ｅ ｃ ｉｉ ａ ｕ Ｓｃ ｏ
苏 云 金 杆 菌 对 营 养 要 求 不 高 ， 了在 牛 肉膏 蛋 白胨 培 养 基 中生 长 良好 外 ， 许 多 由农 副 产 品 组 成 的 培 除 在 养 基 中 ， 至 一 些 以 工 业 废 水 、 渣 为 主 的 培 养 基 中也 能 生 长 良好 ［ ］但 不 同 的 苏 云 金 芽 孢 杆 菌 菌 株 之 甚 废 １ ． 间 的营 养 需 求 差 异 很 大 ， 不 能 以某 一 特 定 配 方 作 为 所 有 苏 云金 芽 孢 杆 菌 的 发 酵 培 养 基 ． 化 学 成 分 的 角 故 从 度 确 定 苏 云 金 芽 孢 杆 菌 的 培 养 基 组 分 是 很 难 的 ［ ． 同 农 副 产 品 、 们 之 间 的 不 同 配 比 以 及 培 养 基 的 含 固 ４ 不 ］ 它
ＳＯ ４・ ７ ２ ０ ・Ｌ～． Ｈ Ｏ． ８ ｇ ０
关 键 词 ：苏 云 金 芽 孢 杆 菌 ；培 养 基 筛 选 ；正 交 设 计 中 图 分 类 号 ：Ｑ９ ９９ ３ ．７ 文献 标识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ： ０ ６ ７ １ （ ０ ２ ０ — ３ ０ １ ０ —８ ２ ０ ） ３０ １ － ３ ７ ７
液 毒 力 的 影 响 相 差 很 大 ， 几 种 培 养 基 组 分 中 以 鱼 粉 对 发 酵 液 的 影 响 最 大 ． 验 所 得 的 最 佳 培 养 基 组 合 为 ： 豆 饼 粉 ３ 在 试 黄 ２ｇ Ｌ～、 米 粉 １ 玉 ４ ｇ・Ｌ～、 生 饼 粉 ３ ・Ｌ 、 粉 １ 花 ２ｇ 鱼 ４ ｇ・Ｌ～、 白 胨 ４ ｇ・Ｌ～、 母 ６ｇ ・Ｌ 、 Ｓ 蛋 酵 Ｆｅ Ｏ４・７ Ｏ ．４ ｇ・Ｌ 、 — Ｈ２ Ｏ ０ Ｚｎ
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
收稿日期:2003-07-16基金项目:国家863计划(2002AA 245011)和福建省科技厅重大科技项目(2002N 004)资助.作者简介:李今煜(1976-),女.研究方向:微生物分子生物学.*通讯作者.苏云金芽孢杆菌发酵培养基的筛选李今煜,陈 聪,关 雄*(福建农林大学生物农药中心,福建福州350002)摘要:采用正交试验对Bt W B 7菌株发酵培养基进行筛选,结果表明,不同原料对发酵液菌数影响相差较大,其中酵母粉和鱼粉影响最大.本试验获得的最佳摇瓶发酵配方为:玉米粉4%、黄豆饼粉1%、酵母粉2%、鱼粉 2.5%和蛋白胨0.1%(质量分数).关键词:苏云金芽孢杆菌;正交试验;发酵培养基中图分类号:Q 939.97文献标识码:A文章编号:1006-7817(2003)04-0490-03Screen of fermentative medium for Bacillus thuringiensisLI Jin-yu,C HEN Cong,GU AN Xiong(Biocide Research Center ,Fujia n Ag riculture and Fo restry Univ ersity,Fuzhou,Fuj ian 350002,China )Abstract :An orthog onal desig n was used to screen fer mentativ e medium of Bacillus thuringiensis iso late W B 7.Among these tests,yeast pow der and fish meal were the mo st efficient subst rates for Bt .The most a ppropriate fermenta tiv e medium is compo sed o f co rn meal 4%,soy bean flour 1%,y east po wder 2%,fish m eal 2.5%,peptone 0.1%.Key words :Bacillus thuringiensis ;or thog onal des ig n;fermentative medium苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis ,Bt )培养基配方与发酵水平密切相关[1],决定着产品的杀虫效果和企业的经济效益.近年来,一些研究人员相继采用正交设计的方法对培养基组分和培养条件进行优化筛选,取得了一定的成效[2].本试验室保存的WB 7菌株不仅具有较高的杀虫活性,而且含有丰富的基因资源,具有良好的开发前景和研究价值.目前我室已研究的有cry 、vip 和几丁质酶基因.因此,本文以农副产品为主要原料,采用正交试验的方法对该菌株进行发酵培养基的优化,确定适合于摇瓶培养的最佳配方.1 材料与方法1.1 供试材料1.1.1 菌种 Bt WB 7菌株为本室保存的菌株.1.1.2 培养基和原料 斜面及平板记数用LB 培养基[牛肉膏1%、蛋白胨1%、琼脂2%、NaCl 0.2%(质量分数)],灭菌前pH7.2.摇瓶发酵培养基原料由浦城绿安生物农药厂提供,其中黄豆饼粉由南昌汇通药业辅料有限公司生产,玉米粉由山东巨能电力集团金玉米开发有限公司生产,蛋白胨由仙游东风化工肥料厂生产,酵母粉由江门甘蔗化工厂生产,鱼粉购自浦城.上述原料使用时均过80目筛.1.2 试验方法1.2.1 正交试验设计 选择对Bt 生长和发育影响较大的玉米粉、黄豆饼粉、酵母粉、鱼粉和蛋白胨等5个培养基组分因素,根据前人的试验数据[3-7],每个因素设定3个水平,同时考虑玉米粉和黄豆饼粉、玉米粉和酵母粉的相互作用.采用L 18(37)正交表,随机安排因素和配比水平(表1).1.2.2 摇瓶培养 按正交试验设计表分别配制培养基,其它原料均为KH 2PO 40.2%、Ca CO 30.5%(质量分数)、p H 7.5.使用250m L 三角瓶,每瓶装液25m L,灭菌后接种,接种量为1%(体积分数).30℃下,185r ·min-1福建农林大学学报(自然科学版)第32卷第4期J o urnal of Fujian Ag riculture and Forestry U niv ersity (Na tural Science Editio n)2003年12月DOI:10.13323/ k i .j.f af u(n at.sci .).2003.04.019 表1 L 18(37)正交试验因素水平表1) Table 1 L 18(37)orthogonal experimen tal factor level s % 水平因素A B C D E 1 2.5 2.0 1.0 2.50.12 4.0 1.00.5 1.00.431.54.52.00.00.21)A.玉米粉;B.黄豆饼粉;C.酵母粉;D .鱼粉;E.蛋白胨.摇床振荡培养,定时取样涂片染色观察菌体长势及芽孢晶体形成情况.芽孢晶体脱落率达到30%时停止培养.1.2.3 发酵液的活芽孢数测定 用稀释平板记数法测定活芽孢数.2 结果与分析从表2的结果和表3的方差分析可以明显看出,酵母粉、鱼粉浓度对发酵液菌数有显著的影响;玉米粉和黄豆饼粉的交互作用、玉米粉和酵母粉的交互作用对其有一定的影响;而玉米粉、黄豆饼粉和蛋白胨对发酵液菌数的影响比较微弱.表2 L 18(37)正交试验设计和结果1)Table 2 L 18(37)orthogonal experimen tal design and results试验号因子A/%B /%A ×BC /%A ×CD /%E /%活菌数×109/(个·m L -1)11(2.5)1(2.0)11(1.0)11(2.5)1(0.1) 5.5021(2.5)2(1.0)22(0.5)22(1.0)2(0.4) 4.0031(2.5)3(4.5)33(2.0)33(0.0)3(0.2) 6.0042(4.0)1(2.0)12(0.5)23(0)3(0.2) 3.3952(4.0)2(1.0)23(2.0)31(2.5)1(0.1)7.8962(4.0)3(4.5)31(1.0)12(1.0)2(0.4) 5.0673(1.5)1(2.0)21(1.0)32(1.0)3(0.2) 4.8983(1.5)2(1.0)32(0.5)13(0.0)1(0.1) 3.0093(1.5)3(4.5)13(2.0)21(2.5)2(0.4)7.56101(2.5)1(2.0)33(2.0)22(1.0.0)1(0.1) 6.28111(2.5)2(1.0)11(1.0)33(0.0)2(0.4) 5.61121(2.5)3(4.5)22(0.5)11(2.5)3(0.2) 3.83132(4.0)1(2.0)23(2.0)13(0.0)2(0.4) 4.67142(4.0)2(1.0)31(1.0)21(2.5)3(0.2) 5.33152(4.0)3(4.5)12(0.5)32(1.0)1(0.1) 5.50163(1.5)1(2.0)32(0.5)31(2.5)2(0.4)37.80173(1.5)2(1.0)13(2.0)12(1.0)3(0.2) 6.28183(1.5)3(4.5)21(1.0)23(0.0)1(0.1) 4.00K 131.2228.5133.8430.3928.3433.8932.1792.57K 231.8432.1129.2823.530.5632.0130.68K 329.5131.9529.4538.6833.6726.6729.72均值1 5.203 4.752 5.640 5.065 4.723 5.648 5.362均值2 5.307 5.352 4.880 3.917 5.093 5.335 5.113均值3 4.918 5.325 4.908 6.447 5.612 4.445 4.953 R0.3890.6000.7602.5300.8891.2030.409 1) A.玉米粉;B.黄豆饼粉;C.酵母粉;D .鱼粉;E.蛋白胨.表3 L 18(37)正交试验方差分析结果1)Table 3 L 18(37)orthogonal experimen tal design and analys is 方差来源偏差平方和自由度平均偏差平方和F 值备注A 0.48520.243 1.63F 0.05(2,3)=9.55B 1.37920.690 4.62F 0.1(2,3)= 5.46A ×B 2.2272 1.114 6.21C 19.25729.62964.49A ×C 2.3892 1.1958.00D 4.6772 2.33815.66E0.50820.254 1.70误差0.44830.149总计31.37017 1) A.玉米粉;B.黄豆饼粉;C.酵母粉;D .鱼粉;E.蛋白胨.491第4期李今煜等:苏云金芽孢杆菌发酵培养基的筛选492福建农林大学学报(自然科学版)第32卷 玉米粉是培养基中的主要碳源,玉米粉含量增大,发酵液菌数也提高,但菌数随玉米粉含量的增大而增大的趋势并不明显.说明碳源在Bt生长中的作用虽然是必需的,但并不是最重要的.鱼粉是培养基中主要的氮源,鱼粉含量从0增加至 2.5%,发酵液菌数从 4.445×109个·m L-1增加至5.648×109个·m L-1,变化明显大于玉米粉.说明氮源对Bt发酵的促进作用大于碳源.酵母粉不仅是重要的氮源,而且含有丰富的维生素和某些氨基酸,其含量变化能大大影响发酵液菌数.酵母粉质量分数为0.5%、1%和2%时,发酵液菌数分别为39.17×109、5.065×109和 6.447×109个·m L-1.这不仅再次证明了氮源在发酵中的重要性,也说明维生素和氨基酸对发酵也有显著的促进作用.黄豆饼粉和蛋白胨也是氮源,但在含有鱼粉作氮源的培养基中,再加入它们并不会明显影响发酵液菌数.玉米粉和黄豆饼粉的交互作用、玉米粉和酵母粉的交互作用反映了碳源和氮源比例关系的变化.它们对发酵液菌数的影响也比较明显,说明Bt的正常生长和发育过程对碳源、氮源的比例也有较严格的要求.从试验结果和上述分析中可以看出,高菌数培养基的最佳配方为5号,其组分含量为A2B2C3D1E1,即玉米粉4%、黄豆饼粉1%、酵母粉2%、鱼粉 2.5%、蛋白胨0.1%,以及少量无机盐CaCO3.3 讨论苏云金杆菌对营养要求不太严格,在工业生产上,常常以农副产品为培养基的主要原料即可达到生产要求.但是,由于农副产品的成分比较复杂,不同的农副产品和它们之间的不同配比都会对菌株的生长发育和产毒能力产生显著影响[7-9].前人研究[3,4,9]和本研究都证明了氮源对发酵液活菌数的影响大于碳源的影响,而氮源以酵母粉和鱼粉的影响最大.但在本研究,酵母粉对发酵液活菌数的影响大于鱼粉,与一些报道有所不同[3-4],说明不同来源的同种原料,由于其营养成分有所不同,对菌株的产孢能力也有影响.本试验以发酵液菌数为唯一指标,没有结合考虑发酵时间.上述的最佳配方虽然有利于获得较高的菌数,却需要较长的发酵时间(70h).可能是因为含固量偏高,对菌株的呼吸代谢有一定的抑制作用,进而影响菌株的生长.实际生产中,发酵时间过长不仅会增加生产成本,降低经济效益,而且还可能带来菌种衰退变异的问题.因此,在下一阶段有关发酵条件的研究和中试中,更倾向于使用发酵时间较短、菌数略低的配方.参考文献:[1]吴继星,谢天健,陈在铒,等.苏云金杆菌85-10-6(5)发酵培养基的筛选[J].微生物学通报,1988,15(6):254-256.[2]陈月华,任改新,梁凤来,等.中国Bt Ken-Ag最佳发酵培养基的优选及其发酵生理学研究[J].微生物学通报,1995,21(3):135-138.[3]袁志明,张用梅,刘娥英,等.不同培养基对苏云金杆菌以色列变种生长和发育的影响[J].工业微生物,1993,23(2):13-18.[4]高家合,王革,李天飞,等.微生物杀虫剂Bt53菌株发酵培养基优化[J].生物技术,2002,12(5):22-23.[5]赵秋雁,赵晓虹,吴保国.Bt L-93菌株培养基的正交试验及培养代谢[J].东北林业大学学报,1998,26(4):63-65.[6]黄天培,邱思鑫,黄志鹏,等.苏云金杆菌摇瓶发酵培养基[J].福建农林大学学报(自然科学版),2002,31(3):317-319.[7]M O R RIS O N,K AN A GA R AT N A M P,CONV ERSE V.Suita bility of30ag ricultural products and by-pr oducts asnutrient sources fo r laborato ry productio n of Bacillus thuringiensis subsp.aizawai(HD133)[J].Journal of Invertebrate Pathology,1997,70(2):113-120.[8]ABDEL-HAM EED A,CA RLBERG G,EL-T A Y EB O M,et a l.Studies on Bacillus thuringiensis H-14strains isola ted inEgy pt-Ⅲ.Selection o f m edia for delta-endo toxin produc tion[J].Worl d J ournal of Microbiology and Biotechnology, 1990,6(3):313-317.[9]操时树,鲁松清,喻子牛.苏云金芽孢杆菌工程的发酵培养基的优选[A].喻子牛.微生物农药及其产业化[M].北京:科学出版社,2000.98-104.(责任编辑:陈幼玉) 。